产丙酮酸棒状杆菌的鉴定及微生物学性状研究

目的对临床分离于皮脂腺囊肿标本中的菌株进行表型和基因型鉴定,描述该菌株的生物学特性及致病性,为临床诊断提供准确地病原学依据。方法对分离菌株进行革兰氏染色等,并使用VITEK 2Compact全自动微生物分析仪进行鉴定。采用K-B法进行药敏试验。提取分离菌株DNA,采用通用引物对16S rRNA基因进行PCR扩增并测序,将测序结果与GenBank中收录的16S rRNA基因序列进行BLAST同源性对比。结果分离菌株经VITEK 2Compact鉴定为玫瑰色库克菌,后经16S rRNA序列测定方法鉴定,分离菌株为产丙酮酸棒状杆菌。药敏试验显示该菌株对四环素、万古霉素、利福平敏感,对青霉素、红霉素、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、头孢吡肟、亚胺培南、庆大霉素等均耐药。结论对于表现型不易鉴定或鉴定不准确的细菌,采用16SrRNA序列测定的方法进行鉴定是最准确的。产丙酮酸棒状杆菌是引起患者疾病的致病菌。在完善产丙酮酸棒状杆菌生化反应信息的同时,探索出有效可行的生物学鉴定方法。     

新型洛菲不动杆菌的分离与鉴定

目的对从呼吸道感染的分泌物中分离的1株革兰阴性球杆样细菌进行研究,探讨其种系发生及分类学特征。方法利用形态、生理、生化特性等表型性状进行初步鉴定,通过细菌16S rRNA基因测序及基因比对明确其种系来源。结果分离菌为革兰阴性球杆状菌,生化反应不活泼,对环丙沙星耐药;BLAST序列比对显示该分离菌与洛菲不动杆菌的相似度为99.2%,与洛菲不动杆菌标准株不同的是在底物利用试验上有8项结果存在差异。结论根据表型性状和种系发生结果证实该菌为洛菲不动杆菌,鉴于该菌株与模式株在生化特性方面存在一定差异,初步考虑该菌株为洛菲不动杆菌的新亚型。     

Cardiobacterium valvarum临床分离株的生物学特性研究及16S rRNA鉴定

目的 采用不同的方-法描述Cardiobacterium valvarum(C. valvarum)临床分离株的生物学特性,利用16S rRNA基因测序技术进行分子鉴定。 方-法 转种阳性血培养标本到血琼脂平板上进行细菌培育,革兰染色涂片镜检,用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定分析仪对临床分离株进行细菌鉴定,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对分离株的蛋白质进行高通量测定,E-test法对分离株作药敏试验。提取分离株的DNA,采用16S rRNA基因测序技术对PCR的产物进行测序,在NCBI的BLAST网站上与GenBank数据库上的序列做相似性比较,用MEGA7.0.26软件构建该分离株的系统进化树。结果 经细菌培养发现小而圆、光滑、不透明,灰色的菌落;经革兰染色后镜下见到小、两端圆形、革兰阴性的多形性杆菌;VITEK 2 Compact上机、MALDI-TOF-MS技术均未得到该分离株的鉴定结-果;16S rRNA基因测序技术测得该菌株基因全序列约为1 450 bp,与C. valvarum F0432的16S rRNA同源性为99.59%,鉴定为C. valvarum。结论该菌的形态、生化反应均无代表性,采用16S rRNA基因测序技术可以对C. valvarum进行鉴定,对该疾病的诊断具有重要意义。     

小熊猫感染肺炎克雷伯氏菌的检查及药敏试验

目的为确诊导致一只6岁左右的雌性小熊猫死亡的病因。方法无菌采集死亡小熊猫的心、肝、脾、肺等样品并进行病原学检查。通过对多个内脏样本进行细菌平行分离鉴定(形态特征、生化特性和16SrDNA分析),对分离得到的一株优势菌(R1)进行小鼠人工感染及药敏试验。结果 R1被鉴定为肺炎克雷伯氏菌,且未检测到别的细菌;R1对小鼠具有较强致病力,LD_(50)为6.5×10~4 CFU/mL,且死亡小鼠与该小熊猫具有一致临床表现和病理剖解症状;R1对头孢噻肟等药物敏感,对丁胺卡那等药物敏感性为中介,对青霉素等耐药。结论该小熊猫死于肺炎克雷伯氏菌感染。该菌对青霉素类抗生素耐药较强,且耐药谱较广,对大环内酯类、多肽类抗生素均有耐受作用,对头孢菌素类和氨基糖苷类抗生素敏感。     

