康莱特联合顺铂高效杀伤骨肉瘤细胞

目的 研究康莱特联合顺铂对骨肉瘤细胞的杀伤作用及其相关机制，探寻骨肉瘤的中西医结合化疗方案。方法 免疫组化及RT—PCR方法检测不同浓度康莱特作用下骨肉瘤OS732细胞的Fas表达，并将康莱特与顺铂单独及联合应用于OS732细胞，采用MTT法检测细胞毒性作用，流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例，相差显微镜及荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变。结果 康莱特可上调OS732细胞的Fas表达并诱导凋亡，10μL／mL康莱特与1μg／mL顺铂合用于OS732细胞的抑制率与各自单用时相比明显提升（P〈0．01）。细胞形态观察及凋亡率测定也显示，康莱特与顺铂联用可诱导更多OS732细胞凋亡。结论 康莱特可协同顺铂高效杀伤骨肉瘤细胞，这可能与康莱特上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡有关。     

艾迪协同依托泊苷诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 研究中药制剂艾迪对骨肉瘤化疗的增效作用及其相关机制.方法 将艾迪与依托泊苷单独及联合应用于骨肉瘤OS732细胞,用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变,免疫细胞化学技术分析凋亡相关蛋白Fas表达.结果 艾迪与依托泊苷对骨肉瘤细胞都有剂量依赖性杀伤作用,艾迪浓度达到25μ 1/mL时,细胞抑制率为38.47％,再增加艾迪浓度抑制率不再明显改变,但如与1μg/mL依托泊苷合用将使细胞抑制率进一步提升为51.62％(P＜0.01).细胞超微结构观察及凋亡率测定也显示,艾迪与依托泊苷联用可诱导更多骨肉瘤细胞凋亡,且联用时骨肉瘤Fas表达明显提升(P＜0.01).结论 艾迪与小剂量依托泊苷合用与单用依托泊苷相比可更高效杀伤骨肉瘤细胞,此作用与上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡有关.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的：研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对骨肉瘤OS-732细胞的诱导凋亡作用，探寻骨肉瘤临床化疗的斯方案。方法：将TRAIL应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞，采用MTr法检测细胞毒性作用，倒置相差显微镜及荧光染色方法观察肿瘤细胞形态改变，扫描及透射电镜在亚细胞形态上证实凋亡细胞。结果：不同浓度TRAIL作用下，细胞抑制率问差别十分显著（P〈0.01）。超微结构观察显示骨肉瘤细胞凋亡。结论：TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡，且具有浓度依赖性。     

IFN-γ增强人γδT细胞杀伤骨肉瘤细胞的研究

目的研究干扰素-γ（IFN-γ）增强骨肉瘤患者γδ T细胞对骨肉瘤杀伤作用的影响。方法以唑来磷酸法扩增骨肉瘤患者外
周血γδ T细胞。分别使用实时荧光定量聚合酶链反应和流式细胞术检测IFN-γ处理前后骨肉瘤细胞Fas的表达情况;LDH法检
测骨肉瘤患者γδ T细胞对骨肉瘤细胞的杀伤活性。结果IFN-γ对骨肉瘤细胞Fas的表达明显提高（P<0.01）,骨肉瘤患者γδ T细
胞对骨肉瘤细胞的杀伤作用显著增强（P<0.01）。抗人FasL抗体对γδ T细胞杀伤OS细胞作用影响较小（P>0.05）;但能显著阻断
γδ T细胞杀伤IFN-γ预处理OS细胞的作用,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论IFN-γ可增强骨肉瘤患者γδ T细胞的抗骨肉
瘤作用。
     

蜂毒素诱导骨肉瘤细胞U2OS凋亡与坏死的实验研究

目的:研究蜂毒素是否能够诱导骨肉瘤细胞U2OS凋亡与坏死.方法:U2OS经不同浓度蜂毒素处理后,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖抑制率,利用单克隆抗体,通过流式细胞仪检测AnnexinV、Apo2.7及Fas蛋白的表达.结果:64 mg/L蜂毒素作用U2OS 12 h、24 h,其坏死率在80%以上.16 mg/L、32 mg/L蜂毒素对细胞增殖有明显抑制作用,并且可诱导细胞凋亡和坏死的产生,增加细胞Aap2.7及 Fas 蛋白的表达.结论:蜂毒素高剂量有明显杀伤U2OS的作用,低剂量具有促细胞凋亡作用,并能上调Fas蛋白的表达.     

