NB901对胃癌细胞DNA的拓扑酶II的活力及其对c—Ha—ras基因表达的影响

本文从胃癌ＢＧＣ８２３细胞中分离出ＤＮＡ扑酶ＩＩ，应用ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ作为底物测定酶的活力，发现５＇脱氧－５＇醛基腺嘌呤核－ＮＢ９０１可以诱导拓扑酶ＩＩ对超螺旋ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ的松散和裂解，并且可以抑制胃癌ＢＧＣ８２３细胞中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因的表达。结果提示抗癌化合物ＮＢ９０１是以癌细胞中ＤＮＡ拓扑酶ＩＩ为作用靶点，癌细胞中拓扑酶ＩＩ可能参与细胞增殖相关基因的转录调控，ＮＢ９０１能够     

视黄酸对胃癌细胞生长和p53及c—myc基因表达的影响

目的：探讨视黄酸对胃癌细胞生长和基因表达的影响。方法：以ＭＴＴ法测定细胞生长，软琼脂集落形成实验测定癌细胞恶性程度，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ测定Ｐ５３及ｃ－ｍｙｃ基因表达水平。结果：１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）能够有效地抑制ＭＧｅ８０－３和ＢＧＣ－８２３细胞生长，但不能抑制ＭＫＮ４５细胞生长，ＡＴＲＡ还能够降低了３株胃癌细胞形成集落的能力。ＭＧｃ８０－３和ＧＢＣ－８２３细胞经ＡＴＲ     

全反式视黄酸对胃癌细胞乳酸脱氢酶等活性的影响

目的　研究全反式视黄酸(ATRA)对胃癌细胞生长的影响并从酶水平探索可能的作用机制。　方法　以MTT法测定ATRA对胃癌细胞的生长抑制作用;用酶标仪测定乳酸脱氢酸(LDH)、β葡萄糖醛酸酶(βG)和碱性磷酸酶(ALP)的活性;以细胞化学法测定琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性。　结果　ATRA能抑制MGc803细胞的生长并降低LDH、ALP和βG的活性,同时提高SDH的活性;但不能抑制MKN45细胞的生长;除降低其细胞外的βG活性外,也不影响LDH、ALP、SDH和细胞内βG活性。　结论　胃癌细胞对ATRA的敏感性不同,这与细胞酶活性的变化密切相关     

沉默乙酰肝素酶对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶(heparanase, HPA)基因表达对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响.方法:根据人HPA基因序列转录RNA的位置及小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,设计了4个靶位点,并构建了4个分别针对靶位点的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,同时合成了阴性和阳性对照质粒表达载体.采用阳离子脂质体法将以上质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞,分别采用RT-PCR和Western印迹法检测转染前后HPA mRNA和蛋白表达的变化,选出对HPA沉默效果最佳的质粒,再应用Transwell小室基质侵袭实验和划痕损伤实验分别研究HPA表达沉默后对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085沉默人胃癌SGC-7901细胞HPA mRNA和蛋白表达的效果最好.pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组中穿透Transwell小室基质的SGC-7901细胞数(289.90±18.11)明显高于对照组(44.00±15.22) (P<0.05),SGC-7901细胞的迁移距离在48、72和96 h内 pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组明显低于对照组(P<0.05). 结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌SGC-7901细胞中HPA mRNA和蛋白表达,从而抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力.HPA可能是治疗胃癌侵袭和转移的一个新靶点.     

L－缬氨酸浓度对胃癌细胞DNA合成率及超微结构的影响

采用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法观察Ｌ－缬氨酸（Ｌ－Ｖａｌ，必需氨基酸）浓度对胃癌细胞株（ＭＫＮ４５，ＭＫＮ２８）与非癌对照细胞ＤＮＡ合成率的影响，发现剥夺基础培养液中Ｌ－Ｖａｌ可明显阻碍胃癌细胞ＤＮＡ的合成（Ｐ＜０．０５）；透射电镜显示胃癌细胞线粒体肿胀、空泡形成及微绒毛减少等变化。Ｌ－Ｖａｌ含量倍或剥夺基础培养中Ｌ－蛋氨酸（必需氨基酸）不影响胃癌细胞的增殖速率。Ｌ－Ｖａｌ浓度对两株非癌细胞ＤＮＡ合成影响不大。本实验结果可为配制胃癌不平衡氨基酸治疗液提供依据。     

