丹参提取物对感染性骨缺损大鼠炎症水平的影响

目的 分析丹参提取物对感染性骨缺损大鼠炎症水平的影响。方法 选取50只SPF级SD大鼠,10只大鼠作为对照组,另外40只建立感染性骨缺损模型,将30只建模成功大鼠分为模型组、药物对照组、丹参提取物组各10只;观察各组大鼠病理组织学检测、骨密度、骨灰度、血管内皮生长因子(VEGF)、骨生长因子、炎症因子水平、降钙素基因相关肽(CGRP)/磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)通路相关mRNA表达量、CGRP/PI3K/Akt通路。结果 与对照组相比,模型组、药物对照组、丹参提取物组骨密度、骨灰度、VEGF、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)、CGRP、PI3K、Akt mRNA表达量、CGRP、PI3K、Akt表达量降低,白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、核因子κB(NF-κB)升高(P<0.05);与模型组相比,药物对照组、丹参提取物组骨密度、骨灰度、VEGF、IGF-1、FGF-2、CGRP、PI3K、Akt mRNA表达量、CGRP、PI3K、Akt表达量升高,IL-10、TNF-ɑ、...     

氟砷联合染毒对大鼠牙齿组织BMP-2、RANK、PI3K、Akt1基因转录水平的影响

[目的]通过建立慢性氟砷联合染毒大鼠模型,观察骨形态发生蛋白2(BMP-2)、核因子κB受体活化因子(RANK)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B1(Akt1)基因mRNA相对表达水平在氟砷联合染毒大鼠牙齿组织中的变化情况。[方法]选取清洁级Wistar大鼠作为研究对象,按析因设计随机分为16组,每组10只,雌雄各半,采用不同浓度Na F(0.0、5.0、10.0、20.0 mg/kg)和Na As O2(0.0、2.5、5.0、10.0 mg/kg)单独和联合灌胃染毒,每周连续灌胃染毒6 d,停灌1 d,连续染毒6个月。实验结束后处死大鼠。采用氟离子选择电极测牙氟含量,原子荧光光谱法测牙砷含量,实时荧光定量PCR检测大鼠牙齿组织BMP-2、RANK、PI3K和Akt1mRNA相对量表达。[结果]无氟染毒的4组大鼠均无氟斑牙发生,余12组大鼠均出现氟斑牙。牙氟、牙砷含量随单独氟、砷染毒剂量升高而增加。大鼠牙齿组织BMP-2和Akt1mRNA表达水平呈现随氟染毒剂量增加而升高的趋势(P0.05),但并未随砷染毒剂量的改变而发生变化(P0.05)。RANK和PI3K mRNA表达水平呈现随氟染毒剂量增加而下降的趋势(P0.05),各砷染毒剂量组间差异则无统计学意义(P0.05)。氟染毒剂量、牙氟含量与BMP-2和Akt1mRNA表达水平呈正相关(r=0.382、0.302,0.292、0.246,均P0.05),与RANK和PI3K mRNA表达水平呈负相关(r=-0.323、-0.332,-0.193、-0.185,均P0.05),氟斑牙与牙齿组织RANK、PI3K mRNA表达呈负相关(r=-0.283、-0.273,均P0.05),其余无相关性。[结论]过量氟暴露可上调大鼠牙组织BMP-2和Akt1转录水平,下调RANK和PI3K转录水平,从而参与牙齿釉质发育或矿化过程,导致牙齿损伤。氟砷联合暴露致牙齿损伤主要表现为氟的主效应,砷间接参与氟致牙齿损伤作用。     

SDF-1和PI3K/Akt通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号传导通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制.方法:将卵巢癌CAOV3细胞分为对照组(未给药),实验组1(100 ng/ml SDF-1),实验组2(50 μmol/L PI3K/Akt信号传导通路抑制剂LY294002)和实验组3(50 μmol/L LY294002,作用0.5h后加入100 ng/ml SDF-1).采用MTT法检测卵巢癌CAOV3细胞经不同药物处理后24、48和72 h的细胞增殖能力.采用Transwell体外细胞侵袭实验和Western Blot法检测经不同药物处理48h后卵巢癌CAOV3细胞的侵袭能力、Akt磷酸化程度和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果:SDF-1可以明显促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05),LY294002可以抑制卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05);实验组3卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭能力与实验组2比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SDF-1能够通过PI3K/Akt信号传导通路诱导MMP-9蛋白表达上调,增强卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;应用LY294002阻断PI3 K/Akt信号传导通路可显著抑制SDF-1对人卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭的促进作用.     

