宁夏地区28株遗传性眼病永生淋巴细胞系的建立

目的建立宁夏地区多种遗传病性眼病的永生淋巴细胞系,从而为进一步深入研究这些遗传病的发病机理提供研究材料。方法采用EB病毒转化B淋巴细胞的方法,建立永生淋巴细胞系。结果成功建立先天性高度近视、先天性白内障、先天性上睑下垂等遗传病,8个家系的28个永生淋巴细胞株。结论遗传性眼病家系永生细胞株的建立,为从分子水平研究它们的发病机理提供了可用的资源。     

肾综合征出血热患者永生化B淋巴母细胞系的建立

目的 建立肾综合征出血热患者永生化的B淋巴母细胞系，为进一步研究汉滩病毒感染者的细胞免疫功能奠定基础。方法 自HFRS患者血液中分离外周血单个核细胞(PBMC)，再用EB病毒感染PBMC，同时加入环胞素A(CysA)。结果 20例血样标本经EBV感染4周左右，形成了15例永生化B淋巴母细胞系。成功转化后的B淋巴母细胞系，其体积增大，进而增殖的淋巴细胞积聚成团。结论 永生化的B淋巴母细胞系可传代培养。冻存复苏后细胞增殖活性并无改变。     

乙型肝炎病毒感染者B淋巴母细胞系的建立

目的 在体外建立HBV感染者永生化的B淋巴母细胞系(LCL),并鉴定其HLA-A基因亚型.方法 利用EB病毒转化外周血B淋巴细胞使之永生化,用环胞菌素A(Cys A)抑制血液中T淋巴细胞的活性;用PCR-SSP法检测血样本的HLA-A基因亚型.结果 成功建立了HBV感染者的永生细胞株16株,其中急性乙肝4例,慢性乙肝10例,携带者2例.所有的细胞株冻存后复苏的成功率为100%.细胞株的HLA-A基因亚型包括1101、0201、0101、2403等.结论 转化后的LCL保持了良好的稳定性,既可能作为人源单抗的来源,也可作为体外研究HBV特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.永生化细胞HLA-A基因亚型的鉴定有可能使其成为异体相应亚型体外特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.     

中国海南黎族永生B细胞系的建立与保存

继人类基因组计划之后，人类基因组多样性计划(Human Genome Diversity Project，HGDP)已成为世界科学研究的热点之一。从世界各地采集不同人群的标本并建立永生细胞系，是HGDP的重要内容^[1-3]。黎族是中华民族的重要成员，集居海南岛。语言属汉藏语系壮侗语族黎语支。根据方言、文化特征及人种学上的差异，又分为孝黎、杞黎、本地黎、美孚黎和加茂     

瘢痕疙瘩家系外周血淋巴细胞永生化方法探讨

目的探讨建立瘢痕疙瘩家系永生化细胞库的方法,为研究瘢痕疙瘩的发病机制、诊断和治疗提供长期的标本来源。方法采用EB病毒转化技术,分别采用新鲜血法和冻存血法。将瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系。结果成功建立了一瘢痕疙瘩家系中27个个体的永生细胞株：新鲜血法较冻存血法可明显提高一次建系成功率。结论EB病毒转化技术可有效保存原来个体完整的基因组,为以后的相关研究提供了长期的DNA资源。新鲜血法明显优于冻存血法,更适用于永生化细胞库的建立。     

永生细胞库建立方法的探讨

目的：用HLA基因分型技术筛查中国人特有HLA－DPB1＊2101－DQA1＊0601－DRB1＊1202单倍型并建立该单倍型的永生细胞库，以备进一步研究该单倍型特别连锁的成因和机理。方法：采集中国某地具有该单倍型的南方人及其家系血样，用微量全血法和淋巴细胞分离法，加入环孢霉素A抑制T淋巴细胞，提高EB病毒转化B淋巴细胞的成功率，结果：HLA－DPB1＊2101－DQA1＊0601－DRB1＊1202单倍型20人份血样，微量全血法建株19份，转化率95％，淋巴细胞分离法建株17份，转化率85％，结论：环孢霉素A可有效地提高EB病转毒化B淋巴细胞的成功率，微量全血法方法简单，用血量少，特别适合在临床上采血困难的老弱病人及儿童。     

原发性免疫缺陷病

原发性免疫缺陷病是一类易于感染的疾病。随着免疫分子生物技术的飞速发展 ,原发性免疫缺陷病的诊断和治疗等取得了长足的进展 ,本文对此作一综述。     

宁夏回族永生B淋巴细胞株的建立及保存

目的永久地保存现有的回族遗传资源。方法以EB病毒（Epstein—barr virus，EBV）转化同时加入环孢霉素A的方法建立永生细胞。结果成功建立了10株宁夏回族永生B淋巴细胞株。结论该永生细胞地建立为回族遗传资源的永久保存以及今后在细胞和分子水平上深入开展回族遗传病的研究奠定了基础。     

B淋巴细胞的永生化及初步筛选

目的构建永生化B淋细胞株并作初步筛选.方法自肺癌患者的肿瘤引流淋巴结中分离出B淋巴细胞,在体外用EB病毒感染使之永生化,再用免疫比浊法测定培养基上清液中人Ig.结果利用上述方法可使B淋巴细胞在体外获得永生化并能分泌人IgG.结论能分泌人型抗体的永生化B淋巴细胞将为进一步构建人源化单链抗体库奠定基础.     

瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株的建立及其染色体分析

目的建立瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株,并对该细胞株进行染色体核型分析,探讨用这种方法建立瘢痕疙瘩永生细胞库的可行性和可靠性。方法采用EB病毒转化技术,把瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL)。分别对建株前和建株后10、20、30、35代的细胞株进行染色体核型分析。结果成功地对瘢痕疙瘩家系27个个体建立了永生细胞株,建株后10代、20代的细胞株染色体未发现明显异常;而培养30代、35代的细胞株染色体发生数目和结构的异常。结论瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株可以为以后的研究提供随时可取的实验材料,在用做遗传学分析时宜在转化早期进行。     

新疆和田维吾尔族长寿老人永生细胞株的建立

目的通过用EB病毒转化外周血B淋巴细胞使之成为永生细胞株的方法,建立新疆和田维吾尔族长寿老人永生细胞株,为永久保存新疆长寿老人的基因遗传资源及后续研究奠定基础。方法常规制备EB病毒上清,用环孢素法和冻存全血法转化外周血B淋巴细胞。结果以环孢素法成功建立了5株新疆和田维吾尔族长寿老人永生细胞,其中百岁2人,90～99岁3人,建系成功率为100%(5/5),以冻存全血法建系成功1例(1/5)。HLA基因分型结果在建系前后完全一致。结论与冻存全血法相比,环孢素法能更有效地转化长寿老人永生细胞株,可为长寿的分子遗传机制研究以及某些细胞生物学性状的检测提供充足的实验材料。     

Epstein-Barr病毒转化的B淋巴母细胞样细胞系的建立

目的：通过建立EB病毒转化的B淋巴母细胞样细胞系(LCLs)，以揭示机体的免疫功能状态，为进一步建立外周血T细胞克隆奠定基础。方法：常规制备EB病毒上清，分别感染Graves病、糖尿病、正常人三个群体外周血B淋巴细胞。结果：成功建立了免疫功能亢进、免疫功能低下和免疫功能正常三种功能状态下的B淋巴母细胞样细胞系(LCLs)。结论：从B淋巴细胞转化为B淋巴母细胞样细胞系(LCLs)所需不同时间反映了不同机体的免疫功能状态。     

人角膜缘干细胞初步建系研究

目的：探讨建立人角膜缘干细胞系，为组织工程研究提供足够的细胞储备。方法：取健康人角膜缘深部色素区组织块，经消化后，在含有RPMI—1640、20％胎牛血清的培养瓶和以羊膜细胞外基质为培养载体的培养皿中分别进行体外培养，并对连续传代的细胞行光镜、扫描电镜观察，比较细胞形态的变化并进行细胞计数与冻存处理。结果：人角膜缘干细胞具有人上皮细胞培养的特性，在培养液中传33代后，细胞仍然保持旺盛的分化、增殖能力，并且更适宜在羊膜细胞外基质上生长；目前我们冻存细胞的复苏率为82．2％。结论：将人角膜缘干细胞经体外培养33代并逐代冻存后初步建立了人角膜缘干细胞系。     

东方田鼠胚胎成纤维细胞永生化细胞系的建立

目的 建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为全面研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定基础和提供细胞实验材料.方法 运用脂质体介导的基因转染法将pSV3 neo质粒导入第3代东方田鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆并扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测细胞株中SV40T基因的整合,RT-PCR鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达;绘制东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞生长曲线.结果 阳性细胞克隆已扩大培养并稳定传代50代,经鉴定SV40T抗原已整合到东方田鼠胚胎成纤维细胞中且稳定表达.结论 成功建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系.     

糖尿病B淋巴细胞株超微形态

电镜观察了8例 EB 病毒转化的糖尿病患者 B 淋巴细胞株和2例正常人 B 淋巴细胞。见糖尿病 B 淋巴细胞株的细胞与 PHA 刺激转化的淋巴母细胞以及 EB 病毒引起的 Burkitt 淋巴瘤细胞明显不同.而与文献报道的携带 EB 病毒的二倍体 B 淋巴细胞类似。但糖尿病 B 淋巴细胞株的细胞明显呈多形性.而且分裂增殖和运动更活跃,并具有吞噬活性.     

