淫羊藿甙对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞内质网应激的影响

目的：观察淫羊藿甙对动脉粥样硬化（AS）家兔血管平滑肌细胞（VSMC）中葡萄糖调节蛋白78基因表达的影响,探讨淫羊藿甙防治AS的可能机制。方法：复制家兔AS模型,给予淫羊藿甙治疗,组织原位杂交观察该基因在兔斑块组织中的表达水平。结果：组织原位杂交显示该基因片段在AS斑块组织中表达水平增高。结论：葡萄糖调节蛋白78基因在AS细胞质中表达增高,可能是淫羊藿甙作用靶点之一,如上调该基因则可促进平滑肌细胞凋亡,将对AS治疗产生一定作用。     

淫羊藿甙与葛根素对血管平滑肌细胞凋亡影响的比较研究

目的:比较不同浓度的淫羊藿甙和葛根素对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响。方法:取家兔主动脉 VSMC 进行传代培养,第4代 VSMC 培养基中分别加入3个浓度的淫羊藿甙或葛根素,72h 后收集细胞,流式细胞仪测定细胞凋亡率,荧光显微镜观察凋亡细胞形态,透射电镜观察凋亡细胞超微结构。结果:各浓度淫羊藿甙和葛根素都可明显增高 VSMC 的凋亡率,并呈浓度依赖关系,荧光显微镜和透射电镜观察到典型的凋亡细胞形态学改变。但是低浓度淫羊藿甙引起细胞凋亡率高于同等浓度的葛根素,高、中浓度时两者间无明显差别。结论:淫羊藿甙、葛根素均有提高 VSMC 凋亡作用,低浓度淫羊藿甙作用似比低浓度葛根素强。     

5种淫羊藿中淫羊藿甙含量比较

<正> 淫羊藿为常用中药,其主要有效成分为淫羊藿甙(icariin),有关淫羊藿甙的含量测定研究已有不少报道。本实验采用薄层层析-紫外分光光度法对中国药典1990年版收载的5种淫羊藿药材中淫羊藿甙的含量进行了测定,为控制淫羊藿的内在质量提供了依据。     

淫羊藿炮制前后淫羊藿甙的含量测定

本实验采用岛津CS-930型双波长扫描仪对淫羊藿炮制前后淫羊藿甙进行了含量测定。实验结果表明:淫羊藿甙含量在炮制品中无明显降低,但炮制品的水煎液中淫羊藿甙的溶出量与生品比较,明显地提高。故仅就淫羊藿甙而言,淫羊藿用羊油炮制是适宜的。     

淫羊藿甙对LAK细胞活性的影响

应用过继免疫疗法治疗恶性肿瘤在临床上已取得了显著疗效 ,ＬＡＫ/ＩＬ -2疗法已广泛应用 ,但ＬＡＫ/ＩＬ -2疗法有时也存在着ＬＡＫ细胞活性较低等缺点 ,在临床应用中受到一定限制。本文着重讨论中药淫羊藿的提取物淫羊藿甙 (ＩＣＡ)对ＬＡＫ细胞杀伤肿瘤细胞的活性变化 ,以期找到一种用中药提高ＬＡＫ细胞活性的方法。1　材料与方法1 .1　材料　淫羊藿甙从淫羊藿中提取 ,高压灭菌 ,纯度95 %以上 ,性质稳定。Ｋ562 细胞从军事医学科学院购进 ,ＩＬ -2购自北京中化合通有限公司。ＬＡＫ细胞培养方法 :取健康人外周血分离单个核细胞 ,以ＲＰ…     

淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞GRP78表达的影响

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的增殖血管平滑肌细胞(VSMC)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48 h后,用流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达;目的基因克隆、鉴定并测序.结果:0.2,0.4 mg·L~(-1)的IcA可显著促进兔VSMC凋亡,且存在剂量依赖性,与半胱氨酸组相比,差异显著(P＜0.01);RT-PCR结果显示:0.2,0.4 mg·L~(-1)的淫羊藿苷作用于VSMC 48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著升高,与半胱氨酸组相比差异显著(P＜0.05);测序结果表明,来源于VSMC的全长648 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源.结论:ICA促进GRP78 mRNA表达,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

淫羊藿甙提取工艺研究

以淫羊藿甙含量为指标,对淫羊藿的提取工艺进行了研究。通过正交实验,优选出了最佳提取工艺,即１５倍量７０％乙醇溶液回流提取１ｈ／次,共２次。     

薄层扫描法控制淫羊藿注射液中淫羊藿甙的含量

控制淫羊藿注射液中淫羊藿甙的含量在一定范围内是保证淫羊藿注射液促进培养鸡胚股骨生长的关键所在。本文采用薄层扫描法进行此项工作,方法简单、取样量少,且定量快速准确,其加样回收率达99.6％。     