TRAIL协同紫衫醇诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 研究TRAIL和紫杉醇联合应用对骨肉瘤细胞的抑制作用,寻找骨肉瘤临床治疗的新方案.方法 将TRAIL与紫杉醇单独或联合应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞,采用MTT法测定其对OS-732细胞的抑制率,并于相差显微镜、荧光显微镜下观察细胞形态的改变.结果 50 ng/mL的TRAIL与10μg/mL紫杉醇联合作用于OS-732细胞24 h后,抑制率为47.49％,明显高于单用TRAIL(50 ng/mL)时的9.85％及单用紫杉醇(10μg/mL)时的20.37％(P ＜0.01).细胞形态结构均出现凋亡的特征性变化.结论 TRAIL与紫杉醇联合应用可高效杀伤骨肉瘤细胞,这种杀伤效应是通过促进OS732细胞的凋亡来实现的.     

阿霉素单用及联用维拉帕米对OS732细胞毒性作用的机制

目的 探讨阿霉素对OS732细胞的毒性作用，维拉帕米是否对阿霉素有增效作用及其作用机制。方法 用MTT法检测肿瘤细胞存活率，比较单用阿霉素及联用维拉帕米对OS732细胞的毒性作用；以流式细胞仪方法检测阿霉素及联用维拉帕米诱导后不同时间点OS732细胞多药耐药指标（Pgp,TopoⅡ和GSTπ）表达情况；以琼脂凝胶电泳法观察阿霉素单用及联用维拉帕米诱导后不同时间点OS732细胞抽取DNA的电泳图；流式细胞仪方法检测阿霉素及联用维拉帕米诱导后OS732细胞凋亡相关因子CD95及Bax蛋白的表达情况。结果 （1）随阿霉素的浓度递增，OS732细胞的存活率呈下降趋势，即阿霉素对OS732细胞生长抑制率呈浓度相关性。同剂量阿霉素对OS732细胞随作用时间延长，细胞存活率下降，但这种趋势并不随时间延长而等幅递增。维拉帕米增强阿霉素对OS732细胞的毒性作用。（2）阿霉素可使OS732细胞获得性耐药，且这种获得性耐药与Pgp,TopoⅡ和GSTπ有关。Pgp和GSTπ表达存在相关性。阿霉素诱导后OS732细胞Pgp和GSTπ表达随时间延长而上调。维拉帕米延缓乃至下调了Pgp的表达。而对TopoⅡ及GSTπ无类似作用。（3）促进肿瘤细胞亡是阿霉素的抑瘤机制之一，且与Fas介导的细胞凋亡途径有关。与Bax途径无关。阿霉素诱导的OS732细胞凋亡呈时间依赖性。维拉帕米可促进阿霉素诱导的OS732细胞凋亡。结论 维拉帕米使阿霉素对OS732细胞的毒性作用增强。临床上应用阿霉素化疗时，更宜选用持续性静脉滴注给药，且以维持48h为宜。阿霉素作用后，OS732细胞获得性耐药与Pagp,TopoⅡ和GST－π有关。阿霉素对OS732细胞毒性作用与它能促进细胞凋亡有关，而维拉帕米延缓Pgp介导的多药耐药的同时促进阿霉素诱导的细胞凋亡。因此，通过促进肿瘤细胞凋亡来实现肿瘤化疗多药耐药的逆转是一条有效途径，本研究为进一步进行肿瘤分子这治疗的研究提供实验基础。     

