过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

亚硒酸钠调控AMPK/mTOR信号通路对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制

目的探讨亚硒酸钠调控AMPK/mTOR信号通路对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法培养人结直肠癌细胞株HT-29、SW620和HCT116,用1.25、2.5、5、10、20μmol/L的亚硒酸钠处理细胞48 h,CCK8试验检测不同浓度亚硒酸钠对细胞增殖的影响;10、20μmol/L的亚硒酸钠作用于人结直肠癌细胞株HT-29 12、24、48、72 h后,CCK8试验检测亚硒酸钠作用不同时间对细胞增殖的影响;10、20μmol/L的亚硒酸钠作用于人结直肠癌细胞株HT-29 48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡率并用Western印迹检测蛋白表达。结果随着亚硒酸钠浓度的增加,人结直肠癌细胞株HT-29、SW620和HCT116的抑制率增大,具有浓度依赖性,亚硒酸钠对人结直肠癌细胞株HT-29、SW620和HCT116的IC50分别为(5.060±1.01)、(6.701±1.21)、(7.471±1.47)μmol/L,后期选择人结直肠癌细胞株HT-29为研究对象;10和20μmol/L的亚硒酸钠对细胞的抑制率在各个时间点都显著高于0 h抑制率(P<0.01),且随着时间的延长抑制率增加;10、20μmol/L的亚硒酸钠处理后细胞的凋亡率均显著高于0μmol/L,具有浓度依赖性(P<0.01),细胞中p-AMPK和Bax的蛋白表达显著高于0μmol/L组,p-mTOR和Bcl-2的蛋白表达显著低于0μmol/L组且具有浓度依赖性(P<0.01)。结论亚硒酸钠能抑制人结直肠癌细胞株HT-29的增殖,促进细胞的凋亡,使Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升,可能与AMPK/mTOR信号通路调控有关。     

LAPTM4β在人结直肠癌耐药细胞株中的表达及意义

目的建立耐奥沙利铂(L-OHP)的人结直肠癌耐药细胞株(HT-29/L-OHP),检测相关耐药基因LAPTM4β的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用机制。 方法采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/L-OHP;应用LAPTM4β-35蛋白抑制剂作用于HT-29/L-OHP细胞株后,流式细胞技术检测细胞凋亡,比较其与HT-29/L-OHP细胞株对于L-OHP的耐药情况;应用RT-PCR检测LAPTM4β mRNA的表达;应用Western blot测定LAPTM4β-35蛋白的表达。 结果成功建立人结直肠癌耐药细胞株HT-29/L-OHP,流式细胞技术检测结果表明应用LAPTM4β-35蛋白抑制剂作用于HT-29/L-OHP细胞株后,其对于L-OHP的耐药明显低于HT-29/L-OHP细胞株。HT-29/L-OHP细胞株中LAPTM4β mRNA表达水平明显高于亲本细胞株HT-29,分别为5.613±0.139和1.105±0.187,(P<0.05),LAPTM4β-35蛋白在HT-29/L-OHP细胞和HT-29细胞的相对表达量2.203±0.080和1.033±0.070,(P<0.05)。 结论LAPTM4β在结直肠癌耐药细胞株中过表达,与结直肠癌奥沙利铂耐药密切相关,可以作为结直肠癌耐药的一个敏感的生物学标志物。     

基于AKT信号通路探讨替吉奥对大肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭的影响

目的 基于蛋白激酶B(AKT)信号通路探讨替吉奥对大肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法 体外培养大肠癌细胞株HT-29细胞,设置对照组(HT-29细胞)、20μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+20μg/ml替吉奥)、50μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+50μg/ml替吉奥)和100μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+100μg/ml替吉奥)。CCK-8法检测HT-29细胞增殖情况;Transwell法检测HT-29细胞迁移、侵袭情况;Western印迹法检测HT-29细胞中AKT、磷酸化(p)-AKT、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、p-PI3K、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达情况。结果 与对照组相比,20、50、100μg/ml替吉奥组HT-29细胞OD450值、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、PCNA、MMP-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);随着替吉奥浓度升高,HT-29细胞OD450值、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、PCNA、MMP-9蛋白表达水平...     

