淫羊藿甙对家兔血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达水平的影响

目的：观察葡萄糖调节蛋白基因78（GRP78）在动脉粥样硬化组织中的表达,探讨淫羊藿甙防治动脉粥样硬化的可能机制。方法：淫羊藿甙诱导培养的兔血管平滑肌细胞凋亡,组织原位杂交观察凋亡基因GRP78在兔斑块组织中的表达水平。结果：兔斑块组织原位杂交显示该基因片段在动脉粥样硬化斑块组织中表达水平增高。结论：葡萄糖调节蛋白78基因在AS细胞质中表达增高,可能是淫羊藿甙作用靶点之一,如上调该基因促进则可促进平滑肌细胞凋亡,将对动脉粥样硬化治疗产生一定作用。     

葛根素对兔血管内皮细胞凋亡及凋亡基因GRP78表达水平的影响

目的 观察葡萄糖调节蛋白(glueose regulated Protein,GRP)78在动脉粥样硬化(AS)组织中的表达,探讨葛根素防治动脉粥样硬化的可能机制.方法 葛根素诱导培养的兔血管内皮细胞凋亡,组织原位杂交观察凋亡基因GRP78在兔斑块组织中的表达水平.结果 兔斑块组织原位杂交显示该基因片段在动脉粥样硬化斑块组织中表达水平增高.结论 葡萄糖调节蛋白78在As细胞质中表达增高,可能是葛根素作用靶点之一,如上调该基因,则可促进内皮细胞凋亡,将对动脉粥样硬化治疗产生一定作用.     

葛根素调节血管平滑肌细胞凋亡相关基因在斑块组织中表达的研究

 目的差异筛选葛根素促进VSMC凋亡相关基因，观察其在动脉粥样硬化组织中的表达，探讨葛根素防治动脉粥样硬化的可能机制。方法葛根素诱导培养的兔血管平滑肌细胞凋亡，提取总RNA,荧光标记差异显示反转录-PCR法筛选差异基因片段，克隆测序及同源性分析，Northern印记杂交鉴定，组织原位杂交观察该基因在兔斑块组织中的表达水平。结果 差异筛选出全长733 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白94基因高度同源，Northern印记杂交显示该基因表达量随着葛根素浓度而增加；兔斑块组织原位杂交显示该基因片段在动脉粥样硬化斑块组织中表达水平增高。结论①证实葡萄糖调节蛋白94基因在葛根素促进增殖血管平滑肌细胞凋亡过程中表达增高,可能是葛根素作用靶点之一；②证实该基因片段在动脉斑块细胞质中表达增高，提示如能上调该基因促进需管平滑肌细胞凋亡，将有可能对动脉粥样硬化治疗产生一定作用。     

淫羊藿甙与葛根素对血管平滑肌细胞凋亡影响的比较研究

目的:比较不同浓度的淫羊藿甙和葛根素对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响。方法:取家兔主动脉 VSMC 进行传代培养,第4代 VSMC 培养基中分别加入3个浓度的淫羊藿甙或葛根素,72h 后收集细胞,流式细胞仪测定细胞凋亡率,荧光显微镜观察凋亡细胞形态,透射电镜观察凋亡细胞超微结构。结果:各浓度淫羊藿甙和葛根素都可明显增高 VSMC 的凋亡率,并呈浓度依赖关系,荧光显微镜和透射电镜观察到典型的凋亡细胞形态学改变。但是低浓度淫羊藿甙引起细胞凋亡率高于同等浓度的葛根素,高、中浓度时两者间无明显差别。结论:淫羊藿甙、葛根素均有提高 VSMC 凋亡作用,低浓度淫羊藿甙作用似比低浓度葛根素强。     

