热休克蛋白90在门静脉高压症内脏高动力循环中的作用

目的:研究热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP 90)在门静脉高压症(portal hypertension,PHT)内脏动脉中的表达变化,探讨其在高动力循环形成中的作用及可能的机制。方法:检侧四氯化碳(CCl4)诱导的肝硬化PHT组(n=7)和对照组(n=7)大鼠的门静脉血流速度(portal vein blood flow velocity,PBV)、门静脉直径、门静脉血流量(portal vein blood flow,PBF)和门静脉压力(portal vein pressure,PP),离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的反应性、HSP 90特异性抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)对离体肠系膜微动脉收缩反应的影响以及肠系膜动脉内HSP 90和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的蛋白表达变化。结果:①PHT组大鼠PBV和PBF明显低于对照组,门静脉直径在PHT组与对照组之间无统计学差异,GA对PHT组PBV及PBF无明显改善;②PHT组大鼠PP明显高于对照组,GA对PHT组PP并无明显降低作用;③PHT组大鼠肠系膜微动脉对NE的收缩反应性明显降低,50%作用浓度明显增大,GA能部分改善这种低反应性;④PHT组大鼠肠系膜动脉内HSP 90和eNOS的蛋白水平较对照组明显上调,GA明显降低PHT组肠系膜动脉HSP 90表达的同时,也降低了eNOS的表达。结论:CCl4诱导肝硬化PHT肠系膜动脉中过度生成的HSP 90可能是通过增加eNOS的表达降低肠系膜动脉对NE的反应性参与内脏高动力循环的形成。     

内皮型一氧化氮合酶活化在门静脉高压症内脏动脉重构中的作用机制

目的 探究内皮型一氧化氮合酶活化在门静脉高压症内脏动脉重构过程的作用机制。方法 雄性SD大鼠随机分为3组,正常对照组(CT组)、门静脉高压组(PHT组)、门静脉高压+L-NAME组(PHTL组)。造模结束后,测定大鼠血清NO水平,观察各组大鼠肠系膜微动脉的组织病理学改变,eNOS mRNA、蛋白表达以及活性水平,检测血管重构蛋白tTG的表达量和酶活性,ROCK蛋白的表达量和活性。结果 PHT大鼠肠系膜微动脉存在管腔扩张,血管壁变薄的重构现象,L-NAME抑制eNOS的产生和活化之后,血管重构现象可得到逆转。PHT大鼠中血管重构蛋白tTG的表达量和活性均降低,L-NAME处理可使tTG的表达量和活性回升。PHT大鼠中ROCK蛋白的表达量和活性均降低,L-NAME处理可使ROCK的表达量和活性回升。结论 在PHT动物模型中,eNOS的表达和活化增加,血清NO水平升高,可降低tTG和ROCK的表达量和活性水平,继而减少血管细胞外基质的产生,产生血管重构的现象。     

白细胞介素-1受体相关激酶-4在血吸虫病门脉高压小鼠肠系膜静脉的表达变化及其意义

目的 探讨血吸虫病门脉高压小鼠肠系膜静脉组织白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)的表达变化及意义.方法 将55只雄性昆明小鼠随机分为对照组(n=15)和感染组(n=40).感染组采用腹部敷贴法感染日本血吸虫尾蚴,分别于感染后12、20周随机分为12周组(n=20)、20周组(n=20)；采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肠系膜静脉IRAK-4 mRNA表达与肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达,Western blot法检测肠系膜静脉IRAK-4蛋白表达.结果 感染组小鼠肠系膜静脉IRAK-4 mRNA表达强度值(12周组0.734±0.081,20周组0.682±0.069)和IRAK-4蛋白表达水平(12周组:1034.52±89.72,20周组:989.56±69.35)较对照组(IRAK-4mRNA表达强度值0.163±0.031,IRAK-4蛋白表达水平667.45±72.22)明显升高(P＜0.01,P＜0.05);20周组IRAK-4 mRNA和蛋白表达与12周组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；各组IRAK-4mRNA的表达与其效应分子TNF-α mRNA的表达呈显著正相关(r=5.56,P＜0.01).结论 门静脉高压症小鼠内脏血管IRAK-4在转录和翻译水平的表达升高,并激活下游炎性反应,是参与门静脉高压性血管病变的重要因素.     