干扰素对人肝癌细胞株HepG2.2.15凋亡的影响

目的：探讨肝癌细胞株HepG2.2.15通过低表达Fas逃避免疫监视,以及干扰素α(IFN-α)通过上调Fas 表达对细胞凋亡的影响。方法：用流式细胞术检测肝癌细胞株HepG2.2.15的 Fas表达及IFN-α对其Fas表达的影响;用激活性Fas单克隆抗体CH11诱导细胞凋亡的方法,研究肝癌细胞对Fas介导凋亡的抵抗以及IFN α对肝癌细胞凋亡的影响。结果：① HepG2.2.15细胞低表达Fas,经浓度分别为2000、1000、　500U/ml的IFN-α作用后,Fas表达均显著增加(P均<0.001),且Fas表达率随IFN-α浓度的增加而增加;②CH11不能诱导HepG2.2.15细胞凋亡,IFN-α上调细胞Fas表达后,由CH11诱导的细胞凋亡增加(P均<0.01),且凋亡率随IFN-α浓度的增加而增加。结论：肝癌细胞HepG2.2.15能抵抗Fas介导的凋亡,IFN-α可通过上调细胞Fas表达,促进CH11诱导的肝癌细胞凋亡。     

α干扰素增强骨肉瘤细胞对依托泊苷敏感性的实验研究

目的探讨α干扰素(IFN-α)在人骨肉瘤U2OS和MG63细胞中对依托泊苷敏感性的作用及其机制。方法采用IFN-α和依托泊苷单独或联合处理骨肉瘤U2OS和MG63细胞72 h,应用流式细胞术和DNA Ladder检测细胞凋亡的变化,Western blot法检测PARP、p53、MDM2、Bax、Bcl-2的表达。结果流式细胞术表明IFN-α在p53正常的U2OS细胞中明显增强依托泊苷诱导的凋亡(P<0.05),却对依托泊苷诱导p53突变的MG63细胞凋亡无明显影响(P>0.05);DNA Ladder表明与单药组相比,IFN-α与依托泊苷联用72 h在U2OS细胞出现明显的DNA梯形条带,而在MG63细胞中无此现象;Western blot结果表明在U2OS细胞中联合用药组出现PARP的明显裂解活化,并且IFN-α明显增强依托泊苷引起的p53信号通路p53、MDM2、Bax等凋亡基因的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,而在MG63细胞中则无此现象。结论 IFN-α能够通过激活p53依赖性信号通路增强依托泊苷诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡,联合应用IFN-α和传统化疗药物如依托泊苷可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。     

白毛藤总苷诱导Bel7402细胞凋亡及其作用机制

目的：探讨Bc l-2、Fas基因在白毛藤总苷诱导人肝癌Bel7402细胞凋亡中的作用。方法：荧光显微镜观察不同浓度白毛藤总苷诱导Bel7402细胞凋亡作用情况,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果：白毛藤总苷诱导Bel7402细胞凋亡,并且上调Fas和降低Bcl-2表达。结论：白毛藤总苷能促进Bel7402细胞凋亡,其机制可能与激活Fas、抑制Bcl-2表达有关。     

IFN-γ上调桥本甲状腺炎Fas表达介导甲状腺破坏

目的 探讨干扰素-γ(IFN-γ)对桥本甲状腺炎(HT)Fas表达的影响及可能致病因素.方法 ① 采用免疫组织化学方法检测HT和正常甲状腺组织中IFN-γ及Fas的表达和分布;② 不同浓度、不同时间IFN-γ刺激大鼠甲状腺细胞系(FRTL-5细胞),采用实时荧光定量PCR、流式细胞术方法分别检测FRTL-5细胞Fas mRNA和蛋白的表达.结果 ① HT组织中甲状腺滤泡细胞Fas蛋白、淋巴细胞IFN-γ蛋白的表达显著高于正常甲状腺组织,且Fas阳性甲状腺滤泡细胞常见于淋巴细胞浸润区;② IFN-γ与FRTL-5细胞Fas mRNA表达水平存在时间-剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05);③ 流式细胞术测定经IFN-γ作用的FRTL-5细胞表面Fas表达水平显著高于未经IFN-γ刺激的FRTL-5细胞.结论 IFN-γ通过上调Fas的表达介导甲状腺滤泡细胞凋亡.     

