气阴双补法对缓解期哮喘大鼠气道重塑及ERK信号分子表达的作用研究

目的：研究气阴双补法中药对缓解期哮喘大鼠气道重塑的影响及细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）信号分子的表达差异。方法：60只体重180～200g健康雄性SD大鼠,随机分成正常组(A)、模型组(B)、中药低剂量组(C)、中药中剂量组(D)、中药高剂量组(E)及地塞米松组 (F),每组8只。用卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘气道重塑大鼠模型,肺组织病理图像分析气道重塑,RT-PCR检测 ERKl／[有的没有斜杠,请全文统一]2mRNA在气道中的表达,免疫印迹检测磷酸化ERK（P- ERK）蛋白在气道平滑肌中的表达。结果：哮喘模型组肺组织切片平滑肌标化面积WAm/Pbm(17.34±0.63[单位])μm2／μm、内管壁标化面积WAi/Pbm(42.35±3.31)μm2／μm显著高于正常组WAm/Pbm(7.63±0.32)μm2／μm、WAi/Pbm(26.73±1.50)μm2／μm（P<0.05）,中药低剂量组WAm/Pbm(13.68±0.52)μm2／μm、WAi/Pbm(37.53±2.57)μm2／μm,中剂量组WAm/Pbm(10.75±0.72)μm2／μm、WAi/Pbm(33.74±1.21)μm2／μm,中药高剂量组WAm/Pbm(9.33±0.92)μm2／μm、WAi/Pbm(30.62±1.34)μm2／μm较模型组显著降低（P<0.05）,但仍高于正常组（P<0.05）;哮喘模型组ERK1mRNA（4.26±0.52[单位（没有单位的）]）、ERK2mRNA（3.54±0.37）、P- ERK（3.288±0.641）表达[单位（没有单位的）]均显著高于正常组ERK1mRNA（1.02±0.11）、ERK2mRNA（0.96±0.13）、P- ERK（0.703±0.338）（P<0.05）;中药低剂量组ERK1mRNA（3.23±0.45）、ERK2mRNA（2.72±0.21）,中剂量组ERK1mRNA（1.65±0.26）、ERK2mRNA（1.36±0.14）、P- ERK（2.172±0.221）,中药高剂量组ERK1mRNA（2.37±0.23）、ERK2mRNA（2.03±0.12）、P- ERK（1.127±0.631）均明显降低（P<0.05）,但仍高于正常组（P<0.05）。结论：气阴双补法中药改善缓解期哮喘大鼠气道重塑,抑制 ERKl／2mRNA及P- ERK蛋白在气道中的表达。     

升陷乌梅汤对激素干预哮喘大鼠TGF-β1/Smad信号通路及气道重塑的影响

目的观察升陷乌梅汤对激素干预哮喘大鼠TGF-β1/Smad信号通路和气道重塑的影响。方法将50只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、哮喘组、激素组、布地奈德组、升陷乌梅汤组。除正常组外,其余各组采用卵蛋白致敏、雾化激发建立哮喘大鼠模型,并予各给药组大鼠腹腔注射糖皮质激素干预,在此基础上予升陷乌梅汤组大鼠灌胃、布地奈德组大鼠雾化吸入。观察各组大鼠肺功能及支气管病理改变,并采用Western blot及RT-qPCR法检测TGF-β1/Smad信号通路相关因子蛋白及mRNA表达的变化。结果①与正常组比较,哮喘组大鼠肺组织中胶原蛋白表达、WAi/Pbm、WAm/Pbm及WAe/Pbm升高(P<0.05),信号通路因子TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白和mRNA表达及p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达均升高(P<0.05),而肺功能中FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF50%及FEF75%均降低(P<0.05),肺组织中Ai/Pbm以及通路因子Smad6、Smad7的蛋白和mRNA表达均降低(P<0.05)。②与哮喘组比较,各给药组均可减少肺组织中WAi/Pbm、WAm/Pbm和WAe/Pbm(P<0.05),降低TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达及TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P<0.05),并升高FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF50%和FEF75%(P<0.05),增加Smad6、Smad7的mRNA表达(P<0.05);且升陷乌梅汤组较激素组可进一步减少WAi/Pbm、WAm/Pbm、WAe/Pbm,降低TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白和mRNA表达及p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P<0.05),并升高FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF75%,增加Smad6的蛋白和mRNA表达以及Smad7的mRNA表达(P<0.05)。结论升陷乌梅汤可在激素干预基础上进一步阻止TGF-β1/Smad信号通路的异常激活,抑制气道重塑发展,延缓肺功能下降。     

