基底细胞癌中MMP-2、TIMP-4表达的研究

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂4(TIMP-4)在基底细胞癌(BCC)中的表达及意义。方法原位杂交法检测MMP-2和TIMP-4在15例BCC及10例正常皮肤中的表达,采用图像分析技术对原位杂交结果进行定量分析。结果BCC癌旁间质MMP-2表达较正常皮肤真皮增高(t=6.71,P<0.01),癌旁间质TIMP-4表达较正常皮肤真皮增高(t=8.65,P<0.01),癌旁间质TIMP-4/MMP-2比值较正常皮肤真皮增高(t=2.52,P<0.05)。部分BCC癌细胞有MMP-2表达,未见癌细胞有TIMP-4明显表达。正常人皮肤表皮无MMP-2和TIMP-4表达,正常人皮肤真皮仅见MMP-2和TIMP-4的弱阳性或阴性表达。结论MMP-2的表达可能与基底细胞癌的生长和侵袭有关;TIMP-4可能抑制MMP-2的活性,从而抑制BCC的侵袭和转移;TIMP-4/MMP-2比值升高可能是抑制BCC侵袭和转移的重要机制。     

H460细胞与单个核细胞三维立体混合培养中MMP-2和MMP-9的表达

目的:研究单个核细胞和肺癌细胞三维立体混合培养对MMP表达的影响.方法:活性胶原立体培养分为H460细胞组(HG)、单个核细胞组(MG)、混合组(HMG)3组,观察癌细胞的生长状况,用明胶酶谱法测定不同时间点各组MMP-2和MMP-9表达.结果:各组细胞在立体胶原内生长良好;MG未明显分泌MMP-2和MMP-9,HG和HMG分泌MMP-2和MMP-9,且HGM分泌的明显多于HG.结论:单个核细胞和癌细胞混合培养后MMP分泌增多.     

转染RECK基因对人骨肉瘤MG-63细胞MMP-2活化及侵袭能力的影响

目的 观察转染RECK基因对人骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及细胞侵袭力的影响.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入MG-63细胞,RT-PCR、流式细胞术检测目的 基因的表达,明胶酶谱法、Matrigel侵袭实验分别检测MG-63细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞生长曲线法观察转染质粒DNA对细胞的毒性作用.结果 转染后RECK基因在MG-63细胞Mrna和蛋白水平分别有稳定高表达;明胶酶谱显示重组质粒转染组MMP一2的活化比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.01),Matrigel侵袭实验显示重组质粒转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.05);而MTT法测重组质粒转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异(均P>0.05).结论 RECK基因过表达可显著减少骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及其侵袭能力,RECK基因可能成为肿瘤治疗的新靶点.     

HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响

目的观察HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响。方法人肝癌HepG2细胞分为空白组(同步培养,不做任何处理)、对照组(转染siRNA)和siRNA干扰组(转染HIF-1α516 siRNA)。siRNA和HIF-1α516 siRNA通过脂质体转染HepG2,转染18h后Western blot检测HepG2细胞中HIF-1β核蛋白和全细胞蛋白的表达、ELISA法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9的含量,Transwell小室观察HepG2的转移侵袭能力。结果 HIF-1α516 siRNA能显著降低HepG2细胞HIF-1α516mRNA的表达(降低70.0%)(P<0.01);增强HepG2细胞的侵袭转移能力(增强71.10%)(P<0.01)。HIF-1α516siRNA对全细胞HIF-1β蛋白的表达无影响,但能促进HIF-1β蛋白的核转移(增强64.1%)(P<0.01)。HIF-1α516 siRNA能明显升高HepG2细胞培养上清中MMP-2、MMP-9蛋白表达,分别升高37.72%、55.46%(P<0.01)。结论 HIF-1α516能抑制HepG2的转移侵袭,其机制可能与抑制HIF-1β的核转移有关。     

MMP-2在体外构建的C6细胞侵袭模型中的作用

目的:探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)在体外构建的C6细胞侵袭模型中的作用.方法:通过Transwell小室体外选择构建出一种更具有侵袭能力的胶质瘤细胞(C6-C1)细胞,与同源的C6细胞相比较,用细胞损伤愈合实验、Transwell小室侵袭评价及MMP-2的明胶酶谱检测进行分析.结果:与同源C6细胞相比,通过体外选择构建的C6-C1具有3倍侵袭能力,快速的单层细胞损伤愈合能力,MMP-2激活水平增加80%,MMP-2前体的表达没有显著差异.结论:MMP-2的激活水平增加与胶质瘤的侵袭转移能力相关.     