门静脉高压症患者脾血管内皮素-1 mRNA的表达

门静脉高压症的具体病理生理过程尚不清楚，我们研究了局部缩血管活性物质内皮素-1(ET-1)mRNA在内脏血管中的表达，探讨其在门静脉高压症血管病变中的意义。     

雷帕霉素抑制门静脉高压症大鼠肠系膜血管新生

目的:研究雷帕霉素对门静脉高压症大鼠肠系膜血管新生的抑制作用,并探讨其机制。方法 :采用部分静脉结扎制备门静脉高压症模型。将雄性SD大鼠随机分为假手术对照组、假手术干预组、手术对照组和手术干预组。术后1周起,假手术干预组和手术干预组给予2 mg/(kg·d)雷帕霉素腹腔注射,持续2周,而假手术对照组和手术对照组给予同等剂量二甲基亚砜腹腔注射。病理学和血液动力学分别评估肠系膜血管新生和门静脉压力。Western印迹法测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和m TOR信号通路标志物P-核糖体蛋白S6激酶(P-P70S6K)和P-真核细胞翻译启始因子4E结合蛋白1(P-4E-BP1)的表达。结果:术后3周,部分门静脉结扎大鼠脾脏肿大,肠系膜血管新生和门静脉压力显著增高(P<0.01);VEGF、P-P70S6K和P-4E-BP1的相对表达量也明显增高(P<0.01)。雷帕霉素干预2周后,有效改善脾脏肿大,抑制肠系膜血管新生和降低门静脉压力(P<0.01),下调VEGF蛋白表达量、P-P70S6K和P-4E-BP1的相对表达量(P<0.01)。结论:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路活化促进门静脉高压症大鼠肠系膜血管新生,雷帕霉素阻断该通路,可抑制肠系膜血管新生,降低内脏血流高动力循环。     

mTOR信号通路活化促进门静脉高压大鼠肠系膜血管新生的实验研究

目的:探讨m TOR信号通路在门静脉高压大鼠肠系膜中的活化状态,研究m TOR信号通路的激活参与门静脉高压大鼠肠系膜血管新生,及其可能机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组,采用胆道结扎离断和部分静脉结扎制备门静脉高压症模型。通过组织病理学和血流动力学分别评估肠系膜血管新生和门静脉压力。采用Western印迹法分别测定血管新生标志物血管内皮生长因子(VEGF)和m TOR信号通路标志物P70S6K和4EBP1的表达。结果:术后3周,两种大鼠模型脾脏肿大、肠系膜血管新生和门静脉压力显著增高(P<0.01);VEGF蛋白表达量、P-P70S6K和P-4EBP1的相对表达量也显著增高(P     

一氧化氮合酶在门静脉高压症中表达的实验研究

比较肝前(PHPH)、肝内型门静脉高压鼠(IHPH)、门腔分流鼠(PCS)以及正常鼠(SO)内脏组织和血管中原生型(cNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)活性及cNOS mRNA和iNOS mRNA的表达。方法:用分光光度法检测大鼠腹主动脉、门静脉、小肠和大肠组织中cNOS和iNOS活性,并用RT-PCR法半定量测定其cNOS mRNA和iNOSmRNA的表达。结果:门静脉高压鼠的动脉中iNOS活性和iNOS mRNA表达均显著地增加,其表达在转录水平受调节。cN03的活性和cNOS mRNA表达也增加,表达除在转录水平外,尚受到转最后调节。但iNOS活性和iNOSmRNA表达的增加远较cNOS活性和cNOSmRNA表达的增加为明显。结论:在门静脉高压症大鼠中NO过多产生主要是iNOS活性增加的结果。     

过氧化氢在门静脉高压症大鼠侧支循环建立中的作用

目的探讨过氧化氢(H2O2)对胆总管结扎诱导的肝硬化门静脉高压症(PHT)大鼠门体侧支循环形成的影响机制。方法胆总管结扎诱导的肝硬化PHT大鼠和假手术组大鼠每天一次腹腔分别注射浓度为10 000 U/kg聚乙二醇过氧化氢酶(PEG-catalase)或生理盐水,共8 d。测定大鼠肠系膜组织H2O2含量,利用彩色微球技术测定门体分流率及相应血流动力学指标。检测大鼠肠系膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)及VEGF受体-2(VEGFR-2)蛋白含量。结果肝硬化PHT组大鼠门静脉压力、肠系膜组织H2O2水平及门体分流程度明显高于对照组大鼠。PEG-catalase处理使PHT大鼠门体分流率明显下降,VEGF及VEGFR-2蛋白水平明显降低,内脏高血流动力循环得到明显改善。结论 H2O2在肝硬化PHT内脏高动力循环形成过程中发挥重要作用,这和VEGF介导的血管增生有关。     