基于钙离子通道探讨麻黄鞣酸及麻黄等治疗哮喘作用机制研究

目的 :基于钙离子通道探讨麻黄鞣酸及麻黄等治疗哮喘作用机制研究。方法 :60只大鼠随机分为空白组、对照组、模型组、麻黄组、麻黄鞣酸组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片高剂量组。构建哮喘模型后,采用HE染色计算哮喘大鼠支气管横断面单位面积的炎性细胞数以及WAm/Pbm,WAi/Pbm,以评估气道炎症。用免疫组化法及蛋白质免疫印迹法(Western-blot)测定大鼠CACC和T MEMl6A蛋白表达。结果 :(1)炎性细胞数,模型组高于空白组(P0.01)。与模型组比较,炎性细胞数,鞣酸组、麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片高剂量组降低(均P0.01)。WAm/Pbm,WAi/Pbm,鞣酸组下降(P0.01),麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片组高剂量组与模型组比较无差异。(2)CACC1在模型组和空白对照组,模型组阳性表达细胞数目多于对照组,强度也高于对照组(P0.01)。与模型组比,计算其光密度比值,鞣酸组、麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片组高剂量组比值下调(P0.01)。CACC4在模型组和空白对照组,模型组阳性表达细胞数目多于对照组,强度也高于对照组(P0.01)。与模型组比较,计算光密度比值,鞣酸组、麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片组高剂量组比值下调(均P0.01)。(3)各组大鼠肺组织中TMEM16A的表达检测结果显示:与空白对照组比较,其余各组大鼠肺组织中TMEM16A的表达水平均显著下调,差异有统计学意义(P0.01);与模型对照组比较,各治疗组大鼠肺组织中TMEM16A的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P0.05或0.01);其中麻杏止咳片高剂量组大鼠肺组织中TMEM16A的表达水平上调最为显著。结论 :(1)麻黄鞣酸可以使WAm/Pbm、WAi/Pbm下降,可以改变气道重构。(2)鞣酸组、麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片高剂量组均可以下调CACC1、CACC4在肺组织中的表达,也都可以上调TMEM16A的表达。     

健脾补肺化痰方对哮喘大鼠肺组织中TGF-β_1、c-fos表达影响

目的:探讨健脾补肺化痰方对幼龄哮喘大鼠肺组织中TGF-β_1、c-fos表达的影响。方法:将120只雄性SD幼龄大鼠,随机分为正常组4周(Z4)、8周(Z8)、12周(Z12),模型组4周(M4)、8周(M8)、12周(M12),健脾补肺化痰方组4周(J4)、8周(J8)、12周(J12),地塞米松组4周(D4)、8周(D8)、12周(D12),每组30只,采用卵白蛋白(OVA)雾化激发建立哮喘大鼠模型,用Masson染色法及Img-Pro6.0图像分析系统,分别测定上述时间段各组大鼠肺组织中WAt/Pbm、WAi/Pbm及WAm/Pbm等气道形态学参数,同时采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测各组大鼠肺组织中TGF-β_1、c-fosm RNA的表达。结果:与正常组相比,模型组肺组织中TGF-β_1、c-fos的表达及WAt/Pbm、WAi/Pbm、Wam/Pbm等气道形态学参数均有不同程度升高(P0.05);与模型组相比,各治疗组以上指标均有不同程度下调(P0.05);健脾补肺化痰方组与地塞米松组比较,差异无显著性(P0.05)。结论:健脾补肺化痰方可通过下调TGF-β_1、c-fos的表达实现对气道重塑的抑制。     