苦参碱诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡的研究

目的 观察苦参碱是否能诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡及凋亡相关基因的变化。方法 0－3.0g/L苦参碱处理HepG2细胞,光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL法原位检测DNA断裂;流式细胞仪检测凋亡峰;AnnexinV-FITC/PI双标记检测早期凋亡;免疫组化和原位杂交法检测wp53,bcl-2,bax,c-myc,Fas等凋亡相关基因的表达,采用真彩色图像分析仪定量检测。结果 1.5-3.0g/L苦参碱可诱导HepG2凋亡,并且使凋亡相关基因wp53,bax,Fas表达上调,而抗调亡基因bcl-2,c-myc表达下调。结论 一定浓度的苦参碱可诱导人肝癌细胞HepG2凋亡,并且该凋亡与凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

氯化两面针碱对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨氯化两面针碱对人骨肉瘤MG-63细胞诱导凋亡作用及其相关机制。方法将不同浓度的氯化两面针碱作用于MG-63细胞,采用MTT法检测其增殖抑制作用;利用荧光显微镜和电镜观察其对细胞形态的影响;利用流式细胞仪检测不同浓度的氯化两面针碱诱导MG-63细胞的凋亡率;Western blotting法分析caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax表达的变化。结果 MTT结果表明,氯化两面针碱可明显抑制MG-63细胞的增殖,并存在时间-剂量依赖性。荧光显微镜下,氯化两面针碱处理过的细胞呈现典型的凋亡形态,如细胞核清亮,大小不一,有的裂解成亮蓝色的颗粒。透射电镜下,同样可看到细胞凋亡现象,如胞质内出现大量空泡,细胞核边集,细胞表面微绒毛减少。流式细胞仪结果表明氯化两面针碱诱导细胞凋亡呈明显的剂量依赖性,随着药物浓度升高,凋亡率升高。Western blotting证实,氯化两面针碱能上调MG-63细胞中cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9和Bax的表达,同时下调pro-caspase-3、pro-caspase-9和Bcl-2的表达。结论氯化两面针碱可诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其具体机制可能与激活caspase凋亡通路有关。     

Bcl-2和Fas在人食管癌细胞Ec-9706细胞中表达及中药干预作用

目的：研究白毛藤诱导人食管癌细胞凋亡的作用及其机制。方法：荧光显微镜观察不同浓度白毛藤诱导Ec-9706细胞凋亡的作用,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果：白毛藤具有诱导Ec-9706细胞凋亡的作用,并且上调Fas基因、降低Bcl-2基因的表达。结论：白毛藤促进Ec-9706细胞凋亡,其机制可能与激活Fas基因、抑制Bcl-2基因表达有关。     

IFN-γ对骨肉瘤细胞组织蛋白酶L的表达及侵袭特性的影响

目的:探讨干扰素γ(interferon-γ, IFN-γ)对骨肉瘤细胞中组织蛋白酶L(cathepsin L, CATL)表达的调控,及其对MG-63细胞体外侵袭特性的影响,为临床上应用IFN-γ防治肿瘤转移提供实验依据.方法:采用IFN-γ对体外培养的MG-63骨肉瘤细胞CATL表达进行诱导调节,并利用RT-PCR方法对其表达水平变化进行半定量检测.Boydern小室检测各组细胞侵袭力的差异.结果:IFN-γ对骨肉瘤细胞中CATL的表达有显著的诱导降低作用,且随着浓度增加表达逐渐下降.同时可以使MG-63细胞的体外侵袭力下降.结论:IFN-γ可抑制骨肉瘤细胞中CATL的表达,并在一定程度上抑制骨肉瘤的侵袭转移潜能.     