丙泊酚对感染性休克大鼠肾功能和PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨丙泊酚对感染性休克大鼠肾功能和PI3K/Akt信号通路的影响。方法将SPF级Wistar大鼠分为对照组、模型组、丙泊酚组、LY294002P组、丙泊酚+LY294002P组,检测各组大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、半胱氨酸抑制素C(CysC)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)。结果与对照组相比,模型组、丙泊酚组、LY294002P组、丙泊酚+LY294002P组的Scr、BUN、CysC、LDH、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、肾组织凋亡指数、Cleaved-Cas-3、Bax蛋白水平升高(P0.05),SOD、GSH-Px含量和Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT蛋白水平降低(P0.05)。与模型组相比,丙泊酚组、丙泊酚+LY294002P组Scr、BUN、CysC、LDH、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、肾组织凋亡指数、Cleaved-Cas-3、Bax蛋白水平降低(P0.05),SOD、GSH-Px含量和Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT蛋白水平升高(P0.05);与模型组相比,LY294002P组Scr、BUN、CysC、LDH、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、肾组织凋亡指数、Cleaved-Cas-3、Bax蛋白水平升高(P0.05),SOD、GSH-Px含量和Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT蛋白水平降低(P0.05)。与丙泊酚组相比,丙泊酚+LY294002P组Scr、BUN、CysC、LDH、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、肾组织凋亡指数、Cleaved-Cas-3、Bax水平升高(P0.05),SOD、GSH-Px含量和Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT蛋白水平降低(P0.05)。结论丙泊酚可以改善感染性休克大鼠肾功能损伤,可能与降低炎症和氧化应激反应、激活PI3K/Akt信号通路有关。     

胸腺素β4对深Ⅱ°烫伤创面愈合的影响及机制研究

目的探讨胸腺素β4对深Ⅱ°烫伤创面愈合的影响及作用机制。方法选取健康SD大鼠40只,将大鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只,其中对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予生理盐水、2、6和18μg胸腺素β4处理创面,观察各组创面愈合情况,采用ELISA法检测组织IL-10和TNF-α水平,采用Western blot检测创面VEGF、Caspase-3、NF-κB表达,采用RT-PCR检测创面VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA表达。结果高剂量组烫伤后7、14 d大鼠创面愈合率分别为(40.06±1.67)%和(70.03±1.88)%,明显高于对照组、低剂量组和中剂量组(P0.05);高剂量组烫伤后12、24和48 h时IL-10均明显高于对照组、低剂量组和中剂量组(P0.05),而TNF-α明显低于对照组、低剂量组和中剂量组(P0.05);高剂量组烫伤后7、14 d时VEGF明显高于对照组、低剂量组和中剂量组(P0.05),而Caspase-3和NF-κB明显低于对照组、低剂量组和中剂量组(P0.05);高剂量组烫伤后7、14 d时VEGF mRNA和TGF-β1 mRNA表达明显高于对照组、低剂量组和中剂量组(P0.05)。结论胸腺素β4可促进大鼠深Ⅱ°烫伤创面愈合,其机制可能与降低炎性因子、Caspase-3及NF-κB水平,提高VEGF表达有关。     

蓝莓对大鼠肝纤维化PI3K-Akt信号通路影响

目的观察磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在猪血清所致的免疫性大鼠肝组织纤维化中作用及蓝莓影响。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、蓝莓原浆低、中、高剂量组(每天灌胃给予0.25、0.50、1.00 mL/100 g)及复方鳖甲软肝片组(每天灌胃0.054 g/100 g),每组10只,除对照组外,其余各组均采用每周二、五腹腔注射猪血清复制大鼠肝纤维化模型,共12周;测定大鼠肝脏指数及血清丙氨酸转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),观察肝组织病理学改变,采用免疫组织化学、Western blot法检测肝组织Akt1、磷酸化Akt1(p-Akt1)表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肝脏指数(0.58±0.02)明显升高(P0.01),肝纤维化明显;与模型组比较,蓝莓高剂量组大鼠肝指数(0.37±0.06)明显降低(P0.01),肝纤维化程度明显减轻;与对照组比较,模型组大鼠肝组织中Akt1、p-Akt1蛋白表达量[分别为(0.99±0.09)、(0.81±0.06)]明显增加(P0.01);与模型组比较,蓝莓高、中剂量组大鼠肝组织中Akt1、p-Akt1蛋白表达量[分别为(0.39±0.13)、(0.42±0.15)与(0.44±0.06)、(0.43±0.12)]明显下调(P0.01)。结论蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化发生发展过程具有干预作用,其机制可能与PI3K/Akt信号通路激活有关。     

