利用噬菌体肽库筛选IL-2Rα模拟表位肽的研究

目的 筛选IL-2Rα模拟表位肽,为研制高效、特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础.方法 应用离子交换层析法从小鼠腹水中纯化抗人IL-2Rα单克隆抗体5G1,细胞ELISA方法检测其特异性.用5G1单抗筛选噬菌体环七肽库,并对噬菌体克隆进行抗原性鉴定.根据阳性克隆的DNA序列合成环肽并鉴定其生物活性.结果 经5轮筛选、鉴定,获得5个与5G1有较强结合特性的噬菌体阳性克隆.DNA测序并推导氨基酸序列,得到Lys-X-{X}-Lys-Gly保守序列.依此序列合成环七肽CP,小鼠淋巴细胞增殖试验证实其有免疫抑制活性.结论 环肽CP为IL-2Rα模拟表位肽,可作为IL-2Rα的拮抗剂发挥免疫抑制效应.     

利用噬菌体肽库确定IL-2Rα表位序列①

目的确定IL-2Rα表位,为研制高效特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法用抗IL-2Rα单克隆抗体5G1对噬菌体六肽库进行筛选,选择出与5G1结合较强的克隆,经DNA序列分析,获得保守序列。对含保守序列的克隆进行生物学活性鉴定。结果选择出31个与5G1结合较强的克隆。获得Ser-Ser-Phe和Ser-Ser-Arg两种保守序列。生物学活性鉴定表明含Ser-Ser-Arg序列克隆较含Ser-Ser-Phe被抑制效果好。结论Ser-Ser-Arg是IL-2Rα表位的关键序列。以此表位序列合成的小分子肽可作为IL-2Rα的拮抗剂而成为免疫抑制剂。     

利用噬菌体肽库确定IL-2Rα表位序列

目的：确定ＩＬ－2Ｒα表位,为研制高效特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法：用抗ＩＬ－２Ｒα单克隆抗体５Ｇ１对噬菌体六肽库进行筛选,选择出与５Ｇ１结合较强的克隆,经ＤＮＡ序列分析,获得保守序列。对合保守序列的克隆进行生物学活性鉴定。结果：选择出３１个与５Ｇ１结合较强的克隆。获得Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ和Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ两种保守序列。生物学活性鉴定表明：含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ序列克隆较含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ被抑制效果好。结论：Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ是ＩＬ－２Ｒα表位的关键序列。以此表位序列合成的小分子肽可作为ＩＬ－２Ｒα的拮抗剂而成为免疫抑制剂。     

人外周血淋巴细胞IL-2R_α表达特性及动力学

本文研究了PHA诱导人外周血淋巴细胞(PBl)IL-2Rα表达的动力学,并探讨了TPA、5-氮胞苷、羟基脲、放线菌素D和秋水仙素等对PHA作用的影响。新分离的PBL几乎不表达IL-2Rα。接受PHA刺激12h时,IL-2Rα表达即明显增加,72h达高峰,随后逐渐降下,至第七天接近未刺激水平。TPA、5-氮胞苷可增加PHA的作用,羟基脲和秋水仙素不影响,而放线菌素D可抑制pHA的效应。这表明人PBL IL-2Rα表达在转录水平调节,与DNA合成及细胞有丝分裂关系不大。体外培养的淋巴母细胞再次接触上述试剂时与初次接触呈现相同的反应性。     

胃癌患者血清IL-6、IL-8、sIL-2R和TNF-α水平的检测分析

机体免疫功能低下或免疫调节功能紊乱是肿瘤发生、发展的重要因素。文章对5 8例胃癌患者血清IL 6、IL 8、sIL 2R和TNF α水平进行检测,探讨其临床意义。1　材料与方法1 1　研究对象　经胃镜和病理证实胃癌患者5 8例,男4 0例,女1 8例,年龄36～6 8岁。慢性良性胃病患者30例;正常对照组30例健康献血员。1 2　方法　受测对象清晨空腹采取静脉血,分离血清, 2 0℃保存待测。IL 6、IL 8、sIL 2R和TNF α检测均采用ELISA法,检测试剂盒分别由第四军医大学免疫学教研室和军事医学科学院提供。操作严格按说明进行。1 3　统计学分析　结果…     