巨噬细胞游走抑制因子通过PI3K／Akt信号通路调控人结肠癌细胞株HT-29增殖和血管生成因子表达

背景：巨噬细胞游走抑制因子（MIF）是-种多功能细胞因子,其在结直肠癌发生、发展中的作用机制尚不明确。目的：探讨MIF是否通过P13K／Akt信号通路调控人结肠癌细胞增殖和血管生成因子表达。方法：人结肠癌细胞株HT-29分为对照组（RPMI-1640）、重组人MIF（rhMIF）组、PI3K抑制剂LY294002组和LY294002预处理联合rhMIF组,并予相应干预。以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测HT-29细胞增殖状态,分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素-8（IL-8）mRNA表达和蛋白分泌,蛋白质印迹法检测Akt和磷酸化Akt（p—Akt）蛋白表达。结果：rhMIF对HT-29细胞具有促增殖作用,能增加细胞VEGF、IL-8 mRNA表达和蛋白分泌,并促进Akt蛋白磷酸化（P＜0．05）;而先予LY294002预处理可显著抑制rhMIF的上述作用．HT-29细胞增殖显著受抑（P＜0．05）,VEGF、IL-8mRNA表达、蛋白分泌以及p-Akt蛋白水平与对照组相比无明显差异。各组总Akt蛋白水平均无明显差异。结论：MIF诱导人结肠癌细胞增殖和血管生成因子表达可能是通过活化PI3K／Akt信号通路实现的。     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

长链非编码RNA PCGEM1靶向miR-433-3p调控结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)PCGEM1影响结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法甲四基偶氮唑蓝(MTT)法测定HT-29细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证PCGEM1基因的转录活性,qRT-PCR检测PCGEM1和miR-433-3p mRNA表达。结果 qRT-PCR结果表明,与正常对照NCM460细胞相比,结直肠癌细胞HT-29中PCGEM1表达显著升高(P0.05),miR-433-3p表达显著下降(P0.05);下调PCGEM1表达可以抑制HT-29细胞增殖、迁移和侵袭;过表达miR-433-3p可抑制结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移、侵袭;PCGEM1参与负向调控miR-433-3p的表达;抑制miR-433-3p表达逆转了下调PCGEM1表达对HT-29细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 PCGEM1通过下调miR-433-3p表达诱导结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移和侵袭。     

亚硒酸钠对结直肠癌HT-29细胞AMPK/mTOR通路活化及凋亡的影响

目的研究亚硒酸钠对结直肠癌HT-29细胞中AMPK及其下游靶蛋白mTOR的作用,以及其对HT-29细胞凋亡的影响。方法分别用亚硒酸钠、AMPKα亚基特异激活剂AICAR和AMPK特异siRNAs处理HT-29细胞。采用Western印迹检测HT-29细胞中AMPK和mTOR的磷酸化水平、流式细胞术检测HT-29细胞凋亡率。结果与对照相比,亚硒酸钠可上调HT-29细胞中AMPK的磷酸化水平,下调mTOR的磷酸化水平,并促进HT-29细胞凋亡(P<0.01);亚硒酸钠单独处理HT-29细胞与AMPKα亚基特异激活剂单独处理HT-29细胞作用类似;敲低HT-29细胞中AMPK蛋白表达后,mTOR磷酸化水平升高,同时,亚硒酸钠对HT-29细胞的促凋亡作用降低(P<0.01)。结论亚硒酸钠通过激活AMPK通路进而抑制mTOR通路,从而促进HT-29细胞凋亡。     

RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及STAT3信号通路的影响

目的探讨RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 Western blotting法检测人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞及正常结肠NCM460细胞中CST1的蛋白表达。以Lipofectamine~(TM) 2000为载体,将设计合成的CST1的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染HCT116细胞(si-CST1组和NC组),并设置空白对照组。转染48 h,MTT法检测细胞活力,Transwell小室检测穿膜细胞数,Western blotting法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达。结果人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞中CST1蛋白的表达均显著高于正常结肠NCM460细胞(P0.05)。si-CST1组HCT116细胞中CST1蛋白的表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,si-CST1组细胞活力和侵袭能力显著降低,p-STAT3、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论 RNA干扰CST1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与下调STAT3信号通路有关。     

基于PI3K/AKT信号通路研究丹酚酸B对成骨细胞骨形成的调控作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在丹酚酸B对成骨细胞骨形成的调控作用。方法 0.00、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00 nmol/L的丹酚酸B作用MC3T3-E1细胞12、24、36 h,MTT法检测细胞活力,RT-PCR法检测碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、骨钙素(OCN)mRNA表达,Western印迹检测细胞中ALP、OPN、COLⅠ、OCN及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果与0.00 nmol/L比较,0.03、0.10、0.30 nmol/L丹酚酸B组细胞活力显著提高(P0.01),ALP、OPN、COLⅠ、OCN蛋白及mRNA表达量上调(P0.01),PI3K及p-AKT表达量上调(P0.01);而LY294002组ALP、OPN、COLⅠ及OCN蛋白及mRNA表达量下调(P0.01),PI3K及p-AKT表达量下调(P0.01)。与LY294002组比较,丹酚酸B+LY294002组ALP、OPN、COLⅠ、OCN蛋白及mRNA表达量上调(P0.01),PI3K及p-AKT表达量上调(P0.01)。结论丹酚酸B通过激活PI3K/AKT信号通路促进MC3T3-E1细胞骨形成。     

补体C7在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞株增殖的影响

目的检测补体C7在结直肠癌组织中的蛋白表达,探讨补体C7对人结肠癌细胞株HCT-116、LoVo增殖的影响及其可能的机制。方法利用免疫组织化学方法分别检测50例结直肠癌患者癌组织及癌旁组织中补体C7蛋白分布与表达水平;将过表达C7质粒和C7-siRNA分别转染人结肠癌细胞株HCT-116和LoVo细胞,通过CCK-8检测C7对这两种细胞增殖的影响;通过Western blotting检测HCT-116在PI3K抑制剂LY294002处理后C7的变化。结果结直肠癌组织中补体C7蛋白表达水平明显高于癌旁组织。与空载质粒组和NC-siRNA组相比,C7过表达组细胞增殖能力明显增强,C7-siRNA组细胞增殖能力明显减弱; LY294002处理结肠癌细胞后C7蛋白表达量明显降低。结论补体C7在结直肠癌组织中明显高表达,抑制结肠癌LoVo细胞中C7基因可降低癌细胞增殖,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响北大核心CSCD

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P<0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

下调BAP31基因表达抑制结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号

目的探讨下调B细胞受体相关蛋白(BAP)31基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号的影响。方法以正常结肠上皮细胞NCM460为对照细胞,Western印迹检测结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的蛋白表达。设计合成BAP31的特异性siRNA及阴性对照siRNA,分别命名为si-BAP31组和NC组,参照LipofectamineTM 2000说明转染HCT116细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测BAP31、β-catenin、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK)8检测细胞活力;Transwell小室检测穿膜细胞数。结果结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的表达均显著高于在NCM460细胞表达(P0.05)。转染si-BAP31的HCT116细胞BAP31表达明显受到抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。与NC组比较,si-BAP31组在24、48和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞侵袭能力及β-catenin、PCNA和MMP-2的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论下调BAP31基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖侵袭能力,机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

