3种疟疾检测方法的应用分析

目的分析疟原虫镜检、抗原检测(快速诊断试验,RDT)和核酸检测(PCR)3种方法在疟疾病例检测应用中的效果。方法对2012-2015年上海市送检的疟疾病例和疑似疟疾病例血样的检测结果进行回顾性分析,以确诊病例为金标准,比较镜检、RDT和PCR等3种方法的诊断指标、虫种特异性鉴定能力和成本效益。不同检测方法的两两比较用χ2检验。结果 3种方法平行分析血样212份,结果显示,综合判定为阳性的167份,占78.8%,阴性45份,占21.2%。阳性血样中,120份为恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)感染,占71.9%;22份为间日疟原虫(P.vivax)感染,占13.2%;17份为卵形疟原虫(P.ovale)感染,占10.2%;6份为三日疟原虫(P.malariae)感染,占3.6%;2份为混合感染,占1.2%。3种检测方法的诊断效率以PCR最高,为96.2%(204/212),RDT次之,为93.2%(192/206),镜检最低,为88.2%(187/212);镜检与RDT和PCR比较,差异具有统计学意义(P0.05);RDT与PCR比较,差异无统计学意义(P0.05)。与确诊病例比较,3种方法的总符合率以PCR最高,为95.3%(202/212),RDT次之,为93.2%(192/206),镜检最低,为88.2%(187/212);镜检与PCR比较,差异有统计学意义(P0.05)。对非恶性疟原虫的3种疟原虫的种特异性鉴定能力,以PCR最高,为95.6%(43/45),镜检次之,为91.1%(41/45),RDT最低,为68.9%(31/45);PCR与RDT比较,差异有统计学意义(P0.05);PCR与镜检比较,差异无统计学意义(P0.05)。对恶性疟原虫单一虫种的鉴定能力,以RDT最优,为100%(116/116);PCR次之,为93.3%(112/120);镜检最低,为84.2%(101/120)。根据是否纳入诊断标准、对仪器设备和技术的要求、诊断效能、检测的成本耗时、应用培训以及技术推广等14项指标综合评测显示,RDT得分为37分(满分42分),成本效益最高,镜检和PCR得分分别为26和27分。结论在以输入性恶性疟为主的疫情形势下,3种检测方法比较,检测效果以PCR和RDT较高,种特异性鉴定能力以PCR和镜检较好,成本效益以RDT最佳。     

巢式PCR法在疟疾检测及虫种鉴别中的应用

根据疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸(SSU rRNA)基因序列设计疟原虫通用型和种特异性的引物,对60份血样进行巢式PCR检测及虫种鉴定,并与血样的吉氏染色镜检结果进行比较。巢式PCR检出40份疟原虫阳性血样,其中22份为恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)阳性、13份为间日疟原虫(P.vivax)阳性、3份为恶性疟原虫和间日疟原虫混合感染、1份为卵形疟原虫阳性(P.ovale)、1份未能分型。与镜检结果一致的血样为46份,占76.7%(46/60),其中恶性疟原虫阳性18份、间日疟原虫阳性11份和阴性17份。将两种检测结果不一致的血样进行扩增片段序列测定和实时荧光PCR分析,检测结果均与巢式PCR结果一致。卵形疟原虫阳性血样扩增片段的序列分析结果显示,该序列与卵形疟原虫SSU rRNA基因序列(GenBank登录号DQ845247)的对应部分同源性为100%,证实该病例为输入性卵形疟原虫感染病例。     

2012-2014年云南省疟疾实验室诊断质量分析

目的分析云南省的省、县两级实验室疟疾镜检诊断质量及影响因素。方法 2012年8月-2014年10月,云南省各疫情报送单位采集镜检确诊为疟疾的患者血样,制作血涂片和滤纸血送至省级疟疾参比实验室进行镜检和基因检测,并统计分析省、县两级实验室疟疾诊断的符合性。结果 2012年8月-2014年10月云南省的72个县镜检确诊疟疾病例1 400例,其中恶性疟、间日疟和未分型疟疾分别占18.4%(252/1 400)、79.3%(1 105/1 400)和3.1%(43/1 400),未分型疟疾比例最高为2012年的3.5%(9/257)。2012年云南各县与省级疟疾参比实验室疟原虫镜检结果的虫种符合率为70.1%(845/1 216),为2012-2014年期间的最低水平,血片疟原虫阳性符合率为77.6%(943/1 216)。各县的疟原虫镜检结果与省级实验室基因检测的虫种符合率、阳性符合率也是2012年最低,分别为81.3%(150/185)和85.0%(157/185)。省级实验室镜检与基因检测结果的不符合率为8.7%(97/1 120),不符合类型中以镜检阴性而基因检测为恶性疟原虫、间日疟原虫或恶性疟/间日疟原虫混合感染为主,占57.7%(56/97)。各县采集疟疾病例血样的覆盖率最低为2012月11月的46.9%(82/175)。2012-2014年全省血涂片制作质量得分分别为69.8、70.4和78.8(P0.05)。结论 2013年后除个别县外,云南省的县级疟疾实验室诊断各环节的工作质量均显著提高。     