血管内皮生长因子参与门静脉高压症内脏高动力循环

目的 检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在门静脉高压症(portal hypertension,PHT)内脏血管中的表达变化,探讨其在内脏高动力循环中的作用及机制.方法 临床检测肝硬化PHT患者脾脏动脉内VEGF通路相关蛋白的表达.动物实验观察正常组(N组)7只大鼠和四氯化碳(CCl4)诱导的肝硬化门静脉高压症组(PHT组)7只大鼠的门静脉直径、门静脉血流速度(portal vein blood flow velocity,PBV)、门静脉血流量(portal vein blood flow,PBF)和门静脉压力(portal vein pressure,PP)以及离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的反应性变化.通过SU5416选择性抑制VEGF通路后,对比离体肠系膜微动脉收缩反应性的变化以及肠系膜动脉内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)活化程度的变化.细胞实验中通过原代培养动脉内皮细胞进行体外实验,验证VEGF对eNOS活化的影响.结果 ①肝硬化PHT患者脾动脉VEGF表达明显升高.②动物实验中门静脉直径在N组和PHT组之间差异无统计学意义,PHT组PBV和PBF明显低于N组,SU5416对PHT组PBV及PBF无明显改善作用.③PHT组PP水平明显高于N组,SU5416对PHT组PP无明显降低作用.④PHT组肠系膜微动脉对NE的反应性明显降低,EC50值明显增大,SU5416能部分改善这种低反应性.⑤PHT组肠系膜动脉VEGF、VEGFR-2、eNOS和p-eNOS的蛋白表达较N组明显上调,SU5416能明显降低VEGFR-2与表达和eNOS的活化.⑥体外实验证实,VEGF可促进eNOS的活化.结论 肝硬化PHT内脏动脉中过度生成的VEGF部分通过促进eNOS表达和活化的方式降低内脏动脉对NE的反应性,参与内脏高动力循环的形成.     

肝硬化门静脉高压患者血浆HSP90在NO合成过程中的作用

目的 研究肝硬化门静脉高压患者血浆热休克蛋白90(HSP90)在一氧化氮(NO)合成中的作用.方法 通过利用HSP90的抑制剂格尔德霉素(Geldanamycin,GA)对HSP90的抑制作用,分别以硝酸还原酶法和放射免疫法,测定GA存在条件下肝硬化门静脉高压患者组、未用GA的肝硬化门静脉高压患者组和正常对照组的血浆处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养液上清中NO浓度和内皮细胞中cGMP浓度.结果 用肝硬化门静脉高压患者血浆处理HUVEC,产生的NO和cGMP显著高于正常对照组(P＜0.01).而存在GA的情况下,产生的NO较未用GA患者组显著减少(P＜0.01),cGMP也显著减少(P＜0.01). 结论 肝硬化门静脉高压患者血浆HSP90具有显著促进NO合成的作用.     

