高糖刺激对大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体表达的影响

目的:观察体外高糖环境下大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体基因及其蛋白表达变化。方法:正常大鼠近端肾小管上皮细胞细胞株(NRK-52E)常规培养于含10%灭活新生胎牛血清的低糖DMEM培养液传代培养,待细胞生长至亚融合状态时,更换为无胎牛血清低糖DMEM培养基培养24h使其同步化,将NRK-52E细胞分为5组:A组为正常对照组,低糖DMEM完全培养液(含D-葡萄糖5.5mmol/L);B组为高糖刺激12h组:高糖DMEM完全培养液(含D-葡萄糖25mmol/L)刺激12h;C组为高糖刺激24h组:高糖DMEM完全培养液刺激24h;D组为高糖刺激48h组:高糖DMEM完全培养液刺激48h;E组为高糖刺激72h组:高糖DMEM完全培养液刺激72h。然后分别提取各组总RNA和总蛋白,分别用RT-PCR检测各组目的基因AdipoR 1/2mRNA的表达,Western印迹法检测各组目的蛋白AdipoR 1/2蛋白的表达。结果:脂联素受体1(AdipoR1)和脂联素受体2(AdipoR2)在NRK-52E细胞中均有表达;在高糖刺激情况下,随着刺激时间的延长,目的基因AdipoR 1/2mRNA的表达均有先增高后降低的趋势,在刺激24h时升高到最高点,和对照组相比有统计学意义(P<0.05);与正常对照组相比,高糖刺激后各时间点AdipoR 1/2蛋白的表达有上升的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NRK-52E细胞AdipoR1/2蛋白的表达不受高糖刺激的影响;高糖影响NRK-52E细胞AdipoR1/2mRNA的表达,并随着刺激时间的延长表现出先增高后降低。高糖通过影响脂联素受体基因的表达从而影响脂联素发挥其生物学作用,以致影响大鼠近端肾小管上皮细胞的功能。     

肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠肺微血管VEGF、VEGFR2、PAI-1、VCAM-1mRNA表达的影响

目的通过观察肺纤方提取物干预体外培养肺微血管的血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR 2)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)、血管细胞黏附因子1(VCAM-1)基因表达的影响,探讨肺纤方干预肺纤维化微血管生成的机制。方法从肺纤维化模型大鼠分离培养肺微血管内皮细胞,将其等量分为模型组,氯沙坦组,泼尼松组,肺纤方大、中、小剂量组。模型组加入含20%胎牛血清的DMEM培养基,氯沙坦组加入含20%胎牛血清及10 mg/L氯沙坦的DMEM培养基,泼尼松组加入含20%胎牛血清及5 mg/L泼尼松的DMEM培养基,肺纤方大、中、小剂量组分别加入含20%胎牛血清及100、60、20 mg/L肺纤方提取物的DMEM培养基,分别作用24 h。双链嵌合荧光染料SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法检测VEGF、VEGFR 2、PAI-1与VCAM-1的mRNA转录水平。结果与模型组比较,肺纤方大、中、小剂量组VEGF基因表达水平均显著降低,而VEGFR2无显著差异;肺纤方大剂量组PAI-1 mRNA表达显著降低;肺纤方大、中剂量组VCAM-1 mRNA表达显著降低(P0.05)。结论肺纤方可通过抑制肺微血管VEGF、PAI-1及VCAM-1的表达改善血凝及纤溶,抑制血管形成而发挥抗肺纤维化作用。     

一种改良的Sprague Dawley新生大鼠视网膜Müller细胞培养方法

目的改良Sprague Dawley(SD)新生大鼠视网膜Müller细胞培养方法。方法取新生1～2 d的SD,分2 d完成视网膜Müller细胞的提取,第1天将眼球浸泡于含体积分数1%双抗的无血清高糖达尔伯克改良伊戈尔培养基(DMEM)中,置于37℃、含体积分数5%CO2的培养箱内过夜;第2天,去培养基,以2. 5 g·L-1胰蛋白酶消化眼球1 h,分离视网膜组织,加入含体积分数1%双抗和体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,制备细胞悬液接种培养; 24 h后换液,6～8 d后传代,传至第4代,细胞免疫荧光染色法鉴定Müller细胞纯度。结果 Müller细胞贴壁生长良好,细胞体宽大,细胞质丰富,细胞核呈圆形或椭圆形,无神经元共生长,Müller细胞纯度> 95%。结论改良的SD新生大鼠视网膜Müller细胞培养方法操作简单,细胞纯度高。     

