17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞上皮间质转化诱导作用的研究

目的:研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜癌细胞发生上皮间质转化的诱导作用。方法:用17β-E2处理Ishikawa和HEC-1A细胞后,Western blot法检测两种细胞中E-cad、N-cad和Vimentin蛋白的表达。结果:经10-8mol/L E2作用后,Ishikawa细胞中的E-cad蛋白表达减少(P0.05),N-cad、Vimentin蛋白增加(P0.05);其他浓度作用前后,各蛋白表达无明显变化(P0.05)。经不同浓度E2作用后,HEC-1A细胞中E-cad、Ncad、Vimentin蛋白均无明显变化。结论:17β-E2仅在特定浓度下存在诱导ER阳性子宫内膜癌细胞Ishikawa发生上皮间质转化的作用。     

CMKLR1对子宫内膜癌细胞增殖和迁移特性的影响

目的:探讨趋化因子样受体1(CMKLR1)对子宫内膜癌细胞增殖及迁移能力的影响,及其对Akt、ERK及MMP2信号传导通路的作用。方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)和Western blot法检测CMKLR1在子宫内膜癌细胞系(HEC-1-B)和正常子宫内膜细胞(HESC)中的表达。shRNA干扰技术分别构建CMKLR1 shRNA和NC shRNA稳转细胞系,并验证干扰效率。CCK8、EDU增殖检测法和细胞划痕实验法检测沉默CMKLR1基因表达对子宫内膜癌细胞增殖及迁移的影响。Western blot法检测沉默CMKLR1基因表达后Akt/ERK/MMP-2信号通路的变化。结果:与正常子宫内膜细胞HESC相比,CMKLR1在子宫内膜癌细胞HEC-1-B中高表达。使用shRNA干扰技术作用的HEC-1-B细胞中CMKLR1基因沉默效率达77.25%。CCK8和EDU法检测显示,沉默CMKLR1基因表达可显著降低子宫内膜癌细胞HEC-1-B的增殖速度(P0.05)。划痕法显示,沉默CMKLR1基因表达显著抑制子宫内膜癌细胞HEC-1-B迁移能力(P0.01)。Western blot检测显示,CMKLR1 shRNA组和NC shRNA组中ERK/Akt/MMP-2的蛋白表达量分别为1.16±0.11、1.57±0.05、0.64±0.01和0.18±0.01、0.34±0.13、0.11±0.04。沉默CMKLR1基因表达后可显著抑制子宫内膜癌细胞系HEC-1-B中磷酸化ERK、Akt及MMP-2蛋白表达,差异有统计学意义(P0.01)。结论:内源性CMKLR1可能参与子宫内膜癌的进展与转移过程,为子宫内膜癌潜在的基因治疗提供新的靶点,以及为子宫内膜癌临床治疗提供新的途径。     

Neuropilin-1在子宫内膜癌细胞系中的表达及17β雌二醇对其表达的调控及意义

目的:探讨神经纤毛蛋白(NRP-1)在子宫内膜癌细胞系中的表达及17β雌二醇(17β-E2)对其表达的调控。方法:采用RT-PCR法及Western blot法检测NRP-1在子宫内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞系中的表达;荧光定量PCR法检测17β-E2对HEC-1A及Ishikawa细胞系中NRP-1 mRNA表达的调控;Western blot法检测Ishikawa细胞中NRP-1表达的变化。结果:HEC-1A及Ishikawa细胞中NRP-1 mRNA及蛋白水平均为阳性表达。17β-E2对Ishikawa细胞系中NRP-1 mRNA表达的影响显著强于HEC-1A,且17β-E2浓度为2×10-7mol/L,作用时间48h时对NRP-1 mRNA表达的促进作用最明显。17β-E2对Ishikawa细胞中NRP-1蛋白表达呈时间依赖性。结论:NRP-1表达于高表达雌激素受体(ER)细胞系Ishikawa及低表达ER细胞系HEC-1A中,且2×10-7mol/l E2作用48h能明显促进Ishikawa细胞系中NRP-1的表达,提示NRP-1可能与子宫内膜癌的发生发展密切相关。     

