IL-10对TGF-β刺激成纤维细胞转化的影响

目的 探讨白介素-10(interleukin-10,IL-10)对转化生长因子-β(transtorm growth factor beta,TGF-β)刺激成纤维细胞增殖、胶原分泌以及向肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)转化的影响.方法 培养人胚肺成纤维细胞,根据不同的处理方法分为五组:A组加入TGF-β (5 ng/ml),B组加TGF-β (5 ng/ml)+IL-10(5 ng/ml),C组加TGF-β (5 ng/ml)+IL-10(15 ng/ml),D组加TGF-β (5 ng/ml)+IL-10(25 ng/ml),E组为空白对照组(无细胞).于72 h使用MTT方法观察各组成纤维细胞增殖情况,羟脯氨酸消化法检测胶原产生量,免疫细胞化学法检测平滑肌肌动蛋白( α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况.结果 B、C、D组细胞内α-SMA表达量分别与A组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.01),D组与B、C组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01);羟脯氨酸产生量C与B组、D组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).细胞增殖吸光度D组与C、B组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在体外IL-10对TGF-β刺激成纤维细胞的增殖、胶原产生及α-SMA表达有抑制作用,且呈剂量依赖性.     

TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化

目的:探讨白细胞介素(IL)-17对A549细胞上皮-间质转化的影响及TGF-β1/Smad2信号通路在其中的作用。方法:用不同浓度(0,10,25,50,100ng/ml)IL-17刺激A549细胞48h,RT-PCR检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、TGF-β1的表达。将体外培养的细胞分为3组:对照组、IL-17(100ng/ml)组、IL-17+SB431542组。48h后收集各组细胞,RT-PCR和Western Blot检测E-cad、α-SMA、TGF-β1、Smad2、和p-Smad2的表达。结果:不同浓度的IL-17作用后,E-cad在50ng/ml IL-17组时表达下调,与浓度呈负相关;α-SMA在100ng/ml IL-17组时表达上调;TGF-β1在25ng/ml IL-17组时表达上调,与浓度呈正相关。与对照组相比,IL-17组E-cad表达下调,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2表达均增加,Smad2蛋白表达水平无明显变化;与IL-17组比较,IL-17+SB431542组Smad2蛋白表达水平无明显变化,TGF-β1、p-Smad2、α-SMA蛋白表达均降低,E-cad的表达明显增加。结论:TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化。     

bFGF反义寡核苷酸对大鼠肺成纤维细胞增殖信号通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸(AODN)对大鼠肺成纤维细胞增殖、转化信号通路的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组(未转染肺成纤维细胞);TGF-β1组(未转染肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+AODN组(转染AODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+RODN(正义寡核苷酸)组(转染RODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激)。每组设3复孔,并作细胞爬片,镜下计数肺成纤维细胞数量,绘制生长曲线。MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率。免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。通过ELISA法检测培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量。用RT-PCR法分析肺成纤维细胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达水平。结果:1细胞计数显示:TGF-β1+RODN组各时段成纤维细胞的数目均较对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组明显增多(P<0.05);TGF-β1+AODN组中成纤维细胞增殖数比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。2MTT结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞光密度值明显比TGF-β1组减低(P<0.05)。3免疫细胞化学染色结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞与对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组比较,α-SMA染色的平均光密度值(IOD)明显增加(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞α-SMA染色的平均光密度值(IOD)比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。4 ELISA法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。5RT-PCR法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显比TGF-β1组明显减低(P<0.05);TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad7mRNA表达明显低于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad7 mRNA表达比TGF-β1组明显增加(P<0.05)。结论:bFGF反义寡核苷酸可抑制肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成,bFGF反义寡核苷酸可能通过下调TGF-β1-Smad信号通路来发挥作用。     

多西环素对TGF-β1诱导肺成纤维细胞α-SMA、FN、Col Ⅰ表达的影响

目的 研究多西环素(Doxy)对转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)向肌成纤维细胞转化的影响,探索Doxy抗肺纤维化的作用.方法 体外培养MRC-5,采用不同浓度的Doxy(0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μg/mL)干预,72 h后采用MTT法检测细胞活性...     