PI3K/Akt信号通路与放射性肝损伤的关系研究

目的探讨PI3K/Akt信号通路与放射性肝损伤的关系。方法选取大白兔20只,随机分为观察组(n=10)和对照组(n=10),两组大白兔再随机分为照射前组和照射后7 d组,各5只。观察组给予右半肝伽玛刀单次照射,对照组给予假照射,检测两组大白兔肝功能,采用HE染色和Masson染色观察肝脏组织结构,免疫组化染色检测TGF-β1、α-SMA和p-Akt表达。结果观察组照射后7 d谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)和总胆红素(TB)分别为(164.51±25.64)、(76.68±12.10)、(301.15±40.41)和(5.68±0.41)μmol/L,明显高于照射前及对照组(P0.05);照射后7 d,观察组大白兔肝细胞排列紊乱,部分细胞胞质疏松,脂肪变性,呈空泡状,肝小叶结构紊乱,肝小叶内逐渐呈纤维间隔;观察组照射后7 d TGF-β1、α-SMA和p-Akt表达吸光值分别为(0.087±0.012)、(0.073±0.010)和(0.075±0.014),明显高于照射前及对照组(P0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路可能参与了放射性肝损伤过程,值得进一步研究。     

LNK对人巨细胞病毒感染平滑肌细胞血管新生微环境的影响

目的研究淋巴细胞连接蛋白(LNK)对人巨细胞病毒(HCMV)感染平滑肌细胞(VSMC)血管新生微环境的影响及作用机制。方法经过细胞培养及细胞转染将细胞分为正常组、对照组、空载组和LNK组。进行细胞增殖实验,酶联免疫吸附法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)水平,化学发光法检测促血管生成素-1(Ang-1)、促血管生成素-2(Ang-2)及血管内皮生长因子-A(VEGF-A)水平,Western blot法检测血清转化生长因子β1(TGFβ1)、转化生长因子β1受体(TGFβ1R1)相对表达量。结果与正常组比较,对照组、空载组、LNK组OD值均升高(P0.05)。与对照组比较,空载组、LNK组OD值较低(P0.05)。与空载组相比,LNK组OD值较低(P0.05)。与正常组细胞比较,对照组、空载组、LNK组细胞IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均升高(P0.05),与对照组、空载组细胞比较,LNK组细胞IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均降低(P0.05)。与正常组比较,对照组、空载组、LNK组Ang-1降低,Ang-2、VEGF-A升高(P0.05),与对照组比较,空载组、LNK组Ang-1升高,Ang-2、VEGF-A降低(P0.05),与空载组比较,LNK组Ang-1升高,Ang-2、VEGF-A降低(P0.05)。与正常组比较,对照组、空载组、LNK组TGFβ1及TGFβR1表达升高(P0.05),与对照组比较,空载组TGFβ1、TGFβR1表达升高,LNK组TGFβ1、TGFβR1表达降低(P0.05),与空载组比较,LNK组TGFβ1、TGFβR1表达降低(P0.05)。结论 LNK转染对HCMV感染VSMC有一定干预作用,能够降低炎症反应,通过调控Ang-2、VEGF-A、TGFβ1、TGFβ1R1蛋白水平,改善血管新生微环境。     