子宫颈鳞癌中MMP-2,MMP-9的表达及意义

目的 :探讨基质金属蛋白酶 (MMP 2 ,MMP 9)与宫颈鳞癌的发生、发展及侵袭的关系。方法 :32例宫颈鳞状细胞癌为实验组 ,慢性宫颈炎及正常宫颈组织各 30例为对照组。明胶酶谱法测定活性型MMP 2及MMP 9蛋白的含量 ,RT PCR技术检测MMP 2及MMP 9mRNA表达水平。结果 :宫颈鳞癌组织中MMP 2及MMP 9酶活性和MMP 2及MMP 9mRNA表达量均显著高于慢性宫颈炎及正常宫颈组织 (P均 <0 .0 1)。结论 :MMP 2及MMP 9与宫颈鳞癌的发生、发展及侵袭有关     

利凡诺对B16黑色素瘤细胞生长及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:观察利凡诺对体外培养的B16黑色素瘤细胞生长状态及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,研究利凡诺的抗肿瘤转移作用。方法:用噻唑蓝(MTT)法检测利凡诺对B16黑色素瘤细胞的生长抑制率;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清的MMP-2蛋白相对含量;免疫细胞化学染色检测MMP-2、MMP-9蛋白表达情况。结果:MTT法检测结果显示,不同浓度的利凡诺对细胞都有明显抑制并伴有时间及浓度依赖性;6.25、12.5μg.ml-1的利凡诺组在72 h与同时段对照组比有显著差异(P<0.05);利凡诺各药物组的MMP-2、MMP-9蛋白阳性表达随药物浓度的增加而减弱。结论:利凡诺可以抑制B16细胞的生长,并且具有潜在的抑制肿瘤侵袭和转移的作用。     

MMP-2、MMP-9在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的：观察膀胱移行细胞癌组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况,并探讨其表达的临床意义。方法选取海南省农垦三亚医院2012年1月至2015年1月收治的30例膀胱移行细胞癌组织标本作为观察组,另选取非膀胱肿瘤手术中切术的正常膀胱组织标本30例作为对照组,对所有标本黏膜中MMP-2、MMP-9的表达情况与表达强度通过免疫组化SP法联合高清晰度彩色医学图文分析系统进行检测,分析其表达的临床意义。结果观察组标本中的MMP-2、MMP-9的表达比对照组标本的表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且MMP-2、MMP-9在正常膀胱上皮呈阴性表达;观察组标本中的MMP-2、MMP-9呈现高表达状态,且表达强度随着疾病分期、分级的增高而逐渐增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在膀胱癌侵袭转移过程中,存在MMP-2、MMP-9的参与,在膀胱移行细胞癌中MMP-2、MMP-9的表达对其预后判断具有非常重要的参考价值。     

SphK1与食管癌侵袭和转移的关系

目的 探讨鞘氨醇激酶1(SphKl)通路在食管癌侵袭和转移中的作用及临床意义。方法 采用Real-time PCR和Western blot检测SphKl在食管癌组织中的表达,设计构建SphKl靶向shRNA质粒,建立SphKl稳定沉默的细胞系。MTT和Transwell法检测SphKl基因沉默对EC-1细胞增殖、侵袭的影响,明胶酶谱检测其对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和MMP-2分泌的影响。结果 SphKl的mRNA和蛋白质表达水平与侵袭能力明显相关。SphKl-siRNA能显著抑制EC-1细胞的增殖和侵袭,并能显著抑制EC-1细胞的MMP-9和MMP-2蛋白分泌。结论 SphKl与食管癌侵袭和转移关系密切,转染靶向SphKl基因的siRNA序列能够抑制食管癌EC-1细胞的增殖和侵袭,其机制与抑制MMP-9和MMP-2蛋白分泌密切相关。     