TNF—α对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖及ERK1／2活性的影响

目的 探讨TNF-α对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖及对ASMCs上ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2表达水平的影响.方法 通过对哮喘模型大鼠ASMCs培养,分别以0.2μ/L、1.0μg/L、20μg/L TNF-α干预ASMCs 生长.采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度TNF-α对ASMCs增殖的影响.RT-PCR检测ASMCs上ERK1/2 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测磷酸化ERK1/2蛋白的表达及定位.结果哮喘组ASMCsS期比例、A值、ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量分别为(34.45±2.08)%、(0.550±0.010)、(0.995±0.118)、(130.77±4.16),与对照组(11.17±0.96)%、(0.292±0.008)、(0.576±0.098)、(163.82±1.38)比较均显著增高(均P<0.01).各TNF-α干预组ASMCs的S期比例、A值、ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2蛋白表达量与哮喘组比较均显著降低(均P<0.01),0.2μg/L和1.0 μg/L TNF-α组p-ERK1/2蛋白表达量高于对照组(P<0.01),20μg/L TNF-α组p-ERK1/2蛋白表达量与对照组比较无差异(P>0.05).结论 与正常鼠相比,慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高.经TNF-α干预后,慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞处于S期的细胞比例减少,增殖减弱,TNF-α可能抑制慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖.TNF-α可下调慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞上ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2表达,TNF-α可能通过抑制ERK信号转导通道的活性对气道平滑肌细胞的增殖进行调控.     

地塞米松对哮喘小鼠气道重塑的影响

目的探讨糖皮质激素对哮喘气道重塑和肺内基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）表达的影响。方法以卵蛋白致敏激发的慢性哮喘小鼠模型为对象，测定对照组、哮喘组、地塞米松组支气管基底膜周径（Pbm）、上皮黏膜层面积（WAmuc）、平滑肌面积（WAm）、气管内壁面积（WAi），并用Pbm标准化。天狼猩红染色测定气道I、Ⅲ型胶原的面积。免疫组化方法测定气道MMP-9及其抑制剂TIMP-1，行免疫组化图像分析。结果（1）地塞米松组的WAmuc／Pbm、WAm／Pbm、WAi／Pbm大于对照组而小于哮喘组，差异有显著性（P〈0．05）；（2）地塞米松组I、Ⅲ型胶原面积较对照组增加而明显低于哮喘组（P〈0．05）；（3）哮喘组MMP-9、TIMP-1表达明显高于地塞米松组，差异有显著性（P〈0．05）。结论慢性哮喘小鼠气道壁明显增厚，而早期行地塞米松干预则可能通过调节MMP-9／TIMP-1比值来减轻气道重塑。     

氟伐他汀对哮喘大鼠气道重建的影响及其机制

目的:观察羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂氟伐他汀对大鼠哮喘模型气道重建的影响.方法:将50只SD雄性大鼠随机分为5组:空白对照组(A组),哮喘组(B组),地塞米松组(C组),氟伐他汀组(D组)及氟伐他汀与地塞米松合用组(E组).以10 g/L卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏并长期吸入激发制备慢性哮喘模型.用免疫组织化学方法检测各组大鼠肺组织中增殖细胞核抗原(PCNA),P21ras和Ⅲ型胶原的表达,采用图像分析方法测量气道壁内周长(Pi)及平滑肌面积(WAm).结果:①氟伐他汀对气道重建具有抑制作用:D组的WAm/Pi (4.44±0.95)μm2/μm,Ⅲ型胶原和PCNA表达(32±6,38±10)均低于B组[(7.01±1.54)μm2/μm,55±8,68±12] (P均＜0.05); ②D组对气道重建的抑制作用弱于C组和E组:D组的WAm/Pi,Ⅲ型胶原和PCNA表达均高于C组 [(3.14±1.06)μm2/μm,21±6,26±6]和E组 [(3.03±0.87)μm2/μm,20±7,25±7 ](P均＜0.05); ③D组P21ras表达的吸光度值(24±11)明显低于B组(57±10)(P＜0.05).P21ras表达与PCNA (rs=0.685,P＜0.05)和Ⅲ型胶原(rs=0.530,P＜0.05)的表达分别呈正相关.结论:氟伐他汀可延缓哮喘气道重建的进程,这种作用与P21ras抑制相关,但其抑制增生的作用弱于地塞米松.     