肝X受体激动剂T0901317抑制TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-SMA的表达

摘要：目的探讨肝X受体激动剂T0901317对TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。方法组织块贴壁法培养人正常肺成纤维细胞,波
形蛋白和角蛋白免疫细胞化学鉴定。T0901317和/或TGF-β1刺激人正常肺成纤维细胞后,分别应用RT-PCR,Western blot 和免疫荧光观察α-SMA mRNA和蛋白水平的表
达。结果人肺成纤维细胞表达波形蛋白而不表达角蛋白。RT-PCR,Western blot,免疫荧光结果均显示正常肺成纤维细胞基态下组成性表达少量的α-SMA,TGF-β1 5 ng/ml 即可以诱导α-SMA mRNA和蛋白表达的明显上调,而T0901317 5
μg/ml时可以明显抑制这种表达的上调。结论肝X受体激动剂T0901317可以在基因和蛋白水平抑制TGF-β1诱导的体外人正常肺成纤维细胞α-SMA表达的上调,可能具有潜在抗纤维化应用价值。     

香烟烟雾提取物对转化生长因子β1刺激的人肺成纤维细胞增殖及分泌过氧化氢的影响

目的 观察香烟烟雾提取物(CSE)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的人肺成纤维细胞(HLF)增殖及分泌过氧化氢(H2O2)的影响,探讨CSE可能参与肺纤维化发病的机制.方法 将体外分离培养的HLF细胞分为对照组和TGF-β1(5 ng/mL)刺激组,用不同浓度的CSE(0%、2.5%、5%、10%)进行干预.应用Brdu ELISA法检测细胞增殖;荧光分光光度法测定细胞分泌的H2O2;免疫荧光标记分泌的H2O2和细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.结果 TGF-β1刺激组细胞经免疫荧光标记显示α-SMA阳性表达,说明HLF在TGF-β1,刺激下转化为肌成纤维细胞(MF).TGF-β1,刺激组中,与0%浓度CSE比较,2.5%、5%浓度的CSE干预可以显著促进细胞增殖(P<0.01或0.05),10%浓度的CSE干预抑制细胞增殖(P<0.01).对照组中,与0%浓度CSE比较,2.5%、5%、10%浓度的CSE均使细胞增殖显著减弱(P<0.01或P<0.05),并呈剂量依赖性.TGF-β1刺激HLF细胞能产生一定量的H2O2,CSE干预后分泌产生的H2O2明显增加(P<0.01),经NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)预处理后检测不到H2O2.免疫荧光标记显示分泌的H2O2来源于α-SMA阳性表达的MF细胞.结论 低浓度的CSE能够促进TGF-β1刺激HLF细胞转化的MF细胞增殖,并显著增加MF细胞向细胞外分泌H2O2,提示CSE可能通过氧化应激参与肺纤维化的发生、发展.     

GF-β1对诱导肾间质成纤维细胞活化并表达MMP-9及TIMP-1的影响

目的 研究转化生长因子-β 1 （transforming growth factor beta-1 ,TGF-β 1 ） 诱导的肾间质成纤维细胞（NRK-49F） 发生表型转化时基质金属降解酶MMP-9 及其抑制因子TIMP-1 表达的变化及对分泌纤维连接蛋白（fibronectin,FN） 的影响。 方法 以不同浓度hTGF-β 1 （0 ng/ml 、0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml） 刺激NRK-49F 细胞48 h,分别应用ELISA法检测细胞上清FN 的浓度,免疫荧光检测细胞表型标记物α-SMA、Vimentin 的表达,Western blot、Northern blotting 方法检测MMP-9、TIMP-1 的基因及蛋白质表达。 结果 0.5 ～ 10 ng/ml TGF- β 1 随刺激浓度增高NRK-49F 细胞表达α-SMA明显增多、Vimentin 明显减少,细胞上清中FN 的含量显著增加（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ;同时,TGF-β 1 浓度＞ 2 ng/ml 时显著上调TIMP-1 mRNA 及蛋白表达水平（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ;以上效应均呈浓度依赖性,但对细胞MMP-9 mRNA 及蛋白表达无明显影响（P ＞ 0.05）。 结论 TGF- β 1 能诱导肾间质成纤维细胞活化,使FN 的分泌增多,该作用可能与TGF-β 1 上调了TIMP-1 基因及蛋白质水平,进而减少细胞外基质（extracellular matrix,ECM） 的降解有关。     