膀胱癌组织中MMP-2和MMP-9的表达和意义

目的 研究基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)在膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma,TCC)中的表达 及其与膀胱癌侵润转移的关系。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对43例膀胱癌手术切除标本 (癌组织及癌旁组织)中的MMP-2,9基因表达进行半定量检测。结果 MMP-2 mRNA在77％(33／43)的膀胱癌组 织、21％(9／43)的癌旁组织中表达;MMP-9 mRNA在53％(23／43)的膀胱癌组织、26％(11／43)的癌旁组织中表达。 癌组织中MMP-2,MMP-9的表达水平(0．929 1±0．294 5,0．760 2±0．323)均高于癌旁组织(0．587 8±0．110 3, 0．527 5±0．113 8),差异有显著性。癌组织中MMP-2,9的表达水平和膀胱癌的分级分期有关。癌组织中的 MMP-2表达阳性率高于MMP-9(P<0．05)。癌组织中MMP-2的表达和MMP-9的表达相关(rs=0．919,P< 0．001)。结论 MMP-2,MMP-9基因在膀胱癌和癌周组织均有差异性表达,表达水平与膀胱癌侵袭相关,可能为反 映膀胱癌侵润转移的生物学指标。     

基质金属蛋白酶-9及其抑制剂与肝癌侵袭转移的关系

目的研究基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其组织抑制剂-2（TIMP-2）在肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达及其与HCC侵袭转移的关系。方法应用组织芯片技术和免疫组化方法（SP法）检测93例HCC组织、66例癌旁组织和36例正常肝组织中MMP-9和TIMP-2的表达情况。结果MMP-9在HCC癌组织中的表达阳性率（62．4％）和癌旁组织（57．6％）高于正常肝组织（11．1％，P〈0．001）；MMP-9的表达随癌的转移而升高（P〈0．01）。TIMP-2在HCC中表达阳性率（51．6％）低于癌旁组织（83．3％，P〈0．001）和正常肝组织（86．1％，P〈0．001）；TIMP-2表达随癌的转移而降低（P〈0．05）。MMP-9和TIMP-2与患者合并硬化、组织分化、AFP水平和HBsAg状态无关（P〉0．05）。结论MMP-9和TIMP-2表达与HCC的侵袭转移密切相关，MMP-9和TIMP-2可以作为临床判断HCC侵袭转移有价值的参考指标。     

MMP-2及MMP-7在食管癌及癌旁组织中的表达

目的 探讨MMP-7和MMP-2在食管癌中的表达及其相互关联。方法 采用RT-PCR方法检测MMP-7和MMP-2在60例食管癌组织及其相应癌旁组织中的表达。结果 MMP-7和MMP-2在癌组织中阳性率分别为90.0%（54/60）和91.7%（55/60）,在其对应癌旁组织中的阳性率为48.3%（29/60）和65.0%（39/60）。通过RT-PCR半定量分析癌组织及其相应的癌旁组织中MMP-7和MMP-2的表达量,差异有统计学意义（P<0.05）。MMP-7的表达与肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关（P<0.05）。MMP-2与MMP-7表达呈正相关。结论 MMP-7和MMP-2的表达可能与食管癌的早期进展和程度有关。     

