短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白对家兔血液流变学的影响

目的研究从短尾蝮蛇毒中纯化的磷脂结合抗凝蛋白(PBAP)对家兔血液流变学的影响。方法采用LBY-N6A自清洗旋转式黏度计测量家兔全血黏度、红细胞压积等指标。结果0.4 mg/kg PBAP注射于家兔耳缘静脉后显著降低低切、中切、高切变率下家兔的全血黏度,对红细胞压积也有显著影响(P<0.05)。结论短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白具有显著改善家兔血液流变的作用。     

双抗体夹心-酶联免疫吸附法测定家兔血清中短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的浓度及其药动学研究

目的:建立测定家兔血清中短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白(PBAP)浓度的方法,并考察其药动学特征。方法:取家兔随机分为低、高剂量组(短尾蝮蛇毒PBAP,0.4、0.8mg·kg-1)和阴性对照组(生理盐水),每组5只,耳缘静脉单次给予相应药物,给药前及给药后1、5、15、30、60、120、240、480min分别从颈总动脉取血,加入到短尾蝮蛇毒PBAP抗体包被酶标板(浓度为100μg·mL-1)中,以给药前的正常血清作为空白对照,用双抗体夹心-酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同时间点血清中短尾蝮蛇毒PBAP的浓度,并用DAS2.0软件计算其药动学参数。结果:短尾蝮蛇毒PBAP检测浓度的线性范围为0.0024～10μg·mL-(1r=0.9703),平均回收率为98.78%,平均板内变异系数为7.96%,平均板间变异系数为10.94%;低、高剂量短尾蝮蛇毒PBAP的主要药动学参数分别为t1/2α(9.553±4.668)、(9.873±1.433)min,t1/2β(201.295±66.060)、(205.798±76.834)min,cmax(0.685±0.160)、(2.333±0.478)mg·L-1,AUC0～∞(27.114±2.781)、(61.625±11.631)mg·min·L-1。结论:ELISA法准确、灵敏、特异性强,可用于短尾蝮蛇毒PBAP在家兔血清中的药动学研究。     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤溶酶对动物血栓的溶栓作用

目的　研究尖吻蝮蛇毒 (Agkistrodonacutus)无出血活性的纤溶酶对动物血栓形成的溶栓作用。方法　采用家兔动物血栓和大白鼠静脉血栓模型 ,静脉注射尖吻蝮蛇无出血活性纤溶酶 ,分 3个剂量组 (n =6) ,其剂量分别为 0 1 4、0 7、1 4mg·kg- 1 ,用生理盐水作阴性对照。测定尖吻蝮蛇毒无出血活性的纤溶酶对动脉血栓、静脉血栓的溶栓作用。结果　给药后 ,尖吻蝮蛇毒无出血活性的纤溶酶对动脉血栓、静脉血栓湿重均有减轻作用 ,与生理盐水对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1 )。结论　尖吻蝮蛇无出血活性纤溶酶对动物血栓有明显的溶栓作用 ,具有潜在的临床应用价值     

短尾蝮蛇毒中磷脂结合抗凝蛋白的分离纯化及鉴定

目的从短尾蝮蛇毒中分离纯化一种抗凝蛋白,并对其生化性质进行研究。方法利用阳、阴离子交换、凝胶过滤的方法分离纯化这种抗凝蛋白,用活化部分凝血活酶时间(APTT)测定其抗凝活性,用SDS-PAGE测定其蛋白相对分子量,用等电聚焦法测定蛋白的等电点.用薄层析方法确定抗凝蛋白与磷脂酰胆碱结合。结果从短尾蝮蛇中分离纯化出的抗凝蛋白是二聚体,相对分子量为24.0×103(非还原)和14.6×103(还原)。等电点为pH 5.2。该蛋白具有精氨酸酯酶活性,能明显地延长活化的部分凝血活酶时间(APTT),其抗凝活性与磷脂结合有关。结论此方法成功地从短尾蝮蛇毒中纯化出一种抗凝蛋白。因其能够与磷脂结合,又具有明显的抗凝活性,因此把该蛋白称为磷脂结合抗凝蛋白(phospholip id-b ind ing anticoagu lation prote in,PBAP)。     