RNA干涉5-脂氧合酶基因表达对结直肠癌细胞生长抑制及ROS含量、NF-κB通路的影响

目的探讨RNA干扰5-脂氧合酶(LOX)基因表达对结直肠癌细胞增殖凋亡及活性氧(ROS)含量和核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法参照LipofectamineTM2000产品说明书将干扰5-LOX表达的siRNA(si-5-LOX组)瞬时转染结直肠癌HCT116细胞,转染无意义的siRNA序列(阴性对照组,NC组)和仅加入脂质体(对照组)为对照组,Western印迹检测转染48 h后各组细胞中5-LOX及NF-κB信号通路p-IκBα和下游靶蛋白cyclinD1、Bcl-2的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS含量;CCK8法分别于转染的24、48、72 h检测各组细胞活力。结果转染si-5-LOX的HCT116细胞5-LOX的蛋白表达显著低于对照组(P0.05);与NC组比较,si-5-LOX组在24、48、72 h的细胞活力均显著降低,在48 h的细胞凋亡率及ROS含量均显著升高,p-IκBα的蛋白表达显著升高,cyclinD 1、Bcl-2的蛋白表达均显著降低(均P0.05)。结论抑制结直肠癌细胞5-LOX的表达可降低细胞活力及诱导细胞凋亡,其机制可能与降低细胞内ROS含量和下调NF-κB信号通路有关。     

猕猴桃根多糖调控Wnt信号通路抑制结肠癌增殖促进其凋亡

目的探讨猕猴桃根多糖(ACPS)调控Wnt信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。方法 0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/ml的ACPS处理人结肠癌HT29细胞,细胞计数试剂盒(CCK)8检测ACPS对HT29细胞活力的影响;ACPS或Wnt信号通路抑制剂XAV-939处理HT29细胞,细胞被分为阴性对照组、ACPS组(4.00 mg/ml的ACPS处理细胞)、XAV-939组(10μmol/L的XAV-939处理细胞)和ACPS+XAV-939组(4.00 mg/ml的ACPS和10μmol/L的XAV-939处理细胞),处理细胞48 h后CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测凋亡率;Western印迹检测Wnt信号通路关键分子β-catenin及下游靶基因cyclinD1和survivin的蛋白表达。结果 0.25 mg/ml和0.50 mg/ml的ACPS对HT29细胞活力影响与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05),而1.00～4.00 mg/ml的ACPS在24～72 h均能降低HT29细胞活力,与阴性对照组比较差异具有统计学意义,且具有浓度依赖性,各浓度均呈现时间依赖性(P0.05);ACPS或XAV-939均能抑制HT29细胞活力,诱导细胞凋亡,下调β-catenin、cyclinD1和survivin的蛋白表达,与阴性对照组比较差异均具有统计学意义(P0.05),两者合用效果更显著。结论 ACPS可通过抑制Wnt信号通路降低结肠癌细胞活力,诱导细胞凋亡。     

IGF-1经AKT通路对人肺癌A549细胞增殖、侵袭与转移的影响

目的探究胰岛素生长因子(IGF)-1能否经蛋白激酶B(AKT)信号通路调节人肺癌A549细胞的增殖、侵袭与转移。方法体外培养人肺癌A549细胞融合至70%～80%,经无血清饥饿过夜,分为对照组、LY294002组、IGF-1组和IGF-1+LY294002组,继续饥饿培养48 h。噻唑蓝(MTT)法、细胞划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western印迹法检测磷酸化(p)-AKT、AKT、基质金属蛋白酶(MMP)-9、小鼠双微体扩增基因(MDM)2和上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)蛋白表达。结果与对照组相比,IGF-1组可明显促进细胞增殖,加速细胞迁移与侵袭,并伴有p-AKT、MMP-2、MDM2蛋白表达增加及E-cadherin蛋白表达降低(P0.05);AKT通路特异性抑制剂LY294002可显著抑制上述作用。结论 IGF-1可能经AKT信号通路上调MMP-9、MDM2蛋白表达并抑制E-cadherin蛋白表达,进而促进人肺癌A549细胞的增殖、侵袭与转移。     

