rhBMP-2-PLA纳米微球的制备及生物学效应观察

目的:制备rhBMP-2-PLA纳米微球缓释系统,观察其对兔成骨细胞的生物学效应。方法:采用复乳-干燥法制备rhBMP-2纳米微球,观察其一般特性,并模拟体内条件研究BMP-PLA纳米微球的体外缓释特性。采用MTT法检测微球对成骨细胞增殖状况的影响,并与单纯rhBMP-2的作用进行比较。结果:纳米微球表面光滑圆整,球体大小均匀,平均粒径为45 nm,rhBMP-2-PLA纳米微球的包封率和载药量分别为(90.67±1.23)%和[(134.65±0.44)×10-3]%,微球体外释药符合Higuichi方程。该微球缓释系统有生物活性,能显著促进兔成骨细胞的增殖,其效应高于单纯施加rhBMP-2的效应。结论:rhBMP-2-PLA纳米微球缓释系统的作用明显优于单纯rhBMP-2,在骨创伤的治疗中有良好的前景。     

rhBMP2缓释微球对牙龈成纤维细胞的生物学作用

目的：观察甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)载重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP2)缓释微球(MPs)对体外培养的人牙龈成纤维细胞(GFCs)的生物学作用。方法：采用体外细胞培养技术,将rhBMP2缓释微球和GFCs一起培养,采用M1Tr法检测其对GFCs的增殖状况的影响;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测细胞ALP活性以反映rhBME2缓释微球对其分化状况的影响,并与单纯rhBMP2的作用进行比较。结果：rhBMP2缓释微球具有良好的生物学活性,能显著促进的GFCs增殖及分化,并维持10d以上,其效应高于单纯施加rhBMP2的效应。结论：所制备的rhBMP2微球比单纯rhBMP2对GFCs有更为明显的生物学效应,可以达到对生长因子的有效缓释。     

rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞的生物学效应

目的 制备rhBMP—2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统，检测其对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生物学效应。方法 采用改良的乳化溶液聚合法制备rhBMP—2纳米微球；采用MTT法检测微球对BMSCs的增殖状况的影响；碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测细胞ALP活性以反映微球对其分化状况的影响，并与单纯rhBMP—2的作用进行比较。结果 该微球缓释系统有生物活性，能显著促进BMSCs的增殖及分化，并呈剂量依赖性。其效应高于单纯施加rhBMP—2的效应。结论 在组织工程技术中应用生长因子缓释系统的作用明显优于单纯生长因子的作用。     

生物活性玻璃陶瓷与骨膜源性成骨细胞体外相容性的实验研究

目的：探讨多孔状生物活性玻璃陶瓷（bioactive glass ceramics，BGC）与体外培养扩增的兔骨膜源性成骨细胞（periosteal-derived osteoblasts，POBs）的生物相容性，为骨组织工程载体材料的选择提供依据。方法：体外培养并扩增兔骨膜源性成骨细胞，运用MTT法和酶学测定法分别检测BGC提取液对细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响．运用倒置相差显微镜、扫描电镜观察与BGC复合培养的细胞在材料内的生长情况。结果：BGC提取液对培养早期细胞的增殖有一定的抑制作用，对培养晚期细胞的增殖无明显影响；在细胞培养过程中能上调POBs分泌ALP的能力：细胞在BGC材料孔隙表面生长良好，并能增殖、分泌细胞外基质。结论：在体外多孔状BGC具有良好的细胞相容性，为BGC作为骨组织工程的细胞载体提供了实验依据。     

钛表面羟磷灰石/壳聚糖-转化生长因子-β1缓释微球复合涂层的制备及其对成骨细胞黏附与增殖的影响

目的 探讨在钛表面制备羟磷灰石（HA）/壳聚糖（CS）-转化生长因子-β1（TGF-β1）缓释微球复合涂层及其对成骨细胞黏附与增殖的影响。方法 通过物理-化学-生物改性联合方式制备HA/CS-TGF-β1 缓释微球复合涂层。运用扫描电镜（SEM）、X射线衍射仪（XRD）、傅里叶变换红外光谱（FTIR）等分析涂层的形貌和物相;使用CCK-8及免疫荧光检测其对成骨细胞的细胞毒性及细胞黏附和增殖的影响。结果 成功制备HA/CS-TGF-β1缓释微球复合涂层,该涂层制备具有超亲水性,体外释药稳定且时间长,成骨细胞在此复合涂层的钛片上生长无抑制,且对细胞的黏附与增殖具有促进作用。结论 HA/CS-TGF-β1缓释微球复合涂层在体外对于成骨细胞的黏附与早期增殖有明显的促进作用,具有良好的运用前景。     

