昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌 PC-3 细胞及 bcl-2、caspase-3 基因表达的影响

目的研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌PC-3细胞株的作用,以及对bcl-2和caspase-3基因表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法分别用0、50、100、200μg/mL LAMS作用于PC-3细胞,用WST-8法检测细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡的变化,用荧光显微镜观察PC-3细胞形态,RT-PCR和Western blotting检测细胞增殖、凋亡相关基因bcl-2和caspase-3mRNA及蛋白的表达。结果LAMS能抑制PC-3细胞的增殖,呈时间-剂量效应;不同质量浓度LAMS诱导PC-3细胞出现剂量依赖性S+G2期阻滞;LAMS作用于PC-3细胞后出现凋亡的形态学改变,LAMS对PC-3细胞bcl-2 mRNA和蛋白表达均呈剂量依赖性减弱,对PC-3细胞caspase-3 mRNA和蛋白表达均呈剂量依赖性增强。结论LAMS能抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其S+G2期阻滞和凋亡,LAMS影响PC-3细胞相关基因蛋白的表达,可能是其抑制前列腺癌的作用机制之一。     

昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌PC-细胞及bcl-、caspase-基因表达的影响

目的研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌PC-3细胞株的作用, 以及对bcl-2和caspase-3基因表达的影响, 探讨其抗肿瘤的作用机制。方法分别用0、50、00、200μg/mL LAMS作用于PC-3细胞, 用WST-8法检测细胞生长的抑制作用, 利用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡的变化, 用荧光显微镜观察PC-3细胞形态, RT-PCR和Western blotting检测细胞增殖、凋亡相关基因bcl-2和caspase-3mRNA及蛋白的表达。结果LAMS能抑制PC-细胞的增殖, 呈时间-剂量效应;不同质量浓度LAMS诱导PC-细胞出现剂量依赖性S+G期阻滞;LAMS作用于PC-3细胞后出现凋亡的形态学改变, LAMS对PC-3细胞bcl-2mRNA和蛋白表达均呈剂量依赖性减弱, 对PC-3细胞caspase-3mRNA和蛋白表达均呈剂量依赖性增强。结论LAMS能抑制体外PC-3细胞的生长, 并促进其S+G期阻滞和凋亡, LAMS影响PC-3细胞相关基因蛋白的表达, 可能是其抑制前列腺癌的作用机制之一。     

昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3相关基因蛋白表达的影响

目的研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3相关基因蛋白表达的影响。方法利用Western blot检测人前列腺癌细胞增殖、凋亡相关基因PTEN、P27kip1、Caspase-3、BCL-2蛋白表达的结果。结果随着LAMS浓度的增加LAMS浓度的增加,BCL2蛋白的表达明显减弱,Caspase-3、p27和PTEN蛋白的表达明显增加,呈剂量依赖性。其中对照组(0ug/ml)与50μg/mL组间无显著性差异,100μg/mL组、200μg/mL组与对照组(0ug/ml)比较均有显著性差异(P<0.01)。结论 LAMS能影响PC-3细胞相关基因蛋白的表达,可能是其抑制前列腺癌的作用机制之一。     

紫杉醇对前列腺癌PC-3细胞作用的实验研究

目的：观察紫杉醇对前列腺癌细胞系PC-3的体外作用。方法：应用光镜形态学，MTT法，流式细胞仪和免疫细胞化学法观察了紫杉醇在体外对前列腺癌细胞系PC--3的作用和对细胞DNA含量及Cyclin D1表达的影响。结果：紫杉醇对前列腺癌细胞系PC-3同时可以下调Cyclin Dl的表达(P＜O．05)，并将细胞周期阻滞于G2／M期(P＜O．05)同时可以下调Cyclin D1的表达(P＜O．05)。结论：紫杉醇对前列腺癌细胞系PC-3有明显的生长抑制和诱导凋亡作用，显示了紫杉醇用于治疗激素非依赖性前列腺癌的可能性。     