雌性大鼠骨髓干细胞体外从头合成雌二醇的研究

[摘要] 目的 研究雌性大鼠骨髓干细胞（BMSCs)在含10%胎牛血清的高糖DMEM体外培养条件下能否分化为产生雌二醇(E2)及表达芳香化酶(aromatase, P450arom)的细胞,为卵巢早衰、老年人骨质疏松症等疾病的治疗提供新的可能途径。方法 体外分离成年雌性SD大鼠的骨髓干细胞,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养增殖,加或不加全反式视黄酸（all-trans retinoic acid, ATRA）诱导分化,分为对照组（不加ATRA)和ATRA组（加ATRA),放射性免疫法（RIA)检测两组细胞培养液中E2的浓度;RT-PCR检测两组细胞中芳香化酶基因CYP19mRNA的表达和FSHRmRNA的表达;免疫细胞化学检测两组细胞中芳香化酶的表达情况。结果 离体培养第3代雌性大鼠骨髓干细胞,RT-PCR示对照组和ATRA组从培养第1天开始均表达CYP19mRNA和FSHRmRNA,免疫细胞化学示两组细胞从培养第2天到第4天都有P450arom的阳性细胞表达,从培养24h开始在两组细胞培养液中都检测到较高水平的E2。结论 雌性大鼠骨髓干细胞在离体培养条件下能从头合成雌二醇及表达芳香化酶。     

高浓度棕榈酸对正常肝细胞株糖皮质激素受体α-亚型表达的影响

目的：研究高浓度棕榈酸对肝细胞糖皮质激素受体α亚型（GRα）表达的影响。方法：用含有10%小牛血清的低糖DMEM培养基培养正常肝细胞株L02。1.0×105细胞接种到6孔板中,并用含有200 mmol/L棕榈酸的低糖DMEM培养基培养72 h,24 h换液1次,用实时荧光定量PCR进行定量分析GRαmRNA。结果：高浓度棕榈酸培养72 h后,肝细胞内GRαmRNA水平是对照组（用含10%、不含脂肪酸牛血清白蛋白的低糖DMEM培养基培养72 h）的1.67倍。结论：高浓度棕榈酸可以刺激肝细胞GRα上调表达。     

复方丹参注射液对RF滑膜细胞VEGF mRNA的影响

目的:观察复方丹参注射液对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织,消化分离滑膜细胞进行分组培养。对照组:含9.0 g/L氯化钠注射液 100 ml/L胎牛血清的达氏修正依氏培养基(DMEM)培养;复方丹参低剂量组:1.5μg/ml复方丹参 100 m l/L胎牛血清的DMEM培养;复方丹参高剂量组:150μg/m l复方丹参 100 ml/L胎牛血清的DMEM培养。提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGF mRNA的表达。结果:复方丹参高低剂量组VEGFmRNA表达较对照组均明显降低(P<0.05)。结论:复方丹参注射液可以下调RA患者滑膜下细胞VEGF mRNA表达水平,从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖。     

培养基对兔骨髓间充质干细胞体外扩增的影响

目的考察含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基(DMEM HG, 10％FBS)、10％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG,10％FBS)、15％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG, 15％FBS)、20％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG, 20％FBS)对兔骨髓间充质干细胞体外贴壁、扩增的影响。方法① 选2月龄的新西兰大白兔,股骨转子间区抽取骨髓利用密度梯度离心贴壁法分离纯化细胞,体外培养。选取传代第一代骨髓间充质干细胞 (passenger one, P1)分别用以上4种细胞培养基培养,测细胞扩增倍数;② 选取传代第二代骨髓间充质干细胞(passenger two, P2)分别将以上4种细胞培养基混悬液接种于24孔板中,观察细胞生长状态并测生长曲线;③ 选取4种培养基中培养效果最好的一组细胞,以密度0.5×104/mL接种于24孔板中,成骨诱导,茜素红染色测其矿化能力。结果DMEM LG(15％FBS) 组中细胞扩增倍数为(16.20±1.60)倍,细胞集落形成数为6.11±1.17,与其它组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,并矿化能力最强。结论DMEM LG (15%FBS)培养基较其他3种培养基更符合兔骨髓间充质干细胞体外扩增培养的条件,且更好的保持了细胞的正常形态和生物活性。     