rhBMP2纳米缓释系统的制备及其对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响

目的：制备甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐（dex-GMA）载重组人骨形态发生蛋白2（rhBMP2）凝胶纳米微球（NPs）缓释系统,检测其理化及生物学特性.方法：采用改良乳化溶液聚合法,制备rhBMP2纳米微球（rhBMP2-dex-NPs）;观察其形态、粒径与稳定性,检测其载药、释药特征;采用体外细胞培养技术,将rhBMP2-dex-NPs和兔骨髓间充质干细胞一起培养,MTT法检测其对细胞增殖状况的影响,碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒检测细胞ALP活性,以反应rhBMp2-dex-NPs对其分化状况的影响,并与单纯rhBMP2的作用进行比较;实验按照培养液中所含成分不同分为4组：培养液中加入单纯rhBMP2（A组）、加入rhBMP2-dex-NPs（B组）、加入空白NPs（C组）和对照组（D组）,其中A、B 2组均分别按照rhBMP2的不同量设置100μg/L、200μg/L、400μg/L 3个浓度组,采用SPSS 10.0对结果进行统计学分析.结果：rhBMP2-dex-NPs大小均匀,粒径分析表明,80%的纳米球粒径在20nm左右,包封率高达83%,80%的rhBMP2在前12d释放;其具有良好的生物学活性,能显著促进骨髓间充质干细胞（BMSCs）的增殖和分化,效应高于单纯施加rhBMP2的效应（P＜0.01）.rhBMP2-dex-NPs与BMSCs共培养3d内,反应BMSCs增殖和分化的OD值与A组无显著差异（P＞0.05）,但显著高于C、D组（P＜0.01）;3d后,rhBMP2-dex-NPs对细胞增殖和分化的促进作用较单纯rhBMP2明显加快;5～7d后,A、B组差异具有显著性（P＜0.01）;12d左右,B组细胞仍然有较强的增殖与分化能力,与其他3组有非常显著差异（P＜0.001）,而此时A、C、D组间差异已无统计学意义（P＞0.05）.结论：所制备的rhBMP2-dex-NPs形态良好、包封率高,理化与生物学性能稳定,可以达到对生长因子的良好缓释,比单纯rhBMP2对BMSCs有更为明显的生物学效应,可以持续促进其增殖与分化达10d以上,在组织工程领域有着广阔的应用前景.     

不同浓度bFGF对犬骨髓基质细胞增殖、分化影响的实验研究

目的：研究不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factot,bFGF）对体外培养的beagle犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal ceils，BMSCs）增殖和分化的影响。方法：体外培养第2代BMSCs的培养液中分别加入不同浓度（25、50、100、200ng／mL）的bFGF，连续6d倒置显微镜下动态观察BMSCs的形态和生长情况．行MTT比色、碱性磷酸酶（alkalin ephosphatase，ALP）活性定量检测、ALP和Von Kossa染色。结果：浓度为50ng／mL的bFGF可明显促进犬的BMSCs增殖（P〈0．05），但无显著促进犬BMSCs分化的作用（P〉0．051。结论：bFGF能有效促进犬BMSCs的增殖，且与bFGF剂量有关。     