土槿皮乙酸体外对前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用及机制

目的:研究土槿皮乙酸(PAB)对人雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)PC-3细胞系增殖的抑制作用及其可能机制。方法:体外培养AIPC PC-3细胞,以不同浓度PAB进行处理一段时间后,再用MTT法测定PAB对PC-3细胞的生长抑制情况;用台盼蓝染色计数活细胞,用吉姆萨染色法检测凋亡细胞,进一步用Hoechst33342染色进行凋亡确认;用PI染色法检测PAB对PC-3细胞周期的影响;用考马斯亮兰G-250染色法检测PAB对细胞质蛋白的影响;用荧光双染法检测细胞微管蛋白表达。结果:PAB明显抑制体外培养的PC-3细胞生长,其抑制率在一定浓度和时间范围内呈依赖关系,作用36h的IC50值为6.20μM。PAB可以通过诱导PC-3细胞凋亡而抑制期增殖,凋亡细胞的数量随PAB浓度的增加而增加。PAB能明显增加PC-3细胞时G2期细胞的比例,G1期和S期细胞数减少,细胞周期的变化与PAB浓度相关。PAB可以减少PC-3细胞胞质内蛋白含量,抑制微管蛋白形成。结论:PAB可以抑制AIPC PC-3细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期(M晚期),呈浓度依赖性;机制可能与PAB降低胞质蛋白量,抑制微管蛋白形成有关。     

2’,4’-二羟基查耳酮对人前列腺癌PC-3细胞的作用研究

目的研究2’,4’-二羟基查耳酮(TFC)对人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的作用,并初步探讨其作用机制。方法使用CCK-8法检测细胞存活率,使用流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期。结果 TFC能剂量依赖性地降低PC-3细胞的存活率,增加PC-3细胞的凋亡率,使细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 TFC能降低PC-3细胞的存活率并诱导其凋亡,可能与其引起PC-3细胞G0/G1期阻滞有关。     

壁虎醇提物体外诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及机制研究

目的:研究壁虎醇提物(GAE)体外诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡作用及其可能机制,为激素非依赖性前列腺癌的治疗提供理论依据。方法:以前列腺癌PC-3细胞为研究对象,MTT法检测3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L~(-1)GAE作用细胞24,48,72 h后对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用;3.5,4.0,5.0 g·L~(-1)的GAE作用48 h后,另设空白组,Hoeehst33342荧光染色法,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,SP免疫组化法检测细胞内半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)和Fas的表达情况并做统计学处理。结果:3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L~(-1)GAE作用细胞24,48,72 h后能显著抑制PC-3细胞的生长且呈剂量和时间依赖性;与空白组比较,3.5,4.0,5.0 g·L~(-1)的GAE作用48 h后Hoeehst33342荧光染色发现部分PC-3细胞发生典型的凋亡形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测显示3.5,4.0,5.0 g·L~(-1)的GAE作用48 h后,早期凋亡细胞分别占6.51%,12.48%和22.81%,且免疫组化显示细胞内蛋白Caspase-3和Fas的表达均上调且呈浓度依赖性(P0.05)。结论:GAE能够诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡,其作用机制可能与死亡受体介导的信号通路有关。     

胡桃醌对人前列腺癌PC-3细胞生长作用研究

目的 探讨胡桃醌对前列腺癌PC-3细胞的生长的影响.方法 光学显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测不同剂量胡桃醌对PC-3细胞生长影响;采用PI染色实验,流式细胞仪检测PC-3细胞凋亡情况.蛋白印迹法检测Caspase-3表达量.结果 与对照组比较,胡桃醌能够抑制前列腺癌PC-3细胞生长并且呈剂量依赖性(P＜0.05).胡桃醌高剂量组细胞形态呈现凋亡状态.流式细胞仪检测胡桃醌作用12 h后诱导PC-3细胞发生凋亡率显著高于对照组(P＜0.05).随着胡桃醌浓度不断增加,Caspase-3表达逐渐升高.结论 胡桃醌能够抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