古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠表达P62、TGF-β1的影响

目的探讨古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠P62、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分成正常组、哮喘组、肾阳虚哮喘组、古汉养生精低、中、高剂量组,每组5只。以氢化可的松制备肾阳虚模型,卵蛋白与氢氧化铝致敏激发制备哮喘模型,造模成功后 通过灌胃方式,各剂量组予以相应剂量古汉养生精,在最后一次激发24 h后,于大鼠左肺切取部分组织,用于行苏木精-伊红(HE)染色,应用图像分析技术测定支气管基底膜周径(Pbm)、支气管管壁面积(Wat)、支气管内壁面积(Wai)、支气管管壁平滑肌面积(Wam),所得数据采用Pbm进行标化,得到Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm等重塑指标;取右肺组织使用qRT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达,采用Western blot检测肺组织P62蛋白的表达。结果肾阳虚哮喘组大鼠病理改变较哮喘组大鼠明显,各剂量组较肾阳虚哮喘组大鼠病理改变明显减轻(P＜0.05)。肾阳虚哮喘组Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm较哮喘组升高,各剂量组较肾阳虚哮喘组降低(P＜0.05)。肾阳虚哮喘组肺组织中TGF-β1 mRNA表达量较正常组明显上升(P＜0.05),各剂量组TGF-β1 mRNA表达量较肾阳虚哮喘组降低(P＜0.05)。肾阳虚哮喘组P62表达较哮喘组降低,而各剂量组P62表达较肾阳虚哮喘组升高(P＜0.05)。结论古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠的气道重塑有抑制作用,可能机制与调控P62、TGF-β1的表达相关。     

p-ERKl/2及ERK2mRNA在哮喘大鼠气道中的表达变化

目的 探讨细胞外信号调节激酶在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响.观察细胞外信号调节激酶是否参与了哮喘气道重构这一病理过程.方法 18只6周龄雄性wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松干预组各6只.以腹腔注射10%卵蛋白和1%卵蛋白雾化吸入复制慢性哮喘模型.干预组在每次激发前给予地塞米松干预.用免疫组化与原位杂交法检测p-ERK1/2及ERK2 mRNA在不同大鼠肺组织的表达程度,采用图像分析系统进行图象分析.结果 (1)哮喘模型组气道壁面积和平滑肌厚度较对照组和干预组显著增加(P<0.05).(2)哮喘组p-ERK1/2及ERK2 mRNA在大鼠肺组织的表达程度较对照组和干预组显著增加(P<0.05).(3)直线相关性分析显示,哮喘组气道壁面积和平滑肌厚度与大鼠肺组织中p-ERK1/2表达水平呈正相关(分别为r=0.858,r=O.848,P均<0.05),哮喘组气道壁面积和平滑肌厚度与大鼠肺组织中ERK2 mRNA表达水平呈正相关,(分别为r=O.918,r=0.860,P均<0.05).结论 哮喘大鼠肺组织p-ERK1/2及ERK2 mRNA表达上调,并与气道重构密切相关,该结果提示细胞外信号调节激酶可能参与了气道重构中平滑肌的增殖过程.     

丙酸氟替卡松对哮喘小鼠气道重塑及TGF-β1表达的影响

目的:探讨丙酸氟替卡松对哮喘小鼠气道重塑的影响及其可能的作用机制.方法:将30只Balb/c小鼠随机分为哮喘组(A组),正常对照组(B组),丙酸氟替卡松治疗组(C组)3组,每组动物10只.A组小鼠于第1日及第15日以鸡卵白蛋白(OVA)致敏,从第1次致敏后第22日开始雾化吸入25g/L OVA激发并持续4 wk,建立哮喘气道重塑模型;B组用生理盐水以同样方法致敏并雾化吸入;C组于激发前30 min雾化吸入丙酸氟替卡松(0.17g/L),吸入时间每次10 min,其它程序与A组相同.制备小鼠肺组织病理切片,HE染色观察各组气道结构改变情况,采用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(WAt/Pbm),支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm);肺组织石蜡切片行TGF-β1免疫组化染色后计算机图像分析测定其灰度值.结果:光镜下可见A组小支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯状细胞增生、平滑肌增厚,而C组上述改变较A组明显减轻.与B组比较,A组支气管管壁厚度[(17.43±1.10)μm2/μm],平滑肌厚度[(6.58±1.16)μm2/μm]显著升高(P＜0.01);与A组比较,C组支气管管壁厚度[(14.06±1.20)μm2/μm],平滑肌厚度[(4.41±1.00)μm2/μm]显著降低(P＜0.01).与B组比较,A组TGF-β1的灰度值(66.18±1.53)显著降低(P＜0.01);与A组比较,C组丙酸氟替卡松干预后TGF-β1的灰度值(72.05±1.65)显著升高(P＜0.01).结论:吸入丙酸氟替卡松能有效防治哮喘小鼠气道重塑,可能的机制是丙酸氟替卡松通过下调TGF-β1的表达干预了气道重塑.     