17β-雌二醇对人子宫内膜癌细胞的增殖及P21ras和p-Erk表达的研究

目的:探讨17β-雌二醇(E2)对人子宫内膜腺癌雌激素受体(ER)阳性的Ishikawa和ER阴性的HEC-1A细胞增殖,细胞周期及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白P21ras和p-Erk表达的影响及意义。方法:用MTT法,流式细胞技术检测不同浓度E2作用Ishikawa和HEC-1A细胞不同时间的细胞吸光度值及细胞周期,用免疫细胞化学法检测上述细胞中P21ras和p-Erk的表达。结果:随E2浓度增加,Ishikawa细胞吸光度值上升并呈时间依赖性(P<0.01),G0～G1期比例下降(P<0.01),S期比例升高(P<0.01);HEC-1A细胞吸光度值及细胞周期无明显变化(P>0.05);10-6mol/LE2作用于Ishikawa细胞30min时,P21ras和p-Erk活化表达最强,作用于HEC-1A细胞15min时,P21ras和p-Erk即有明显表达而且达高峰,随着E2浓度增加两种细胞中P21ras和p-Erk表达均逐渐增加,呈浓度依赖性。结论:E2可促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖和周期进展,而且可以促进Ishikawa和HEC-1A中P21ras和p-Erk表达增加。     

基质细胞衍生因子1α对子宫内膜癌细胞信号传导通路的激活作用

目的探讨基质细胞衍生因子1α（SDF-1α）对子宫内膜癌细胞系HEC-1A和Ishikawa磷脂酰肌醇3激酶，蛋白激酶B(PI-3K／Akt)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的激活作用。方法应用蛋白免疫印迹杂交技术，检测SDF-1α作用于HEC-1A和Ishikawa细胞后Akt及ERK的活化情况。结果20ng/ml SDF-1α作用于HEC-1A细胞15min时，ERK1/2活化最明显，且持续至少达2h，随着SDF-1α浓度的增加，ERK1/2活化逐渐增强；SDF-1α作用HEC-1A细胞后Akt的活化水平无明显改变。20ng/ml SDF-1α作用于Ishikawa细胞15min时，Akt活化最明显，且持续至少达2h，随着SDF-1α浓度的增加，Akt活化逐渐增强；SDF-1α作用Ishikawa细胞后ERK1/2的活化水平无明显改变。结论SDF-1α作用于雌激素受体阴性的HEC-1A细胞和雌激素受体阳性Ishikawa细胞，激活的信号传导通路不同。     

雌激素对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞β-catenin mRNA的影响

目的:探讨Wnt信号通路在子宫内膜异位症(EMs)发病机制中的作用。方法:体外分离培养内异症患者在位内膜间质细胞,应用RT-PCR检测不同浓度(0mol/L,10-14mol/L,10-12mol/L,10-10mol/L,10-8mol/L,10-6mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)作用子宫内膜间质细胞48h和17β-E2(10-10mol/L)作用子宫内膜间质细胞不同时间(0h,12h,24h,48h)后β-catenin mRNA的表达水平。同法检测雌激素受体拮抗剂ICI182,780(10-6mol/L)对17β-E2促进β-catenin mRNA表达的影响。结果:17β-E2体外能明显促进在位内膜间质细胞β-catenin mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖性,于10-10mol/L17β-E2作用48h最明显。ICI182,780能明显抑制雌激素对在位内膜间质细胞β-catenin mRNA的表达。结论:Wnt信号通路可能参与了EMs的发生及发展。     