马兜铃酸对体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞的损伤作用

目的:观察马兜铃酸(aristolochic acid,AA)对体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)的损伤作用。方法:体外培养NRK-52E,分别以不同浓度的AA-Na刺激细胞,每组设6个复孔,孵育24 h。透射电镜观察NRK-52E细胞的超微结构,MTT法检测不同浓度AA对NRK-52E细胞增殖的影响,流式细胞仪检测NRK-52E细胞的凋亡,免疫细胞化学法检测AA对NRK-52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响;检测不同时间段(12、24、48 h)马兜铃酸对NRK-52E细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)及内皮素-1(ET-1)mRNA和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。结果:①AA浓度低于10μg/ml时对NRK-52E的增殖无明显影响,20~40μg/ml浓度的AA可明显抑制NRK-52E细胞的增殖;②较高浓度的AA(40μg/ml)可明显刺激细胞凋亡;③AA5、10、20、40μg/ml均可刺激NRK-52E表达α-SMA,其中AA10μg/ml对α-SMA表达较强;④AA刺激NRK-52E细胞24 h后TGF-β1mRNA、ET-1 mRNA表达最多,48 h时表达水平下降,而COL-I的表达水平随时间的延长而上调,呈时间依赖性。结论:AA可直接损伤肾小管上皮细胞,促进其表达肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA,即有促转分化作用,且其对NRK-52E细胞的损伤作用呈剂量及时间依赖性。     

IL-17对肺成纤维细胞的增殖、转化和胶原合成作用

目的探讨IL-17对博来霉素诱导肺纤维化形成中的肺成纤维细胞增殖、转化、胶原合成作用。方法用5 mg/kg博来霉素气管内注入的方法诱导肺纤维化形成,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中表达的变化,选择表达IL-17RmRNA最佳时间的肺成纤维细胞进行原代培养、鉴定。使用四氮唑蓝比色法检测不同浓度的IL-17对肺成纤维细胞的增殖。使用RT-PCR和Western Blotting检测肌成纤维细胞标志物α-SMA以及I和III型胶原的表达。结果(1)IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中明显升高,在第14天表达最高。(2)不同浓度IL-17能够促进肺成纤维细胞的增殖,最佳浓度为50 ng/ml。(3)IL-17促进肺成纤维细胞表达α-SMA增加。(4)IL-17促进肺成纤维细胞I和III型胶原合成。结论 IL-17具有促进小鼠肺纤维化形成中肺成纤维细胞增殖、转化和胶原的合成作用,可能在肺纤维化形成中起重要作用。     

乳腺癌细胞外泌体对肿瘤相关成纤维细胞激活的诱导作用及机制

目的 探讨乳腺癌细胞外泌体对肿瘤相关成纤维细胞激活的诱导作用及机制。方法 (1)将乳腺上皮细胞MCF10A、乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231、PBS分别与成纤维细胞MRC-5共培养;另取上述细胞和PBS,在与MRC-5共培养的同时加入外泌体摄取抑制剂GW4869。检测共培养后MRC-5细胞的迁移能力,细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、 IL-8、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β(TGF-β)、CXC基序趋化因子配体12(CXCL12)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1)、Ⅳ型胶原蛋白α1链(COL4A1)的mRNA表达水平。(2)提取MCF10A、MCF-7和MDA-MB-231细胞的外泌体并鉴定,然后将上述细胞外泌体、PBS分别与MRC-5细胞共培养。检测MRC-5细胞的迁移能力,细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、 TGF-β、 CXCL12、COL1A1、COL3A1、COL4A1的mRNA表达水平,以及细胞中核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达水平。结果 (1)相较于与PBS或MCF10A细胞共培...     