PFKFB4对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其作用

目的 探讨激酶PFKFB4是否参与调控胃癌细胞侵袭和迁移并对其作用机理进行初步研究。方法 使用免疫共沉淀检测与PFKFB4有相互作用的SRC家族蛋白,通过转录组测序寻找下游调控基因,利用Western blot和qRT-PCR验证下游基因与磷酸化SRC蛋白的关系,并通过Transwell方法检测PFKFB4相关通路对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 PFKFB4能够与SRC-2相互作用,但PFKFB4不影响SRC-2的表达,而是磷酸化SRC-2第698位的丝氨酸;SRC-2 Ser698磷酸化后,其下游调控基因LKB1的mRNA和蛋白的表达水平都受到抑制,同时胃癌细胞的迁移和侵袭能力增强。结论 PFKFB4通过磷酸化SRC-2负调控抑癌因子LKB1的表达增强胃癌细胞的迁移和侵袭能力。     

转录水平RNA干扰肝素酶基因对肝癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨转录水平基因沉默（TGS）技术和转录后水平基因沉默（PTGS）技术对肝素酶（HPA）基因干扰效果及其对肝癌SMCC-7721细胞侵袭能力的影响。方法 从HPA基因启动子区和编码区分别设计并合成TGS和PTGS的小干扰RNA（siRNA）,并转染肝癌细胞SMMC-7721;实时半定量PCR和Western blotting检测TGS和PTGS siRNA转染后48、72和96h HPA的表达,并设空白组作为对照;Transwell小室实验检测干扰后SMMC-7721细胞的侵袭能力。结果 TGS和PTGS两种技术在转染48h后,从mRNA和蛋白水平上均能成功干扰HPA表达;转染后72h,PTGS组HPA恢复表达,而TGS组仍保持沉默;转染后96h,两组HPA均恢复表达。Transwell小室实验表明,TGS和PTGS组HPA基因均能使SMCC-7721的穿膜细胞数减少,TGS组效果更明显。结论 TGS技术沉默肝癌SMMC-7721细胞中HPA基因的能力优于PTGS技术,并使肝癌细胞的侵袭能力显著降低。     

糖原合酶激酶3-β对胃癌细胞生长的影响及其机制

目的观察GSK-3β功能改变对胃癌细胞生长影响并初步探讨其作用机制。方法体外MTT观察LY294002单独或联合LiCl对人胃癌细胞株SGC-7901作用。采用Western blot、RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测总GSK-3β、p-GSK-3β^ser9、CyclinD1和Caspase3表达。结果LY294002对SGC-7901细胞增殖具有抑制作用,呈时间浓度依赖关系;LY294002干预细胞72h后,总GSK-3β表达无改变,p-GSK-3β^ser9和CyclinD1表达下降,caspase3表达升高;LiCl部分拮抗LY294002对细胞的生长抑制及对CyclinD1和caspase3表达的改变。结论GSK-3β对胃癌细胞生长具有抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关。     

RNA干扰技术沉默Stat3基因对胃癌细胞SGC7901生物学行为影响的实验研究

目的：构建Stat3-siRNA表达载体，探讨转染Slat3-siRNA表达载体阻断人胃癌细胞系SGC7901的Stat3信号传导通路对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：利用RNAi技术，构建Star3－siRNA表达载体，稳定转染胃癌细胞系SGC7901，利用Real—time PCR、Western Blot、MTT、流式细胞技术等方法分别检测Stat3基因mRNA和蛋白表达及细胞增殖和凋亡的变化情况，结果：成功构建Stag—siRNA表达载体，经测序验证无误。Weslern Blot及Real—time PCR结果显示：Stat3基因的表达水平均下降，其中以SGC7901-siRNA3干扰效果最明显，差异具有显著性（P〈0．05）。MTT法结果显示：稳定转染SGC7901细胞后，细胞的增殖能力明显下降，与对照组相比差别显著（P〈0．05）。流式细胞技术显示：Stat3-siRNA3实验组较对照组出现了明显的细胞凋亡，在G1期前出现的亚二倍峰即为凋亡峰。结论：Star3基因的RNAi重组体可以有效的抑制Star3基因的表达，RNA干扰技术沉默Stat3基因能够抑制胃癌细胞的生长，促进其凋亡。