下调KDM1A基因对结直肠癌细胞增殖、侵袭及AKT信号通路的影响

目的探讨赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(KDM1A)对结直肠癌细胞增殖侵袭及AKT信号通路的影响。方法采用LipofectamineTM2000转染试剂将si-KDM1A转染至结直肠癌HCT15细胞中,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期变化,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,RT-PCR检测细胞中KDM1A mRNA的表达,Western blotting检测KDM1A蛋白和AKT信号通路相关蛋白p21、Cyclin D1、MMP-2和p-AKT的表达。结果转染si-KDM1A后,HCT15细胞中KDM1A mRNA、KDM1A、Cyclin D1、MMP-2和p-AKT蛋白表达均显著降低,而p21蛋白表达显著升高;细胞的增殖能力和侵袭能力明显减弱;细胞在G1期所占比例明显增加,而在S期和G2期明显减少。结论下调KDM1A基因可抑制结直肠癌HCT15细胞的增殖、侵袭能力,其分子机制可能与抑制AKT信号通路的活化有关。     

Ad—PTEN对乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制作用的影响及机制

目的探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒（Ad—PTEN）和LY294002对乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制作用的影响及机制。方法在MCF-7中导人Ad—PTEN和P13K抑制剂LY294002。Westem blotting法检测P11EN／P13K／AKT及其下游相关蛋白表达,M1Tr法检测MCF-7细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期,AnnexinV法检测细胞凋亡率。结果与DMSO组、空载病毒和LY294002组相比,联合组（LY294002＋Ad—PTEN）PTEN蛋白明显上调,而P13K／AKT及下游蛋白水平显著下降;联合组细胞阻滞于G0／C1期;细胞凋亡率增加明显;自培养第2天起,联合组细胞生存率呈下降趋势。结论Ad—PTEN联合LY294002通过阻滞细胞周期、促进细胞凋亡抑制MCF-7的增殖能力,两者具有正向协同作用;其机制可能与下调P13K／AKT信号通路下游蛋白有关。     

葛根素抑制结肠癌HT-29细胞生长及部分机制

分别采用MTT法、TUNEL法及免疫细胞化学方法,观察葛根素对HT-29细胞增殖的量效和时效关系、增殖与细胞凋亡的影响及细胞核因子-κB(NF-κB)065蛋白表达的影响.发现随着葛根素作用时间和剂量的增加,药物对HT-29细胞的抑制率逐渐增高.TUNEL法和免疫细胞化学染色显示,不同剂量组葛根素可使HT-29细胞凋亡明显增加,PCNA表达显著降低,同时细胞内NF-κB p65蛋白表达显著降低(P＜0.05).认为葛根素具有抗HT-29细胞增殖作用,可能与阻断NF-κB p65蛋白通路,抑制氧化损伤有关.     

miR-503在结直肠癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨microRNA-503(miR-503)在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测54例结直肠癌组织及4种结直肠癌细胞(SW480、Lovo、LS174T和HT-29)中的miR-503水平,分析结直肠癌组织miR-503表达与常见临床病理参数的关系,采用脂质体转染miR-503模拟物(mimics)至miR-503水平最低的细胞,采用MTT法、流式细胞仪及Transwell法检测过表达miR-503对细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭的影响。结果 54例结直肠癌组织的miR-503相对表达量为(0.257±0.011),低于癌旁组织(P0.05),且miR-503水平与TNM分期、分化情况、肿瘤大小和术前癌胚抗原均有关(P0.05);与人正常结肠细胞系CCD-18Co相比,4种不同恶性程度结直肠癌细胞SW480、Lovo、LS174T和HT-29的miR-503相对表达量依次为(0.342±0.072)、(0.161±0.054)、(0.260±0.041)和(0.415±0.086),差异均有统计学意义(P0.05);与对照组相比,转染miR-503 mimics后的细胞增殖抑制率和凋亡率均升高,G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例均降低,穿膜细胞数减少(P0.05)。结论 miR-503在结直肠癌组织和细胞中低表达,且与结直肠癌的临床病理参数有关,上调miR-503水平可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭并诱导细胞周期阻滞和凋亡。