ERK5对人肺成纤维细胞自噬、凋亡和增殖的调控

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶-5(ERK5)对人肺成纤维细胞系(HLFs)自噬、凋亡和增殖的调控及对成纤维细胞表型转化的影响.方法 转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLFs建立肺纤维化细胞模型,过表达ERK5基因(ERK5)后通过Western blot检测自噬、凋亡、增殖相关因子和表型转化标志因子α-SMA的表达,通过细胞增殖/毒性检测(CCK8)试剂盒检测细胞增殖率.结果 经TGF-β1处理后,与对照组相比,ERK5组细胞α-SMA、P62蛋白表达水平升高,LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平降低;促凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3表达水平降低,抗凋亡蛋白Bcl-2和增殖细胞核抗原PCNA表达水平升高,CCK8检测到细胞增殖率升高.结论 在TGF-β1诱导的HLFs表型转化过程中,ERK5高表达促进细胞增殖、抑制细胞自噬和凋亡.     

阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导肾成纤维细胞表型活化的影响

目的 观察阿魏酸哌嗪对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾成纤维细胞表型活化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的可能机制.方法 体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F),利用MTT观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞活力的影响;免疫细胞化学法观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达的影响;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-SMA及CTGF mRNA表达的作用,双抗体夹心ABC-ELISA法检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响.结果 TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏成纤维细胞活力,上调细胞α-SMA、CTGF蛋白和mRNA的表达以及Col Ⅰ、FN的表达.与TGF-β1刺激组相比,阿魏酸哌嗪能部分抑制TGF-β1诱导的细胞活力增加、α-SMA、CTGF的表达和细胞外基质(ECM)的合成.结论 阿魏酸哌嗪可以在一定程度上拮抗TGF-β1诱导的肾纤维化效应.     

骨肉瘤细胞外泌体调控JAK2/STAT3信号通路影响成纤维细胞向肿瘤相关成纤维细胞转化

目的 探讨骨肉瘤外泌体对肿瘤相关成纤维细胞转化的影响及机制。方法 提取并鉴定骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63,人成骨细胞hFoB1.19外泌体,将PBS、hFoB1.19、U2-OS、MG-63外泌体与人肺成纤维细胞MRC-5共孵育,CCK8法检测MRC-5增殖能力,Transwell小室法检测MRC 5迁移和侵袭能力,qRT-PCR检测MRC-5细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8表达,Western blot 检测MRC-5细胞α-SMA、Vimentin、FAP表达,JAK2/STAT3信号通路的激活。结果 透射电镜和Western blot鉴定所提取的外泌体符合其结构特征;与U2-OS、MG-63外泌体共孵育后,MRC-5增殖、迁移和侵袭能力显著增加,MRC-5中IL-1β、IL-6、IL-8表达显著增加,α-SMA、Vimentin、FAP表达显著增加,JAK2和STAT3磷酸化水平显著增加（均P＜0.001）。结论 骨肉瘤细胞外泌体通过激活JAK2/STAT3信号通路而促进成纤维细胞向肿瘤相关成纤维细胞转化。     

TGF-β3拮抗TGF-β1诱导的FMT 改善小鼠肺纤维化

目的 研究转化生长因子(transforming growth factor, TGF)-β3是否能够抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞(human lung fibroblast, HLF)间质转化。方法 在体外培养原代HLF进行细胞实验,分为3组:对照组:给予等体积超纯水;TGF-β1组:细胞给予TGF-β1(4ng/ml)处理HLF 24h;TGF-β3组:细胞给予20ng/ml的TGF-β3预处理24h后加入TGF-β1(4ng/ml)处理24h。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和纤连蛋白(Fibronectin)蛋白的表达水平。在体内构建小鼠肺纤维化模型,分为3组:对照组:给予等体积0.9%氯化钠溶液气管滴注;模型组:博来霉素溶于0.9%氯化钠溶液,按2.0U/kg的浓度给予小鼠气管内滴注;TGF-β3干预组:于造模前1天,将TGF-β3(100μg/kg)给予小鼠尾静脉注射。HE和Masson染色法观察肺组织病理学变化,免疫荧光法检测α-SMA和Fibronectin蛋白的变化。结果 在体外,与TGF-β1组比较,TGF-β3组细胞迁移和侵袭能力降低,α-SMA和Fibronectin蛋白表达下调。在体内,与模型组比较,TGF-β3组小鼠肺组织病理变化改善,胶原沉积减少,α-SMA和Fibronectin蛋白荧光强度降低。结论 TGF-β3抑制TGF-β1引起的HLF间质转化,并改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化。     