重症监护病房136株鲍曼不动杆菌的耐药性分析

目的 了解本院重症监护病房鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物的耐药情况.方法 采用安徽恒星HX-21细菌鉴定分析仪对本院2008年1月至2010年1月送检标本中分离的鲍曼不动杆菌进行鉴定及药敏分析.结果 136株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦敏感性较高.结论 标本主要来源于呼吸道,占76.47%.应该严格执行隔离制度,减少交叉传播.重视病原学检测,根据药敏合理用药,减少多重耐药菌株产生.     

两株牛源致病性肠球菌的分离鉴定及生物学特性分析

目的分离、鉴定宁夏地区某养殖场致奶牛和肉牛死亡的病原菌,并分析其生物学特性。方法采集宁夏地区一奶牛和肉牛养殖场死亡犊牛脏器,进行病原菌的分离培养,采用革兰染色、全自动生化鉴定仪进行菌种鉴定,并进行生物学特性分析,包括培养特性、药物敏感性、毒力基因携带情况以及动物致病性。结果分离纯化得到两株革兰染色阳性菌,分别命名为EF1和EF2,在营养培养基上形成白色、圆形、光滑的菌落,在选择性培养基上形成黑色、圆形、光滑菌落。经全自动生化鉴定仪鉴定EF1为屎肠球菌(Enterococcus faecium),EF2为粪肠球菌(Enterococcus faecalis);药敏试验测定EF1对头孢拉定、庆大霉素和丁胺卡那耐药,EF2对头孢拉定、林可霉素、环丙沙星、土霉素、庆大霉素、磺胺嘧啶和丁胺卡那耐药。PCR检测EF1携带agg、gelE和efaA毒力基因,EF2携带esp、ace、gelE和efaA毒力基因。动物致病性试验中小鼠注射病原菌72h开始死亡,解剖观察两组小鼠脏器(肝、脾、肾)均肿大变黑,且从病变脏器中分离到的细菌均与接种细菌一致。结论该起疫情病原菌为粪肠球菌和屎肠球菌。两分离菌株均具有高耐药性和强致病性,可能与携带多种毒力基因有关。     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定与生物学分析

目的 从四川省某规模化养猪场病死猪肝脏分离到一株奇异变形杆菌,分析其生物学特性,为临床鉴别诊断和治疗提供参考。方法 对分离株进行革兰氏染色、培养特性观察、毒力试验、生化试验、药敏试验以及16S rRNA基因序列分析,并且构建系统进化树。结果 分离株16S rRNA测序结果经BLAST对比分析,其与各株奇异变形杆菌同源性均为98%以上,将分离株与GenBank中其他6株不同来源的变形杆菌与3株不同来源的肠杆菌科细菌进行序列对比分析并且构建系统进化树,证明分离株与猪源奇异变形杆菌(HQ259935.1)的同源性最高,为99.8%;与大肠杆菌,沙门氏菌,克雷伯氏菌的同源性仅为92.1%~93.2%。致病性试验表明分离株对小鼠LD₅₀为1.86×10⁶CFU/只。分离株对氨基糖苷类和β-内酰胺类药物中度敏感,对其他种类药物敏感性较低。结论 分离株经鉴定为猪源奇异变形杆菌,具有较高的耐药性和致病性。     

山羊源奥斯陆莫拉菌的分子鉴定与分析

目的 对重庆市某羊场送检的山羊肺炎病例进行病原菌分离培养,从分子水平上对该病原菌进行分类学鉴定与分析。方法 分离纯化病原菌后,进行形态学鉴定,药敏试验和致病性试验,并采用细菌通用引物扩增该病原菌的16SrDNA,对扩增的核苷酸序列进行测序和分析。结果 所得病原菌为革兰氏阴性杆菌,对多种抗生素敏感,能够引起健康羊只出现呼吸道疾病,PCR扩增出长约1 447 bp的目的片段,将该序列与NCBI中已公布的序列进行比对,发现所得序列与奥斯陆莫拉菌(Moraxella osloensis,登陆编号为JN084136)同源性高达99.9％。并将该序列与其相关性较高的奈瑟氏菌属(Neisseria)、莫拉克斯氏菌属(Moraxella)、俊片菌属(Lampropedia)与副球菌属(Paracoccus )等4种菌属的代表菌株16S rDNA构建系统发育进化树,结果显示该病原菌与莫拉克斯氏菌属(Moraxella)聚为一簇。结论 研究表明,从山羊肺炎病例分离到的菌株为奥斯陆莫拉菌。     