2017-2019年湖北省疟疾诊断参比实验室病例复核结果分析

目的　分析湖北省疟疾诊断参比实验室对网络报告疟疾病例的复核结果,为进一步提高全省疟疾防控水平提供科学依据。 方法　由湖北省疟疾诊断参比实验室对全省2017—2019年网络报告疟疾病例样本采用镜检和巢式PCR法进行复核,并分析病例和虫种等符合情况。 结果　2017—2019年,湖北省共有网络报告疟疾病例410例;湖北省疟疾诊断参比实验室共复核407例样本,确诊疟疾病例374例,总体疟疾诊断阳性符合率为91.89%（374/407）、虫种符合率为89.04%（333/374）;不同市（州）报告疟疾病例复核阳性符合率为50.00%～100.00%、虫种符合率为66.67%～100.00%,差异均有统计学意义（χ2 = 40.46、42.30,P均 < 0.01）;恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫复核虫种符合率分别为95.80%、100.00%、58.33%和51.92%,差异有统计学意义（χ2 = 76.66,P < 0.01）;镜检法与巢式PCR法检测结果一致率为89.83%（362/403）。结论　湖北省各级医疗卫生机构疟疾诊断质量总体较高,但部分地区诊断能力仍有待提高。     

2015年江西省"三甲医院"寄生虫病检验技能竞赛成绩分析

目的 了解江西省综合性三甲医院检验人员寄生虫病检测能力。方法 全省20家综合性三甲医院组队参赛,每队2名选手。竞赛分为笔试和技能操作两部分（各100分）。笔试内容涉及寄生虫生活史、免疫学基础、检测技术、病原诊断等;技能操作包括厚、薄血涂片及改良加藤厚涂片的制片和镜检阅片。结果 共40名选手参赛,总成绩平均分为（97.3±22.4）分,及格率为15.0%;其中笔试平均成绩为（56.6±12.8）分,及格率为52.5%;技能操作平均成绩为（40.8±12.4）分,及格率为5.0%。笔试成绩中,土源性线虫生活史得分率最高（90.0%）,食源性寄生虫病防治基础知识得分率最低（31.5%）。选手血涂片制作、镜检及格率均高于加藤片,差异均有统计学意义（P均 < 0.05）;间日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫和阴性片的镜检检出率依次为38.8%、45.0%、35.0%和25.0%;蠕虫卵检出率以鞭虫卵最高（87.5%）,曼氏迭宫绦虫卵最低（2.5%）。省级医院选手加藤片制作和镜检得分均高于市级医院 （P均 < 0.05）;教学医院选手加藤片制片成绩高于非教学医院（P < 0.05）。结论 江西三甲医院检验专业人员寄生虫病检测技能水平难以满足当前寄生虫病诊断的需要,应引起卫生主管部门和医院的高度重视。     

两种检测方法在间日疟和卵形疟诊断中的应用分析

目的分析疟原虫镜检和巢式PCR检测间日疟和卵形疟效果。方法收集2012～2016年输入性间日疟和卵形疟病例血样,巢式PCR检测疟原虫ssRNA基因,并与显微镜检结果进行比对。结果显微镜检和巢式PCR检测71份血样,间日疟、卵形疟、混合感染分别占74.6%、25.4%、0%和63.4%、29.6%、7%,符合率为81.7%;亚洲23份血样,镜检与巢式PCR均为间日疟,符合率为100%,巢式PCR检测非洲血样48份,间日疟、卵形疟和混合感染分别占45.8%、43.8%和10.4%,镜检与巢式PCR符合率为72.9%;巢式PCR检测26份卵形疟,经典curtisi、变种wallikeri和混合感染分别占80.8%、11.5%和7.7%,检出变种wallikeri总数占卵形疟19.2%。结论巢式PCR检测疟原虫虫种鉴别优于传统镜检法,可提高疟疾病例诊断水平。     