门静脉高压形成中内源性硫化氢体系的变化及其对一氧化氮/一氧化氮合酶途径的影响

目的 研究新型气体信号分子硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)在大鼠门静脉高压形成中的作用以及对内源性一氧化氮(nitric oxide,NO)/一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)体系的调节作用,以深入探讨H2S在大鼠门静脉高压形成中的病理生理意义.方法 将30只健康SD大鼠随机分为4组:正常组(5只),假手术组(5只),部分门静脉结扎(partly portal vein ligation,PPVL)组(10只)及PPVL+NaHS组(10只).模型制作14 d后,分别测定各组大鼠的门静脉压力(portal venous pressure,PVP)和平均动脉压力(systemic mean arterial pressure,MAP);采用免疫组织化学方法榆测大鼠肝脏中胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)和NOS蛋白表达情况,RT-PCR方法检测肝脏中CSE和NOS mRNA表达情况.结果 术后14 d,假手术组和正常组各项检测指标未见显著差异.与正常组比较,PPVL组PVP明显增高(P＜0.01),MAP下降(P＜0.05);外源件给予H2S的供体-NaHS后,与PPVL组比较,PPVL+ NaHS组PVP进一步增高(P＜0.05),MAP进一步下降(P＜0.05).CSE、NOS3在各组大鼠的肝脏中均有表达.与正常组比较,PPVL组CSE蛋白及mRNA表达增加(P＜0.05);外源性给予NaHS后,其表达则进一步增加(P＜0.05).NOS2在正常组和假手术组未见明显表达,部分门静脉结扎后,大鼠肝脏中可见NOS2蛋白及mRNA表达,外源性给予NaHS后,其表达降低(P＜0.05).但是,NOS3蛋白及mRNA表达在各组之间无显著差异.结论 H2S参与了门静脉高压的形成与发展,外源性给予NaHS可以加重门静脉高压,内源性H2S的高水平可以抑制NOS的生成.     

门静脉高压症apelin/APJ信号活化的实验研究

目的:探讨apelin/APJ信号在门静脉高压症的激活状态以及门静脉高压症的过程是否有apelin/APJ信号的活化,并提出其可能的机制。方法:采用部分门静脉结扎(partial portal vein ligation,PPVL)及胆道结扎离断(bile duct ligation,BDL)两种方法制备SD大鼠不同特点的门静脉高压症模型。通过大体观察、血流动力学、病理学及免疫组织化学评估门静脉压力和apelin/APJ信号在肠系膜的激活。结果:两种模型组大鼠门静脉压力均比相应假手术组高。两种模型肠系膜血管新生明显,其侧支循环大量开放。BDL组和PPVL组大鼠肠系膜组织APJ和apelin蛋白与各自假手术组相比均有升高。结论:apelin/APJ信号可能在门静脉高压症形成过程中有重要作用。     

他克莫司对大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡及热休克蛋白70表达的影响

目的探讨脊髓损伤后他克莫司（FK506）对热休克蛋白70表达的影响及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用Allen法建立大鼠急性脊髓损伤模型。雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组（n=12）、损伤组（n=30）和FK506组（n=30）。FK506组伤后5min一次性经尾静脉注射FK506（0．3mg／kg）,假手术组和损伤组以相同方法给予0．9％的生理盐水。术后行脊髓功能评分;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测热休克蛋白70mRNA的表达;免疫组织化学染色检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和热休克蛋白70的表达;原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡。结果热休克蛋白70mRNA和蛋白的表达在FK506组较损伤组明显增加（P〈0．05）,分别于伤后6、24h达高峰;FK506组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达和神经细胞凋亡均较损伤组明显减少（P〈0．01,P〈0．05）;脊髓功能评分在FK506组显著优于损伤组（P〈0．05）。结论FK506能抑制脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活性,减轻神经细胞凋亡,促进脊髓功能恢复,其机制可能与诱导热休克蛋白70表达增加有关。     

Expression of HSP70 in healing wounds of diabetic and nondiabetic mice.

BACKGROUND: Heat shock proteins (HSPs) stabilize intracellular processes of cells under stress. Little is known about the role of HSPs in wound healing, or whether their expression is altered by systemic disease. The focus of this study was to examine the local heat shock response to wounding in diabetic mice. METHODS: Congenitally diabetic and phenotypically normal mice underwent standardized full-thickness cutaneous wounding. Mice were sacrificed at sequential time points and the wound beds excised. Tissues underwent immunohistochemical (IHC) and RT-PCR analyses for inducible HSP70. RESULTS: HSP70 protein expression in the wound bed by IHC peaked at 24 h in the nondiabetic mice. Expression of HSP70 was delayed in the diabetic mice until Day 3, which correlates with the clinical delay in healing seen in this model. The protein was especially prominent in the epithelium and in inflammatory cells migrating into the granulation tissue matrix. RT-PCR demonstrated upregulation of HSP70 mRNA within 12 h after wounding, lasting until Day 3, and decreasing thereafter in both the nondiabetic and the diabetic animals. CONCLUSION: Cutaneous wounding produces a HSP response in inflammatory cells, and expression of inducible HSP70 is delayed in diabetic mice. This delay may be related to the impaired inflammatory response of diabetics, and may contribute to impaired wound healing. The wound may be a continuing source of the heat shock response in inflammatory cells after injury.     