PDTC影响骨肉瘤U-2 OS细胞凋亡的研究

目的:观察在NF-KB抑制剂PDTC诱导骨肉瘤细胞发生凋亡的过程中,NF-KB活性抑制后,Livin和aspase-3表达水平变化.方法:以不同浓度(0、50、100、200、400 μmol/L)PDTC作用于骨肉瘤U-2 OS细胞不同时间(24小时,48小时)后,采用MTT法和流式细胞仪测定U-2 OS细胞凋亡,采用Western Blot检测U-2 OS细胞Livin和caspase-3蛋白表达.结果:①不同浓度PDTC作用24小时、48小时后对U-2 OS细胞生长有明显抑制作用,并呈时间、剂量依赖性.②50、100、200和400μmol/L PDTC作用24小时后的凋亡率与对照组相比差异有显著性,且各浓度组之间差异均有显著性(P＜0.01).③PDTC作用于U-2 OS细胞后可降低Livin蛋白的表达,增加caspase-3蛋白表达,呈现剂量依赖性.结论:PDTC可明显抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞,并使细胞周期受到阻滞,进一步诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞与诱导凋亡呈剂量依赖关系.     

全反式维甲酸联合干扰素-γ对人肝癌细胞株SMMC-7721抗增殖作用的研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)和干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)联合作用对于人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用。方法用ATRA和IFN-γ处理SMMC-7721细胞后,应用MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率,电镜观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达变化。结果ATRA作用于SMMC-7721后,抑制细胞增殖并且诱导细胞凋亡发生,和IFN-γ联合作用后,这种作用加强;SMMC-7721细胞中PCNA的表达在ATRA作用后减少,ATRA与IFN-γ联合作用后进一步减少。结论IFN-γ可以增强ATRA对于肝癌细胞的抑制及诱导细胞凋亡的作用,并且明显下调了PCNA的表达。     

阿霉素单用或联用维拉帕米对OS732细胞的毒性作用

目的 探讨阿霉素单用及联用维拉帕米对骨肉瘤细胞株（OS732细胞）的毒性作用。方法 用MTT比色法检测按不同浓度梯度阿霉素或联用维拉帕米干预OS732细胞24，48，72h 后的细胞活性；用流工细胞仪检测阿霉素单用及联用维拉帕米干预OS732细胞2，12，24，48及72h后Fas抗原（CD95）表达率，结果 阿霉素对OS732细胞的毒性作用呈剂量依赖关系，但并不随时间增加等幅增加，无细胞毒作用的维拉帕米对阿霉素有增效作用。结论 联用维拉帕米对阿霉素的增效作用可能与促细胞凋亡作用有关。     

IFN-γ和TNF-α诱导间充质干细胞促进结肠癌细胞的化疗抵抗

目的 观察炎症因子干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-a,TNF-a)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对结肠癌细胞化疗抵抗的影响及机制.方法 应用炎症因子IFN-γ和TNF-α联合处理MSCs,收集条件培养上清,并将其作用于人结肠癌细胞系HCT116及HT29细胞,同时分别给予化疗药物顺铂和5-氟尿嘧啶处理.显微镜下观察各组细胞形态变化,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax和Bcl 2表达情况.结果 经化疗药物处理,与未经条件培养上清培养的细胞比较,经条件培养上清培养的细胞形态学改变更轻微,细胞增殖率增高(P＜0.05)、凋亡率降低(P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达水平上调、Bax mRNA表达水平下调.结论 经炎症因子IFN-γ和TNF-α诱导的MSCs能够促进结肠癌细胞化疗抵抗能力.     

IFN-γ对骨肉瘤细胞组织蛋白酶L的表达及侵袭特性的影响

目的：探讨干扰素γ（interferon-γ，IFN-γ）对骨肉瘤细胞中组织蛋白酶L（cathepsin L，CATL）表达的调控，及其对MG-63细胞体外侵袭特性的影响，为临床上应用IFN-γ防治肿瘤转移提供实验依据。方法：采用IFN-γ对体外培养的MG-63骨肉瘤细胞CATL表达进行诱导调节，并利用RT-PCR方法对其表达水平变化进行半定量检测。Boydern小室检测各组细胞侵袭力的差异。结果：IFN-γ对骨肉瘤细胞中CATL的表达有显著的诱导降低作用，且随着浓度增加表达逐渐下降。同时可以使MG-63细胞的体外侵袭力下降。结论：IFN-γ可抑制骨肉瘤细胞中CATL的表达，并在一定程度上抑制骨肉瘤的侵袭转移潜能。