地塞米松调节基质金属蛋白酶-2对哮喘大鼠气道重建的影响

目的　观察地塞米松对气道重建的影响 ,并探讨基质金属蛋白酶 - 2 (MMP- 2 )与金属蛋白酶组织抑制物 - 1(TIMP- 1)间的平衡在其中的作用。方法　 30只雄性 Wistar大鼠随机分为哮喘组、地塞米松组和对照组 ,每组10只。动物处死后行支气管肺泡灌洗 ,收集灌洗液作细胞学检查。肺组织作病理切片 ,HE染色 ,采用计算机图象分析技术测定支气管基底膜周径 (Pbm ) ,总管壁面积 (WAt) ,内壁面积 (WAi) ,平滑肌面积 (WAm )等反映气道壁厚度的指标。半定量逆转录聚合酶连反应 (RT- PCR)技术分析肺组织中 MMP- 2与 TIMP- 1m RNA的表达。结果　 1哮喘组 WAt/ Pbm,WAi/ Pbm及 WAm / Pbm (分别为 2 5 .3± 2 .1μm2 /μm ,2 0 .4± 2 .3μm2 /μm ,4 .2± 2 .0μm2 /μm )与对照组 (2 0 .8± 1.3μm2 / μm,15 .3± 2 .1μm2 / μm,3.1± 1.1μm2 / μm)比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 1) ,对照组与地塞米松组 (2 1.3± 2 .4 μm2 / μm,14 .2± 2 .5 μm2 / μm,3.2± 1.0 μm2 / μm)比较 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。2哮喘组的MMP- 2及 TIMP- 1m RNA水平 (0 .6 8± 0 .14 ,0 .5 6± 0 .10 )与对照组 (0 .14± 0 .0 3,0 .11± 0 .0 5 )比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 1) ,哮喘组与地塞米松组 (0 .37± 0 .11,0 .31± 0 .10 )     

气道炎症和重构在小鼠哮喘模型中的变化及地塞米松的干预作用

目的观察小鼠慢性哮喘模型中气道炎症和重构的变化及地塞米松的影响。方法77只BALB／C小鼠随机分为对照组、哮喘组、哮喘 激素组，卵蛋白致敏并反复雾化吸人2、4及8周，造成慢性哮喘模型，哮喘 激素组腹腔注射地塞米松。借助MetaMorph图像分析软件测量单位气道面积炎性细胞数目、基底膜周径(Pbm)、上皮黏膜层面积(WAmuc)、平滑肌面积(WAm)、气管内壁面积(WAi)、胶原面积(Wcol)、杯状细胞的比例和气管基底膜(／1mm)上BrdU 细胞数目。结果哮喘组和哮喘 激素组单位气道面积炎性细胞计数高于对照组，且哮喘组高于哮喘 激素组；雾化吸人OVA2、4及8周组炎性细胞计数无显差异。哮喘组WAmuc／Pbm、WAm／Pbm及WAi／Pbm较对照组和哮喘 激素组明显增加，哮喘 激素组高于对照组。各组在雾化吸入2、4及8周后WAmuc/Pbm、WAm／Pbm、WAi／Pbm无显性差异。哮喘组和哮喘 激素组Wcol／Pbm大于对照组，哮喘组大于哮喘 激素组。在哮喘组，雾化8周后Wcol／Pbm大于雾化2周后。对照组杯状细胞积分为0分，哮喘组杯状细胞积分高于哮喘 激素组。在哮喘 激素组，雾化吸人4及8周后杯状细胞积分低于雾化吸人2周后。哮喘组和哮喘 激素组气管基底膜上BrdU 细胞数目明显高于对照组，哮喘组高于哮喘 激素组。在哮喘组，雾化吸人4及8周后BrdU 数目大于雾化吸人2周。在哮喘 激素组，雾化吸人4及8周后BrdU 数目大于雾化吸人2周。结论气道炎症和气道重构在哮喘发病早期即可出现,在一定时期内并未随哮喘病程的延长而加重。早期使用激素可抑制气道炎症和上皮细胞增生，不能预防但可部分抑制气道重构。     

