syndecan—1蛋白的表达与肝细胞肝癌恶性表型的研究

目的 探讨syndecan-1蛋白在肝细胞肝癌的表达及与临床病理参数的关系。方法 采用免疫组化ABC法检测syndecan-1在肝细胞肝癌中的表达 。结果 发现在47例肝癌组织中syndecan-1阴性表达28例,其分化不良的肝癌syndecan-1阴性表达率高于分化较好者（分别为78．3％,41．7％,两者相比P＜0．05）;直径＞5cm的肝癌syndecan-1阴性表达率高于直径≤5cm肝癌（分别为81．0％,42．3％,两者相比P＜0．01）;大体或镜下有癌栓者syndecan-1阴性表达率高于无癌栓的肝癌（分别为84．2％,42．9％,两者相比P＜0．01）。syndecan-1的阴性表达与患者血清甲胎蛋白水平及Child分级均无明显的相关性（P＞0．05）。结论 syndecan-1的低表达与肝癌增大、分化程度低、侵袭转移发生等恶性表型相关,可能对这些表型起负调节作用,可视为抑癌基因。     

人肝细胞癌中nm23表达的研究

目的:研究转移抑制基因nm23mRNA在人肝细胞癌中的表达及其意义.方法:应用分子杂交及RT-PCR方法对30例人肝细胞癌中nm23表达进行研究.结果:Northern blot结果表明,阳性带位于0.8Kb处;癌组织、癌旁组织中nm23的表达结果显示:癌组织中有19例表达,癌周肝组织中有3例表达.nm23在肝细胞癌组织中的表达明显高于癌周肝组织(P0.05).结论:nm23基因可能在肝癌形成及转移过程中起调节作用.     

FHIT基因蛋白的表达与肝癌的临床关系

目的　探讨脆性组氨酸三联体 (FHIT)基因蛋白在原发性肝细胞癌 (简称肝癌 )中表达的临床意义。方法　采用免疫组织化学S -P法检测FHIT基因蛋白在 46例肝癌组织及癌旁组织和 10例正常肝组织中的表达。结果　FHIT基因蛋白在正常肝组织及癌旁组织均为阳性表达 ,显著高于在肝癌中的阳性表达率 5 6.5 2 %。FHIT基因蛋白的丢失与肿瘤是否有门静脉癌栓、肿瘤组织分化程度明显相关 (P <0 .0 5 ) ,与肿瘤大小、有无包膜、甲胎蛋白是否阳性、是否感染乙型肝炎病毒、是否合并肝硬化等因素均无明显的相关性。结论　FHIT基因蛋白缺失在肝癌组织中是频发事件 ,且FHIT基因蛋白的缺失和肝癌的临床表现及预后有一定的关联。     

Survivin在原发性肝细胞癌中的表达及其与侵袭、转移的关系

目的 研究Survivin基因在原发性肝细胞癌中的表达水平及其与肝癌侵袭转移的相关性.方法 收集4种肝细胞癌细胞株,35例原发性肝癌组织标本及相应的癌旁组织,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Survivin mRNA转录情况;Western blot法检测Survivin蛋白表达.结果 在mRNA水平4株肝癌细胞株随侵袭转移能力升高Survivin表达依次升高(P＜0.01),HC-CLM6细胞株中Survivin表达水平最高.肝癌组织Survivin mRNA表达均为阳性,而癌旁组织内无一例阳性表达,Survivin mRNA的表达水平在肝内转移组(1.082±0.213)显著高于肝内无转移组(0.799±0.324,P＜0.05).Western blot的结果与RT-PCR结果一致,肝内转移组Survivin蛋白表达(0.892±0.198)显著高于肝内无转移组(0.342±0.237,P＜0.05).结论 Survivin在原发性肝细胞癌中表达,且与侵袭转移等肿瘤的恶性生物学行为有关,Survivin基因高表达可作为判断HCC侵袭性和进展的一个潜在重要指标.     

Pokemon在肝细胞癌及癌旁、癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达

目的检测和分析Pokemon在肝细胞癌及癌旁组织、癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达。方法40例肝癌组织、距癌组织1cm以上的癌旁组织、距癌组织5 cm以上癌以远组织取自肝细胞癌合并乙型肝炎后肝硬化行肝移植患者切除病肝。20例肝硬化组织取自肝硬化行断流手术患者。20例正常肝组织取自健康供体标本。用real-time PCR(实时定量PCR,RT- PCR)法检测Pokemon蛋白mRNA在这些组织中的表达。结果肝癌组织、癌旁组织的Pokemon蛋白tuRNA的表达水平显著高于癌以远组织、肝硬化组织、正常肝组织(P<0.05)。肝癌组织与癌旁组织则差异无统计学意义(P>0.05)。癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织之间差异也无统计学意义(P>0.05)。结论Pokemon在肝细胞癌中存在异常高表达。癌旁组织可能存在着亦有Poke- mon蛋白mRNA高表达的的癌前病变。癌以远组织、肝硬化组织Pokemon蛋白mRNA表达水平与正常肝组织差异无统计学意义。     

