InvA-PCR应用于磐安县钩端螺旋体病检测的研究

目的:针对InvA-PCR方法检测钩端螺旋体病的研究。方法:根据侵袭蛋白A基因(InvA)与卫生行业标准推荐的引物G1/G2对比,进行特异性与灵敏度研究,并应用于磐安鼠标本钩端螺旋体PCR检测。对磐安县2009分离菌株进行钩端螺旋体InvA-PCR和LS-PCR鉴定。结果:InvA-PCR具有较高的灵敏度和特异性,该引物可特异性扩增致病性钩端螺旋体DNA,对本实验所用的其他细菌不扩增。2009年分离的钩端螺旋体菌株进行PCR鉴定结果与血清学鉴定结果相符。对鼠标本进行InvA-PCR检测,InvA-PCR检测阳性率为5%。与卫生行业标准推荐的引物G1/G2对比,符合率为100%。结论:InvA-PCR检测方法可灵敏、特异地检测致病性钩端螺旋体,能正确有效地反应野生动物带毒率,为控制钩端螺旋体病提供依据。     

用聚合酶链反应（PCR）检测临床标本中的钩端螺旋体

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测临床标本中的钩端螺旋体王际莘译杨裕华校基因ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交有助于确定９种基因型的钩体，其构成２００多种血清型，其中非致病性钩体仅有三种。即双曲钩端螺旋体，Ｌ．ｍｅｙｅｒｉ和Ｌ．ｗｏｌｂａｃｈｉ。致病性钩体由二种构成：问号...     

flaB-PCR在钩端螺旋体病检测中应用

目的 探讨flaB-PCR对组织标本中钩端螺旋体检测的可行性，为钩端螺旋体流行病学调查提供一种快速、有效的技术手段。方法 根据黄疸出血型钩体赖株高度保守序列flaB设计一对引物，用PCR方法对实验动物标本及疫区动物标本中的钩端螺旋体DNA进行flaB基因片断扩增，扩增产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果 该引物可特异性扩增钩端螺旋体DNA，而对本实验所用其它细菌均不扩增。肾组织中含10条钩端螺旋体经flaB-PCR扩增后，琼脂糖凝胶电泳可以目测到扩增产物。26份人工感染钩端螺旋体的动物脏器标本，flaB-PCR扩增阳性10份，阳性率38．46％；细菌分离阳性2份，阳性率7．69％。2种方法比较差异有统计学意义（X^2=6．93，P〈0．01）。疫区70份蛙肾标本。分离细菌8株，阳性检出率11．43％；flaB-PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳阳性14份，阳性检出率20％。细菌分离阳性的标本flaB-PCR均为阳性。结论 flaB-PCR灵敏、特异、快速，是钩端螺旋体检测的有效方法，可用于钩体病疫情监测和流行病学调查。     

聚合酶链反应检测钩端螺旋体的研究进展

钩体病是由钩端螺旋体(简称钩体)引起的一类季节性人畜共患病。该病型别较多，临床症状复杂，危害较大。自从1886年Weil医生首次报导本病以来．各国学在钩体病原学、病理学、流行病学、实验室诊断及疫苗的研制等方面的研究进展迅速，特别是八十年代后，随着分子生物学的发展，许多新方法用于钩体病的研究，取得了许多成果,     

应用PCR技术检测小型兽类肾组织中钩端螺旋体DNA的研究

目的 :应用PCR技术对安徽省 7个不同地区所获的小型兽类肾组织中携带的钩端螺旋体DNA进行检测。结果 :安徽省的小型兽类携带钩体DNA检出率为 9.41% (16 / 170 ) ,不同地区间检出率有所不同 ,个别地区啮齿类动物携带钩体DNA检出率高达 19.0 5 % (12 / 6 3) ,而有的地区则未检出 ;不同的小兽之间携带钩体DNA的检出率也有所不同 ,黑线姬鼠为 12 .96 % (14/ 10 8) ,褐家鼠为 5 .88% (2 / 34 ) ,其余 4种啮齿类动物则未检出。结论 :应用PCR技术能准确及时地从宿主动物的肾脏组织中检测出钩体DNA的存在 ,其高度特异性、敏感性是鼠肾培养及鼠血MAT的检测不可比拟的 ,用其来分析钩体病的流行因素、流行特征和地理分布以及为今后扩大钩体病调查 ,提供了新的手段     

二种PCR检测方法应用于钩端螺旋体检测结果分析

钩端螺旅体病(Leptospirosis,简称钩体病)是由钩端螺旅体(Leptospira,简称钩体)引起的一种分布广泛的人兽共患性传染病.     

