EST-SSR标记对三七选育品系的研究

目的:通过对不同三七选育品系的遗传变异和遗传分化程度进行分析比较,为三七的品种选育提供理论依据.方法:利用自行设计和他人开发的17对EST-SSR引物,对来自4个不同区域的17份三七选育品系进行遗传多样性及遗传分化分析.结果:在17份三七选育品系中一共扩增出136个多态位点,平均多态信息量PIC值为0.78,Nei's基因多样性H0.139,Shannon多样性指数I0.208.选育品系间的遗传分化系数为0.382,遗传相似度和聚类分析的结果表明17份三七选育品系和屏边三七被划分为4个大类群,其中17份三七选育品系被分为3个类群,屏边三七单独在一个类群.结论:通过集团选择后,从相同栽培居群内筛选出的不同品系存在一定程度的遗传分化,可以用EST-SSR标记来检测集团选择的结果.     

三七栽培居群间表型变异式样研究

目的:试图揭示文山地区三七不同栽培群体居群间和居群内的表型多样性及遗传结构,为进一步开展三七种质资源研究和品种选育提供理论依据和基础材料.方法:通过对来自文山地区4个三七主产区10个三七栽培居群的表型变异式样进行调查、统计、分析研究,并进行聚类分析.结果:个体间的差异几乎存在于每一个居群的每一个性状当中,在不同的居群内、不同性状间多样性存在较明显的差异.居群内多态现象丰富,居群间多型性明显,居群间的表型分化系数平均为0.238 8,地区间的表型分化系数V_(st)平均为0.176 2.Q-聚类分析的结果表明,10个三七栽培居群被划分为4组,居群间的表型差异并不完全与其地理距离的远近一致,自身的遗传作用对表型差异的影响比环境影响更明显.结论:文山三七不同群体均具有丰富的遗传多样性,并且其遗传变异主要存在于居群内个体间;不同居群间具有较大的遗传差异,地区间的遗传差异相对较小,长期的人工选择和不断地轮换种植地点是造成如此状况的主要原因;长期的人工选择已形成一些独特的农家优良种群,为三七的遗传育种提供丰富的材料.     

三七市畅探因

三七为五加科人参属三七的根.主产于云南文山、砚山、广南以及广西靖西、那坡等地,以云南文山产量最大,质量最佳.     

屏边三七结实特性和种子后熟的研究

目的:了解屏边三七的结实和种子后熟特性,为屏边三七的生物学特性研究和家化种植提供基础。方法:持续80 d观测屏边三七的结实动态,统计存在的果实类型及比例。测定种子生物学性状,持续225 d观察种胚在后熟过程中的活力及胚的变化。结果和结论:屏边三七平均结实(38.7±6.5)粒/株,子房膨大期后需要80 d完全成熟,其中0~40 d为果实快速生长期,鲜重增幅15倍。屏边三七存在单籽、双籽、三籽共3种果实类型,比例分别为39.53%,58.66%,1.81%。屏边三七的种子长5.16~6.52 mm、宽3.12~4.95 mm,千粒重为(0.648±0.014)g,含水率为(55.23±0.49)%。屏边三七的种子属于形态后熟,种子脱离母体后,在自然条件下至75 d发育出种胚,至165~180 d种胚才发育成熟,此时种子的后熟完成,种胚活力最高达70%,种胚长(3.217±0.406)mm,种胚宽(0.872±0.165)mm。至195 d进入发芽期。     

三七DNA指纹图谱分析

目的:对文山三七和广西三七进行DNA指纹图谱的鉴别研究,了解其间遗传变异的大小,并建立三七品种的检定方法。方法:采用RAPD技术。结果:从45个引物中筛选出23个扩增稳定且谱带清晰的引物,共得到211个遗传标记。DNA指纹图谱显示,样品间有遗传差异,具有不同的遗传特征,据此可进行鉴别。结论:RAPD技术可作为三七鉴别的参考方法。     

三七及其三个近缘种的红外光谱分析

采用红外光谱一维谱图及二阶导数宏观指纹鉴定的方法对屏边三七、疙瘩七、峨眉三七和种植三七的块根、叶原药材的红外光谱图进行了整体的分析。原药材红外光谱一维谱图及二阶导数图谱显示,屏边三七、疙瘩七、峨眉三七和种植三七为近缘种种质资源的关系,初步判断种植三七与峨眉三七的种缘关系最近,屏边三七与疙瘩七的种缘关系较为接近。     