卵巢癌细胞培养上清抑制CD8+ T细胞增殖及IL-2R表达的研究

目的研究不同卵巢癌细胞株培养上清液对CD8^ T细胞增殖功能和表面IL-2Rα、β、γc链表达的影响，探讨卵巢癌腹腔局部免疫抑制的形成机制。方法将3种卵巢癌细胞株(OVCAR3，CAOV3，SKOV3)培养上清液和普通培养液混合培养CD8^ T细胞，MTT法测定CD8^ T细胞的增殖反应，流式细胞仪检测细胞表面IL-2Rα，β，γc链的表达，ELISA法测定培养上清液中sIL-2R的浓度。结果(1)3种不同浓度卵巢癌细胞株培养上清液显著抑制CD8^ T细胞的增殖，并随浓度增加而增加，和对照组比较，25％浓度时P值依次为0．004、0．006、0．013；50％浓度时P值依次为0．002、0．003、0．005；75％浓度时P值均为O．001。(2)3种卵巢癌细胞上清均抑制CD8^ T细胞表面IL-2R表达，其中IL-2β和γc链表达被显著抑制，P值依次为0．002、0．013、0．011和0．015、0．039、0．040，对IL-2Rα链表达有抑制趋势，但差异无显著性，P值分别为0．235、0．224、0．498。(3)3种卵巢癌细胞株培养上清液均使CD8^ T细胞培养上清中sIL-2R浓度显著上升，P值分别为0．008、0．010、0．005。结论卵巢癌细胞株培养上清液对CD8^ T细胞的增殖和IL-2R表达有抑制作用，可能是卵巢癌腹腔局部免疫缺陷的机制之一。     

IL-2R反义S-ODNs抑制人淋巴细胞增殖及IL-2R表达

ＩＬ ２Ｒα、β、γｍＲＮＡ上起始密码子ＡＵＧ的下游序列, 合成与之互补的硫代反义寡聚脱氧核糖核酸（ＩＬ ２Ｒα、β、γＳ ＯＤＮｓ） , 长度为２０ｎｔ。实验结果表明,ＩＬ ２ＲαＳ ＯＤＮｓ 对外周血淋巴细胞生长最高抑制率可达到８１－９２％ ; 而ＩＬ ２ＲβＳ ＯＤＮｓ和ＩＬ ２ＲγＳ ＯＤＮｓ 的抑制作用较低, 其最高抑制率均为５９－１ ％ 。在１０μｍｏｌ／ＬＩＬ ２ＲαＳ ＯＤＮｓ 作用后的第４８ 小时,ｓＩＬ ２Ｒ 的表达下降８０％ ; ｍＩＬ ２Ｒα的表达下降５１－５％ 。     

人肝细胞毛细胆管表达IL-2Rα的初步研究

目的了解人肝细胞毛细胆管是否表达IL-2Rα。方法对正常人肝组织、慢性乙型肝炎等不同病种人肝组织进行IL-2Rα标记,通过免疫组织化学染色、免疫荧光化学染色及免疫电镜三种方法观察其表达。结果免疫组化染色法和免疫荧光染色法显示IL-2Rα标记人肝细胞膜毛细胆管面定位正确,无非特异性染色,而肝细胞膜的血窦面、细胞浆、细胞核不被IL-2Rα标记。酶标记免疫电镜显示人肝细胞膜毛细胆管面有明显电子致密物沉积。结论人肝组织毛细胆管确实表达IL-2Rα,并且有很强的特异性和灵敏度.     