复方芙蓉花叶提取物对烧伤后创面感染大鼠创面愈合的影响及其作用机制

目的 探讨复方芙蓉花叶提取物对烧伤后创面感染大鼠创面愈合的影响及其作用机制。方法 选取45只大鼠，10只作为空白组，其余35只建立烧伤后创面感染模型，35只建模大鼠最终有30只建模成功，将最终建模成功的30只大鼠分为模型组、药物对照组、实验组，每组各10只。药物对照组给予庆大霉素，实验组给予4 g/L复方芙蓉花叶提取物，空白组、模型组给予普通无菌纱布，连续干预10 d后观察大鼠变化。结果 与空白组比较，模型组、药物对照组、实验组创面愈合率、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6水平上升，血管内皮生长因子(VEGF)、Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA表达量及相对表达量下降(P<0.05);与模型组相比，药物对照组、实验组创面愈合率、VEGF水平、Wnt1、β-catenin mRNA表达量及相对表达量上升，MMP-2、MMP-9、TNF-α、IL-1β、IL-6下降(P<0.05);与药物对照组比较，实验组创面愈合率、VEGF水平、Wnt1、β-catenin mRNA表达量及...     

PI3K/Akt通路在尼古丁促NCI-H1975细胞增殖及抑制凋亡中的作用

目的探讨PI3K/Akt通路在尼古丁促进人肺腺癌细胞NCI-H1975增殖及抑制其凋亡中的作用。方法不同浓度尼古丁(0 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L、1μmol/L、10μmol/L)处理细胞72 h或者1%μmol/L尼古丁处理细胞不同时间(24、48、72 h)后,用RT-PCR、Western blot测PI3K/Akt通路及其下游分子(Bad、Caspase9、Fox O3a、m TOR)的mRNA和蛋白质变化情况;不同浓度尼古丁处理细胞1 h后,用Western blot测PI3K/Akt通路及其下游分子的磷酸化蛋白质(p-Akt、p-Bad、p-Caspase9、p-Fox O3a、p-m TOR)变化情况。结果随尼古丁浓度增大或者其作用时间延长,人肺腺癌细胞NCI-H1975中PI3K mRNA及蛋白质表达上调(P0.05),PI3K/Akt通路下游分子Bad、Caspase9、FoxO3a、m TOR mRNA及蛋白质表达下调(P0.05);蛋白质磷酸化水平(p-Akt、p-Bad、p-Caspase9、p-Fox O3a、pm TOR)随尼古丁浓度增大而增高(P0.05),具有浓度依赖性。结论尼古丁可能通过PI3K/Akt通路调节其下游多个靶分子的mRNA表达、蛋白质表达及磷酸化蛋白质从而调节人肺腺癌细胞NCI-H1975的增殖与凋亡。     

miR-221在急性心肌梗死大鼠中表达及其作用

目的探讨miR-221在急性心肌梗死(AMI)大鼠中的表达及其作用。方法在45只SD清洁级雄性大鼠中随机抽取35只通过冠状动脉左前降支结扎大鼠建立AMI模型,将其中建模成功的30只大鼠随机分为AMI组、对照组及抑制组,每组各10只;另抽取未建模的10只大鼠设立假手术组,采用冠状动脉左前降支穿线不结扎。其中对照组用携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒空载体miR-221阴性对照以4×10~7病毒数量进行心肌组织局部注射转染,抑制组用携带miR-221 inhibitor慢病毒以4×10~7病毒数量进行心肌组织局部注射转染,AMI组和假手术组每天给予等量生理盐水,隔日1次连续2周;记录大鼠心脏功能。采用原位末端凋亡法(TUNEL)检测心肌凋亡指数(AI),RT-PCR法检测miR-221表达,Western blot法检测Bax、Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达。结果与假手术组大鼠miR-221表达量(0.18±0.02)比较,AMI组(1.16±0.12)和对照组(1.18±0.12)大鼠的miR-221表达量均升高(均P0.01),抑制组大鼠miR-221表达量(0.30±0.03)均低于AMI组和对照组大鼠的miR-221表达量(均P0.01);与假手术组大鼠Bax(0.13±0.01)、Bcl-2(0.53±0.05)、PI3K(0.45±0.04)和p-AKT(0.87±0.09)蛋白表达量比较,AMI组和对照组大鼠的Bax蛋白表达量均上调(均P0.01),Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达量均下调(均P0.01);抑制组大鼠较AMI组和对照组大鼠Bax表达量均下调(P0.01),Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达量均上调(P0.01)。结论 miR-221在AMI大鼠心肌组织中高表达,下调miR-221表达可通过激活PI3K/AKT信号通路调控下游蛋白Bax及Bcl-2的表达抑制AMI大鼠心肌细胞凋亡。     