三七产地适宜性数值分类与区划研究

以云南文山为道地基点县,运用《中药材产地适宜性分析地理信息系统》(TCMGIS-Ⅰ),分析了三七的全国适宜产地。结果表明三七适宜区分布范围较广,但在云南的东南部、广西西北部和贵州的东南部适宜区分布较集中。三七种植过程中需要育苗移栽、搭棚遮荫等复杂的栽培技术,决定了只有少数地区(云南、广西)最终发展成为三七的主产区,说明了社会因素在三七道地产区形成中的重要作用。研究结果对指导三七生产发展有重要参考价值。     

广西草珊瑚种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的探索广西草珊瑚Sarcandra glabra种质资源的遗传多样性,为草珊瑚及其他中药种质资源保护、亲缘关系研究、品种选育和引种栽培提供分子生物学依据。方法利用AFLP标记对来自广西不同产地的18份草珊瑚开展遗传多样性分析,采用NTSYS软件进行聚类和主坐标分析。结果从64对AFLP引物组合中筛选出8对用于扩增,共获得319条清晰可辨条带,其中多态性条带251条,多态性位点百分率为78.68%。聚类和主坐标分析表明广西草珊瑚种质资源的遗传基础存在一定的多样性,但遗传相似性系数(0.630 3～0.836 6)较大,遗传距离较近。结论广西草珊瑚种质资源的遗传多样性偏低,应该尽快采取相应措施,对草珊瑚资源进行合理保护。     

抗癌药用植物屏边三七地理分布及生长发育规律研究

目的对屏边三七(Panax stipuleanatus H. T. Tsai et K. M. Feng)的地理分布及生长发育规律进行研究,为该物种的资源保护及进一步开发作基础理论研究。屏边三七为五加科(Araliaceae)人参属(Panax)多年生阴生草本植物,是国家二级保护植物,它是我国云南省东南部特有分布物种,也是我国西南地区的名贵中药材。方法采用民族植物学田野调查法和野外观察、采集,再辅以室内文献、标本查阅方法研究屏边三七的地理分布,形态观察用手持放大镜和解剖镜,按照常规统计学方法随机选取测量个体,用直尺、游标卡尺对屏边三七的生长发育特征进行研究。结果屏边三七生长发育规律研究结果表明:屏边三七于2月上旬种子开始出土,株高、主茎粗3月20日至4月20日进入生长迅速期,叶片数、叶长、叶宽、叶柄3月10日至4月10日迅速增长,花序、果实的生长动态,4月10日至5月30日伞形花序发育生长期这时花序增长迅速,5月10日至6月10日结果期,果实数呈缓慢增长走势; 6月10日至6月30日果实生长发育期,果实由绿果变成红色,呈迅速增长趋势; 6月10日至7月10日果实成熟期,果实色泽更加鲜艳,成熟后呈迅速减少趋势; 7月10日后果实开始脱落。结论屏边三七的地理分布和生长发育规律研究,为屏边三七进一步引种栽培和野生变家种提供一定的理论指导。     

屏边三七总皂苷的含量测定研究

目的:测定屏边三七中总皂苷的含量。方法:通过实验研究确定了屏边三七总皂苷检测时的显色条件及检测波长。采用紫外-可见分光光度法测定屏边三七中总皂苷的含量。结果:屏边三七中总皂苷在5%香草醛-冰醋酸和73%的高氯酸溶液中,于65℃下加热25 min显色最优,最佳检测波长为543 nm;精密度、稳定性、重复性和加样回收试验等RSD均小于2.5%。结论:屏边三七中总皂苷平均含量为3.60%。所建立的检测方法可靠、结果稳定、重现性好,其可用于屏边三七中总皂苷的含量测定。     