转化生长因子-β对肥胖哮喘小鼠气道重塑的影响及吡非尼酮的干预作用

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)对肥胖哮喘小鼠气道重塑的影响及吡非尼酮干预的作用。方法 75只C57BL/6J小鼠随机分为对照组(A组)、肥胖组(B组)、肥胖哮喘组(C组)、布地奈德治疗组(D组)、吡非尼酮治疗组(E组)5组,每组15只。肥胖小鼠以高脂饮食诱导肥胖模型,C、D、E组采用卵清蛋白致敏激发建立哮喘模型,对照组以普通饲料饲养,生理盐水致敏激发。D组以布地奈德悬液(0.5 mg/ml)雾化,E组以吡非尼酮(300 mg/kg)饮水干预,余组正常饮水。4周后收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类。肺组织切片观察小鼠气道炎症及重塑情况,测定气管壁总面积(WAt)、气管平滑肌面积(WAm)和管腔基底膜周长(Pbm)。采用酶联免疫吸附实验、蛋白质印迹法检测TGF-β水平。结果 C组小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比、TGF-β水平、气管壁厚度(WAt/Pbm)和平滑肌厚度(WAm/Pbm)均高于其他四组;E组BALF中嗜酸性粒细胞百分比、WAt/Pbm较D组减少(P均0.05);TGF-β水平按照C、D、E、B、A组依次递减(P均0.05),且与BALF中嗜酸性粒细胞百分比呈正相关(r=0.79,P均0.01)。结论 TGF-β在肥胖哮喘小鼠气道中高表达,与气道重塑有密切关系。吡非尼酮能有效抑制TGF-β的表达,从而改善肥胖哮喘气道重塑。     

ERK1/2与实验性慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道平滑肌增殖的分子机制研究

目的:探讨ERK1/2信号在烟熏实验性慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道重塑平滑肌增殖的分子机制。方法:取大鼠模型肺组织分别提取RNA、蛋白以及行组织病理学检查。RT-PCR检测TGF-β1、ET-1条带;Masson染色检测各组支气管管腔的内周长(Pi)、平滑肌层面积(WAm)、支气管壁面积(WAt);Western Blot检测各组标本TGF-β1、ET-1、ERK1/2和p-ERK1/2。结果:烟熏2周后气道平滑肌层和支气管壁厚度较健康对照组和U0126对照组明显增厚(P<0.05),TGF-β1、ET-1以及ERK1/2蛋白磷酸化表达均增加,予U0126干预后,气道平滑肌增殖和支气管壁厚度逐渐减轻,ERK1/2蛋白磷酸化受到抑制,呈剂量依赖性。结论:烟熏可以刺激大鼠气道平滑肌慢性炎症和平滑肌增殖,ERK1/2是COPD气道平滑肌增殖信号传导的主要途径。TGF-β1参与了ERK1/2信号系统对气道重塑平滑肌增殖的调控。MEK1的特异性阻断剂U0126能有效干预COPD气道平滑肌细胞增殖的分子信号调节。     