水凝胶对大鼠Ⅱ度放射性皮炎创面愈合影响机制探讨

目的放射性皮炎是肿瘤患者治疗中常见的一种反应之一,严重影响到肿瘤患者治疗进程。本研究探讨Urgo水凝胶治疗Wistar大鼠Ⅱ度放射性皮炎愈合过程中创面愈合率及其机制,为临床治疗放射性皮炎提供新方法。方法建立Wistar大鼠Ⅱ度放射性皮炎模型,随机分成3组,实验组给予Ugro水凝胶0.2mm涂层,比亚芬组(传统组)给予比亚芬0.2mm涂层,生理盐水组(对照组)给予0.9%生理盐水喷雾创面处理。通过HE染色、免疫组化及图像分析,测定各组Wistar大鼠放疗后7、14、21和28d创面肉芽组织、创面面积及创面中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达。结果 X射线放射后大鼠出现脱毛或皮肤溃疡现象,实验组创面面积在第21d为(0.900±0.070)cm2,低对照组(2.317±0.280)cm2和传统组(1.550±0.080)cm2,差异有统计学意义,F=20.4,P0.05;实验组创面面积在第28d为(1.061±0.054)cm2,明显低于对照组(2.520±0.140)cm2和传统组(1.453±0.080)cm2,差异有统计学意义,F=68.84,P0.05。实验组第28dbFGF阳性表达量为55.00±1.00,高于传统组43.60±1.81,差异有统计学意义,t=5.52,P=0.000 6。实验组第28天TGF-β1阳性表达量为51.00±3.69,高于传统组36.40±4.41,差异有统计学意义,t=2.54,P=0.035。结论 Ugro水凝胶能加快Wistar大鼠Ⅱ度放射性皮炎创面的愈合,减轻创面的炎症反应,促进弹力纤维和胶原的修复,其机制与表皮生长因子的表达有关。     

明日叶查尔酮对胰岛素抵抗细胞PI3K-Akt-GLUT4信号通路的影响

目的研究明日叶查尔酮(Angelica keiskei chalcones,AC)对胰岛素抵抗L6细胞磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶-葡萄糖转运体4(PI3K-Akt-GLUT4)信号通路的影响。方法采用高浓度胰岛素诱导的胰岛素抵抗L6细胞,分别加入5、10、20μmol/L终浓度的明日叶查尔酮共同培养24 h,葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测细胞PI3K和Akt的mRNA表达水平,蛋白印迹法检测GLUT4和Akt的蛋白表达水平。结果胰岛素抵抗组细胞培养液的葡萄糖含量显著高于空白对照组(P0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则降低(P0.05);中、高剂量AC组细胞培养液葡萄糖含量均低于胰岛素抵抗组(P0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则升高(P0.05)。结论明日叶查尔酮可上调L6细胞胰岛素抵抗模型PI3K-AktGLUT4信号通路的表达水平,增强其对葡萄糖的摄取利用,改善胰岛素抵抗。     

冬青坐浴剂联合内托生肌散对肛瘘术后创面愈合的疗效评价

目的:探讨冬青坐浴剂联合内托生肌散对肛瘘术后创面愈合的疗效。方法:将116位符合纳入标准的低位肛瘘患者随机分为观察组与对照组,每组58例。两组均行肛瘘切除术,观察组术后应用冬青坐浴剂坐浴联合内服内托生肌散及玉红生肌膏换药;对照组应用高锰酸钾坐浴联合玉红生肌膏换药,观察两组伤口愈合情况。结果:观察组的炎性反应期为(6.3±0.5)天,短于对照组(7.1±0.4)天,差异有统计学意义(t=9.5151,p0.05);观察组第7,14,21天创面毛细血管计数均明显多于对照组(u值分别为2.3799,3.7672,3.5888,p均﹤0.05)。观察组第7,14,21天TGF-β1表达水平明显高于对照组(t值分别是-4.7358,-6.1236,-2.8973,p均0.05),其中第14天的表达水平最早,两组均表现出先升后降的趋势(p0.05)。观察组的伤口愈合时间明显短于对照组(u=2.1891,P0.05)。结论:推断在肛瘘术后,可能通过冬青坐浴剂外洗联合内服内托生肌散可促进肛瘘创面愈合,其机制可能为早期提高TGF-β1表达水平促进肉芽生长,血管新生,提高局部供血供氧,从而加速创面愈合;而后期TGF-β1水平下降,抑制肉芽组织及瘢痕过度增生,使创面顺利上皮化,然其机制,信号调控通络如何,仍有待进一步验证。     