COX-2、MMP-2在直肠癌中的表达及其相关性分析

目的探讨人直肠癌中环氧化酶-2（COX-2）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的形态表达特点及其与侵袭和转移的关系。方法选取直肠癌组织46例,正常直肠组织12例,分别应用COX-2单克隆抗体和MMP-2单克隆抗体进行免疫组织化学染色,观察COX-2、MMP-2的表达水平,结果进行统计学处理。结果COX-2在直肠癌中的阳性表达率为63．04％,在正常直肠组织中阳性表达率为25％,差别有统计学意义（P〈0．05）;其表达程度与直肠癌的临床分期和转移有关（P〈0．05）,而与其组织学类型及分级无关（P〉0．05）。MMP．2在直肠癌中的表达率为67．39％,在正常直肠组织中表达率为25％,差异有统计学意义（P〈0．05）;其表达程度与直肠癌的分级、临床分期和转移有关（P〈0．05）,与其组织学类型无关（P〉0．05）。结论COX-2、MMP-2在直肠癌组织中均呈过表达,其表达程度具有相关性。COX-2、MMP．2的表达与直肠癌的发生、侵袭和转移密切相关。     

MMP2和MMP9在HepG2肝癌细胞系及HCC组织中表达的比较研究

目的分析MMP2和MMP9在HepG2细胞系及肝细胞癌(HCC)组织中的表达,探讨不同的基质金属蛋白酶(MMPs)与肝细胞癌侵袭转移的特异相关性。方法免疫细胞化学检测HepG2细胞系中MMP2和MMP9的表达,免疫组织化学检测38例HCC肝癌组织中MMP2和MMP9的表达。结果MMP9在HepG2细胞系的表达高于MMP2的表达。MMP9和MMP2在HCC组织中均有所表达,但MMP9的表达率84.2%(32/38)明显高于MMP2的表达52.6%(20/38),二者有显著差异(P<0.05)。结论MMP2、MMP9的表达在体内外呈现出一致性,即MMP9在体内外的表达均高于MMP2,推测可能MMP9与HCC的侵袭转移关系更为密切。     

基质金属蛋白酶-2、9及其抑制剂-1在大肠腺癌中表达的研究

目的:探讨人大肠腺癌组织中MMP-2、MMP-9和TIMP-1的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学方法(SP)检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1在30例大肠癌组织及相应切缘正常组织中的蛋白表达。结果:大肠癌组织中MMP-2、MMP-9及TIMP-1阳性表达明显高于正常切缘组织(P<0.05),并与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期以及有无淋巴结转移密切相关(P<0.05);MMP-9和TIMP-1表达明显相关(r=0.4924,P<0.05)。结论:MMP2、MMP9、TIMP1的过度表达与大肠腺癌的侵袭、转移有密切关系,其联合检测有助于评估大肠腺癌恶性生物学行为及预后。     

基质金属蛋白酶-9活性在胃癌组织中的表达

目的研究基质金属蛋白酶-9在胃癌组织中的活性,探讨其活性形式与胃癌侵袭转移的关系。方法用明胶酶谱法检测46例胃癌组织中基质金属蛋白酶-9活性,比较胃癌组织与癌旁正常组织、转移胃癌与未转移胃癌组织、侵及浆膜层与黏膜内的胃癌组织中其活性形式与相对表达程度。结果基质金属蛋白酶-9的酶原形式（92kD）和活性形式（84kD）在胃癌组织中均高于癌旁正常组织,在伴有淋巴结转移的胃癌组织中均明显高于未发生转移的胃癌组织。84kD活性形式在浸及浆膜层的胃癌组织中高于浸及黏膜层的胃癌组织,但92kD的酶原形式与胃癌浸润深度无明显相关性。结论基质金属蛋白酶-9活性形式可能促进肿瘤的浸润、转移;检测84kD活性形式MMP-9可以成为临床判断胃癌的恶性程度和转移的参考指标。     

肝癌中COX-2蛋白与MMP-2蛋白的表达及其相关性研究

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在肝细胞癌(HCC)中表达的相关性和临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测47例HCC组织、33例癌旁组织COX-2蛋白和MMP-2蛋白的表达。结果:COX-2蛋白在HCC组织、癌旁组织中的阳性表达率分别为78.7%,30.3%(P<0.05),COX-2蛋白的表达与肿瘤分化程度、肝硬化、静脉浸润以及TNM分期相关(P<0.05);MMP-2蛋白在HCC组织、癌旁组织中的阳性表达率分别为68.1%,39.4%(P<0.05),MMP-2蛋白的表达与肿瘤大小、分化程度、静脉浸润、TNM分期相关(P<0.05)。COX-2与MMP-2同时阳性表达者为25例。结论:COX-2蛋白和MMP-2蛋白在HCC组织中表达上调,并呈正相关(P<0.01),证实COX-2和MMP-2在HCC发生发展过程中起重要作用。     