辛伐他汀对大鼠颅骨成骨细胞生物学特性的影响

目的：研究辛伐他汀对原代培养大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法：组织块法分离培养大鼠颅骨成骨细胞,分别在含不同浓度辛伐他汀（1.0μmol/L、0.5μmol/L、0.25μmol/L、0.125μmol/L）培养液环境下培养成骨细胞,采用MTT法测定细胞增殖情况;检测细胞碱性磷酸酶（ALP）活性以及培养液中骨钙素（OC）含量;Von Kossa染色观察成骨细胞矿化结节,用Image-Pro Plus（IPP6.0）软件及其相关系统完成图像采集及分析计算成骨细胞矿化面积的百分比,通过矿化结节面积百分比计算检测细胞的矿化能力。采用SPSS13.0对数据进行单因素方差分析。结果：辛伐他汀抑制成骨细胞的增殖,呈剂量依赖性。各浓度组的ALP活性均增加,以0.250μmol/L浓度组的作用效应最为显著;骨钙素水平增加,与对照组比较均有统计学意义;辛伐他汀能使成骨细胞矿化面积百分比显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：辛伐他汀抑制体外培养大鼠颅骨成骨细胞的增殖,但却促进成骨细胞的分化及矿化,发挥促进骨形成的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子（EGF）对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的剂量效应和时间效应。方法：用体外细胞培养技术和噻唑蓝（MTT）比色法，观察不同浓度和不同时间bFGF和EGF对外胚间充质细胞增殖的影响。结果：0.1-100ng/mL bFGF,0.1-10ng/mL EGF对细胞有促增殖作用，并呈浓度依赖性,两种生长因子均在10ng/mL浓度时作用最强，并于培养第5d达到促增殖高峰。结论：bFGF和EGF能促进外胚间充质细胞的增殖。     

TGF β1和bFGF对鼠口腔黏膜固有层前体细胞的影响

目的探讨转化生长因子B1（TGF-β1）和碱性成纤维细胞因子（bFGF）对大鼠口腔黏膜固有层前体细胞（OMLPPC）的增殖及碱性磷酸酶活性的影响。方法体外扩增培养OMLPPC,利用5ng／mLTGF-β1、10ng／mlbFGF单独及联合作用于OMLPPC,利用MTT方法检测OMLPPC的增殖,利用试剂盒检测其碱性磷酸酶活性,以RT．PCR方法检测各组矿化基因骨钙素（OCN）的表达。结果对细胞的增殖,3d时各组间未见显著性差异;7、14d,bFGF单独作用明显促进细胞的增殖（P〈0．05）,TGF-β1单独作用抑制细胞的增殖（P〈0．05）。TGF-β1＋bFGF组7d时增殖不受影响,14d时增殖变缓。碱性磷酸酶活性检测,对照组及bFGF组各时间点增加均无显著性差异。TGF．131组间7、14d比3d时ALP活性有显著性差异（P〈0．05）。TGF-131＋bFGF组14d时ALP活性显著增强（P〈0．05）。RT—PCR检测OCN结果显示,各组培养14d后,TGF-131组、TGF-β1＋bFGF组表达OCN,对照组、bFGF组未见表达。结论一定浓度的bFGF和TGF-131联合作用,不仅可保证OMLPPCs的增殖,而且能诱导并促进其向矿化方向的分化。     

Basic fibroblast growth factor and epidermal growth factor reverse impaired ulcer healing of the rabbit oral mucosa

BACKGROUND: The therapies for refractory ulcers on the oral mucosa are symptomatic and very unsatisfactory. We hypothesized that application of growth factors might be able to achieve successful remission of the lesion. We evaluated the effects of systemic administration and topical application of epidermal growth factor (EGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) on impaired wound healing of ulcers in the rabbit gingiva. METHODS: Almost uniform round ulcers could be created on the gingiva of the rabbits by chemical injury with acetic acid. When the submandibular glands were removed or i.v. injection of cisplatin (CDDP) and peplomycin sulfate was performed before ulcer formation, healing of the ulcers took longer than in untreated rabbits. To ascertain whether or not human EGF and bFGF affect rabbit cells, we first examined the effects of EGF and bFGF on the proliferation of the cells derived from rabbit gingiva. We then applied EGF or bFGF in these impaired healing models. RESULTS: EGF and bFGF promoted proliferation of the fibroblasts, and EGF also promoted proliferation of the keratinocytes isolated from gingival tissue of rabbits in vitro. Systemic injections of EGF and bFGF in rabbits, which had their submandibular glands removed, and topical application of bFGF accelerated healing of ulcers created in rabbits injected with CDDP and peplomycin sulfate. The ability of bFGF to promote the healing of ulcers was much greater than that of EGF. CONCLUSION: Basic FGF may be effective for refractory oral mucosal lesions.     