转化生长因子-β1促血管内皮细胞向间质细胞转化的作用研究

目的 观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)促进内皮细胞向间质细胞转化[endothelial-mesenchymal (myofibroblast) transition,EnMT]的效应,探讨肌成纤维细胞的来源以及纤维化疾病发生的新机制.方法 分离培养人脐静脉内皮细胞,采用不同浓度的TGF-β1(0、10、25、和50 ng/ml)刺激细胞 72 h后,倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,免疫荧光方法检测第Ⅷ因子相关抗原和α-SMA表达变化,RT-PCR检测VE-钙粘蛋白(VE-Cadherin),α-SMA和Ⅰ型胶原基因表达变化. 结果 正常对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF-β1刺激组内皮细胞由铺路石样形态向梭形转化.免疫荧光检测可见对照组含有少量FⅧ,α-SMA双阳性细胞.TGF-β1组FⅧ,α-SMA双阳性细胞明显增多,并且具有明显的浓度依赖性(P<0.05,P<0.01).RT-PCR检测结果显示,TGF-β1刺激导致内皮细胞特异性标记物VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)基因的表达显著减少(P<0.05),随着TGF-β1刺激浓度的增加,VE-钙粘蛋白基因表达呈明显的下降趋势;相反,内皮细胞间质性标记物α-SMA和I型胶原基因的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),并且具有明显的浓度依赖性.结论 TGF-β1刺激内皮细胞后,细胞表型和功能均表现为间质细胞特性,提示TGF-β1具有促进内皮细胞向间质细胞转化(EnMT)的作用,并且其促EnMT效应具有明显的浓度依赖性.     

人肾小管上皮细胞转分化过程中血管内皮细胞生长因子及其受体表达的变化

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化过程中,血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的变化.方法用不同浓度的TGFβ1诱导HK-2转分化,细胞免疫化学方法检测血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和VEGF mRNA表达,酶联免疫分析(ELISA)检测上清中的VEGF,免疫印迹检测细胞裂解物中的VEGF及其受体.结果(1)HK-2细胞在TGFβ1(5、8 ng/ml)刺激后,α-SMA免疫染色均为阳性,以8 ng/ml时最强;TGFβ1呈剂量和时间依赖诱导α-SMA mRNA表达(P＜0.001).(2)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF从基因到蛋白水平呈双相改变:0.1和1 ng/mlTGFβ1刺激后VEGF mRNA和蛋白表达强度均高于对照组(P＜0.001);而3、5和8 ng/ml TGFβ1刺激后表达强度则低于对照组(P＜0.001).8 ng/mlTGFβ1刺激较短时间(12和24h),VEGF mRNA和蛋白表达强度高于对照组(P＜0.001);而刺激较长时间(36、48和72 h),mRNA和蛋白表达强度均低于对照组(P＜0.001).(3)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,以浓度和时间依赖性方式诱导VEGF受体表达增强(P＜0.001).结论TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF受体表达增强,而VEGF表达出现双相变化,高浓度的TGFβ1刺激可引起VEGF表达下调.     

GSK3β/eEF2K信号通过调控自噬参与肺成纤维细胞诱导分化

目的 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/真核延伸因子2激酶(eEF2K)在肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中的表达,以及对细胞自噬和纤维化的影响。方法 将L-929细胞(对照组)于适宜条件下培养48 h,加入5 ng/mL TGF-β1诱导其表型转化为肌成纤维细胞(TGF-β1组)。将空质粒、si-eEF2K及si-GSK3β转染肌成纤维细胞,培养48 h后采用免疫荧光染色法检测p-eEF2K和α-SMA蛋白表达情况,蛋白质印迹法检测各组eEF2K、p-eEF2K、GSK3β、P62及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达情况。结果 与对照组相比,TGF-β1组细胞p-eEF2K、GSK3β蛋白和α-SMA蛋白表达显著增加(P<0.05);转染si-eEF2K及si-GSK3β后,L-929细胞p-eEF2K/eEF2K表达下降(P<0.05),P62和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平增加(P<0.05),α-SMA蛋白表达降低(P<0.05)。结论 GSK3β/eEF2K信号可能通过降低自噬活性促进肺成纤维细胞向肌纤维细胞的表型转化,促进细胞纤维化进程。     