Measurement of hepatobiliary function and hepatic hemodynamics in portally hypertensive rats

Background

Portal hypertension induced by partial ligation of the portal vein (PPVL) is associated with cardiovascular changes including portal systemic shunting (PSS). Despite large diversion of portal blood, there are no reports on the effect of PPVL on hepatobiliary function. Here we report on the effect of PPVL on liver function.

Methods

Male Lewis rats were divided into 3 groups: control (n=10), PPVL (n=10) and bile duct ligated (BDL) (n=4). Under anesthesia, PPVL was performed around a 21-gauge needle and BDL was by ligation of the common bile duct. Under ether anesthesia, 0.1 mCi^99mTc-labelled Hepatoiodida^® was injected via the penile vein and scintigraphy performed. The heart and liver were chosen as regions of interest and the mean transit times for the heart (MTT_heart) and liver (MTT_liver) were calculated. PSS was measured by direct intraportal injection of⁵⁷Co-labelled microspheres.

Results

Portal pressure was significantly elevated in the PPVL group (p<0.001 vs. control) and PSS was in evidence (24±15%, SD, p<0,001). The MTT_heart and MTT_liver for the control group (97±12 sec and 357±49 sec, respectively) were not significantly different than those for the PPVL group (150±50 sec and 410±48 sec, respectively). In the BDL group, the MTT_heart and MTT_liver were significantly different from control and PPVL.

Conclusions

We conclude from our results that despite the presence of significant PSS, no change in hepatobiliary function in rats with prehepatic portal hypertension occurs.     

HSP90β在结肠癌组织和细胞中的表达及其与化疗耐药的关系

目的 研究热休克蛋白90β(HSP90β)在结肠癌组织和HCT-8细胞中的表达,及其与结肠癌细胞对化疗药物耐药性之间的关系.方法 应用免疫组化染色法研究HSP90β在结肠癌组织中的表达水平以及与Duke's分期、病理分级之间的关系;MTT法检测长春新碱(VCR)对结肠癌亲本细胞HCT-8和耐药细胞HCT-8/VCR的半数抑制浓度(IC50;以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP90β mRNA在结肠癌亲本和耐药细胞系中表达的差异,探讨其与细胞耐药性之间的关系.结果 结肠癌组织中HSP90β的表达阳性率为41.67%,高于癌旁结肠组织的16.67%(P<0.05).HSP90β表达水平与肿瘤分化之间有关(r=-0.8825,P<0.05),与肿瘤Duke'S分期之间无关(P>0.05);HCT-8/VCR细胞对VCR的耐药性显著高于HCT-8细胞(P<0.05);HSP90β mRNA在耐药细胞中的含量(0.955±0.03)明显高于亲本细胞(0.835±0.029)(P<0.01).结论 HSP90β在结肠癌中的表达水平升高,可能与结肠癌的恶性转化、化疗耐药性有关,可望作为改善结肠癌化疗敏感性的一个新靶点.     

热休克蛋白70抑制大鼠颅脑损伤诱生型一氧化氮合酶mRNA的表达

目的 探讨热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）对大鼠感染性脑损伤（感脑）诱生型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的表达及一氧化氮（ＮＯ）合成的影响。方法 将大鼠７２只随机分为正常对照组、感染性脑损伤组和热休克处理组,每组又ｈ共３个时间点。采用百日咳菌液通过左颈内动脉注入制成大鼠感染性脑损伤模型,用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交技术检测各组各时间点的ＨＳＰ７０的表达,同时用原位杂交方法检测各组ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达及Ｇｒｉｅｓｓ法测定各组的ＮＯ含量的变化。结果 Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交分析结果表明,大鼠感脑各组及正常组有一定量的ＨＳＰ７０表达,而热休克处理组的ＨＳＰ７０的量明显高于感脑组（Ｐ〈０．０１）。原位杂交结果提示ｉＮＯＳ在感脑的大脑皮质神经细胞４、８、２４ｈ开始表达,可见明显的杂交信号,而休克处理组仅有少量的阳性颗粒。ＮＯ含量在感脑