periostin促进Ishikawa子宫内膜癌肿瘤干细胞的增殖和侵袭

目的:探讨periostin对子宫内膜癌肿瘤干细胞增殖和侵袭的影响,及其可能作用机制。方法:收集100例手术切除的子宫内膜癌组织及距病灶3cm的癌旁组织,免疫组化、荧光定量PCR技术检测子宫内膜癌组织及癌旁组织中periostin的表达。流式细胞仪分选出子宫内膜癌细胞系Ishikawa CD133~+细胞并培养,免疫荧光检测Ishikawa肿瘤细胞球中CD133的表达情况。Western bolt法检测CD133~+ Ishikawa和parental Ishikawa细胞中periostin的表达。构建针对periostin的shRNA表达载体转染Ishikawa CD133~+细胞和过表达periostin的载体转染亲本parental Ishikawa细胞。Western bolt法检测细胞中periostin蛋白表达水平,CCK-8和Transwell小室检测细胞的增殖和侵袭能力,Western bolt法检测Wnt信号通路蛋白(β-catenin、c-myc、CyclinD1、GSK3β)的表达。结果:periostin在子宫内膜癌组织的表达高于癌旁组织(P0.01),并与子宫内膜癌的病理级别呈正相关(r=0.65,P0.01)。子宫内膜癌肿瘤干细胞具有"干细胞"特性,能形成肿瘤球并表达干细胞标记物CD133。periostin在CD133~+ Ishikawa细胞中的表达高于亲本parental Ishikawa细胞(P0.01);相对于转染空载体组细胞,periostin shRNA能有效抑制Ishikawa CD133~+细胞的增殖和侵袭,且抑制Wnt信号通路蛋白(β-catenin、c-myc、CyclinD1、GSK3β)的表达(均P0.01)。Parental Ishikawa细胞过表达periostin慢病毒能增强其增殖和侵袭能力,表现为Wnt/β-catenin信号通路被激活。结论:periostin通过激活Wnt/β-catenin信号通道促进子宫内膜癌肿瘤干细胞的增殖和侵袭。periostin可能成为临床治疗子宫内膜癌的新靶标。     

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的激活作用

目的　探讨 17β 雌二醇 (E2 )对子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶B(PI 3K/PKB)信号传导通路的激活作用以及PI 3K抑制剂对其的影响。方法　应用免疫印迹杂交技术 ,检测一定浓度 (1× 10 -6mol/L) 17β E2 作用于Ishikawa细胞不同时间 (分别为 0、5、15、30、6 0、12 0min)后和不同浓度 (分别为 0、1× 10 -10 、1× 10 -8、1× 10 -6、1× 10 -4mol/L) 17β E2 作用Ishikawa细胞一定时间 (30min)后PKB的活化情况 [以磷酸化PKB和总PKB比值 (p PKB/PKB)表示 ],以及用同法检测PI 3K抑制剂LY2 94 0 0 2对 17β E2 活化PKB的影响。结果　 1× 10 -6mol/L 17β E2 作用于Ishikawa细胞 15min时 ,PKB的活化水平 (0 5 33± 0 0 2 9)已明显高于对照 (0 36 1± 0 0 2 9,P <0 0 5 ) ,30min时最明显 (0 6 6 6± 0 0 2 1,P <0 0 0 1) ,而且持续至少达 12 0min时 ;随着 17β E2 浓度 (分别为 1× 10 -10 、1×10 -8、1× 10 -6、1× 10 -4mol/L)的增加 ,PKB的活化水平逐渐增高 ,与对照比较 ,差异有显著性 (除 1×10 -10 mol/L外 ,P值分别为 >0 0 5、<0 0 5、<0 0 5、<0 0 0 1)。随着LY2 94 0 0 2作用浓度 (分别为 0 1、10、5 0、10 0 μmol/L)的增加 ,17β E2 作用Ishikawa细胞后P     