麦冬多糖抑制TGF-β1诱导的人胚胎肺成纤维细胞表型的转化

研究麦冬多糖对转化生长因子-β₁(TGF-β₁)诱导的人胚胎肺成纤维细胞表型转化的影响,并初步探讨其分子机制。方法 采用TGF-β₁诱导人胚胎肺成纤维细胞(HEL)转化,同时给予麦冬多糖进行干预;采用CCK-8检测细胞的增殖率,电镜观察细胞的超微结构,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ 型胶原蛋白(COL I)、Smad2蛋白和p-Smad2蛋白的表达,实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA mRNA和COL Ⅰ mRNA的表达。结果 25、50、100 μg.ml^-1浓度的麦冬多糖对HEL细胞均无明显毒性,并能抑制TGF-β₁诱导所致的成纤维细胞增殖(P＜0.05);与对照组相比,麦冬多糖干预组细胞表面微绒毛减少、微丝变短,胞浆内线粒体数目下降,粗面内质网减少; 同时下调α-SMA、COL I、Smad2、p-Smad2蛋白的表达量和α-SMA、COL I的mRNA表达水平(P＜0.05)。结论 麦冬多糖可能通过干预TGF-β/Smads信号通路,在一定程度上抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化。     

整合素-β1在转化生长因子-β2诱导晶状体上皮细胞转化中的作用

目的探讨整合素-β1(integrinβ1)在转化生长因子-β2(TGF-β2)体外诱导晶状体上皮细胞(HLECs)向肌成纤维细胞转化中的作用。方法体外培养的HLECs,选择传3代的细胞进行实验,以TGF-β2作为诱导剂。免疫荧光方法检测HLECs integrinβ1、E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达,RT-PCR方法检测E-cadherin和α-SMAmRNA的表达。其中部分细胞预先加入去整合素kistrin孵育1h,再加入TGF-β2刺激细胞48h。结果 TGF-β2处理晶状体上皮细胞后,integrinβ1、α-SMA和F-actin的表达明显增强,细胞E-cadherin表达明显减弱。加入去整合素kistrin后,细胞α-SMA和F-actin的表达明显减弱,细胞E-cadherin表达明显增强。结论 TGF-β2诱导了HLECs转分化,整合素-β1参与了TGF-β2诱导的HLECs向肌成纤维细胞的转化过程。     

JNK信号通路在白介素-1β介导人胚肺成纤维细胞活化中的作用

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号转导通路在白细胞介素-1β（IL-1β）介导的人胚肺成纤维细胞（FB）活化中的作用。方法 体外培养人胚肺FB,用IL-1β、JNK抑制剂（SP600125）作用于细胞,采用免疫蛋白印迹法（Western blot）检测细胞JNK/SAPK磷酸化水平和α-平滑肌激动蛋白（α-SMA）的表达,RT-PCR方法检测纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）、纤维连接蛋白（FN）、神经生长因子（NGF）和α-SMA mRNA的相对表达量,ELISA法检测培养上清液中NGF及白细胞介素-6（IL-6）水平。结果 在IL-1β刺激下,人胚肺FB中α-SMA及磷酸化JNK蛋白表达显著高于对照组,同时PAI-1、FN、NGF和α-SMA mRNA的表达及培养上清液中NGF、IL-6水平均明显高于对照组（P<0.05）;SP600125显著抑制IL-1β诱导的上述指标表达增加（P<0.05）。结论 IL-1β促进人胚肺FB活化及细胞外基质聚集,JNK信号转导通路参与这一过程。