三种蝮蛇抗栓酶的毒性及性质的实验研究

三种蝮蛇抗栓酶的毒性强度用LD_(50)表示,分别是,蛇岛蝮蛇抗栓酶为1.68±0.35u/kg,东北陆生白眉蝮蛇抗栓酶为5.23±0.61u/kg,浙江蝮蛇抗栓酶为1.94±0.15u/kg。对家兔亚急性毒性实验表明,对血细胞、肝及肾功能、脏器等无明显影响。蛇岛蝮蛇抗栓酶可减少血小板的数量。东北陆生白眉蝮蛇抗栓酶和浙江蝮蛇抗栓酶具有体外血浆凝固性。蛇岛蝮蛇抗栓酶、东北陆生白眉蝮蛇抗栓酶表现了以血循环毒为主的毒性,浙江蝮蛇抗栓酶表现了以神经毒为主的毒性。     

蝮蛇抗栓酶对家兔抗凝血作用的药效动力学

<正> 蝮蛇抗栓酶(ahylysantinfarctase)是从东北陆生白眉短尾蝮蛇(Agkistrodon halys brevicaudus Stejneger)毒中分离得到的以精氨酸酯酶为主的酶制剂,具有抗凝和溶纤作用。为了解其iv给药后的药效动力学,本研究以家兔为实验对象,用毛细玻管法测定凝血时间,以给药后凝血时间的延长率为药理效应指标,观察了蝮蛇抗栓酶抗凝作用的量效关系和时效关系,并求出有关参数。结果如下: 1.剂量-效应关系:成年家兔24只,随机分成6组。iv蝮蛇抗栓酶0.15～0.40mg/kg时,其对家兔的抗凝     

三种溶栓抗凝药治疗缺血性脑梗死临床疗效与血液流变学分析

用蝮蛇抗栓酶、血栓通和丹参注射液三种溶栓抗凝药共治疗198例缺血性脑梗死。蝮蛇抗栓酶的显效率为71．8％，临床疗效明显高于血栓通和丹参注射液，P<0．01。蝮蛇抗栓酶能显著降低患者的全血比粘度、血纤维蛋白原和体外血栓长度、湿重、干重，且临床体征的恢复与血液流变学指标的改善相符。作者认为蝮蛇抗拴酶是治疗缺血性脑梗死的有效药物，血液流变学的观察对临床用药疗程和剂量有一定的指导意义。     

短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白体内外对凝血因子的影响

蛇毒中常有的抗凝蛋白分为蛋白水解酶类和非蛋白水解酶，它们作用的有效成份和性质已被广泛研究。然而，蛇毒中磷酯结合抗凝蛋白对凝血功能的作用尚未见报道。笔者已报道从短尾蝮蛇毒中纯化出一种能与磷酯结合的新型抗凝蛋白。该蛋白是二聚体，     

三种蝮蛇抗栓酶注射剂对大鼠和家兔血小板聚集的影响

用比浊法研究三种蝮蛇抗栓酶注射剂对大鼠和家兔血小板聚集的影响,结果表明蝮蛇抗栓酶注射剂在试管内浓度0.045u/ml 时对大鼠和家兔血小板聚集无明显抑制作用。静脉注射蝮蛇抗栓酶注射剂1u/kg 对家兔血小板聚集有明显抑制作用。尤其是蛇岛蝮蛇抗栓酶注射剂抑制作用最为显著。     

三种溶栓抗凝药治疗缺血性脑梗死临床疗效与血液流变学分析

用蝮蛇抗栓酶、血栓通和丹参注射液三种溶栓抗凝药共治疗198例缺血性脑梗死.蝮蛇抗栓酶的显效率71.3%,临床疗效明显高于血栓通和丹参注射液,P<0.01.蝮蛇抗栓酶能显著降低患者的全血比粘度、血纤维蛋白质和体外血栓长度、湿重、干重,且临床体征的恢复与血液流变学指标的改善相符.作者认为蝮蛇抗栓酶是治疗缺血性脑梗死的有效药物,血液流变学的观察对临床用药疗程和剂量有一定的指导意义     

蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究

目的 :寻找一种分离纯化蝮蛇毒纤溶酶的工艺并研究其理化性质。方法 :采用DEAE SepharoseCL 6B和HeparinCL 6B层析方法 ,从蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶。结果 :蝮蛇毒纤溶酶经HPLC为单一峰 ,等电聚焦电泳为一条带 ,其等电点为 4.5 5 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为 2 9.4kD。该酶对热不稳定 ,在 pH6～ 9时稳定 ,氨基酸组成分析表明含酸性氨基酸较多。结论 :用此工艺可制得高纯度的蝮蛇毒纤溶酶。     

Fibrinolytic enzyme from Agkistrodon halys brevicaudus (Korean mamushi) snake venom.