藿酮胶囊诱导人体血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：从细胞凋亡水平研究藿酮胶囊抗动脉样硬化的作用机理。方法：实验培养人胚胎胸主动脉平滑肌细胞,用白细胞介素－１（ＩＬ－１）刺激平滑肌细胞建立血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＶＳＭＣ）增生模型,从细胞形态学,ＤＮＡ凝胶电泳,流式细胞术３个方面观察用藿酮胶囊诱导增生的ＶＳＭＣ凋亡现象。结果：透射电镜观察发现：藿酮胶囊处理的ＶＳＭＣ出现细胞皱缩,染色质凝集后细胞     

淫羊藿苷对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生和平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生和平滑肌细胞凋亡的影响。方法:大鼠44只随机分为正常对照组8只,淫羊藿苷60 mg.kg-1组、淫羊藿苷120 mg.kg-1组和模型组各12只。后3组建立鼠颈动脉球囊损伤术后狭窄模型,淫羊藿苷组术前6 d开始ig至实验结束;模型组以等体积生理盐水ig。术后14 d和28 d分批处死动物。取各组动物颈动脉损伤段,常规制片,HE染色,采用计算机图像分析系统测量内膜面积和中膜面积,并计算新生内膜/中膜面积比(I/M);采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)检测平滑肌细胞凋亡。结果:给药两组术后14,28 d,损伤部位血管内膜、中膜面积明显小于模型组,差异非常显著(P0.01);球囊损伤后14,28 d,各手术组新生内膜区均出现明显的凋亡细胞,其中淫羊藿苷组较模型组细胞凋亡率显著增高(P0.01),结论:淫羊藿苷可能通过促进平滑肌细胞的凋亡而减轻球囊损伤后新生内膜的增生。     

益气健脾中药对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨益气健脾中药血清体外诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)分析、透射电镜、流式细胞仪分析、DNA电泳分析检测细胞凋亡；应用Northern印迹检测bcl-2、c-myc和p53基因表达活性。结果：经中药血清处理的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC)，可出现典型的凋亡特征，DNA电泳呈梯状图谱；流式细胞仪分析显示G0／G1期细胞阻滞现象，亚二倍体凋亡细胞增多，出现典型的凋亡峰，细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示，30％中药血清可抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，上调促凋亡基因c-myc和p3 mRNA水平。结论：益气健脾中药通过影响凋亡相关基因bcl-2、c-myc和p53的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

大蒜素对血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察大蒜素对培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖细胞核抗原（ＰＣ－ＮＡ）表达的影响。方法：用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达，同时测定培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、前列环素（ＰＧＩ２）及环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）的含量。结果：大蒜素能增加ＳＯＤ活性，降低ＬＰＯ，升高ＰＧＩ２和ｃＡＭＰ水平，抑制ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达（Ｐ〈０．０５－０．０１）。结论：大蒜素有抑     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的改进大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）的培莽方法。方法采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果镜下培养细胞呈典型的“谷-峰状”生长,免疫组化染色显示胞浆内α—actin阳性表达。结论拳法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

祛痰泻浊方对机械损伤兔的血管平滑肌细胞增殖和凋亡机理研究

观察祛痰泻浊方对实验性动脉粥样硬化(AS)家兔,机械损伤血管内皮后血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机理。     

心脑宁诱导增生VSMC凋亡及对相关基因表达的影响

目的 :探讨活血化瘀中药血清体外诱导增生血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 :采用流式细胞仪分析 ,DNA电泳分析检测细胞凋亡 ;应用Northen印迹检测bcl- 2、c-myc基因表达活性。结果 :经中药血清处理的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmuclecell,VSMC) ,可出现典型的凋亡特征 ,DNA电泳呈梯状图谱 ;流式细胞仪分析显示G0 /G1期细胞阻滞现象 ,亚二倍体凋亡细胞增多 ,出现典型的凋亡峰 ,细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示 ,2 0 %中药血清可抑制抗凋亡基因bcl- 2的表达 ,上调促凋亡基因c -myc的mR NA水平。结论 :活血化瘀中药可通过影响凋亡相关基因bcl- 2、c -myc的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

淫羊藿苷对大鼠颈总动脉损伤后基质 金属蛋白酶-2表达的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠颈动脉损伤后基质金属蛋白酶(MMP-2)mRNA表达的影响。方法:取大鼠44只,随机分为正常对照组8只,淫羊藿苷高、低剂量组和模型组各12只。后3组建立鼠颈动脉球囊损伤术后狭窄模型,淫羊藿苷组术前6 d开始ig淫羊藿苷60,120 mg.kg-1至实验结束(14 d和28 d);模型对照组以等体积生理盐水ig。术后14 d和28 d分批处死动物。取各组实验动物颈动脉损伤段,常规制片,免疫组织化学S-ABC法检测MMP-2蛋白的表达;RT-PCR检测MMP-2 mRNA的表达。结果:在球囊损伤后14,28 d时,淫羊藿苷干预组的MMP-2 mRNA及蛋白表达量显著低于模型组(P<0.01)。各干预组之间无明显差异。结论:淫羊藿苷在动脉损伤后早期可通过下调MMP-2 mRNA的表达,抑制平滑肌细胞的迁移,从而减轻细胞外基质(ECM)的合成而抑制球囊损伤后新生内膜的增生。