2017年江苏省疟疾诊断参比实验室样本检测结果分析

目的 分析2017年江苏省疟疾诊断参比实验室样本检测结果,为巩固江苏省疟疾诊断水平提供科学依据。方法 由江苏省疟疾诊断参比实验室收集2017年疟疾网报病例诊断结果和样本;对每份病例样本分别采用镜检、核酸检测复核和疟疾快速诊断试纸条（RDT）检测;比较分析不同地区和不同疟原虫虫种样本检测结果符合情况。结果 2017年江苏省共有疟疾网报病例242例,经复核确定疟疾病例共239例,其中恶性疟163例、间日疟21例、三日疟11例、卵形疟43例、恶性疟和卵形疟原虫混合感染1例。13个设区市疟疾网报病例的诊断符合率均＞80%,总符合率为88.8%;恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫检测符合率分别为98.8%、57.1%、63.6%、81.4%,RDT对4种疟原虫感染检出率分别为95.7%、85.0%、63.6%、79.1%。结论 2017年江苏省疟疾网报病例诊断质量总体较高,对非恶性疟人体疟原虫的虫种鉴别能力有待提高,RDT对非恶性疟人体疟原虫感染检测效果不理想。在当前消除疟疾阶段,应加强和保持各部门的疟疾诊断能力。     

山东省泰安市2015—2019年输入性疟疾病例实验室诊断与复核结果分析

省、市、县三级实验室分别采用镜检法、胶体金法及巢式PCR法对泰安市2015-2019年输入性疟疾进行诊断与复核。共诊断与复核输入性疟疾病例122例,其中镜检法和胶体金法的符合率分别为94.3%(115/122)和95.9%(117/122),镜检阴性率为5.7%(7/122),均为恶性疟;胶体金法阴性率为4.1%(5/122),3例非恶性疟和2例恶性疟阴性,3种检验方法符合率差异有统计学意义(P <0.05)。其中恶性疟和间日疟诊断符合率最高,均达100%,对卵形疟诊断符合率最低,仅为12/18,对4种疟原虫实验室诊断符合率差异有统计学意义(P <0.01)。医疗机构中初诊合格率为94.3%(115/122),市、县级疾病预防控制机构复核合格率分别为97.5%(119/122)和95.1%(116/122),差异无统计学意义(P> 0.05)。今后应继续加强市、县级疟疾实验室镜检人员技能培训,积极开展疟疾核酸检测,以进一步提升医疗及疾病预防控制机构的疟疾诊断水平。     

SYBR Green实时PCR检测恶性疟原虫和间日疟原虫的临床检验技术研究

目的建立鉴别恶性疟和间日疟的SYBR Green实时PCR检测方法。方法针对恶性疟原虫和间日疟原虫18S rRNA基因设计引物,优化引物浓度与退火温度,建立可扩增出两种疟原虫基因片段的SYBR Green实时PCR,并进行54例临床标本检测,其中恶性疟32例、间日疟22例。以镜检法为金标准分析敏感度和特异度等指标。结果该方法可扩增出恶性疟原虫和间日疟原虫18S rRNA基因片段,并能检出混合感染,特异性好。该方法检测恶性疟原虫或间日疟原虫的敏感度为97.30%(36/37),特异度为5.88%(1/17);检测恶性疟原虫,敏感度为87.50%(21/24),特异度为63.33%(19/30);检测间日疟原虫,敏感度为69.23%(9/13),特异度为68.29%(28/41)。结论所建立的SYBR Green实时PCR方法能较准确地诊断疟疾并鉴别虫种,敏感度高,在混合感染的诊断方面具有优越性。     

疟疾诊断参比实验室:疟原虫显微镜检测能力外部评估结果分析

目的评价国家疟疾诊断参比实验室的疟原虫显微镜检测水平。方法综合分析该实验室参与2013—2014年世界卫生组织西太区组织的疟原虫血涂片显微镜检测外部质量评估结果。结果疟原虫虫种鉴定水平在2013年和2014年的得分率分别为91.11%(82/90)和93.33%(84/90)。但间日疟原虫与卵形疟原虫之间误判率较高。2014年原虫计数的成绩(得分率:93.94%,31/33)好于2013年(得分率:60.61%,20/33)。结论该实验室疟原虫镜检能力不断提高,但仍需加强卵形疟原虫的镜检能力,同时提高原虫计数能力。     