淫羊藿苷对强直性脊柱炎成纤维细胞向成骨型分化的影响

目的异位成骨是强直性脊柱炎病理过程的核心环节。成纤维细胞是AS异位成骨的靶细胞,BMP/Smad信号传导通路是骨形成过程中的一条重要通路。该研究通过观察淫羊藿苷对体外培养强直性脊柱炎成纤维细胞增殖和凋亡的作用,同期观察淫羊藿苷对体外培养AS成纤维细胞成骨表型表达及BMP/Smad信号通路蛋白表达的影响,初步探讨淫羊藿苷干预强直性脊柱炎异位成骨的分子机制。方法采用组织学原代培养法,建立人髋关节囊成纤维细胞系,应用免疫组化法鉴定细胞来源。以第3代对数生长期的AS成纤维细胞为研究对象,将实验分为AS空白对照组与淫羊藿苷小剂量组(25μg/mL)、中剂量组(50μg/mL)与大剂量组(100μg/mL)。MTT法检测淫羊藿苷干预下AS成纤维细胞的增殖情况;Annexin V法流式细胞术检测淫羊霍苷对AS成纤维细胞凋亡的影响。检测淫羊藿苷作用下AS成纤维细胞成骨表型的表达状况,观察其ALP活性、胶原合成及OC分泌量。Western blotting技术检测在不同剂量淫羊藿苷干预下,AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路中Smad1、Smad5、Smad4及成骨标志基因Cbfa-1蛋白的表达情况。结果淫羊藿苷100μg/mL可明显抑制AS成纤维细胞增殖(P0.05),且无细胞毒产生,各组细胞不同时间点增殖情况无显著差异;淫羊藿苷各剂量组对AS成纤维细胞凋亡均无明显作用。大剂量淫羊藿苷对AS成纤维细胞ALP活性、胶原合成及OC分泌均有明显抑制作用。与AS对照组相比,淫羊藿苷作用后AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路Smad1、Smad4、pSmad1以及Cbfa-1蛋白表达受明显抑制(P0.05)。结论淫羊藿苷能有效抑制AS成纤维细胞增殖,且抑制AS成纤维细胞成骨表型的表达,其分子机制可能是淫羊藿苷通过干预BMP/Smad信号通路活化,从而调节成骨标志基因Cbfa-1表达,抑制AS成纤维细胞向成骨型分化,可能是淫羊藿苷干预AS异位成骨的机制之一。     

葛根素抑制HCY所致血管内皮细胞凋亡及其相关机制的研究

目的:差异筛选葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)基因,观察其在动脉粥样硬化(athemsclero-sis,AS)病灶中的表达水平,探讨葛根素抗AS的可能机制。方法:建立同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导的人主动脉血管内皮细胞损伤模型,与不同浓度葛根素(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)共同培养48h,Annexin V-FITC检测血管内皮细胞凋亡率,RT-PCR筛选差异表达的GRP78基因片段,制备地高辛标记探针,高脂饲料复制兔AS模型,主动脉组织原位杂交检测GRP78mRNA表达水平。结果:经葛根素处理48h后,各组血管内皮细胞凋亡率均低于HCY组(P0.05、P0.01),且随葛根素剂量增加而减少;筛选出全长648bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源,组织原位杂交显示该基因在AS病灶血管内皮细胞胞质中高表达。结论:GRP78基因参与AS病变形成;葛根素拮抗HCY诱导的血管内皮细胞凋亡,下调GRP78基因表达水平可能是其作用机制之一。     

淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞GRP78表达的影响

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的增殖血管平滑肌细胞(VSMC)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48 h后,用流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达;目的基因克隆、鉴定并测序.结果:0.2,0.4 mg·L~(-1)的IcA可显著促进兔VSMC凋亡,且存在剂量依赖性,与半胱氨酸组相比,差异显著(P＜0.01);RT-PCR结果显示:0.2,0.4 mg·L~(-1)的淫羊藿苷作用于VSMC 48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著升高,与半胱氨酸组相比差异显著(P＜0.05);测序结果表明,来源于VSMC的全长648 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源.结论:ICA促进GRP78 mRNA表达,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

淫羊藿苷激活抑制鼻咽癌CNE-2细胞存活、侵袭、迁移的体内外研究

【目的】 探讨淫羊藿苷对鼻咽癌CNE-2细胞存活和侵袭迁移特性的影响。【方法】 ①体外研究：用不同浓度淫羊藿苷处理鼻咽癌CNE-2细胞,采用细胞计数试剂盒8（CCK8）测定细胞增殖能力以选择合适的剂量进行后续实验。采用Transwell实验观察细胞侵袭能力;划痕实验观察细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法检测血管内皮生长因子（VEGF）、上皮钙黏附蛋白（E-cadherin）、神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达情况及信号通路蛋白Ca2+/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化情况。并进一步观察单独或联合 JNK抑制剂SP600125对JNK活化程度的影响,采用蛋白免疫印迹法检测细胞JNK磷酸化水平。②体内研究：建立鼻咽癌CNE-2荷瘤裸鼠模型,测定裸鼠移植瘤质量、细胞凋亡和移植瘤组织VEGF表达情况、MVD值。【结果】 选择低细胞毒性10、20、50 μmol/L剂量的淫羊藿苷进行后续实验。与空白对照组（淫羊藿苷0 μmol/L）比较,淫羊藿苷10、20、50 μmol/L组CNE-2细胞侵袭细胞数、划痕愈合率降低,细胞VEGF、N-cadherin、Vimentin表达水平明显降低（P < 0.05）,E-cadherin表达水平与CaMKⅡ、JNK的磷酸化水平升高（P < 0.05）,均呈剂量依赖性。淫羊藿苷（10 μmol/L）可减弱JNK抑制剂SP600125对JNK磷酸化的抑制作用。与模型组比较,淫羊藿苷组鼻咽癌裸鼠存活率升高,移植瘤质量减小,移植瘤组织细胞凋亡率升高,VEGF表达水平、MVD值明显下降（P < 0.05）。【结论】 淫羊藿苷可促进CaMKⅡ/JNK通路激活来抑制鼻咽癌CNE-2细胞的存活、侵袭和迁移能力。     