ISSR分析3种类型黄连的遗传多样性和遗传结构

目的 研究3种类型黄连的遗传多样性和遗传结构.方法 对3种类型黄连的90个单株进行ISSR分析,运用POPGENE 1.31软件计算相关参数.结果 22个引物共检测到164个位点,其中108个为多态位点;黄连3种类型具有较丰富的遗传多样性,在物种水平上,多态位点百分率(PPB)为65.85％,有效等位基因数(Ne)为1.229 8,Nei's基因多样度指数(H)为0.1440,物种水平Shannon's多样性信息指数(Hsp)为0.2302;在类型水平上,PPB为55.08％,Ne为1.2189,H为0.1360,类型水平Shannon’s多样性信息指数(Hpop)为0.2151.Nei's基因多样性指数计算的类型间遗传分化系数与Shannon’s类型分化系数分别为0.0561和0.0652,均说明大部分遗传变异存在于类型内;ISSR标记检测到类型间存在着广泛的基因流(Nm=8.4054),遗传分化程度较低;两两类型间的Nei's遗传一致度(I)的范围为0.9831～0.9897;根据Nei's遗传距离进行各类型间的UPGMA聚类,基于ISSR分子标记的聚类结果与形态分类基本一致.结论 3种类型的黄连遗传多样性较高,为新品种的培育提供了丰富的遗传基础.     

不同产地野生玉竹种质资源多样性与亲缘关系的ISSR分析

目的 研究中国不同居群野生玉竹种质资源的遗传多样性.方法 选取我国11个不同居群的野生玉竹样品和1个居群的栽培样品进行ISSR分析,Popgene 32及Ntsyspc-2.1软件分析处理数据.结果 通过筛选得到10条ISSR引物,扩增得到115条带,其中108条为多态性条带,多态性条带百分率为93.38％; Nei's基因多样性(H)为0.432 1±0.084 1,Shannon 信息指数(Ⅰ)为0.619 7±0.100 5,遗传距离(GD)变异为0.128 9～0.496 5;利用UPGMA法构建分子树状图,可将12个居群聚合为两大类.结论 不同产地野生玉竹种间存在较高的多态性,遗传多样性较为丰富;野生玉竹的遗传多样性高于栽培居群的遗传多样性,可能与栽培方式和环境因素有关;药用植物玉竹对环境变化的适应能力强,地理来源相同的野生居群和栽培居群先行聚合,与其种质间的亲缘关系较近有关;聚类结果可以部分反映地理分布的特点,为种质资源的鉴定打下良好基础.     

蒲公英遗传多样性的ISSR分析

目的 分析蒲公英的遗传多样性.方法 采用ISSR分子标记对21个居群蒲公英遗传多样性进行分析,用软件Popgen32分析Nei's基因多样性指数(H)和Shannon信息指数(I),采用NTSYS 2.10e软件进行聚类分析和主坐标分析.结果 16条ISSR引物共扩增出166条条带,其中多态性条带152条,平均多态性百分率为90.4％,平均H为0.286 5,平均I为0.437 0;遗传距离和遗传一致度分别为0.156 2～0.590 2和0.554 2～0.855 4;UPMGA法进行聚类分析显示,聚类结果与地理来源有较强的一致性,可以看出来源于同一地区的蒲公英种质聚在一起,呈现出一定的地域性分布规律.结论 采用ISSR分析蒲公英遗传多样性,蒲公英表现出丰富的多态性,表明可以用ISSR标记技术对蒲公英进行分子水平的遗传多样性分析.     

苦玄参转录组EST-SSR引物开发及群体遗传多样性分析

目的研究18个苦玄参种群的遗传多样性及亲缘关系,为苦玄参的资源评价及开发利用提供依据。方法采用EST-SSR引物开发技术,利用SSR分子标记,分析18个种群的遗传多样性,并基于遗传距离对其进行聚类分析,明确各种群间的亲缘关系。结果从100对EST-SSR标记中,筛选出具有多态性的引物48对。随机抽取20对具有多态性的引物对18个种群进行扩增,共扩增出71个等位基因,平均每对引物3.55个。各引物间多态位点百分数(P)为0～40.7%,平均19.9%;多态信息含量(PIC)为0～0.794 1,平均0.397 7;Shannon信息指数(I)为0～1.814 3,平均0.808 4。观测杂合度(Obs_Het)为0～0.442 3,平均值0.212 7;预期杂合度(Exp_Het)变化范围0～0.826 9,平均值0.455 8。18个种群群内近交系数(Fis)值为-0.095 3～0.663 9,平均0.159 2;总群体内亚群间近交系数(Fit)值为0.062 6～0.858 7,平均0.537 2;遗传分化系数(Fst)为0～0.686,平均0.449 6。基因流(Nm)在0.114 4～0.759 4,平均值为0.306 1。各种群基因多样性指数(Nei)为0～0.401 6、I为0～0.620 9,广西梧州最高,云南普洱龙潭乡最低。云南景洪勐龙镇和云南景洪景哈乡遗传距离最近,仅0.031 9;广西龙州和云南勐海县打洛镇遗传距离最大,为0.963 8。在遗传距离0.321 3处,可将18个种群分成4个群体,其中广西3个种群归入同一群体,云南勐满镇、勐伦镇及勐遮镇归为同一个群体,第3个群体为云南勐海县勐宋乡,其余种群归入第4个群体。结论 18个种群遗传分化水平不一致,各种群杂合度差异较大。种群间Nm较小,群体基因交换不大;群体内存在一定的近交率,种群亲缘关系受地理隔离影响较大。     