长链非编码RNA与子宫内膜癌关系的研究进展

子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年增长。长链非编码RNA(lncRNA)是非编码RNA家族的成员之一,近年研究发现其在子宫内膜癌的病理过程中发挥重要的调控作用,成为研究热点。lncRNA可作为促进基因,通过人类第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PTEN/PI3K/AKT/mTOR)、Wnt/β连环蛋白(Wnt/β-Catenin)、细胞外信号调节激酶/腺苷酸活化蛋白激酶(ERK/AMPK)等多种信号通路调控子宫内膜癌细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡过程,亦可通过PTEN/PI3K/AKT/mTOR途径抑制子宫内膜癌过程。在lncRNA调控子宫内膜癌的过程中,形成的lncRNA-miRNA轴可作为未来干预治疗的新方向。lncRNA还可影响化疗药的耐药性,并对子宫内膜癌的诊断和预后有重要价值。综述近年lncRNA和子宫内膜癌的研究,为lncRNA对于子宫内膜癌的诊断、预后或治疗靶点提供理论依据。     

乙二醛酶Ⅰ在子宫内膜癌组织和细胞中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的 了解乙二醛酶Ⅰ(GLO-Ⅰ)在子宫内膜癌组织和细胞中的表达情况,探讨GLO-Ⅰ对子宫内膜癌细胞增殖与凋亡的影响.　方法应用免疫组化抗生物素蛋白-生物素复合物(ABC)法检测子宫内膜癌(29份)、正常子宫内膜(19份)组织中GLO-Ⅰ蛋白的表达,紫外分光光度计检测子宫内膜癌及其癌旁组织、正常子宫内膜组织中GLO-Ⅰ的活性.GLO-Ⅰ小分子RNA(siRNA)转染子宫内膜癌细胞株lshikawa细胞后,采用蛋白印迹法及逆转录(RT)-PCR技术分别检测其GLO-Ⅰ蛋白及mRNA的表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪分别检测其细胞增殖及凋亡情况.结果 (1)子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ蛋白的阳性表达率为76%(22/29),正常子宫内膜组织为0/19,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).正常子宫内膜、子宫内膜癌癌旁组织中GLO-Ⅰ活性(分别为1.1、0.8 IU/mg)较弱,子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ活性(92.3 IU/mg)明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).(2)Ishikawa细胞转染GLO-Ⅰ silRNA后,其GLO-Ⅰ mRNA的表达水平为0.25±0.06,低于阴性对照(转染与目的基因无关的siRNA)的0.93±0.10,差异有统计学意义(P<0.01);其GLO-Ⅰ蛋白的表达水平为0.38±±0.06,低于阴性对照的0.94±0.13,差异也有统计学意义(P<0.01).(3)Ishikawa细胞转染GLO-Ⅰ siRNA后,其细胞增殖能力与空白对照(仅加转染试剂)比较明显降低(P=0.028);其细胞凋亡率为(6.7±0.8)%,高于阴性对照的(1.2±0.4)%和空白对照的(1.4±0.4)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 GLO-Ⅰ在子宫内膜癌组织和细胞中均呈过度表达,子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ活性异常升高.抑制GLO-Ⅰ基因表达可促进子宫内膜癌细胞凋亡,并抑制其增殖.     

AMPK/ERK信号通路在脂联素抑制子宫内膜癌细胞增殖中的作用

目的:探讨脂联素对子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用及AMPK/ERK信号传导通路的有关机制。方法:以10μg/ml脂联素作用子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞0～60min,Western blot检测脂联素作用不同时间后细胞AMPK及ERK的磷酸化程度。脂联素作用12,24h后,分别采用RT-PCR和Western blot检测Cyclin D1 mRNA和蛋白水平。脂联素作用48h,MTT法检测细胞增殖。结果:脂联素以时间依赖方式诱导子宫内膜癌细胞AMPK活化,脂联素作用5min后明显活化,并维持至30min(F=22.749,P=0.000),AMPK抑制剂复合物C可明显抑制脂联素诱导的细胞AMPK活化。脂联素以时间依赖模式抑制子宫内膜癌细胞ERK活化,作用5min ERK活化明显受抑制,并维持至少60min(F=13.802,P=0.000),复合物C明显阻断脂联素诱导的细胞ERK活性抑制。脂联素明显抑制Cyclin D1 mRNA转录和蛋白表达(P=0.003,P=0.000),复合物C明显阻断脂联素对细胞Cyclin D1 mRNA转录和蛋白表达的抑制作用(P=0.006,P=0.000)。脂联素明显抑制细胞增殖(P=0.001),复合物C明显阻断脂联素对细胞的抑制作用(P=0.002)。结论:脂联素可能通过AMPK/ERK/Cyclin D1途径抑制子宫内膜癌细胞增殖。     