从内质网应激途径探讨淫羊藿总黄酮对衰老大鼠心肌细胞的保护作用

摘要 目的：研究淫羊藿总黄酮对自然衰老大鼠心肌细胞的影响及其机制。方法：将SD雄性大鼠随机分为青年对照组(9月龄组)，自然衰老组(24月龄组)，淫羊藿总黄酮低、中、高剂量组，每组10只。淫羊藿总黄酮低、中、高剂量组大鼠从18月龄开始分别给予淫羊藿总黄酮10mg/kg，20mg/kg，60mg/kg灌胃给药，青年对照组和自然衰老组大鼠灌胃1% 羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。每周停药一天，持续6个月。HE染色观察心脏的组织形态，电镜观察心肌细胞中线粒体的超微结构，Western blot检测心脏组织中GRP78、CHOP、Bax、P-JNK蛋白表达情况。结果：HE染色和电镜结果显示，与自然衰老组相比，淫羊藿总黄酮低、中、高剂量组心脏组织的形态结构和超微结构均有所改善。淫羊藿总黄酮还可抑制GRP78蛋白的表达，降低CHOP、Bax和P-JNK蛋白的表达。结论：淫羊藿总黄酮对自然衰老大鼠心肌细胞具有保护作用。其机制可能是通过抑制内质网应激的发生，减少心肌细胞的凋亡，从而发挥对心脏的保护作用。     

淫羊藿苷对高糖诱导内皮细胞衰老的干预作用

目的:观察淫羊藿苷对高糖环境下内皮细胞衰老的影响及可能的作用机制研究。方法:人脐静脉内皮细胞分别培养在正常糖浓度(5.5 mmol/L),高糖浓度(33 mmol/L),高糖+淫羊藿苷低剂量及高糖+淫羊藿苷高剂量组中,药物干预48 h后,β半乳糖苷酶染色测定细胞衰老,流式细胞术检测细胞周期,NO检测试剂盒检测细胞培养上清中NO水平,Westernblot检测培养细胞PI3K,Akt蛋白表达水平。结果:与正常糖浓度组比较,高糖浓度组衰老细胞的阳性率明显增高,G0/G1期细胞比率增加,S期显著减少,细胞培养上清中NO水平减少,PI3K和磷酸化Akt蛋白水平降低。而淫羊藿苷能够明显降低高糖环境下衰老细胞阳性率,增加S期细胞比率,提高培养上清中NO水平,同时能够提高高糖环境下内皮细胞PI3K和磷酸化Akt蛋白表达水平。结论:淫羊藿苷能延缓高糖诱导的内皮细胞衰老进程,提高内皮细胞功能,其作用机制可能与调节高糖环境下内皮细胞PI3k/Akt通路有关。     

舒心稳斑颗粒对AS兔中VEGF、ICAM-1的影响

目的：观察舒心稳斑颗粒对AS兔VEGF、ICAM-1的影响。方法：运用高脂饲料喂养12周以造成日本大耳白兔动脉粥样硬化模型,用舒心稳斑颗粒灌胃给药治疗4周,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清中VEGF含量,采用免疫组化法分析ICAM-1在主动脉粥样斑块中的表达量。结果：与模型组比较,舒心稳斑颗粒能降低血清中的VEGF含量,差异有统计学意义（P〈0.01）;同时也能明显降低ICAM-1在主动脉粥样斑块中的面密度,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：VEGF、ICAM-1与AS斑块的发生、发展密切相关,舒心稳斑颗粒通过降低血清中VEGF的含量,同时抑制AS斑块中ICAM-1的表达,延缓AS的进展,这可能是其抗AS作用的机制之一。     