IL-13Rα2与乳腺癌肺转移以及ER阴性病人不良预后的相关性研究

乳腺癌是女性肿瘤中发病率最高,且致死率仅次于肺癌的癌症种类。大部分乳腺癌病人死亡的主要原因是癌细胞向远端器官发生了转移。在本文中,我们研究了IL-13Rα2与乳腺癌转移以及病人不良预后的相关性,并初步探寻了其影响癌细胞转移的可能机制。通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹实验、Kaplan-Meier生存分析、细胞免疫荧光和细胞侵袭等实验方法,我们证明了IL-13Rα2的表达与ER阴性乳腺癌细胞的肺转移能力、ER阴性乳腺癌病人的肿瘤转移和不良预后正相关,与乳腺癌样本中ER的表达负相关,并且其中的作用机制可能与IL-13通过IL-13Rα2调节肿瘤细胞上皮-间质转换(EMT)有关。     

人肝细胞毛细胆管表达IL-2Rα的研究及意义

目的 了解人肝细胞毛细胆管是否表达IL-2Rα,观察其表达特异性和灵敏度.方法 对正常人肝组织、慢性乙型肝炎等不同病种人肝组织进行IL-2Rα标记,通过免疫组织化学染色、免疫荧光化学染色及免疫电镜3种方法 观察其表达.结果 免疫组化染色法和免疫荧光染色法显示IL-2Rα标记人肝细胞膜毛细胆管面定位正确,无非特异性染色,而肝细胞膜的血窦面、细胞质、细胞核不被IL-2Rα标记.酶标记免疫电镜显示人肝细胞膜毛细胆管面有明显电子致密物沉积.结论 人肝组织毛细胆管确实表达IL-2Rα,其特异性和灵敏度均优于CEA(多克隆抗体).     

人工合成VEGF表位模拟7肽的生物学功能研究

目的: 检测人工合成血管内皮细胞生长因子(VEGF)表位模拟 7肽特异抑制VEGF促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的活性。方法: 通过噬菌体展示技术, 筛选获得了表达模拟肽的阳性噬菌体克隆, 经测序得到VEGF表位模拟肽序列: GWYYDAX。人工合成该短肽, 用体外细胞培养的方法检测其对HUVEC的生长抑制作用。结果: 表位模拟肽GWYYDAX可剂量依赖性抑制VEGF促进HUVEC生长的活性。结论: VEGF表位模拟肽可能模拟了VEGF的部分结构, 竞争结合HUVEC细胞VEGF受体 (KDR), 阻断了VEGF VEGFR的信号传递而抑制细胞生长, 具有潜在的应用前景。     

从噬菌体环肽库中筛选TNF-α表位模拟肽的研究

目的：用具有中和活性的抗TNF—α单抗(mAb)J1D9筛选噬菌体环七肽库，从中获得可模拟TNF—α表位的短肽。方法：筛选TNF—α表位模拟肽，并用夹心ELISA法鉴定阳性克隆。结果：对环七肽库进行3轮筛选后，随机挑选20个噬菌体克隆，经ELISA鉴定出9个阳性克隆。DNA序列分析后，推导的氨基酸序列共3种：c—RRPAQSG—c、c—NKHNRKI—c和c—RGMSRKI—c。结论：筛选的环七肽克隆展示肽具有TNF—α的抗原性，为TNF—α表位模拟肽。     

以特异性噬菌体展示肽为靶筛选TNF-α结合肽的研究

目的：建立以特异性噬菌体展示肽为靶从噬菌体肽库中筛选结合表位的新方法。方法：以前期工作中筛选得到的模拟TNF－α表位的环七肽克隆LCS－7（c-RRPAQSG-c)为靶，筛选噬菌体线性十二肽库；用间接ELISA及竞争试验鉴定阳性克隆。结果：对噬菌体十二肽库进行3轮筛选后，挑取20个克隆中有10个为阳性克隆，测序结果氨基酸序列相同：EHMALTYPFRPP。结论：以TNF－α模拟肽克隆为靶筛选得到的噬菌体十二肽克隆，能够与TNF－α结合，为TNF－α结合肽；所测得序列完全一致。上述结果提示了该筛选方法的可行性。     

大鼠原代肾小管上皮细胞上IL-18Rα、β链的表达

目的:检测培养的大鼠原代肾小管上皮细胞(renal tubularepithelialcells,RTECs)是否表达IL-18Rα和IL-18RβmRNA。方法:以肾小管节段贴块法进行原代RTECs的培养。用免疫细胞化学染色法鉴定细胞的类型,用RT-PCR检测RTECs中IL-18RαmRNA及IL-18RβmRNA的表达。结果:免疫细胞化学染色法证实,原代培养的细胞均为RTECs,并表达IL-18RαmRNA和IL18RβmRNA。结论:在RTECs中有IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA的表达,为探讨IL-18R在肾间质纤维化中提供了实验依据的作用。     