瘦素对人子宫内膜癌细胞雌激素原位合成的影响

目的探讨瘦素对子宫内膜癌(EC)细胞中芳香化酶表达和原位雌激素合成的影响,以及瘦素在子宫内膜癌发病机制中的作用。方法 2009年4月至2010年6月在辽宁医学院附属第一医院采用EC间质细胞与Ishikawa细胞共培养模式;MTT法检测瘦素对EC细胞增殖的影响;RT-PCR法及免疫印迹法分别检测间质细胞和Ishikawa细胞中芳香化酶mRNA及蛋白的表达,并观察瘦素对共培养细胞中芳香化酶表达的影响;放免法检测瘦素对共培养细胞生成雌二醇的影响。结果瘦素明显促进共培养的子宫内膜癌间质细胞和Ishikawa细胞的增殖,在0～100μg/L范围内呈剂量依赖性,100μg/L时增殖效应最大,自(121.14±5.50)%至(274.24±6.03)%;芳香化酶在间质细胞中的表达水平高于Ishikawa细胞,瘦素增加EC细胞芳香化酶的表达及雌激素的合成,当100μg/L瘦素时,E2(1.35±0.17)pmol/L,当加入100μg/L瘦素+1μmol/L来曲唑时E2(0.47±0.18)pmol/L,来曲唑可抑制此作用。结论瘦素可能通过促进EC细胞芳香化酶的表达,增加原位雌激素合成进而刺激EC细胞增殖。     

雌激素通过子宫内膜癌细胞膜受体激活丝裂原活化蛋白激酶通路快速效应的初步研究

目的 研究子宫内膜癌Ishikawa细胞中17β雌二醇通过细胞膜受体对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的快速激活效应.方法 17β雌二醇偶联牛血清白蛋白(E2-BSA)在不同的时间作用于Ishikawa细胞后,采用蛋白印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)1和ERK2(ERK1/2)的表达情况,并利用激光扫描共焦显微镜(激光共聚焦)技术观察雌激素是否可以与细胞膜受体结合,不穿过细胞膜而快速磷酸化ERK1/2.结果 蛋白印迹法检测发现,ERK1/2在1×10-7mol/L的E2-BSA作用5 min后被快速磷酸化,磷酸化ERK1/2蛋白的表达水平为0.52,60 min时达到高峰(表达水平为0.98),120 min时回落(表达水平为0.09).激光共聚焦技术显示,E2-BSA在作用5 min时与细胞膜上相应受体结合,未穿过细胞膜即增高磷酸化ERK1/2的表达.结论 雌激素可以通过细胞膜受体快速激活子宫内膜癌细胞的MAPK通路.     