2012—2020年江苏省输入性卵形疟流行病学特征

目的　分析2012—2020年江苏省输入性卵形疟病例流行病学特征,为该省制定输入性疟疾防控策略提供科学依据。方法　在传染病报告信息管理系统和寄生虫病防治信息管理系统中,收集2012—2020年江苏省卵形疟确诊病例相关信息,包括出国、回国时间,在国外患病次数,发病、初诊和确诊时间,初诊和确诊单位等资料,进行描述性统计分析。结果　2012—2020年江苏省累计报告卵形疟病例347例,其中2015年报告例数最多（71例）。347例卵形疟病例均为实验室确诊的境外输入性病例,占该阶段江苏省报告疟疾病例总数的14.32%。全省卵形疟报告例数居前5位的地级市依次为连云港市（53例,占15.27%）、南通市（44例,占12.68%）、淮安市（44例,占12.68%）、泰州市（44例,占12.68%）和扬州市（36例,占10.37%）。报告病例数以10月最多,达39例（占11.24%）;12月最少,为21例（占6.05%）。卵形疟病例境外感染来源地主要为赤道几内亚（97例,占37.95%）、安哥拉（60例,占17.29%）、尼日利亚（40例,占11.53%）。卵形疟病例从回国到发病中位时间为64（144） d,其中7.49%（26/347）的病例回国1年后发病。病例初诊单位主要集中在县级医疗机构（117例,占33.72%）,确诊单位主要集中在地市级医疗机构（122例,占35.16%）。2012—2020年江苏省卵形疟病例初诊正确率从2012年的0提升到2020年的78.26%,呈逐年上升趋势（[χ2] = 50.90,P＜0.01）。结论　2012—2020年江苏省每年均有输入性卵形疟病例报告,感染来源地主要为非洲,初诊和确诊单位主要集中在地市级和县级等基层医疗机构。今后应重点开展基层镜检人员疟原虫检测能力培训,以提高卵形疟诊断能力、巩固消除疟疾成果。     

Evaluation of the Binax NOW ICT test versus polymerase chain reaction and microscopy for the detection of malaria in returned travelers

Microscopic detection of Plasmodium species has been the reference standard for the diagnosis of malaria for more than a century. However, maintaining a sufficient level of expertise in microscopic diagnosis can be challenging, particularly in non-endemic countries. The objective of this study was to compare a new rapid malaria diagnostic device (NOW ICT Malaria Test; Binax, Inc., Portland, ME) to polymerase chain reaction (PCR) and expert microscopy for the diagnosis of malaria in 256 febrile returned travelers. Compared with PCR, the NOW ICT test showed a sensitivity of 94% for the detection of P. falciparum malaria (96% for pure P. falciparum infection) and 84% for non-P. falciparum infections (87% for pure P. vivax infections and 62% for pure P. ovale and P. malariae infections), with an overall specificity of 99%. The Binax NOW ICT may represent a useful adjunct for the diagnosis of P. falciparum and P. vivax malaria in febrile returned travelers.     

2015年重庆市3例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例的实验室诊断

目的   分析重庆市2015年3例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例病原、抗原及核酸检测过程,减少卵形疟原虫的漏诊和误诊。 方法  收集流行性病学资料及血样,按照WS259-2015疟疾的诊断标准对3例血样进行血涂片镜检、快速疟疾诊断试纸条检测（RDT）及巢式PCR检测。 结果  3例患者均为非洲务工归国人员,并都有疟疾发病史。血涂片镜检结果,3例血样均为疟原虫阳性。RDT检测结果3例均为除恶性疟以外其他疟原虫阳性。国家参比实验室推荐的巢式PCR检测DNA,3例均为阴性。用卵形疟原虫wallikeri亚种的种特异性引物的PCR检测,3例均为阳性。 结论  根据镜检、RDT和卵形疟原虫wallikeri亚种种特异性PCR检测确定,重庆市2015年首次发现了3例卵形疟原虫wallikeri亚种感染输入病例,为重庆地区首次发现。     