浙江省钩端螺旋体PCR检测方法建立与应用

目的：为更好的进行钩端螺旋体病监测,为预防措施提供依据.方法：建立PCR检测方法,进行灵敏度、特异性研究.探索钩端螺旋体PCR扩增DNA条件.对浙江省2006年分离菌11株进行PCR鉴定,对龙游、常山捕获的一百只鼠和一百只蛙肝、脾、肾标本在提取其DNA后进行PCR检测.结果：所建立PCR检测方法具备较高灵敏度和较好特异性.对2006年分离的钩体菌株进行的PCR鉴定结果与血清学鉴定结果相符.鼠和蛙肝、脾、肾标本进行PCR检测,PCR检测阳性率10%,钩体菌株培养分离率仅为1%.x2=15.58,P＜0.05有显著差异.测序及培养均能证实PCR检测结果具有特异性.结论：钩体PCR检测方法的建立能更加准确的反映野生动物自然带毒率.钩体PCR检测方法可推广应用.     

浙江省钩端螺旋体FlaB—PCR检测方法的建立与应用

目的探讨FlaB-PCR检测方法对钩端螺旋体（钩体）检测的可行性。方法根据鞭毛蛋白B基因（FlaB）选择引物,与卫生行业标准推荐的引物G1／G2对比,进行特异性与灵敏度研究,并应用于龙游、常山两地的蛙、鼠标本钩体PCR检测。对浙江省2007年分离菌株进行钩体PCR鉴定。结果FlaB-PCR具有较高的灵敏度和特异性,该引物可特异性扩增致病性钩体DNA,对本实验所用的其他细菌不扩增。2007年分离的钩体菌株进行PCR鉴定结果与血清学鉴定结果相符。鼠和蛙肾标本进行FlaB-PCR检测,阳性率20．94％,与卫生行业标准推荐的引物G1／G2对比,两法符合率为90．54％。结论FlaB-PCR检测方法可灵敏、特异地检测致病性钩体,能正确有效地反映野生动物带病毒率,可为控制钩体病提供依据。     

钩端螺旋体毒力相关基因的分布特点分析

目的 探讨钩端螺旋体(钩体)毒力相关基因的分布特点。方法 根据钩体赖型赖株全基因组序列的生物信息学分析资料，选择了12个可能与钩体毒力相关的基因，采用聚合酶链反应(PCR)方法，对中国问号钩体38株参考菌株和81株分离的野生菌株，以及12株非致病性的双曲钩体共131株菌株进行了检测。结果 问号钩体中各毒力相关基因分布广泛，双曲钩体中仅检测到个别毒力相关基因。lipL32基因存在于所有检测的问号钩体，lipL36基因在问号钩体不同菌株中的变异较大，阳性检测率为0％～90．91％；lal608基因在问号钩体黄疸出血群菌株中阳性检测率为87．50％，而在其他血清群菌株间阳性检测率为0％～25．00％，sphA基因仅在问号钩体少数菌株中能检测到，阳性检测率为17．65％，且在中国赛罗群哈焦型参考菌株中未检测到。结论 这些基因可能是问号钩体重要的毒力相关基因。其中lipL32可能是问号钩体各血清群菌株共同抗原的编码基因；lipL36基因可能和问号钩体血清群特异性和多样性有关；lal608基因可能是黄疸出血群菌株特有的基因；哈焦型菌株与问号钩体菌株在基因结构具有较大的差异。     

聚合酶链反应和地高辛标记的核酸杂交技术用于钩端螺旋体的检测

目的为钩端螺旋体快速诊断和流行病学调查建立一种比较理想的方法.方法根据钩端螺旋体赖株DNA合成一对flaB引物,用PCR技术对钩端螺旋体菌株、疫区现场动物标本等进行flaB基因扩增,用地高辛（DIG）标记flaB基因探针,用琼脂糖凝胶电泳和斑点杂交技术进行检测.结果纯化钩端螺旋体DNA 5pg经flaB-PCR扩增后,琼脂糖凝胶电泳可以目测.用DIG标记的flaB探针可以检测到5fg及以下的DNA扩增产物.疫区70份蛙肾标本,分离细菌8株,阳性率11.43%.flaB扩增阳性14份,阳性率20%;DIG标记探针斑点杂交检测,阳性19份,阳性率为27.14%.结论PCR-斑点杂交是一种灵敏、特异、快速的钩端螺旋体检测方法,既可用于快速检测和早期诊断,也可用于疫情监测和流行病学调查.     

奶液模拟标本中单增李斯特菌real-time PCR检测方法的建立

目的建立了基于TaqMan探针的real-time PCR技术针对奶液模拟标本中单增李斯特菌的快速检测方法。方法用单增李斯特菌hlyO基因的部分片段作为靶基因,制作标准曲线,定量检测奶液中的单增李斯特菌。结果通过对不同李斯特菌及一些较为常见的致病菌的DNA进行扩增,只有单增李斯特菌能够产生扩增曲线,其余菌株均不产生扩增曲线。单增李斯特菌的检测灵敏度可以达到9copies/反应体系。结论该方法特异性好,灵敏度高,整个实验可在1.5h内完成,可用于食品中单增李斯特菌的快速检测和疫情暴发时的相关病原调查。     

Evaluation of rapid urease test for detection of Helicobacter pylori in gastric biopsy specimens

Using 80 gastric biopsy specimens from patients with various gastroduodenal diseases, the isolation rate of H. pylori and urease activity of the biopsy specimens were examined. The sensitivity and specificity of the rapid urease test was 84.6% and 75.9%, respectively, for the cultivation of H. pylori. The mean number of H. pylori detected in urease-positive and negative biopsy specimens was 10^{6.1 ± 0.9} and 10^{4.5 ± 1.2} cfu/g specimens, respectively.     