信号通路抑制剂对PTEN基因不同表达状态子宫内膜癌细胞的作用

目的 比较相关信号通路抑制剂诱导PTEN基因不同表达状态子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡情况.方法 以PTEN反义寡核昔酸及PTEN真核表达载体转染子宫内膜癌细胞(HEC-1A、Ishikawa)后,激光共聚焦显微镜观察PTEN蛋白的表达.表皮生长因子受体、丝裂原活化蛋白激酶及雷帕霉素靶蛋白信号通路抑制剂--RG-14620、SB203580(SB)及西罗莫司分别处理HEC-1A、HEC-1A-PTEN-null、Ishikawa、Ishikawa-PTEN细胞,荧光染色法、流式细胞仪、四甲基偶氮唑蓝比色法分别检测细胞凋亡时的形态学改变、细胞凋亡率、细胞周期分布、细胞存活率.结果 转染后,Ishikawa-PTEN细胞内PTEN蛋白表达增加,HEC-1A-FFEN-null细胞内PTEN蛋白表达受到抑制.RG-14620、SB及西罗莫司处理后,Ishikawa和HEC-1A-PTEN-null细胞荧光染色见核呈浓集周缩改变;细胞发生明显凋亡及G1期阻滞,尤以SB作用最为显著,Ishikawa+SB、HEC-1A-PTEN-null+SB的细胞凋亡率分别为(37.8±0.8)%、(31.6±0.8)%,G_1期细胞比例增加[分别为(87.5±1.9)%、(84.1±3.2)%];细胞增殖受到抑制,尤以SB处理后作用为显著,Ishikawa+SB、HEC-1A-PTEN-null+SB的细胞存活率仅为(49.0±1.7)%、(54.0±2.1)%.结论 PTEN基因缺失使相应信号通路抑制剂作用的子宫内膜癌细胞增殖明显受抑,细胞阻滞于G1期,细胞凋亡增加,对相关信号通路抑制剂的敏感性增加.     

双酚A激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖的研究

目的:研究双酚A(bisphenol A,BPA)活化磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)促子宫内膜癌细胞Ishikawa和RL952增殖的机制。方法:CCK8试剂盒检测Ishikawa和RL952细胞的增殖情况,蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AKT蛋白的表达。结果:在Ishikawa和RL952细胞中,BPA作用48 h时,细胞增殖呈浓度依赖性,1μmol/L的BPA促细胞生长效应最显著,Ishikawa和RL952细胞增殖率分别为0.758±0.023和0.692±0.042。BPA浓度超过1μmol/L后,促细胞增殖的作用下降。BPA作用24 h时促增殖效应不明显,BPA作用72 h时表现出细胞毒作用。1μmol/L BPA处理的Ishikawa和RL952细胞48 h后p-AKT蛋白的表达较对照组升高(P<0.05),加入PI3K抑制剂(LY294002),p-AKT的蛋白表达比对照组降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BPA通过激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖。     

长链非编码RNA与子宫内膜癌关系的研究进展

子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年增长。长链非编码RNA(lncRNA)是非编码RNA家族的成员之一,近年研究发现其在子宫内膜癌的病理过程中发挥重要的调控作用,成为研究热点。lncRNA可作为促进基因,通过人类第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PTEN/PI3K/AKT/mTOR)、Wnt/β连环蛋白(Wnt/β-Catenin)、细胞外信号调节激酶/腺苷酸活化蛋白激酶(ERK/AMPK)等多种信号通路调控子宫内膜癌细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡过程,亦可通过PTEN/PI3K/AKT/mTOR途径抑制子宫内膜癌过程。在lncRNA调控子宫内膜癌的过程中,形成的lncRNA-miRNA轴可作为未来干预治疗的新方向。lncRNA还可影响化疗药的耐药性,并对子宫内膜癌的诊断和预后有重要价值。综述近年lncRNA和子宫内膜癌的研究,为lncRNA对于子宫内膜癌的诊断、预后或治疗靶点提供理论依据。     

ERRα过度表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞内分泌治疗的影响

目的探讨孤儿受体-雌激素受体相关受体α（ERRα）在子宫内膜癌Ishikawa细胞中过度表达对内分泌治疗的影响。方法重组并构建含有绿色荧光蛋白（GFP）和G418耐药筛选标记的真核表达质粒pEGFP-N1-3FLAG-ERRα,瞬时转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa后采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测ERRαmRNA和蛋白的表达情况。使用不同浓度的ICI182780处理子宫内膜癌Ishikawa细胞、Ishikawa-空载体细胞（Ishikawa-空）和ERRα过度表达的（Ishikawa-ERRα）细胞,流式细胞技术检测分析10-6mol/LICI182780对细胞诱导的凋亡情况。结果瞬时转染pEGFP-N1-ERRα质粒后,Ishikawa在mRNA和蛋白水平均能检测到ERRα的表达增加。流式细胞仪细胞凋亡分析表明,ERRα过度表达导致子宫内膜癌细胞Ishikawa耐受ICI182780的诱导凋亡作用（P〈0.05）。结论 ERRα过度表达为激素依赖性的子宫内膜癌细胞株Ishikawa提供了一种耐受内分泌治疗的机制。     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与子宫内膜癌