熊果酸诱导HL-60细胞凋亡机制的探讨

目的：本实验拟用熊果酸干预处理人急性早幼粒白血病HL-60细胞,体外培养实验,证实其对HL-60细胞的增殖抑制和促进诱导凋亡作用,并通过免疫细胞化学方法检测bcl-2,survivin在熊果酸与该细胞株作用后表达,探讨熊果酸诱导HL-60细胞调亡可能的分子机制。方法：荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期相分布及细胞凋亡率：琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA;免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Survivin蛋白。结果：荧光显微镜下观察,80gmol／LUA作用24h的HL一60细胞可看到典型的细胞凋亡形态学变化;40umol／L、80umol／LuA可使G0／G1期细胞增多,出现G0／G1期阻滞,S期和G2／M期细胞数减少,凋亡细胞峰（sub-G1）及凋亡率逐渐增高,Bcl-2、Survivin蛋白表达降低,当UA浓度为40gmol／L时,P〈0．01,有显著性差异。结论：UA呈浓度和时间依赖性抑制HL．60细胞增殖,诱导其凋亡机制可能与下调Bcl-2、Survivin蛋白表达有关。     

大黄素抑制人结肠癌RKO、Caco-2细胞体外增殖作用的研究

目的:探讨大黄素对人结肠癌细胞株RKO、Caco-2的体外增殖的抑制作用。方法:MTT比色法检测细胞活力;倒置显微镜显像观察细胞数量变化;FCM检测细胞凋亡率及周期分布;Caspase-3分光光度法检测Caspase-3酶蛋白活性。结果:随着作用时间的延长以及大黄素浓度的升高,大黄素对人结肠癌RKO、Caco-2细胞的体外增殖抑制作用增高;大黄素阻滞两种细胞于S期,使G2/M期细胞比率明显下降,激活Caspase-3酶蛋白;提高细胞凋亡率。结论:大黄素抑制人结肠癌细胞株RKO、Caco-2体外增殖,其作用呈浓度、时间依赖性;大黄素能够阻滞RKO、Caco-2细胞株细胞周期并激活Caspase-3诱导细胞凋亡。     

虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法 用MTT比色法检测虎眼万年青总皂苷对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡与细胞周期变化;透射电镜观察细胞形态学变化.结果 虎眼万年青总皂苷对MDA-MB-231细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;可诱导细胞发生凋亡,且凋亡率呈浓度依赖性,使细胞周期明显阻滞于G0/G1期;电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变.结论 虎眼万年青总皂苷可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与虎眼万年青总皂苷将癌细胞阻止于G0/G1期相关.     

西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞生长的影响

目的研究西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)生长及其细胞周期分布的影响。方法应用MTT比色法检测肿瘤细胞活性,流式细胞仪分析细胞周期相对分布。结果西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)有较强的抑制作用,其抑制率与含药血清浓度呈直线相关。流式细胞仪周期分析结果显示含药血清处理24 h,S期细胞比例增加,G2/M期细胞减少;处理48 h后,G0/1期细胞增多,S期细胞减少。结论西黄丸含药血清可抑制人乳癌细胞系(MCF-7)细胞生长,并可干扰其细胞周期。     

(8R)-3β,8-dihydroxypolypoda-13E,17E,21-triene induces cell cycle arrest and apoptosis in treatment-resistant prostate cancer cells

Mastic, a resinous exudate from Pistacia lentiscus, has been reported to exhibit selective cytotoxicity against different cancer cell lines. There are, however, no data published correlating distinct mastic-derived compounds with the postulated cytotoxic activity. A polypodane-type bicyclic triterpenoid, (8R)-3β,8-dihydroxypolypoda-13E,17E,21-triene (1), was isolated from P. lentiscus oleogum resin. In androgen-independent PC-3 prostate cancer cells, 1 potently inhibited the expression of cyclins D1 and E, but had no effect on the expression of the cyclin kinase inhibitor p21(Waf1/Cip1). Inhibition of the expression of cell cycle-regulating cyclins resulted in cell cycle arrest in the G?/G? phase, reduction in the number of cells in the S phase, and the triggering of apoptosis, as detected by increased expression of phosphatidylserine on the cell surface and by formation of DNA laddering. In addition, 1 suppressed the formation of prostate cancer colonies in soft agar and inhibited proliferation, angiogenesis, and the growth of prostate tumors xenografted onto chick chorioallantoic membranes without overt systemic toxicity. Taken together, these data show that 1 triggers apoptosis in chemoresistant, androgen-independent human prostate cancer cells in vitro and in vivo. Thus, 1 may serve as a lead compound for targeting so far incurable androgen-insensitive prostate cancers.     