褪黑素及其受体拮抗剂对哮喘小鼠模型气道炎症和气道重构的调节作用

目的观察褪黑素(MT)与褪黑素受体拮抗剂Luzindole(LUZ)对小鼠慢性哮喘模型中气道炎症和气道重构的影响。方法95只BALB/c小鼠随机分为对照组(NS组)、哮喘组(OVA组)、褪黑素治疗组(MT组)、激素治疗组(DXM组)及褪黑素受体拮抗剂Luzindole组(LUZ组)。OVA组、MT组和DXM组卵蛋白(OVA)致敏并反复雾化吸入OVA 2周、4周及8周,造成慢性哮喘模型,LUZ组OVA致敏后雾化吸入OVA 2周;MT组、DXM组和LUZ组分别腹腔注射MT、DXM和LUZ。测定单位气道面积炎症细胞数目、基底膜周径(Pbm)、上皮黏膜层面积(WAmuc)、平滑肌面积(WAm)、气管内壁面积(WAi)、胶原面积(Wcol)、杯状细胞比例和气管基底膜(/1 mm)上BrdU阳性细胞数目。结果OVA组、MT组及DXM组炎症细胞计数高于NS组,OVA组高于MT组和DXM组,LUZ组高于OVA 2周组(P均<0.05);MT组和DXM组之间以及各组2、4和8周之间炎症细胞计数差异无显著性。OVA组WAmuc/Pbm、WAm/Pbm、WAi/Pbm及Wcol/Pbm较NS组、MT组和DXM组增加,MT组和DXM组高于NS组(P均<0.05),各组2、4和8周之间差异无显著性。OVA组杯状细胞积分高于MT组和DXM组,LUZ组明显高于OVA 2周组(P均<0.05),MT组和DXM组间无差异,随着雾化时间延长杯状细胞积分逐渐降低。OVA组、MT组和DXM组气管基底膜上(/1 mm)BrdU阳性细胞数目高于NS组,OVA组高于MT组和DXM组,LUZ组高于OVA 2周组(P均<0.05),MT组和DXM组间无差异。在OVA组、MT组和DXM组,雾化吸入4和8周后BrdU阳性细胞数目高于雾化吸入2周后(P均<0.05)。结论早期使用MT可抑制气道炎症、细胞增生,部分抑制气道重构,其作用与地塞米松相当。     

电针背三针对哮喘大鼠气道重塑模型TGF－β1／Smad3信号通路的调控

【目的】观察电针背三针（双侧大杼、风门、肺俞）对哮喘大鼠气道重塑模型转化生长因子β1（TGF－β1）和Smad3蛋白及mRNA表达的影响,探讨电针背三针治疗哮喘的作用和分子机制。【方法】采用卵蛋白雾化法复制哮喘模型,在激发哮喘6周后处死,采用图像分析法测量大鼠气道形态学参数,免疫组织化学染色法检测支气管肺组织TGF－β1、 Smad3的蛋白表达,采用实时荧光定量PCR （qRT－PCR）检测TGF－β1、 Smad3 mRNA表达水平。【结果】与空白组比较,模型组大鼠平滑肌横断面的标化后面积（WAm／Pbm）、支气管内管壁横断面标化后面积（WAi／Pbm）,支气管肺组织TGF－β1、 Smad3蛋白及mRNA表达水平均显著升高;与模型组比较,电针组各指标均显著降低,差异均有统计学意义（P＜0．05）。【结论】电针背三针对气道重塑的作用可能与其对TGF－β1／Smad3信号通路的调控有关。     

平喘宁调节哮喘大鼠肺组织EGF、C-JUN干预气道重塑研究

目的:研究平喘宁对寒哮大鼠肺组织中ERK信号通路中EGF、C-JUN等相关蛋白以及C-JUN mRNA表达水平的影响,探讨平喘宁干预哮喘气道重塑的作用机制。方法:随机将雄性SD大鼠分为正常组、模型组、平喘宁小剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁大剂量组、桂龙咳喘宁组、地塞米松组,采用HE染色法检测实验后肺组织的病理学改变;采用SqRT-PCR法检测实验后肺组织中C-JUN mRNA的表达丰度;采用Wersten blot法检测实验后肺组织中EGF、C-JUN的相对表达量。结果:HE染色后,模型组较正常组有明显气道重塑现象;各治疗组气道重塑均较模型组得到适当缓解。通过Western blot法检测发现,与正常组相比,EGF蛋白的表达在平喘宁大剂量组无特异性变化(P0.05),在其他各组均有增高(P0.01);C-JUN蛋白的表达在除平喘宁中剂量组无特异性变化外(P0.05),在其他各组均有增高(P0.01);与模型组相比,EGF的表达在地塞米松组和平喘宁大剂量组、小剂量组中降低(P0.01、P0.05);C-JUN蛋白的表达在平喘宁大剂量组和平喘宁中剂量组中下降(P0.01、P0.05)。通过RT-PCR检测:与正常组相比,C-JUN mRNA的表达在各组中均增高(P0.01);与模型组相比,C-JUN mRNA的表达在平喘宁大剂量组、平喘宁中剂量组中下降(P0.01)。结论:平喘宁大剂量组与平喘宁中剂量组可降低寒哮大鼠肺组织中EGF、C-JUN蛋白和基因的表达,从而延缓气道重塑以治疗哮喘。     