成骨细胞对血管内皮细胞增殖与形态的影响

目的:观察兔成骨细胞与血管内皮细胞在直接共培养条件下的形态学的变化及对血管内皮细胞增殖的影 响。方法:将体外培养的成骨细胞与血管内皮细胞经传代后分别以细胞数量为0:1、1:1、2:1、4:1设为4组,置于 同一培养皿中,培养1、3、5、7 d后观察两种细胞形态学的变化及成骨细胞对血管内皮细胞增殖情况的影响。结果: 两种细胞随共培养时间的延长,其细胞形态均呈长梭形。从生长曲线可见,细胞比例为2:1血管内皮细胞增殖程度 明显高于其他两实验组。结论:当成骨细胞与血管内皮细胞直接共培养时,各自失去自身细胞的形态而呈长梭 形;血管内皮细胞增殖程度可有显著的提高。     

成骨细胞与血管内皮细胞联合培养对成骨细胞功能的影响

目的　探讨不同比例兔成骨细胞(ROB)与血管内皮细胞(RVEC)直接联合共培养后,对成骨细胞功能的影 响。方法　取兔成骨细胞与血管内皮细胞,将两者分为4组分别以1∶0、1∶1、2∶1、4∶1直接联合共培养于培养皿中, 通过对细胞内碱性磷酸酶活性(ALP)测定和培养液中骨钙素(OC)定量测定,观察血管内皮细胞对成骨细胞功能的 影响。结果　成骨细胞与血管内皮细胞直接联合共培养相容性良好,2∶1的细胞比例组ALP活性及OC含量较其 他各组明显增高。结论　在体外直接联合共培养的体系中,血管内皮细胞有明显促进成骨细胞活性的作用。     

骨形成蛋白—2和成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖的联合效应

目的：探讨重组人骨形成蛋白－2（rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 单独或联合作用对人牙周膜细胞（PDLCs)增殖的影响。方法：体外培养人PDLCs,分别用不同浓度的rhBMP-2和bFGF单独或联合作用,用四唑盐比色法（MTT法）进行观察。结果：rhBMP-2和bFGF单独作用后PDLCs的增殖较对照组有明显的升高;而rhBMP-2与bFGF联合作用后PDLCs的增殖较各自单独作用有更明显的升高（P＜0．05）。结论：rhBMP-2与bFGF联合应用对于促进人PDLCs的增殖具有协同作用。     

松质骨支架与成骨细胞生物相容性的实验研究

目的：观察松质骨支架对成骨细胞的粘附、生长、增殖的影响,为骨组织工程支架的选择提供实验依据.方法：采用Ficoll梯度离心法得到兔骨髓基质干细胞,经诱导培养为成骨细胞并通过相差显微镜观察、Ⅰ型胶原免疫组化法染色、四环素染色确认为成骨细胞;采用物理化学方法对猪松质骨进行处理得到猪松质骨支架,与成骨细胞体外复合培养,通过扫描电镜观察猪松骨材料对成骨细胞生长、粘附的影响.结果：骨髓基质干细胞经条件培养基诱导培养后已分化为成骨细胞,与松质骨支架联合培养1d后可见细胞附着于材料表面,但数量不多,细胞呈圆球形,7d后细胞生长密集,似葡萄状粘附于脱矿猪松质骨的孔壁上,细胞呈不规则圆球形,表面有丰富的绒毛状突起,细胞间有伪足样突起相连但分布不均.细胞相互融合,可见细胞遮盖微孔间隙.结论：松质骨材料具有良好的细胞相容性,可用作骨组织工程的支架材料.     

碱性成纤维生长因子促进牙龈间充质干细胞增殖作用的研究

目的:体外研究碱性成纤维生长因子(bFGF)促进牙龈间充质干细胞(GMSCs)增殖的作用.方法:酶消化法获得原代GMSCs,克隆化培养后进行干细胞鉴定.取第4代GMSCs,以含有10％胎牛血清的α-MEM作为基础培养基,分别加入0、0.5、1、5、10、20 ng/ml 5种不同浓度bFGF培养1～9 d,用CCK-8法检测细胞增殖.结果:GMSCs可以通过酶消化法获得,具有干细胞特性;0.5～20 ng/ml的bFGF均能促进GMSCs的增殖,在0.5～ 10 ng/ml范围内促增殖作用随浓度增加和培养时间延长而增强.结论:bFGF对GMSCs增殖能力具有浓度依赖性和时间依赖性促进作用.     