MMP-2和MMP-9在食管鳞状细胞癌患者癌组织中的表达及其意义

目的: 探讨食管鳞状细胞癌患者癌组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达,分析二者的关联性。方法: 选取食管鳞状细胞癌手术离体标本100例,取癌组织和对应的癌旁正常组织,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测MMP-2和MMP-9 mRNA表达,采用Western blotting法检测MMP-2和MMP-9蛋白表达;采用Pearson相关分析法分析癌组织中MMP-2和MMP-9 mRNA表达的相关性。结果: 食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中MMP-2 mRNA阳性表达率分别为89.0%(89/100)和76.0%(76/100),两者比较差异有统计学意义(χ²=5.853,P=0.016);食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中MMP-9 mRNA阳性表达率分别为48.0%(48/100)和16.0%(16/100),两者比较差异有统计学意义(χ²=23.529,P=0.000)。MMP-2 mRNA阳性表达率与食管鳞状细胞癌的浸润深度有关联(χ²=4.971,P=0.026),与淋巴结转移无关联(χ²=2.127,P=0.145);MMP-9 mRNA阳性表达率与食管鳞状细胞癌的浸润深度有关联(χ²＝4.421,P=0.035),与淋巴结转移无关联(χ²=0.617,P=0.432)。MMP-2 mRNA与MMP-9 mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率呈正相关关系(r=0.274,P=0.006)。结论: MMP-2和MMP-9可能参与了食管鳞状细胞癌的发生发展,但在食管鳞状细胞癌淋巴结转移方面可能不发挥关键作用。     

组织因子和基质金属蛋白酶-2在肝细胞癌侵袭转移中作用

目的：研究肝细胞肝癌组织中的组织因子（TF）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达,对肝癌侵袭转移的作用及两者之间的关系。方法：用免疫组织化学EnVisionTM法检测肝癌56例及其癌旁肝组织标本中TF和MMP-2的表达。结果：（1）肝癌组织中TF及MMP-2的阳性表达均明显高于癌旁组织（P〈0.05）;（2）癌静脉浸润、肝内外转移、无或包膜不完整组织中TF和MMP-2的表达显著高于相应对照组（P〈0.05）;（3）肝癌中TF表达和MMP-2表达呈正相关。结论：HCC中TF及MMP-2表达明显增高,且与癌侵袭转移有关。     

姜黄素纳米粒(NanoCurcTM)联合索拉非尼对肝细胞癌(HCC)的协同抑制作

 目的 探讨姜黄素纳米粒(NanoCurcTM,NC) 单药或联合索拉非尼对人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的作用。方法 采用体外细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)、体外划痕试验和Transwell侵袭试验法检测NC和/或索拉非尼对肝癌细胞株MHCCLM3增殖、迁移、侵袭能力的影响;应用流式细胞术分析其对细胞凋亡的作用。建立裸鼠MHCCLM3原位移植模型并观察NC和/或索拉非尼对肿瘤大小和肺转移率的影响。应用RT PCR、ELISA、Western blot法检测基质金属蛋白酶 9 (matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1 （tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)、细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2) mRNA或相应蛋白表达变化;并测定ERK1/2的磷酸化变化。结果 NC与索拉非尼联合应用可显著抑制HCC体外增殖和侵袭能力(P<0.01),抑制体内肿瘤生长和肺转移(P<0.01)。单独应用NC和索拉非尼时肺转移率分别为50.0%和66.7%,两者联合用药时则显著降低至16.7%。两药联合应用可协同抑制ERK磷酸化,从而下调MMP 9的表达。结论  NC联合索拉非尼可通过协同诱导细胞凋亡、抑制MMP-9的表达而抑制肝癌生长和转移。