肿瘤坏死因子-α对NIH3T3细胞成熟化作用的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α (TNF-α)对NIH3T3细胞成熟化所起的作用.方法 体外培养NIH3T3成纤维细胞,将细胞分为空白对照组(A组)、TNF-α组(B组)及TNF-α+Anti-TNFRSF1B组(C组).细胞制成 2×108/L的细胞悬液后,接种于25 cm2培养瓶中,待细胞呈汇合状态时,换用无血清DMEM高糖培养基培养12～16 h.然后A组换用含体积分数0.02胎牛血清的DMEM高糖培养基继续培养;B组换用含100 μg/L TNF-α的培养基培养;C组先加入浓度为50 μg/L的Anti-TNFRSF1B作用1 h后,倒出培养基后再加入含100 μg/L TNF-α的培养基继续培养.然后采用RT-PCR方法测定各组Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶3(MMP3)mRNA的表达,Western Blot方法测定各组Ⅰ型胶原蛋白和MMP3蛋白的表达.结果 B、C组 MMP3 mRNA及蛋白的表达较A组升高,差异均有显著意义(t=-13.413～5.076,P<0.05);B组较C组升高,差异也具有显著意义(t=4.441～5.076,P<0.01);B、C组Ⅰ型胶原的表达较A组降低,差异也均有显著性(t=-4.950～5.808,P<0.05),B组较C组降低,差异也均有显著性(t=-4.950～-3.823,P<0.05).结论 TNF-α可促进NIH3T3细胞活化.     

槲皮素抗NIH-3T3细胞凋亡的作用

目的:探讨槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用。方法:体外培养小鼠成纤维细胞,取对数生长期的成纤维细胞分成四个实验组。对照组(C):仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。槲皮素前保护组(Qb):先用含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h,再换含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in。槲皮素后保护组(Qa):先用0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h。H2O2实验组(H2):先用含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换仅含有10%胎牛血清的DMEM培养基作用24 h。取培养细胞提取DNA和制备1×107/m l细胞悬液的滴片,应用TUNEL和Ladder电泳检测细胞凋亡率;应用细胞免疫组化技术检测Bc l-2、Bax、Caspase-3蛋白质的表达。结果:由TUNEL和Ladder实验得出,Qb组的细胞凋亡率明显低于H2组和Qa组。由细胞免疫组化技术检测分析得出,Qb组与Qa、H2组相比,Bc l-2的表达增高,Bax、Caspase-3的表达减低。结论:槲皮素可能是通过上调Bc l-2的表达,下调Bax、Caspase-3的表达,对H2O2诱导NIH-3T3细胞的凋亡起到抑制作用。     

低抗凝肝素对大鼠肝星状细胞生长的影响

目的:探讨低抗凝肝素对胎牛血清培养的大鼠肝星状细胞生长的影响.方法:肝星状细胞经体积分数为0.4%胎牛血清/DMEM培养液同步化48 h后分为对照组和实验组,对照组以体积分数为10%胎牛血清处理,实验组分别以体积分数为10%胎牛血清和不同质量浓度(8 g/L,40 g/L,200 g/L,1 000 g/L,5 000 g/L)低抗凝肝素处理,应用MTT法测定其对肝星状细胞生长的影响.结果:低抗凝肝素(40～5 000 g/L)对肝星状细胞的增殖有明显抑制作用(P＜0.05).在不同的作用时间,低抗凝肝素(200 g/L)均对肝星状细胞生长有明显抑制作用,且在其作用48 h后肝星状细胞生长速度明显减慢.结论:低抗凝肝素对大鼠肝星状细胞生长具有抑制作用.     