明日叶查尔酮对糖尿病大鼠肝细胞PI3K和AktmRNA表达的影响

目的研究明日叶查尔酮(ashitabe chalcone,AC)对糖尿病大鼠肝细胞磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidy I inositol 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶(serine-threonine kinases,Akt)mRNA表达的影响。方法高脂饲料喂养加链尿佐菌素腹腔注射诱发的2型糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组和高、低剂量AC组,每组10只,均喂饲高脂饲料,分别每日经口灌胃给予明日叶查尔酮0、30和10mg/kg BW。另设一个正常对照组为正常大鼠喂饲普通饲料,实验周期4周。用放射免疫分析法检测血清胰岛素水平,葡萄糖氧化酶法测血糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测肝细胞PI3K和Akt mRNA表达水平,蛋白印迹法测肝细胞Akt磷酸化水平。结果高剂量AC组空腹血糖和血清胰岛素水平显著低于糖尿病对照组,而PI3K mRNA、Akt mRNA和磷酸化Akt蛋白表达水平均显著高于糖尿病对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论明日叶查尔酮可上调糖尿病大鼠PI3K和Akt mRNA的表达水平,改善胰岛素抵抗。     

磷脂酰肌醇3激酶和蛋白激酶B在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的 研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达和临床意义.方法 运用Western Blot和免疫组化法检测41例EOC(EOC组)、20例正常卵巢(NO,NO组)和20例良性卵巢上皮性肿瘤(BEOT,BEOT组)组织中PI3K和Akt蛋白的表达.结果 PI3K在EOC组中阳性表达率为70.7％(29/41),显著高于NO组和BEOT组[10.0％(2/20)、20.0％(4/20)],差异有统计学意义(P＜ 0.01);Akt在EOC组中阳性表达率为73.2％(30/41),显著高于NO组和BEOT组[10.0％(2/20)、30.0％(6/20)],差异有统计学意义(P＜0.01).在EOC患者中,临床分期Ⅰ～Ⅱ期PI3K和Akt蛋白的表达与Ⅲ～Ⅳ期比较差异有统计学意义(P＜0.05);浆液性囊腺癌中PI3K和Akt蛋白的表达与黏液性囊腺癌比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PI3K和Akt蛋白在EOC组织中表达显著增强,它们在EOC发生、发展中起到～定的作用,PI3K/Akt通路有望作为抗肿瘤治疗的有效新靶点.     

氟化钠对人成骨肉瘤Saos-2细胞PI3K/Akt信号表达及凋亡的影响

目的观察氟化钠(NaF)对人成骨肉瘤Saos-2细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号表达及凋亡的影响。方法采用成组设计,按NaF剂量将Saos-2细胞分为0(对照)、5、10、20、40 mg/L染氟组(n=3)。体外培养24、48 h后收集细胞,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测PI3K、Akt和线粒体凋亡途径相关分子Forkhead转录因子(FoxO)1的蛋白表达,采用流式细胞仪检测Saos-2细胞的凋亡水平。结果体外培养24、48 h时,各组Saos-2细胞PI3K、Akt蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。24 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白表达(0.40±0.06、0.45±0.02、0.37±0.06、0.32±0.06)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-PI3K蛋白表达(0.46±0.06、0.58±0.03)均高于对照组(0.29±0.04,P均<0.05),而40 mg/L染氟组(0.21±0.03)低于对照组(P<0.05)。24 h时,5、10、20 mg/L染氟组磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达(0.27±0.01、0.30±0.03、0.27±0.03)均高于对照组(0.20±0.02,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-Akt蛋白表达(0.42±0.04、0.60±0.02)均高于对照组(0.27±0.01,P均<0.05),而40 mg/L组(0.18±0.02)低于对照组(P<0.05)。24 h时,10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.38±0.07、0.41±0.06、0.47±0.08)均高于对照组(0.34±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.36±0.08、0.37±0.10、0.54±0.04、0.73±0.04)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05)。24、48 h时,对照组和5、10、20、40 mg/L染氟组细胞凋亡率分别为(2.867±0.583)%、(3.647±0.035)%、(3.773±0.095)%、(5.440±0.325)%、(7.203±0.476)%,(3.707±0.286)%、(4.023±0.241)%、(4.970±0.368)%、(12.473±0.949)%、(19.387±1.892)%。24 h时,40 mg/L染氟组凋亡水平高于对照组(P<0.05);48 h时,20、40 mg/L染氟组凋亡水平均高于对照组(P均<0.05)。结论氟可以直接激活成骨细胞内的PI3K/Akt信号通路,进而产生抗凋亡作用。     

脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体生物学功能的变化

目的:探讨脓毒症对大鼠小肠上皮短肽载体(PepT1)的表达和功能变化影响. 方法:将60只大鼠分为对照组(n=10)和脓毒症组(n=50),采用盲肠结扎穿刺术(CLP)动物模型.模型建立后4、8、12、16和20 h留取血标本和小肠黏膜,行肠黏膜病理检查,用Elisa方法检测血清、肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测肠上皮PepT1 mRNA和蛋白表达.采用高效液相色谱法检测PepT1的摄取功能. 结果:CLP所致的脓毒症大鼠小肠黏膜明显损伤,表现为黏膜短缩、脱落,毛细血管扩张出血和溃疡形成.血清和肠黏膜TNF-α、IL-1β水平均在建模4h时达高峰,之后逐渐下降,显著高于对照组(P＜0.05).脓毒症8、12、16和20 h组小肠上皮PepT1 mRNA表达水平较对照组明显下降(P＜0.05),PepT1蛋白表达也较对照组显著减少(P＜0.05).脓毒症12、16和20 h组小肠上皮PepT1对底物的摄取功能较对照组明显下降(P＜0.05),摄取量也较脓毒症4h和8h组明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论:CLP所致的脓毒症大鼠小肠上皮PepT1 mRNA和蛋白表达明显下降,机体在基因和蛋白水平下调了肠上皮PepT1生物学功能.     

PI3K-Akt信号通路在尼古丁致牙周膜成纤维细胞细胞凋亡中的保护作用

目的探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制。方法向7×104/ml的PDLFs细胞悬液中分别加入0(对照)、1、10、100μg/ml的尼古丁溶液培养24 h。采用RT-PCR法检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,Akt)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA的表达量,采用Western blot法检测Akt蛋白的Thr308、Ser473位点磷酸化和caspase-3蛋白的表达量。结果与对照组比较,各剂量尼古丁染毒PDLFs细胞的PI3K mRNA表达水平上调(P<0.05),Akt mRNA表达水平下调(P<0.05),PDLFs细胞Akt在Thr308、Ser473位点磷酸化水平均升高(P<0.01),caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平均升高(P<0.05,P<0.01)。且随着尼古丁染毒剂量的升高,PI3K mRNA的表达水平呈逐渐增高的趋势,Akt mRNA的表达水平呈逐渐降低的趋势,PDLFs细胞Akt在Thr308位点磷酸化水平呈逐渐增高的趋势,PDLFs细胞Akt在Ser473位点磷酸化水平呈先上升后降低的趋势,PDLFs细胞caspase-3 mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增高的趋势。结论 PI3K-Akt信号通路在尼古丁致PDLFs细胞凋亡中具有抗凋亡的保护作用。     

伤科黄水促进大鼠创伤创面愈合的实验研究

目的研究伤科黄水促进大鼠背部开放创面愈合的作用机理。方法雌性SD大鼠45只,体重250g～300g,随机分为伤科黄水组、呋喃西林组和生理盐水组。手术造模形成大鼠背部开放创面模型,术后每日分别以相应药物作用于创面。于第3、5、7、9、15天对大鼠背部修复组织行大体及光镜观察;计算创面愈合率;检测大鼠血清TNF-α含量。结果伤科黄水组较对照组创面组织水肿轻、肉芽生长快、创面结痂快、修复疤痕薄;术后第3、7、15天创面愈合率明显提高(P<0.05);光镜观察见成纤维细胞及新生毛细血管增生多,炎性细胞浸润早;大鼠血清中TNF-α含量明显增高(P<0.05)。结论伤科黄水具有显著促进创伤创面愈合的作用,并与TNF-α水平适度增高存在一定关系。