不育症患者精浆IL-2R和IL-10的检测与临床应用

不育症是指婚后一年以上,有规律的性生活,未采取任何避孕措施而未能生育的状态。其中,男性因素导致的不育症占有非常高的比例。为了观察精浆中细胞因子对男性生殖的影响,用化学发光免疫分析技术（CLIA）对106例不育男性精浆中的细胞因子白细胞介素-2受体（IL-2R）、白细胞介素-10（IL-10）进行了检测,以探讨检测细胞因子水平对男性不育症诊断的临床应用价值。     

噬菌体肽库确定IL—2Rα表位序列

目的：确定ＩＬ－２Ｒα表位，为研制高效特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法：用抗ＩＬ－２Ｒα单克隆抗体５ＧＩ对噬菌体六肽库进行筛选，选择出与５ＧＩ结合较强的克隆，经ＤＮＡ序列分析，获得保守序列。对含保守序列的克隆进行生物学活性鉴定。结果：选择出３１个与５ＧＩ结合较强的克隆。获得Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ两种保守序列。生物学活性鉴定表明：含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ序列克隆较含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ     

抗IL-13Rα2单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定

目的:在成功制备小鼠抗人IL-13Rα2高亲和力单克隆抗体(mAb)的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人IL-13Rα2 mAb杂交瘤细胞LX147-7中提取总RNA,以此为模板反转录获得cDNA,用针对小鼠mAb重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应。将PCR产物连入克隆载体,经筛选阳性克隆,PCR和酶切鉴定正确后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因。结论:获得了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因序列,为构建相关基因工程抗体打下了良好基础。     

从噬菌体随机十五肽库中筛选类脂A模拟肽的研究

目的用具交叉保护性的针对类脂 A的单抗 (1B6 )筛选噬菌体十五肽库 ,旨在研究类脂 A的模拟肽。方法对噬菌体十五肽库进行亲合筛选 ,用噬菌体 EL ISA法鉴定阳性克隆。结果经 3轮筛选后 ,随机挑选 14个噬菌体克隆 ,做夹心EL ISA试验 ,其中 5个克隆显示较强的阳性结果。将上述 5个阳性克隆 DNA测序 ,序列均为 ACTCATTGGCATCAGTGGAGGCATCATCAGTTTCCTGCTCCTACT,相应的氨基酸序列为 THSHQWRHHQFPAPT。竞争性噬菌体 EL ISA的结果显示大肠杆菌 L PS和伤寒杆菌 L PS均可特异性抑制阳性噬菌体克隆与类脂 A抗体的结合。结论该噬菌体克隆展示肽具有 L PS表位的抗原性 ,且模拟了 L PS的共同部分类脂 A。     

银屑病患者治疗前后血清IL-2、SIL-2R和TNF-α检测的临床意义

银屑病是临床较为常见的一种皮肤病,其发病机理甚为复杂,近年来研究证实,本病存在严重的细胞免疫缺陷,是一种自身免疫缺陷性疾病。本文对42例银屑病患者的血清白细胞介素-2（IL-2）、可溶性白细胞介素-2受体（SIL-2R）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）进行了检测及分析。现将结果报告如下。     

噬菌体表达短肽模拟脂多糖类脂A表位的研究

目的：得到拟类脂Ａ的六肽。方法：用抗类脂Ａ的单克隆抗体筛选噬菌体随机六肽库,经四轮筛选后进行ＥＬＩＳＡ检测,用得到的１５个阳性克隆分别免疫小鼠,并将使小鼠产生抗ＬＰＳ抗体的１０个克隆进行测序,将保守序列进行肽合成。结果：得到保守序列为Ｌｙｓ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ,即ＫＦＳＳＲＸ。固相合成此小肽可与其１Ｂ６抗体结合,且此结合可被ＬＰＳ抑制。结论：此六肽可模拟脂多糖或类脂Ａ表位。