18份草珊瑚种质的ISSR标记遗传相关性与亲本选配分析

通过ISSR分子标记技术分析18份来源于不同产地并经质量评价的草珊瑚种质的遗传多样性及亲缘关系,并进行亲本选配优化分析,为进一步利用这些种质进行育种奠定一定基础。应用ISSR-PCR分子标记技术研究18个份来自于不同居群的草珊瑚种质的DNA指纹图谱,应用Popgen32软件计算遗传多样性和遗传距离, 并以UPCMA法进行聚类分析。经筛选获得23条多态性引物,ISSR-PCR扩增共获得198条谱带,其中多态性谱带184条,Nei's基因多样性指数(h) 为0.32,Shannon多样性指数(I) 为0.485 4。供试的草珊瑚种质的遗传相似系数为0.383 8~0.878 8,平均为0.661 2。遗传距离分析揭示了各受试种质相互间的遗传一致性与遗传距离,其中种质S2与种质S18之间的遗传距离最远,为0.957 5,而种质S4与种质S5之间的遗传距离最近,仅为0.129 2。而聚类分析表明种质S1,S2,S3, S7,S10等5个种质在不同程度上有别于其余受试13个种质,并优化了S2与S3,S2与S6,S2与S18等3组较佳亲本选配组合。研究表明受试种质具有较好的遗传多样性,遗传距离分析与聚类分析所揭示的18个种质之间的亲缘关系,并为优化杂交育种的亲本选配提供遗传背景方面可靠的信息。     

栀子遗传多样性及遗传分化的RAPD分析

 目的应用随机扩增多态性DNA(random amplifed polymorphic DNA,RAPD)标记技术对栀子8个种群遗传多样性和遗传分化进行研究。方法18种随机引物对92个个体进行检测,应用POPGENE软件和AMOVA软件对结果进行处理。结果共得到120个可重复的位点,其中多态位点75个,多态百分率为62.5%。各种群内多态位点百分率在39.17%～68.83%之间,平均为56.98%。河南南阳(POP1)种群最高,其次是江西新干县野生种群(POP7),最低是江西抚州水栀子种群(POP3)。Shannon指数和Nei指数均反映出栀子各种群具有较高的遗传多样性。Shannon指数为0.431 3,各种群Shannon指数在0.2256～0.380 6之间,Nei指数为0.289 2,各种群Nei指数在0.148 2～0.263 0之间。AMOVA揭示种群内遗传多样性占总遗传多样性的76.05%,而种群间遗传多样性只占23.95%。运用POPGENE也得出种群内遗传变异(69.34%)大于种群间(30.66%)的结论。种群间的遗传分化系数为0.306 6。栀子种群间的基因流为1.130 6,遗传相似度平均为0.129 09,遗传距离平均为0.880 72。根据遗传距离聚类分析,河南南阳种群(POP1)与江西樟树新干种群(POP4,POP5,POP6,POP7)聚为一类,湖南种群(POP8)与江西抚州栀子种群(POP2)聚为一类,江西抚州水栀子种群(POP3)与其他各种群间的遗传关系较远。结论目前,虽然野生资源逐年减少以及多年栽培中的品种选育,栀子遗传多样性仍较丰富,且种群内大于种群间,种群间存在较少的遗传分化。     