Enhancement of osteoblast proliferation in vitro by selective enrichment of demineralized freeze-dried bone allograft with specific growth factors

Decalcified freeze-dried bone allograft (DFDBA), believed to serve as a matrix for new bone growth and to contain various bone-inducing growth factors, is currently used to regenerate periodontal defects and to restore and maintain dental alveolar ridges. Growth factors within DFDBA are extracted during the demineralization process, thus rendering the allograft incapable of spontaneous osteogenesis; however, exogenous growth factor addition to DFDBA may enhance the osteogenic capacity of native osteoblasts. This study's purpose is to evaluate murine osteoblast proliferation in the presence of various exogenous soluble growth factors as measured by fluorescence units. Osteoblasts harvested from mouse pup calvaria were cultured with 2% residual calcium-DFDBA and supplemented by one of the following growth factors or combinations of these factors: transforming growth factor-beta (TGF-beta), insulin-like growth factor-I (IGF-I), platelet-derived growth factor (PDGF), fibroblast growth factors basic (bFGF), or vascular endothelial growth factors (VEGF). Osteoblast proliferation rates indicate that the in vitro supplementation of 2% residual calcium-DFDBA with the combination of IGF and TGF-beta, IGF and PDGF, and PDGF and TGF-beta significantly (P < or = .05) enhance murine osteoblast activity and proliferation at 7 days compared with the control containing no exogenous growth factors.     

碱性成纤维细胞生长因子对犬牙周成纤维细胞样细胞增殖影响的体内研究

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对犬牙周成纤维细胞样细胞增殖的影响。方法　选用4只成年杂种犬,将其上颌两侧的前磨牙(P1-3)、第一磨牙(M1)、下颌两侧的前磨牙(P2-4)、第一磨牙(M1)作为实验牙。在每个象限4个实验牙的近中根颊侧人工制备“U”形骨缺损,并设计为4组,即对照组、bFGF组、ePTFE组、bFGF+ ePTFE组。每周手术1次,每次手术做1个象限的4个牙位,连续4次。完成4次手术后1周处死动物。动物处死前1 h注射尿嘧啶脱氧核苷(BrdU),标本行免疫组化染色,显微镜下计数BrdU标记的成纤维细胞样细胞。结果　各组中BrdU+细胞数均于术后2周最多,术后3、4周显著减少。术后1、2周,bFGF组和bFGF+ePTFE组的BrdU+细胞明显多于对照组和ePTFE组。结论　牙周术后2周是牙周功能细胞增殖的活跃期,bFGF的局部应用可明显促进牙周愈合早期牙周功能细胞的增殖,从而促进牙周再生。     

两种纳米形貌对MG63成骨细胞增殖、分化的影响

目的:评价钛表面纳米管和纳米颗粒形貌对MG63成骨细胞的增殖、分化能力的影响。方法:通过磁控溅射和阳极氧化技术制备纳米颗粒和纳米管形貌。采用扫描电镜和轮廓仪表征材料表面形貌以及粗糙度,并将MG63成骨细胞株与不同形貌的钛材料进行复合培养,检测1d、4d、7d的MTT值及4d、7d的碱性磷酸酶活性。结果:培养1d、4d、7d后,纳米管和纳米颗粒组MTT值高于对照组,7d时,纳米管组MTT值高于纳米颗粒组;培养7d后,纳米形貌实验组碱性磷酸酶活性明显高于对照组。结论:纳米管和纳米颗粒形貌均有利于成骨细胞的增殖和分化。相对于纳米颗粒,表面的纳米管形貌更有利于促进成骨细胞的增殖。     

rhBMP-2及rhbFGF对骨髓间充质干细胞增殖的长期效应的实验研究

目的：检测rhBMP-2和rhbFGE、单独、联合及序贯作用对兔骨髓间充质干细胞增殖的长期效应。方法：在细胞培养技术下，采用MTT法检测单独、联合及序贯施加rhBMP-2和rhbFGF后，兔骨髓间充质干细胞在第1，3，5，7及10天增殖的状况，并进行统计学分析。结果：rhBMP-2和rhbFGF均能长期显著地促进兔骨髓间充质干细胞的增殖，并呈剂量依赖性。两种生长因子联合作用的效应高于单独或序贯作用的效应。结论：不同生长因子的不同应用方式对骨髓间充质干细胞增殖的长期效应不同。