生长抑素2型受体mRNA在人胃上皮永生细胞及肿瘤细胞株中的表达

目的 了解多种癌细胞上是否较广泛表达生长抑素 2型受体,同时了解 p53突变与否对生长抑素 2型受体的表达有无影响。方法 用 RT-PCR和克隆的人生长抑素 2型受体 cDNA为探针检测人胃上皮永生细胞、人胃癌细胞、胰腺癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞共 10株细胞上该受体 mRNA的表达。结果 发现除 1株胰腺癌细胞外,其余 9个细胞株均表达生长抑素 2型受体。一株胃癌细胞分别转染了野生型和突变型的 p53基因,也同样表达生长抑素 2型受体。 结论 提示生长抑素 2型受体在癌细胞的表达有较大的普遍性,在胃癌细胞中生长抑素 2型受体的表达与 p53是否突变可能无关。     

浙江省汉族人群18-STR基因座的分型资料及其应用

【目的】 建立浙江地区汉族人群18个STR基因座(D8S1179､D21S11､D7S820､CSF1PO､D3S1358､TH01､D13S317､D16S539､D2S1338､D19S433､VWA､TPOX､D18S51､D5S818､FGA､PentaE､PentaD､SE33)的遗传多态性数据资料,并探讨18-STR鉴定分析系统在亲子鉴定､产前诊断等领域的应用｡ 【方法】 对浙江汉族598例无血缘关系个体,采用2组荧光标记STR-PCR复合扩增系统及毛细管电泳基因分型技术,获取18个STR基因座数据资料;在497个亲子鉴定案例中,比较18-STR与15-STR鉴定系统在亲子鉴定和产前诊断中的应用｡ 【结果】 18个STR基因座基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P > 0.05)｡18个STR基因座的杂合度在0.630 ~ 0.942之间,累积个体识别力大于0.9999999999,基因型分布与中国其它地区汉族人群存在差异｡与15-STR鉴定系统相比,18-STR鉴定系统更有利于二联体亲缘关系的认定及可疑突变的判断｡在胎儿亲子鉴定中偶然发现的1例21三体胎儿在D21S11､PentaD两个STR基因座出现了特征性峰型｡ 【结论】 18个STR基因座在浙江汉族人群中呈高度多态性,对法医学亲子关系的认定或排除具有较大价值,部分STR基因座的检测也有助于非整倍染色体的产前诊断｡     

人促甲状腺激素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以进口纯人促甲状腺激素（ｈ—ＴＳＨ）作免疫原，经用Ｇａｌｆｒｅ等杂交瘤制备法，分别制备成１３Ｂ４、１３Ｃ４、８Ｈ１０、３Ｅ４四株具有抗ｈ—ＴＳＨ特异性，与促黄体素、促卵泡素、绒毛膜促性腺素无明显交叉反应。具有稳定分泌功能的杂交细胞株。经亚型鉴定均为ＩｇＧ１。液相中与１２５Ｉ—ｈＴＳＨ的最大结合率依次为１３Ｂ４、３Ｅ４、８Ｈ１０和１３Ｃ４，分别为６１％、５９％、５６％和３４％。表位分析表明，４株单抗主要针对两个不同表位。在此基础上已成功地建立ｈ—ＴＳＨ固相免放和酶免吸附超敏测定法。     

人胃癌细胞系的建立及其评价

目的 利用已建立的胃癌人源化异种移植瘤(Patient-derived xenograft,PDX)模型建立胃癌细胞系,并对建立的胃癌细胞系进行生物学特性评价.方法 选择12例生长状态良好的胃癌PDX模型,待小鼠移植瘤体积生长至500～900mm3时,取出肿瘤组织进行癌细胞的原代培养建立细胞系,通过细胞形态学观察、染色体分析、短片段重复序列(STR)分析、免疫组织化学染色、体外药敏及体内成瘤实验对其生物学特性进行分析鉴定,并在此基础上利用建立成功的胃癌细胞系进行化疗药物药效学评价.结果 12例PDX模型中共成功建立6例胃癌细胞系,细胞系可稳定多次传代.选择其中2例胃癌细胞系(GAXC031和GAXC066)进行生物学特性鉴定.遗传学结果证实,这2例细胞系来自亲本PDX模型,符合恶性胃癌的遗传学特征,在裸小鼠体内具有致瘤性.由细胞系建立的移植瘤模型在保留主要临床生物学特征的前提下,具有成瘤率高,潜伏期短,生长均一性好等特点.体外和体内药敏实验结果均表明,GAXC031对5-氟尿嘧啶有一定的敏感性[体外半抑制浓度(IC50)为0.265μmol/L,体内肿瘤生长抑制率(TGI)为30％～50％],而GAXC066不敏感(体外IC50为＞200 μmol/L,体内TGI＜0);2例细胞系对顺铂的敏感性均较强(TGI＞60％).结论 成功建立了6例人源胃癌细胞系.对GAXC031和GAXC066细胞系全面的分析和鉴定显示,细胞系与亲本PDX模型高度相关.细胞系体内外药敏实验结果显示,对同一个化疗药物,其体内与体外数据间存在很高的一致性.这些细胞系及相关模型可用于抗癌药物的研发和肿瘤基础研究.