苦参碱对人食管癌细胞株Eca-109增殖和凋亡的影响

目的探讨中药提取物苦参碱单体(Matrine)对人食管癌细胞株Eca-109的诱导凋亡和抑制增殖作用。方法体外培养人食管癌细胞株(Eca-109),分别给以不同浓度的苦参碱对体外培养的Eca-109细胞株进行干预。以MTT比色法、Hoechst33342染色法以及流式细胞术测定苦参碱对Eca-109细胞株的诱导凋亡及抑制增殖的作用。结果 MTT实验显示苦参碱可以明显抑制Eca-109细胞株的增殖,流式细胞术检测细胞周期显示G2期细胞明显增多,S期细胞显著减少。结论苦参碱能明显抑制Eca-109细胞株的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与细胞周期阻滞于G2期有关。     

蟾酥提取工艺优化与提取物体外抗肿瘤活性研究

目的优化蟾酥中脂溶性成分华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的提取工艺,并探讨蟾酥提取物对人宫颈癌HeLa细胞和卵巢癌SKOV-3细胞的增殖及细胞周期的影响。方法采用U5（54）均匀设计,考察酒精浓度、酒精用量、提取时间等因素对指标性成分提取的影响;MTT法检测蟾酥提取物对HeLa与SKOV-3细胞增殖的影响;流式细胞技术检测细胞周期变化;倒置显微镜下观察HeLa和SKOV-3细胞形态变化。结果以100倍量95%酒精加热回流提取2次,每次2.5 h,两种指标性成分转移率最大,为（117.20±3.52）%;蟾酥提取物呈时间和剂量依赖性地抑制HeLa和SKOV-3细胞增殖;随着蟾酥提取物剂量的增加,HeLa细胞出现S期和G2/M期阻滞,SKOV-3细胞出现G0/G1期阻滞,两种细胞均出现空泡样变性。结论均匀设计法优选蟾酥有效成分的提取工艺合理可行;蟾酥提取物可显著抑制HeLa和SKOV-3细胞的增殖,使细胞出现空泡样变性,并阻滞细胞周期。     

健脾消癥方对人胃癌细胞MGC803凋亡和细胞周期的影响

目的:观察健脾消癥方对胃癌细胞株MGC803增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:(1)采用MTT法观察不同浓度的健脾消癥方对胃癌细胞株MGC803增殖的抑制作用;(2)使用Annexin V/PI荧光双染法检测健脾消癥方诱导肿瘤细胞进入凋亡的比例;(3)应用流式细胞仪检测健脾消癥方对MGC803细胞周期的影响。结果:(1)健脾消癥方对MGC803细胞有较强的抑制增殖的作用,并呈一定的浓度依赖性。(2)健脾消癥方高、中、低浓度组对胃癌细胞株MGC803作用24h后,早期凋亡率分别为49.83%、55.29%、16.73%。健脾消癥方高、中、低浓度组对胃癌细胞株MGC803作用48h后,早期凋亡率分别为84.52%、55.58%、51.76%。(3)与阴性对照组相比,健脾消癥方各浓度组对胃癌细胞株MGC803作用48h后,可将细胞阻滞于G2-M期,健脾消癥方高浓度组在G0-G1期前出现较明显的亚二倍体峰。结论:(1)健脾消癥方可明显抑制胃癌细胞株MGC803的增殖作用。(2)健脾消癥方对人胃癌细胞株MGC803有明显的诱导凋亡及阻滞细胞周期在G2-M期的作用。     

苦参碱对人结肠癌HT29细胞生长抑制作用的实验研究

目的研究苦参碱（matrine,MA）对人结肠癌HT29细胞系抑制和诱导凋亡的作用。方法分别采用MTT法检测细胞的生长抑制率,流式细胞仪、透射电镜观察MA处理HT29细胞后细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生。结果2～32mg／mLMA均能抑制HT29细胞增殖（P〈0．05）,其抑制率与作用时间及浓度相关。4、8、16mg／mLMA处理HT29细胞后,G。／G,细胞明显高于阴性对照组（P〈0．05）,提示细胞周期停滞于G0／G1期。透射电镜可见,HT29细胞出现凋亡形态学改变。结论MA对HT29细胞有抑制作用,机制可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

Dryopteris crassirhizoma has anti-cancer effects through both extrinsic and intrinsic apoptotic pathways and G0/G1 phase arrest in human prostate cancer cells

Aim of the study

The inhibitory effect of Dryopteris crassirhizoma on the proliferation of human metastatic prostate PC3-MM2 cells and the mechanism of action were examined to identify its anti-cancer properties. The effect of the extract on cell cycle progression and its combined cytotoxic effect with tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) on PC3-MM2 cells were also investigated.