鸡肉空肠弯曲杆菌的分离鉴定及耐药性分析

目的 分离和收集食源性空肠弯曲杆菌的优势流行株,了解市场上鸡肉中空肠弯曲杆菌的污染和药物敏感性情况。方法 根据GB/T4789.9-2003、SN0175-2010、ISO10272-1:2006、FDA/BAM:2001、USDA/FSIS:1998等方法优化组合出一套对动物性食品源空肠弯曲杆菌有效的分离鉴定方法,从市场上鸡肉中分离疑似空肠弯曲杆菌,并进一步用生化试验及PCR方法进行准确鉴定。采用微量肉汤稀释法测定了所分离的空肠弯曲杆菌对22种常见抗菌药物（组合）的最低抑菌浓度值（MIC）。结论 根据培养特征、形态特征、生化试验和PCR结果准确鉴定出21株空肠弯曲杆菌,其污染率为11.5%。86%生化试验阳性的菌株经PCR鉴定为阳性。将空肠弯曲杆菌标准菌株和随机选出的分离株的16S rDNA扩增序列进行比对,二者同源率为100%。药敏试验表明,14.3%的分离菌株对氨苄西林具有耐药性;大多数菌株对头孢类抗生素MIC值相对较高;42.9%的菌株对萘啶酸具有耐药性;所有分离株对环丙沙星、四环素、红霉素、氯霉素、庆大霉素、链霉素不耐药。     

人感染藤黄短小杆菌的分离与鉴定

目的研究从患儿颌下淋巴结穿刺脓液中分离的纯G^＋棒状样杆菌的生物学地位。方法常规方法分离培养细菌，并做生化反应。提取细菌DNA，采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因，琼脂糖凝胶电泳回收目的基因并测序。结果分离菌的一般生物学特性与生化反应与藤黄短小杆菌基本相同，16S rRNA基因长1387bp，与藤黄短小杆菌16S rRNA基因相似度达99．7％。结论通过生化反应和16S rRNA基因的序列测定确定此菌为藤黄短小杆菌，初步认为是藤黄短小杆菌的新亚型。     

羊肺炎克雷伯氏菌感染症及病原菌检验与系统发育分析

目的对一起小尾寒羊病害进行发病情况、临床表现与病理变化、病原等方面的检验,旨在明确感染症的特征及相应的病原菌。方法在发病情况调查的基础上,对新鲜病死羊进行体表及剖检后的病变检验;同时以病变肝、肺、心血组织为材料做细菌分离与纯培养,对所分离的细菌进行形态特征、理化特性等方面的鉴定;选取经鉴定后的1个代表菌株(SKp-1株)进行了16S rRNA基因的分子鉴定,测定了16S rRNA基因序列,构建了系统发育树;将代表菌株培养后制备成9×108CFU/ml的菌液,经接种感染健康小尾寒羊,测定其致病作用;对4株细菌以琼脂扩散法(K-B)做对抗菌类药物的敏感性测定。结果被检病死小尾寒羊无特征性临床表现,剖检可见肺肿胀,肠黏膜脱落、出血等。从肺、肝、心血组织均检出了纯一的同种细菌,经理化特性等鉴定表明为克雷伯氏菌属(KlebsiellaTrevisan 1885)的肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(K.pneumoniaesub-sp.pneumoniae)。所测代表菌株的16S rRNA基因序列长度为1415bp,在GenBank登录号为AY963633,与检索出的28种克雷伯氏菌属细菌16S rRNA基因序列同源性均在98~99%,在系统发育树中与肺炎克雷伯氏菌(登录号为AF453251)聚为一个分支。人工感染试验结果显示对小尾寒羊具有致病作用。用37种抗菌类药物所做的药敏试验结果显示在不同株间无明显的敏感与耐药性差异。结论所检小尾寒羊病例为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种感染。     