2018年江苏省疟疾疫情分析

目的　分析2018年江苏省疟疾疫情，为制订全省消除疟疾后监测方案和技术措施提供科学依据。方法　收集2018年江苏省疟疾病例报告卡、疟疾病例流行病学个案调查表和疫点信息等资料，对2018年江苏省疟疾疫情数据进行统计分析。结果　2018年江苏省共报告疟疾病例243例，较2017年上升1.67%，其中恶性疟171例、间日疟14例、三日疟15例、卵形疟42例、间日疟与卵形疟混合感染1例；全部疟疾病例均为境外感染的输入性病例，未发现本地继发感染病例。患者职业以务工人员为主，占76.54%；全省报告病例数较多为南通市（48例）、扬州市（33例）和泰州市（22例）。报告病例的感染地分布以非洲地区为主（占96.30%），另有8例来自亚洲、1例来自中美洲。患者在就诊当天和就诊后1～3 d即确诊分别有125人例（51.44%）和91例（37.45%）；乡级、县级和市级医疗机构初次就诊确诊率分别为48.27%、88.76%和97.30%，乡（镇）卫生院初次就诊确诊率显著低于县级（χ2 = 21.47，P < 0.01）和市级医疗机构（χ2 = 32.86，P < 0.01）。结论　江苏省已无本地感染疟疾病例，但每年境外输入性病例数仍位居全国前列。今后应继续完善消除疟疾后监测体系、加强高危人群疟疾防病意识宣传、进一步提升医疗机构疟疾诊断能力和水平、做好输入性疟疾病例管理，以巩固消除疟疾成果。     

2018年江苏省疟疾疫情分析

目的　分析2018年江苏省疟疾疫情,为制订全省消除疟疾后监测方案和技术措施提供科学依据。方法　收集2018年江苏省疟疾病例报告卡、疟疾病例流行病学个案调查表和疫点信息等资料,对2018年江苏省疟疾疫情数据进行统计分析。结果　2018年江苏省共报告疟疾病例243例,较2017年上升1.67%,其中恶性疟171例、间日疟14例、三日疟15例、卵形疟42例、间日疟与卵形疟混合感染1例;全部疟疾病例均为境外感染的输入性病例,未发现本地继发感染病例。患者职业以务工人员为主,占76.54%;全省报告病例数较多为南通市（48例）、扬州市（33例）和泰州市（22例）。报告病例的感染地分布以非洲地区为主（占96.30%）,另有8例来自亚洲、1例来自中美洲。患者在就诊当天和就诊后1～3 d即确诊分别有125人例（51.44%）和91例（37.45%）;乡级、县级和市级医疗机构初次就诊确诊率分别为48.27%、88.76%和97.30%,乡（镇）卫生院初次就诊确诊率显著低于县级（χ2 = 21.47,P < 0.01）和市级医疗机构（χ2 = 32.86,P < 0.01）。结论　江苏省已无本地感染疟疾病例,但每年境外输入性病例数仍位居全国前列。今后应继续完善消除疟疾后监测体系、加强高危人群疟疾防病意识宣传、进一步提升医疗机构疟疾诊断能力和水平、做好输入性疟疾病例管理,以巩固消除疟疾成果。     

2008-2017年武汉市境外输入性疟疾疫情及诊断能力分析

目的 分析湖北省武汉市境外输入性疟疾流行特征、医疗机构防治和诊断能力,为输入性疟疾监测和制定防控策略提供科学依据。方法 收集2008-2017年武汉市境外输入性疟疾病例流行病学资料,对病例性别、年龄、地区、职业、发病时间、血检阳性率、入院?检出时间采用描述性分析,对虫种、疫源地、就诊情况进行统计分析。结果 2008-2017年武汉市共报告境外输入性疟疾424例,其中恶性疟301例（70.99%）,20 ~ 49岁男性为主要发病群体,发病无季节相关性。非洲和东南亚地区输入性病例的疟原虫感染类型不同（[χ2] = 205.83,P < 0.01）,卵形疟和三日疟均来自非洲撒哈拉沙漠以南国家。不同级别医疗机构初诊（Z = -3.89,P < 0.01）和确诊（[χ2] = 53.88,P < 0.01）能力差异有统计学意义。2008年后医院发热门诊血检能力快速提升,至2010年实现所有疟疾病例均在实验室（镜检）诊断,且24 h检出率逐年提高至90%以上,而6 d检出率降至0（2016年）。结论 虽然武汉市医疗机构应对境外输入性疟疾能力已处于较高水平,但输入性疟疾防控形势依然较严重,须持续加强医疗机构的相关能力建设。     

福建省3例输入性卵形疟的实验诊断分析

目的 随着输入性疟疾的增加,通过镜检结合PCR方法,提高检出率。方法 福建省2013年成立基因诊断参比实验室,用PCR方法回顾性筛查过往病例时发现有3例卵形疟原虫误诊为间日疟。结果 镜检结合PCR扩增和序列分析发现FJ1、FJ2为卵形疟亚种curtisi和恶性疟混合感染,FJ3为单一卵形疟亚种curtisi感染。结论 福建省以往卵形疟报道很少,需要加强诊断培训,镜检结合PCR检查提高检出率。