丹参预防家兔动脉粥样硬化的分子机制

目的研究丹参对动脉粥样硬化的预防作用机制。方法建立家兔动脉粥样硬化模型,比较正常组、AS组及丹参组动脉粥样硬化斑块形成的变化;检测各组血清脂质水平;免疫组化结合RT-PCR法分析Bcl-2、Bax及MCP-1在粥样硬化斑块中的表达。结果丹参组主动脉粥样斑块面积和血清TG水平低于AS组(P<0.01);免疫组化显示,AS组Bcl-2、Bax及MCP-1阳性细胞表达与正常组有显著性差异。而丹参的干预,可以调节Bax/Bcl-2阳性细胞表达率,同时下调MCP-1的蛋白表达。结论丹参可抑制动脉粥样硬化斑块的形成,调节Bcl-2/Bax表达及炎症机制参与可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

舒心稳斑颗粒对AS兔血脂及ICAM-1的影响

目的：观察舒心稳斑颗粒对动脉粥样硬化（AS）兔血脂及ICAM-1的影响。方法：40只日本大耳白兔随机分为空白对照组、高脂模型组、舒心斑颗粒组及辛伐他汀组,每组10只。对除空白对照组外的其余组大鼠运用高脂高胆固醇饲料喂养12周制备高脂血症合并AS模型,分别灌胃给药治疗。测定并比较各组实验兔血TC、TG、LDL—C、HDL—C、ICAM-1含量并分析ICAM-1在主动脉粥样斑块中的表达量。结果：与高脂模型组比较,舒心稳斑颗粒能明显降低血清TC、TG、LDL—C和ICAM-1的含量,同时也能明显降低ICAM-1在主动脉粥样斑块中的表达,差异均具有统计学意义（P〈0．01）,对HDL—C的含量影响不明显（P〉0．05）。结论：舒心稳斑颗粒可改善高脂血症的脂质代谢,降低AS斑块中ICAM-1的表达,抑制AS斑块中的炎症反应,这可能是其防治动脉粥样硬化的机制之一。     

补阳还五汤对动脉粥样硬化模型主动脉基质金属蛋白酶表达量的影响

目的观察补阳还五汤对动脉粥样硬化大鼠模型的治疗作用,并从蛋白水平探讨其作用机制。方法大鼠动脉粥样硬化造模成功后随机分为补阳还五汤治疗组、川芎嗪治疗组、模型组,另设正常对照组。予相应处理后检测腹主动脉基质金属蛋白酶（MMP-9）表达水平。用药前后取尾静脉血2ml测血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平。结果高脂饮食可诱导大鼠形成动脉粥样硬化模型,其主动脉组织MMP-9强阳性表达。补阳还五汤治疗组的MMP-9表达量水平、低密度脂蛋白胆固醇显著低于川芎嗪治疗组、模型组。结论益气活血代表方剂补阳还五汤可以下调MMP-9的表达,降低血脂,具有抗动脉粥样硬化作用。降低主动脉组织MMP-9的表达可能是其作用机制之一。     

高脂饲养结合腹主动脉球囊损伤制作兔腹主动脉粥样硬化模型的研究术

目的探索制作快速、稳定可靠的动脉粥样硬化家兔模型的方法。方法采用高脂饲料喂养结合动脉内膜球囊损伤的方法建立家兔动脉粥样硬化模型。于高脂喂养的第10周末取颈动脉血测定总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量,并于腹主动脉取样作HE染色观察。结果高脂饲养10周后,动物TC、TG和LDL显著升高（P＜0．05或0．01）,主动脉内壁肉眼可见典型动脉粥样斑块,光镜下见内膜明显增厚,形成明显的斑块及纤维帽结构,斑块厚度与内中膜厚度比值增加明显。结论高脂饲料喂养动脉内球囊损伤法可以短期内成功复制出家兔动脉粥样硬化模型。     

降脂消斑片对鹌鹑动脉粥样硬化模型主动脉与冠状动脉粥样硬化斑块的影响

目的：观察降脂消斑片对鹌鹑动脉粥样硬化（AS）模型主动脉及冠状动脉粥样硬化斑块的影响。方法：采用单纯高脂饲料喂养方法复制鹌鹑AS模型。分别给予降脂消斑片高、中、低剂量及阳性对照组药物辛伐他汀片、脂降宁片治疗。观察对主动脉及冠状动脉粥样硬化斑块的影响。结果：与模型组比较,降脂消斑片高、中剂量组可减轻主动脉与冠状动脉粥样斑块及血管内膜的脂质浸润程度,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：降脂消斑片能减轻鹌鹑AS模型的主动脉与冠状动脉粥样硬化斑块及血管内膜的脂质浸润程度。     