相关系列扩增多态性分子标记分析部分山药品种遗传多样性

 目的评价山药资源的多样性,为山药品种鉴定及亲缘关系的研究提供科学依据。方法以8个山药栽培居群中的21个山药品种为试材,进行相关系列扩增多态性（SRAP）分析,Popgene1.32软件计算遗传参数,UPGMA方法构建亲缘关系聚类图。结果相关系列扩增多态性引物共检测到309条清晰条带,其中多态性条带289条;Nei基因多样性指数（H）为0.2881、Shannon信息指数为（I）0.4416、居群间基因多样性（Ht）为0.2891,阐明了山药居群间具有很高的多样性;居群内以河南温县薯蓣居群多样性最高,PPB为35.92％,而福建三明（FJSM）和浙江高楼（ZJRG）山薯居群多样性最低（PPB＝0％）;居群间基因分化系数Gst为0.8658、基因流（Nm）为0.0775,揭示山药居群间遗传变异大于居群内遗传变异;8个居群间的遗传距离在0.0498～0.4879,因栽培物种的不同被聚为4类;相关系列扩增多态性标记可将21个山药品种分别归属到薯蓣、参薯、褐苞薯蓣、山薯种内。结论山药品种呈现较高遗传多样性,4种基原山药种间遗传差异较大,相关系列扩增多态性是鉴别我国山药品种的有效方法。     

三七透明质酸钠凝胶对家兔硬膜外瘢痕中成纤维细胞凋亡的影响

目的：研究三七透明质酸钠凝胶（以下简称“三七凝胶”）对硬膜外瘢痕组织中成纤维细胞凋亡的影响。方法：选取大耳白品系家兔作为实验动物,制作家兔椎板切除模型,在硬膜囊周围分别滴加三七凝胶、三七浓缩液、透明质酸钠、生理盐水,于术后第2、4、8周取材。通过末端脱氧核糖核苷酸转移酶（TdT）介导的原位缺口末端标记法（Tunel）和原位杂交法观察各组局部硬膜外瘢痕中成纤维细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达情况。结果：对硬膜外瘢痕中成纤维细胞凋亡的Tunel染色显示,三七凝胶组在第2、4、8周的细胞凋亡指数显著高于生理盐水组和透明质酸钠组（P〈0.01）,且于第2周与三七浓缩液组无明显差异;透明质酸钠组在第2、4、8周与生理盐水组均无明显差异（P〉0.05）。原位杂交检测Caspase-3表达的结果显示,实验第2周时三七凝胶组的Caspase-3表达量最高,较其他各组均具有显著性差异（P〈0.05）,三七浓缩液组较生理盐水组高,有统计学意义（P〈0.05）;第4周时各组间均无统计学差异;第8周时三七凝胶组的Caspase-3表达量均显著高于生理盐水、三七浓缩液及透明质酸钠组（分别P〈0.01,0.01,0.05）。结论：三七凝胶可明显诱导成纤维细胞凋亡,促进凋亡执行因子Caspase-3的表达;透明质酸钠对瘢痕中成纤维细胞凋亡的影响不大;三七凝胶诱导瘢痕中成纤维细胞凋亡的机制可能与促进Caspase-3的表达有关。     

基于RAPD的福建产南方红豆杉遗传多样性研究

目的对福建省23个不同地理种源的南方红豆杉Taxus chinensis var.mairei进行分析,以揭示其种源和种群的遗传多样性,为南方红豆杉资源的收集与保护提供一定的理论依据。方法利用RAPD分子标记技术,对福建省23个不同地理种源的南方红豆杉的遗传多样性进行分析。结果物种水平上的观测等位基因数(Na)为1.974 4,有效等位基因数(N_e)为1.603 8,Nei’s基因多样性指数(H)为0.351 3,Shannon多样性指数(I)为0.522 8。不同种源的南方红豆杉的遗传多样性相对较高。通过对种源和种群的遗传多样性分析,发现23个不同种源的南方红豆杉的遗传距离变化幅度为0.240 4~0.912 0,遗传相似度的变化幅度为0.401 7~0.786 3。7个不同种群的南方红豆杉群体的遗传距离变化幅度为0.021 0~0.379 4,遗传相似度的变化幅度为0.684 3~0.979 2。根据Nei法计算南方红豆杉7个种群遗传多样性遗传相似度(D_(st))为0.108 8,分化指数(G_(st))为0.369 0,基因流系数(N_m)为0.855 0,总的遗传变异中有36.9%的变异存在于群体间,群体内的变异63.1%,种群内存在明显分化。结论不同种源间的南方红豆杉存在一定的遗传变异,但不同种群间的南方红豆杉群体的相似度又比较高,亲缘关系较近。