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路目前已鉴定出4条[细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38)、c.Jun氨基未端激酶(JNK)和ERK5],其中ERK1/2通路可被多种刺激活化,通过调控细胞周期,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖、迁移和侵袭等而与肿瘤的发生发展密切相关.许多子宫内膜痛相关因素通过MAPK/ERK通路起作用.雌激素可以通过非基冈组转录效应迅速激活MAPK通路促进子宫内膜的的发生发展.综述MAPK/ERK信号通路的研究进展,重点论述MAPK/ERK信号通路与子宫内膜癌的关系及分子机制,以及MAPK/ERK通路抑制剂在肿瘤防治方面的临床应用前景.     

PTEN在子痫前期胎盘滋养细胞浸润不足中的作用及机制研究26

目的:检测子痫前期(PE)患者胎盘组织中PTEN表达,探讨PTEN对滋养细胞迁移功能的调控及其可能机制.方法:收集重度PE患者和正常孕妇的胎盘组织各20例,实时定量PCR和Western blot法检测胎盘组织中PTEN表达;将PTEN过表达质粒(pcDNA3.1-HA-PTEN)或特异性siRNA(siPTEN)瞬时转染至HTR-8/SVneo细胞,同时转染pcDNA3.1或siCTL作为对照.采用划痕实验评估细胞迁移能力,Western blot法检测p-Akt(Thr308)、p-Akt(Ser473)、Akt、MMP-2和MMP-9表达.结果:重度PE患者胎盘组织中PTEN mRNA和蛋白表达明显高于正常孕妇,差异均有统计学意义(P<0.01).与转染pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-HA-PTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48 h后,细胞迁移率明显降低[(26.42±6.68)%vs(52.92±6.71)%,P<0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)表达显著下调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达下降;与转染siCTL组比较,siPTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48 h后,细胞迁移率则明显升高[(50.39±6.84)%vs(30.04±5.40)%,P<0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)的表达明显上调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达升高.结论:重度PE患者胎盘组织中PTEN表达明显升高,PTEN可通过下调Akt活性降低MMP-2和MMP-9表达,抑制滋养细胞的迁移.提示PTEN在PE的发病中发挥了一定的作用.     

Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株化疗敏感性的研究

目的:研究Tie2表达对子宫内膜癌细胞株化疗敏感性的影响,探索子宫内膜癌辅助治疗新方法。方法:将表达Tie2-siRNA的碱基片段插入含有CMV启动子、新霉素抗性基因及绿色荧光蛋白报告基因的质粒中,应用脂质体包涵体技术将质粒转染入子宫内膜癌Ishikawa细胞株,以减少Tie2基因表达,采用逆转录PCR及蛋白印迹方法鉴定。DAPI染色检测各组细胞凋亡。不同浓度卡铂处理细胞,检测各组细胞的化疗敏感性。结果:成功转染后,Ishikawa细胞中Tie2 mRNA及蛋白表达水平的抑制率分别为75.5%及56.4%,Tie2-siRNA组细胞凋亡增加,化疗敏感性增加。Tie2-siRNA组的卡铂IC50为(29.95±0.68)μg/ml,低于空白对照组(80.55±1.05)μg/ml。结论:降调Tie2基因的转录及表达可促进子宫内膜癌细胞凋亡,增加子宫内膜癌细胞对化疗药物的敏感性。