Materials and methods

The anti-proliferative effects of Dryopteris crassirhizoma were examined by culturing PC3-MM2 cells in the presence or absence of various concentrations of Dryopteris crassirhizoma extract, and the inhibitory effects on cell proliferation were determined by Cell Counting Kit (CCK)-8 analysis. The quantities of apoptosis-inducing proteins were measured by western blotting analysis. Cell cycle progression was analyzed by PI staining using flow cytometry.

Results

Dryopteris crassirhizoma (50 and 100 μg/ml) inhibited markedly the proliferation of PC-3 and PC3-MM2 cells without cytotoxicity to normal (spleen) cells from BALB/C mice. Dryopteris crassirhizoma (100 μg/ml) effectively induced apoptosis through the activation of caspase-3, -8, -9, bid, and PARP in PC3-MM2 cells. The cells exposed to Dryopteris crassirhizoma increased significantly the accumulation of the DNA contents in the G0/G1 phase and sub-G1 phase in contrast to the control. The combined cytotoxic effects of Dryopteris crassirhizoma and TRAIL induced the increased activity of 29% in contrast to the sum of the inhibitory effects of each agent alone.

Conclusions

Dryopteris crassirhizoma has anti-cancer properties by inducing cell cycle arrest and apoptosis through the extrinsic and intrinsic pathway in PC3-MM2 cells. The extract also showed a combined effect with TRAIL on the inhibition of proliferation in the cells. These findings suggest that possibly its extract could be used for treating androgen-independent prostate cancer with minimal side effects.     

佛手挥发油对MDA-MB-435人乳腺癌细胞体外增殖的影响

 目的 探讨佛手挥发油对MDA-MB-435人乳腺癌细胞增殖的影响。方法 采用MTT法测定细胞活力;倒置显微镜、荧光显微镜和扫描电镜观察细胞的凋亡与坏死的形态学变化;彗星电泳检测细胞DNA的损伤程度;流式细胞术分析细胞周期的变化。结果 佛手挥发油对MDA-MB-435癌细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。不同浓度的佛手挥发油处理MDA-MB-435细胞6 h后,低、中浓度实验组(31.25,62.5和125 μg·mL-1)细胞体积缩小、核固缩,染色质凝集或片段化,呈现典型的凋亡特征;而高浓度实验组(250 μg·mL-1)细胞膜裂解,但核形态完整, 呈明显的坏死特征。此外,彗星电泳结果显示,低、中浓度实验组彗星头小而彗尾窄长,表明细胞发生了凋亡;高浓度实验组彗星头大而彗尾长且宽,表明细胞已坏死。进一步的流式细胞结果显示,佛手挥发油能将MDA-MB-435癌细胞周期阻滞在S期和G2/M期。结论 佛手挥发油具有抑制MDA-MB-435癌细胞增殖的作用,低、中浓度的佛手挥发油诱导细胞凋亡且将细胞周期阻滞在S期和G2/M期,而高浓度的佛手挥发油引起细胞坏死。     

β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的研究β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡作用。方法 MTT法观察β-谷甾醇、豆甾醇对细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率、细胞内活性氧ROS、钙离子Ca2+含量、线粒体膜电位ΔΨm变化。结果β-谷甾醇、豆甾醇均明显抑制SMMC-7721细胞增殖,使细胞形态发生典型凋亡变化,凋亡率和细胞内Ca2+、ROS的含量均显著增加,线粒体膜电位降低。β-谷甾醇使细胞周期阻滞在G2/M期,而豆甾醇则同时阻滞在S期和G2/M期。结论β-谷甾醇、豆甾醇具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导细胞凋亡的作用。