West Nile Virus detection in kidney, cloacal, and nasopharyngeal specimens

We compared kidney tissue samples and cloacal and nasopharyngeal swab samples from field-collected dead crows and blue jays for West Nile virus surveillance. Compared to tissue samples, 35% more swab samples were false negative. Swab samples were usually positive only when the corresponding tissue sample was strongly positive.     

Telecytology for rapid assessment of cytological specimens

We investigated the feasibility of telecytology for rapid on-site evaluation (ROSE) of cytological specimens. During a six-month study, 385 consecutive adult patients underwent image-guided fine needle aspiration biopsies of the lung or transbronchial needle aspirations of mediastinal lymph nodes. Direct smears were immediately wet-fixed and a cytopathologist or a trained cytotechnologist evaluated specimen adequacy using a telecytology system. Specimens were reported as adequate or inadequate. A total of 238 specimens (62%) were diagnosed without rapid assessment. The percentage of non-representative samples in the group without rapid evaluation was 42%. In the group of 147 specimens (38%) which underwent rapid evaluation, 48 (33%) were reported as inadequate and 99 (67%) as adequate. Only 22% of final diagnoses were non-representative, including samples which were assessed as inadequate by rapid evaluation. In three patients of 32, where the obtained material was recognized as adequate, final diagnoses were non-representative. Rapid evaluation with the use of telecytology improves the diagnostic yield of guided fine-needle aspiration biopsies by decreasing the percentage of non-representative specimens.     

Real-time PCR快速检测钩端螺旋体方法的建立

目的:采用新型TaqMan探针建立检测钩端螺旋体的实时荧光定量PCR。方法:根据钩端螺旋体16s rDNA设计的一对引物及探针,以钩体标准菌株的核酸为模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI 7500)建立实时荧光定量PCR。结果:建立的定量标准曲线的循环CT值与模板拷贝数呈现良好的线性关系(r=0.998),与普通PCR相比,荧光PCR的灵敏度是其1000倍,检测其他细菌DNA,未检测到信号。结论:本研究中检测钩端螺旋体的实时荧光定量PCR具有高度的特异性和敏感性,特别适合检测样本中微量的钩端螺旋体。     

临床标本中未知病毒基因芯片检测方法探索

目的探索可用于检测临床标本中未知病毒的基因芯片技术。方法设计合成1～4型登革病毒基因芯片探针,制备成登革病毒基因芯片。提取1～4型登革病毒标准毒株的核酸RNA,以phi29DNA聚合酶结合带标签序列的随机引物进行全基因组扩增,再以Cy3荧光染料标记的标签序列引物进行PCR随机扩增标记,标记产物进一步用登革病毒芯片进行杂交检测,随后用广州白云机场出入境检验检疫局国境口岸收集的登革热病人血清标本对新建立的方法进行验证。结果1～4型登革病毒标准毒株培养液提取的RNA,经扩增、标记及芯片杂交检测,相应探针阵列均可检测到明显杂交信号,探针阳性率均达100％;从3份临床登革热病人血清标本中提取的RNA,同样也可得到明显的杂交信号,而背景干扰信号很低,从相应达到100％探针阳性率的探针阵列可判断,3份病人血清标本中分别为含1、2、3型登革病毒。结论该研究新建立的基因芯片方法,可用于检测临床血清标本中的登革病毒,如果设计更多针对不同病原体的特异性芯片探针,该方法还可用于临床标本中一些未知病原体的鉴定。     

RT-PCR快速检测腮腺炎病毒

目的：建立腮腺炎病毒的核酸快速诊断技术。方法：在腮腺炎病毒核蛋白基因（NP）的保守区域设计一对半引物，采用逆转录聚合酶链（RT-PCR）和半巢式PCR方法扩增腮腺炎病毒特异性核酸片段。结果：该方法能特异性地扩增腮腺炎病毒357bp和232bp的核酸片段，而对麻疹、风疹和流感病毒无交叉反应。检测腮腺炎病毒的灵敏度，1次PCR可检测出10CCID50，2次PCR反应可达0.1CCID50。采用该方法从流行性腮腺炎患含漱液标本中能直接检出腮腺炎病毒核酸条带。结论：该方法能特异、敏感地检测临床标本中腮腺炎病毒，是快速诊断腮腺炎病毒感染的理想方法。