首次从中国小鼠中分离到肝螺杆菌及其鉴定

目的对中国小鼠肝螺杆菌进行分离鉴定。方法采集中国某实验动物中心发病小鼠标本,采用细菌学分离培养、血清学试验、多重PCR检测、病理组织学检查等方法进行鉴定,并对细菌的分子生物学特征进行分析。结果分离到一株能产生多种毒素的细菌,经鉴定为肝螺杆菌(HHm0801)。用螺杆菌属16SrRNA基因特异引物和肝螺杆菌16SrRNA基因、flaA基因、flaB基因、ureA基因、cdtB基因、cdtC基因特异引物对HHm0801细菌的PCR扩增为阳性,经核苷酸序列测定分析证实上述序列与肝螺杆菌ATCC51449基因序列(GenBank登录号:NC004917)同源性高达99%。肝螺杆菌感染小鼠肝脏的肝细胞肿大,出现大小不等的空泡,部分胞核深染,局部坏死,肝小叶脂肪变性;直肠部分绒毛脱落,有少量炎性细胞,局部充血。脾脏淋巴细胞散在分布,小叶间隔不清晰,脾巨噬细胞增多。眼睛巩膜增厚,晶状体部可见深色物质沉着。结论首次从中国小鼠中分离到了肝螺杆菌,为进一步研究该菌及开展流行病学调查提供了科学依据。     

Characterization of a Novel Reassortant Epizootic Hemorrhagic Disease Virus Serotype 6 Strain Isolated from Diseased White-Tailed Deer (Odocoileus virginianus) on a Florida Farm

We report an outbreak of a novel reassortant epizootic hemorrhagic disease virus serotype 6 (EHDV-6) in white-tailed deer (WTD) on a Florida farm in 2019. At necropsy, most animals exhibited hemorrhagic lesions in the lung and heart, and congestion in the lung, liver, and spleen. Histopathology revealed multi-organ hemorrhage and congestion, and renal tubular necrosis. Tissues were screened by RT-qPCR and all animals tested positive for EHDV. Tissues were processed for virus isolation and next-generation sequencing was performed on cDNA libraries generated from the RNA extracts of cultures displaying cytopathic effects. Six isolates yielded nearly identical complete genome sequences of a novel U.S. EHDV-6 strain. Genetic and phylogenetic analyses revealed the novel strain to be most closely related to a reassortant EHDV-6 strain isolated from cattle in Trinidad and both strains received segment 4 from an Australian EHDV-2 strain. The novel U.S. EHDV-6 strain is unique in that it acquired segment 8 from an Australian EHDV-8 strain. An RNAscope^® in situ hybridization assay was developed against the novel U.S. EHDV-6 strain and labeling was detected within lesions of the heart, kidney, liver, and lung. These data support the novel U.S. reassortant EHDV-6 strain as the cause of disease in the farmed WTD.     

中华绒螯蟹病原维氏气单胞菌的检验

目的为明确一起中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis H.Milne-Edwards)自然发病的病原,进行细菌学检验。方法随机取6只病(死)蟹做细菌分离,对其中6株分离菌(编号:HQ010516C-1至HQ010516C-6)按常规进行形态特征、主要理化特性鉴定;同时,选择1个代表菌株(HQ010516C-1)测定16S rRNA基因序列,构建系统发育树;以代表菌株对健康蟹做人工感染试验;对分离菌以琼脂扩散(K-B)法进行对抗菌类药物的敏感性测定。结果6株被检菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),对供试健康蟹有致病作用,对供试37种抗菌类药物中的头孢噻肟等28种药物敏感或高度敏感、对新生霉素低度敏感、对青霉素G等8种耐药。结论所检出的维氏气单胞菌为该病例的病原菌之一。     

日本鳗鲡混合感染迟缓爱德华氏菌与创伤弧菌的分离与鉴定

目的对日本鳗鲡混合感染迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的病原进行了分类鉴定。方法对两株病原菌进行了形态、API-ID32E鉴定系统和分子生物学鉴定,分别测定了菌株AnGH080301和An-GH080302的16SrRNA和HSP60基因序列,构建了系统进化树。结果按形态特征和API-ID32E鉴定系统分别初步鉴定菌株AnGH080301和AnGH080302为迟缓爱德华氏菌和创伤弧菌。菌株AnGH080301的16SrRNA基因部分序列(登录号FJ646618)与迟缓爱德华氏菌的16S rRNA基因(登录号AB050832)同源性最高,达99.7%;菌株AnGH080302的HSP60基因部分序列(登录号FJ646619)与创伤弧菌HSP60基因(登录号BA000037)的同源性最高,达99.8%。结论综合菌株的生理生化特性和分子生物学鉴定结果,可将菌株AnGH080301和AnGH080302分别鉴定为迟缓爱德华氏菌和创伤弧菌,迟缓爱德华氏菌与创伤弧菌均为人兽共患病病原,其混合感染日本鳗鲡致病的报道尚属首次。     