稳消颗粒对兔实验性动脉粥样硬化血清FIB和CRP表达的影响

目的观察稳消颗粒对兔实验性动脉粥样硬化血清C反应蛋白（CRP）和纤维蛋白原（FIB）表达的影响。方法健康新西兰大白兔36只,随机分为空白组（正常饮食）9只和造模组（高脂饮食）27只。造模成功后将造模组再随机分为稳消颗粒组、辛伐他汀组、模型对照组。停用高脂饲料改用标准饲料并根据体重比折算临床剂量给予相应的药物治疗8周。分别于实验前与实验后经耳缘静脉采血,检测CRP和FIB水平。结果与空白组相比,稳消颗粒组、辛伐他汀组和模型对照组的CRP、FIB水平显著增高（P〈0.05）;稳消颗粒组、辛伐他汀组CRP、FIB明显低于模型对照组（P〈0.05）,但稳消颗粒组、辛伐他汀组之间比较无统计学意义（P〉0.05）。结论稳消颗粒可降低CRP、FIB水平,有利于AS斑块稳定。     

丹蒌片对兔动脉粥样硬化模型ERS相关基因表达的影响

目的:建立兔动脉粥样硬化模型,研究丹蒌片对兔粥样硬化病变及内质网应激(ERS)相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)表达的影响,为丹蒌片临床的应用提供实验依据。方法:雄性日本大耳白兔24只随机分为正常组、模型组、可定组和可定+丹蒌片联合用药组,每组6只。正常组饲喂普通饲料,模型组在普通饲料中加入2%胆固醇及0.02%蛋氨酸;可定组、可定+丹蒌片组在普通饲料中加入2%胆固醇及0.02%蛋氨酸及相应的对照药物,复制家兔动脉粥样硬化病变模型。分别在用药前与饲养9周后检测胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)值,载脂蛋白A(Apo A),载脂蛋白B(Apo B);饲养9周后取实验动物胸主动脉上段,苏木素-伊红(HE)常规染色后观察组织形态变化;应用原位杂交技术检测BIP基因表达。结果:与正常组比较,模型组兔血脂TC,TG,LDL-C,Apo B含量明显升高,HDL-C,Apo A含量明显降低(P0.05);与模型组比较,可定组、丹蒌片联合用药组明显降低兔血脂TC,TG,LDL-C,Apo B含量,明显升高HDL-C,Apo A含量(P0.01)。HE染色正常组血管内膜形态正常;模型组内膜严重增生,内皮细胞损伤;可定组血管内膜轻度增生;可定+丹蒌片组血管内膜形态接近正常。原位杂交结果显示,模型组BIP蛋白的表达明显升高;可定组及可定+丹蒌片组可下调BIP蛋白的表达。结论:丹蒌片联合可定能延缓动脉粥样硬化的发展,且效果显著。     

褪黑素通过 ERK/MAPK 通路调控 AS 兔动脉内皮细胞 MLCK 表达

 目的 探讨褪黑素（ melatonin , MLT ）是否可通过信号调节激酶 / 丝裂原活化蛋白激酶（ ERK/MAPK ）通路调控动脉粥样硬化（ atherosclerosis , AS ）模型兔动脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶（ myosin light chain kinase , MLCK ）的表达。 方法 复制兔 AS 模型,分析血清中相关脂质成分的动态变化;γ -³²P-ATP 掺入法测定模型兔主动脉的 MLCK 活性;动脉经冰冻切片,免疫组化检测动脉内膜 MLCK 的表达,伊红（ HE ）染色观察动脉壁的形态结构; Western blot 检测 AS 兔动脉组织 MLCK 的表达和 ERK 磷酸化水平。 结果 AS 兔模型复制成功,实验兔在高胆固醇（ cholesterol , Cho ）饮食 4 , 8 , 12 周后,与正常对照相比,血清中相关生化指标有逐渐增加趋势（ <> P <0.05 ）;γ -³²P-ATP 掺入法显示动脉组织中 MLCK 的活性呈逐渐增强趋势（ <> P <0.05 ）, Western blot 和免疫组化则显示动脉内皮细胞 MLCK 的表达、 ERK 磷酸化水平亦呈逐渐增强趋势, HE 染色显示主动脉内膜逐渐增厚,细胞间隙逐渐增大;而加喂 MLT 后,动脉组织 MLCK 的表达、 ERK 磷酸化水平及 MLCK 的活性和主动脉内膜通透性均有所下降,而泡沫细胞形成量逐渐增多,至高 Cho 饮食 12 周时则形成了明显的 AS 斑块,加喂 MLT 后,主动脉内膜病变则有一定程度减轻。 结论 MLT 可能通过 ERK/MAPK 通路下调模型兔动脉内皮细胞 MLCK 活性而减轻 AS 斑块的病变程度。