RP-HPLC法测定维生素E霜的含量

目的:测定维生素E霜中维生素E的含量。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱:D iamonsilTM(钻石)C18柱,流动相:甲醇-氯仿(85∶15),流速:1.0 m l.m in-1,检测波长284 nm,柱温40℃。结果:维生素E的平均回收率为99.79%,方法精密度(RSD)为0.20%(n=6)。结论:该法可用于维生素E霜中维生素E的含量测定。     

纽邦 E100i, E200呼吸机的使用与保养及 C200Ⅰ空压机的改进

为了延长呼吸机的使用寿命 , 避免昂贵的大修 , 良好的维护保养措施是相当重要的 , 本文讨论了上述问题 .     

气相色谱法测定维生素E微乳中维生素E的含量

维生素Ｅ微乳由维生素Ｅ，吐温－８０，甘油及水组成，通过绘制相图筛选最佳配方及制备工艺，采用气相色谱法测定微乳中维生素Ｅ的含量，以３％ＯＶ－１７为固定相，８０￣１００目１０１担体，柱温为２６５℃，以三十二烷为内标，线性范围为０．４￣２．０ｍｇ相关系数为０．９９５２，平均回收率为１０１．８％，ＲＳＤ＝０．１％。     

自拟戊肝合剂治疗散发性戊型病毒性肝炎50例

自拟戊肝合剂治疗散发性戊型病毒性肝炎 5 0例 ,治疗 1个月痊愈率达 84 % ;总有效率为1 0 0 % ,与对照组疗效有显著性差异。其具有清肝利胆、泻下退黄、凉血解毒之效 ,能调整免疫功能 ,抑制戊肝病毒 ,消除胆道炎症 ,排除病毒产物 ,促进肝细胞新陈代谢 ,有利于缩短疗程 ,提高治愈率     

肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中的蛋白表达以及人乳头瘤病毒(HPV)16E6、E7和HPV18E6/E7感染对其表达的影响。方法采用免疫组化SP法检测70例浸润性宫颈癌、15例原位癌、20例正常宫颈组织中KAI1蛋白的表达,采用PCR扩增-琼脂糖凝胶电泳法检测浸润性宫颈癌组织中HPV16E6、E7和HPV18E6/E7的DNA状况。结果宫颈浸润癌及原位癌组织中的KAI1蛋白表达与正常宫颈上皮中的表达相比明显下调(P<0.05),原位癌与浸润癌中的表达差异无统计学意义;HPV16E6、E7和HPV18E6/E7在浸润性宫颈癌中的阳性率分别为67.1%、54.3%和12.9%,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染与宫颈癌中的KAI1蛋白表达无相关性。结论肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中呈下调表达,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染不影响其表达。     

L1、E6和E7基因序列分析

目的了解中国西南地区HPV16亚型基因的一级结构特点,为由HPV16亚型感染引起的疾病特别是宫颈癌的临床诊断、治疗提供理论依据。方法选取经分型明确为HPV16型感染的官颈癌组织32例,用PCR方法获得其E6、E7及L1基因的全长序列并进行测序分析。结果与德国标准株相比,32个标本中总共发现131（G—A）（Gly-Arg）、178（T—G）（Asp—Glu）、350（G-T）（Val—Leu）、647（A—G）（Asn-Asp）、846（T—C）（同义突变）、IA基因第966（C—T）（同义突变）、L1基因第1302（C-T）（同义突变）和L1基因第1434（A—G）（同义突变）等20个突变位。结论与标准序列比较,中国西南地区HPV16亚型L1、E6和E7基因存在一定范围变异,提示在预防治疗西南地区妇女宫颈癌病人以及研制该地区HPV疫苗时,需要注意这些位点的变异,特别是一些引起氨基酸变异的位点。     

紫外分光光度法测定复方维生素E霜中维生素E的含量

本文报告紫外分光光度去测定复方维生素E霜中维生素E的含量,方法简便,准确, 适用于一般医院制剂室测定。     

欧盟对变更要求的指南文件

Ⅲ/5783/93终结稿 工类变更文件要求的指南 以EEC法规2309/933和指令75/319/EEC为修正案,一致通过了上市批准产品变更程序的共同方法.这些程序说明了工业企业和行政部门的任务,同时保证了医药产品的变更不会影响公众健康.