Identification and characterization of soil-isolated Streptomyces SJE177 producing actinomycin

One hundred seventy-seven actinomycetes strains were isolated from soils collected from fruit orchards in Thailand. All were tested for antibacterial activity against seven pathogenic bacteria using co-cultivation methods. Forty strains (22.6%) were active against at least one indicator bacteria. Twenty-seven strains (15.3%) inhibited only gram-positive bacteria, four strains (2.3%) inhibited only gram-negative bacteria, and nine strains (5.1%) showed activity against both. Strain SJE177 had potent activity against all tested bacteria, and was selected for further investigation. A crude ethyl acetate extract of this strain retained inhibitory activity as tested by disk-diffusion method. Analysis of morphological and biochemical characteristics and the 16S rRNA gene sequence indicated this strain belonged to the genus Streptomyces. The strain formed a monophyletic line in a phylogenetic tree of 16S rRNA gene sequences with other Streptomyces reference strains. High performance liquid chromatography (HPLC) analysis showed SJE177 produced actinomycin. Since many isolates showed inhibitory activity against indicator bacteria, these results suggest Thai soil could be an interesting source to explore for antibacterial substances.     

Virological surveillance of acute respiratory tract illnesses of children in Morioka, Japan. III. Human respiratory coronavirus]

In the virological surveillance of children with acute respiratory tract illnesses, five human respiratory coronaviruses (HRCV) were recovered. Three of these strains were isolated from nasopharyngeal swabs of patients with influenza-like illness collected in Kuji City on March 29, 1979. This may suggest the association of HRCVs and influenza-like illness. The other 2 strains were yielded from nasopharyngeal swabs of patients with afebrile acute upper respiratory tract illness collected in Morioka City on March 16 and April 27, 1979. These 5 isolates exhibited typical properties of HRCV; distinctive morphology, resistant to BUDR, chloroform sensitivity, and electron microscopic features of growth in L132 cells. These isolates were identified as 229E-like HRCV by indirect immunofluorescence test, but these were considerably different to HRCV (strain 229E) in antigenicity. Reciprocal neutralization titers of antisera against HRCV (strain 229E) and each isolate were determined by 50% plaque reduction tests in monolayers of L132 cells. The neutralizing activities of anti-HRCV (strain 229E) serum against each isolate were 40- to 100-fold lower than that of homologous reaction. The remarkable differences of antigenicity among the isolates did not be observed.     

某高级中学结核病爆发分离菌株的实验室鉴定

目的鉴定从某中学结核病爆发分离菌株的种属。方法对2006年5—8月,辽宁省某高级中学发生的10例痰检阳性病例中的3份痰标本分离的菌株经表型鉴定方法;传统生化方法;扩增hupB基因、dnaA-dnaN 和NTF-1区;Spoligotyping 以及MIRU基因分型;16S rRNA基因、16S-23S ITS和hsp65基因测序以及hsp65基因限制性酶切分析进行鉴定。结果临床分离株经生化方法初步鉴定1份为结核分枝杆菌复合群和2份为非结核分枝杆菌,随后经表型鉴定和扩增hupB基因、dnaA-dnaN 和NTF-1区;Spoligotyping 以及MIRU基因分型,说明属于结核分枝杆菌复合群的菌株为结核分枝杆菌北京基因型现代株,MIRU基因型为223325173533。经16S rRNA基因、16S-23S ITS和hsp65基因测序以及hsp65基因限制性酶切分析说明属于非结核分枝杆菌的菌株为猪分枝杆菌。结论本次从结核病爆发累及病人的标本中分离出结核分枝杆菌北京基因型现代株和猪分枝杆菌,猪分枝杆菌在暴发流行中的意义尚需进一步研究。