By means of DEAE-Sepharose CL-6B ion exchange chromatography and TSK-GEL G2000 SW high-performance gel filtration, a purified protein with fibrinolytic activity was obtained from the venom of Agkistrodon halys brevicaudus (Korean mamushi). The protein was homogeneous as judged by isoelectric focusing electrophoresis and high-performance gel filtration. Its mol. wt is 39,200 and its isoelectric point 4.12. The specific fibrinolytic activity of the protein was 3.2 times higher than that of the crude venom. The fibrinolytic activity of the purified principle was 33 units/mg protein (units of standard urokinase activity).     

彩超诊断小腿肌间静脉血栓对骨科手术诊疗的应用价值

目的探讨超声诊断小腿肌间静脉血栓对骨科手术及治疗的指导价值。方法应用彩色多普勒血流显像(CDFI)对500例骨科住院患者进行术前、术后常规双下肢深静脉筛查,分析患小腿肌间静脉血栓者的年龄、治疗前后2周内生化指标及超声改变情况。结果彩超检出小腿肌间静脉血栓54例,术前发生肺栓塞者2例。术前及术后制动造成血栓者32例(59.3%);术前已患有血栓者22例(40.7%);其中血压、血脂增高者32例,年龄均为50岁以上(59.3%)。抗凝、溶栓治疗后,CDFI显示病变管腔内由无血流信号逐渐变为可见部分血流信号或血流通畅;生化检测中:血浆抗凝血酶Ⅲ活性测定及凝血酶原时间指标逐渐升高,D-二聚体、纤维蛋白原及凝血酶活动度指标逐渐降低。抗凝、溶栓2周后行手术治疗者未发现有肺栓塞发生。结论彩超检查小腿肌间静脉血栓简便、易行,可持续观察,还可有效的预防其进一步延伸,对手术患者的诊疗具有临床指导价值,可最大限度的减少肺栓塞的发生。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化方法研究

目的:研究长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的简单分离纯化方法。方法:采用DEAE-Sephadex A-25及Sephadex G-25层析的方法,比较二者对长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶简单分离纯化的效果。结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出类凝血酶,SDS-PAGE电泳显示为一条带,分子量大约为35.5kDa,达到电泳纯。理化性质研究表明,此类凝血酶具有体外凝血活性,体外凝血酶比活力为12.57IU.mg-1,用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐测得该酶的精氨酸酯酶比活力为137.65IU.mg-1。用蛋白酶抑制剂和乙二胺四乙酸对该酶进行抑制实验,结果表明该酶属于丝氨酸蛋白酶,而不是金属蛋白酶。结论:本方法可用于长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化。     

Thrombolysis effect with FIIa from Agkistrodon acutus venom in different thrombosis model.

AIM: A fibrinolytic enzyme from Agkistrodon acutus venom, called FIIa, was tested for thrombolytic activity in animals. METHODS: Carotid thrombosis model in rats and rabbits and middle cerebral artery (MCA) thrombosis model in rats were used. RESULTS: Intravenous administration of FIIa, at a dosage of 0.625 mg/kg, resulted in thrombolysis of carotid thrombi. However, in middle cerebral artery thrombosis, the effective thrombolysis dose was 1.25 mg/kg. When the dosage of FIIa increased, the thrombolytic effect was stronger. Histological examination of kidney, liver, heart, and lung tissue showed no hemorrhage. CONCLUSION: It shows that FIIa from Agkistrodon acutus venom is able to solubilize thrombus in vivo without hemorrhage at an effective dose for thrombolysis.     

三种蛇毒类凝血酶对纤维蛋白原的作用方式

目的以纤维蛋白原为底物,考察巴西矛头蝮蛇(Bothrops atrox)、尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)、长白白眉蝮蛇(Agkistrodon halys pullas)3种蛇毒类凝血酶对纤维蛋白原的作用方式。方法采用SDS-PAGE及RP-HPLC法对作用结果进行检测。结果 3种蛇毒类凝血酶对纤维蛋白原的作用方式不完全相同,巴西矛头蝮蛇、尖吻蝮蛇2种蛇毒类凝血酶只作用于纤维蛋白原的α链,对β、γ链则无作用,长白白眉蝮蛇毒类凝血酶起初作用于纤维蛋白原的β链,对α链作用较弱,随着时间的延长对α链作用增强,对γ链无作用。结论巴西矛头蝮蛇、尖吻蝮蛇2种蛇毒类凝血酶属于SVTLE-A型,而长白白眉蝮蛇毒类凝血酶则属于SVTLE-AB型。