消化复宁汤对肝郁脾虚型慢性萎缩性胃炎大鼠ERK1/2和p-ERK1/2的影响

目的 研究消化复宁汤对肝郁脾虚型慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)大鼠细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路的影响,探讨消化复宁汤防治CAG的机制.方法 将80只雄性Wistar大鼠随机取10只为正常组,其余大鼠随机分为模型组,消化复宁汤高、中、低剂量组和维酶素组.采用脱氧胆酸钠及30％和60％无水乙醇灌胃联合施压束缚和饥饱失常法复制肝郁脾虚证CAG模型.实验结束后,观察各组大鼠一般情况的变化,采用ELISA法检测大鼠血清ERK1/2水平,采用Western Blot法检测大鼠胃组织ERK1/2、p-ERK1/2的表达水平.结果 消化复宁汤能明显改善CAG大鼠肝郁脾虚证候表现.消化复宁汤中剂量组与维酶素组血清ERK1/2水平较模型组显著升高(P＜0.05),消化复宁汤中、低剂量组与维酶素组大鼠胃组织ERK1/2水平显著高于模型组(P＜0.05);消化复宁汤高、中、低剂量组及维酶素组大鼠胃组织p-ERK1/2表达水平较模型组显著降低(P＜0.05);消化复宁汤高、中、低剂量组血清ERK1/2水平和胃组织p-ERK1/2表达水平相比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 消化复宁汤可通过激活ERK1/2,抑制p-ERK1/2的水平防治CAG发生,其作用无明显的剂量依赖性.     

不同剂量三七皂苷单体Rg1下调大鼠低O2高CO2性肺动脉平滑肌细胞ERK1/2的表达

目的:观察在低O2高CO2条件下,不同剂量的三七皂苷单体Rg1对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响.方法:分离并纯化SD大鼠PASMCs,随机分6组:常氧对照组(N组)、低O2高CO2组(H组)、DMSO对照组(HD组)、Rg1低、中、高剂量干预组(RgL组、RgM组、RgH组).分别以Western blot和RT-PCR法检测磷酸化ERK (p-ERK)蛋白和ERK1及ERK2 mRNA的表达水平.结果:与N组相比,HD组p-ERK蛋白和ERK1、ERK2 mRNA表达水平明显高于N组(P＜0.01);RgL、RgM、RgH组在不同程度上抑制了p-ERK蛋白和ERK1、ERK2 mRNA的表达(P＜0.01),其中三七皂苷单体Rg1以40mg/L的浓度为佳.结论:三七皂苷单体Rg1可下调低O2高CO2条件下大鼠PASMCs ERK1/2的表达,这可能是Rg1减轻低O2高CO2性肺动脉收缩(HHPV)的机制之一.     

ERK1/2信号通路在大鼠气道黏液高分泌中的作用研究

目的:探讨细胞外信号通路1/2(ERK1/2)在气道黏液高分泌过程中的作用。方法:通过大鼠气道内注入脂多糖(LPS)并烟熏建立气道黏液高分泌模型。分别给予ERK1/2特异性阻断剂-U01260.25mg/kg、0.5mg/kg和1mg/kg腹腔注射14d。提取肺组织,采用免疫组化、RT-PCR等方法检测Muc5ac、ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)等的表达水平。结果:LPS及烟熏刺激可以使大鼠气道上皮Muc5ac mRNA和蛋白的表达增多,并引起p-ERK1/2与ERK1/2比值明显增高。U0126可以抑制由LPS导致的气道Muc5ac高表达和p-ERK1/2与ERK1/2比值增高。p-ERK1/2与ERK1/2的比值与Muc5ac mRNA和蛋白的表达呈正相关关系。结论:U0126可抑制LPS及烟熏所致的气道黏液高分泌状态,其机制可能是ERK1/2信号通路参与了气道黏液高分泌的调控,U0126通过特异性阻断ERK1/2从而导致黏液高分泌的下调。