RUNX3基因在肝癌组织的mRNA表达水平及其临床意义

目的 探讨RUNX3基因在肝癌组织和癌旁组织的mRNA表达水平及其与临床病理因素的相关性.方法 采用RT-PCR检测RUNX3基因在51例肝癌组织及其癌旁组织的mRNA表达水平,分析RUNX3基因mRNA表达与临床病理因素的相关性.结果 RUNX3基因在51例肝癌组织的mRNA表达量相对值为0.4509±0.0963;在相应癌旁组织的mRNA表达量相对值为0.9147±0.0222;两者差异有显著统计学意义(t=33.6087,P＜0.001).RUNX3基因mRNA表达水平在分化程度、浸润周围组织、癌栓、肝内转移等病理因素方面的差异有统计学意义(P＜0.05).在性别、肿瘤直径、肿瘤部位、癌肿出血坏死、组织分型方面的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RUNX3基因在肝癌组织的mRNA表达水平显著低于在癌旁组织.RUNX3基因mRNA低表达与分化程度、浸润周围组织、癌栓、肝内转移等病理因素相关.RUNX3基因可能是肝癌的一种抑癌基因.     

肝癌组织、外周血细胞磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 mRNA表达的意义

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)mRNA表达对肝细胞肝癌(HCC)及其血液微转移的诊断价值。方法参照甲胎蛋白(AFP)mRNA,半定量与巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测41例HCC、41例癌旁组织、52例非瘤肝组织(41例远离癌灶组织与11例正常肝组织)及67例外周血的GPC3表达。结果半定量PCR显示组织与外周血细胞全部存在GPC3 mRNA表达,HCC、癌旁、非瘤肝组织的表达量分别为78.9±35.5、30.6±21.6、23.8±15.5;而AFP mRNA的表达量依次为61.2±32.6、31.5±23.6、21.2±15.9。各基因在HCC与其他组织中的表达量差异具有统计学意义(P<0.01),以各基因在非瘤肝的相对表达量上限(x-+1.96s)为界,HCC中GPC3 mRNA和AFP mRNA的高表达分别占80.5%与63.4%;至少一个基因高表达HCC达总数的92.7%,与AFPmRNA单独检测差异有统计学意义(P<0.01)。临床病理特征分析发现AFP mRNA与HCC分级及血清AFP浓度有关,GPC3 mRNA表达与HCC分级及侵袭性有关。67例外周血GPC3 mRNA的表达量为15.9±9.0,各类组织中GPC3 mRNA表达均强于相应的外周血表达(P<0.01)。外周血GPC3mRNA表达量在HCC组、非HCC组分别为16.1±8.3、15.6±10.2,组间差异无统计学意义;在HCC转移组、HCC无转移组的表达量各为16.0±9.0、16.3±7.7,组间差异无统计学意义。巢式PCR显示,AFP mRNA表达比率在HCC组与非HCC组各为56.1%、23.1%,组间差异有统计学意义(P=0.011);HCC转移组与无明显转移组各为80.9%、30.0%,组间差异有统计学意义(P=0.002)。结论GPC3 mRNA是潜在的HCC组织诊断指标,与AFP mRNA有明显的互补作用,两者联合检测可提高HCC的阳性检出率;外周血存在GPC3 mRNA的广泛表达,但其与HCC的转移复发无关,不能用于HCC微转移的检测。     

肝癌细胞NFAT2基因启动子区甲基化与其mRNA表达的关系

目的:探讨肝癌细胞中NFAT2基因启动子CpG岛甲基化状态及与其mRNA表达的关系。方法:用重硫酸盐测序法检测肝癌组织与癌旁组织及不同肝细胞系与正常肝细胞中NFAT2启动子甲基化状态,用qRT-PCR检测肝癌组织与癌旁组织NFAT2 mRNA表达,并分析肝癌组织NFAT2启动子甲基化与mRNA水平的相关性。结果:肝癌组织中NFAT2基因CpG岛甲基化率明显高于癌旁组织(33.0%vs.21.6%,P=0.003);人肝癌细胞系HuH7、HepG2、Hep3B中NFAT2基因CpG岛甲基化率分别为34.8%、40.4%、37.0%,均明显高于人正常肝细胞系L02中NFAT2基因CpG岛甲基化率(16.2%)(均P0.05)。肝癌组织NFAT2 mRNA相对表达量明显低于与癌旁组织(0.000 602 4 vs.0.001 469,P0.05),肝癌组织中NFAT2 mRNA水平与其启动子甲基化程度呈明显负相关(r=-0.661,P=0.027)。结论:肝癌细胞中NFAT2基因表达下调可能与其启动子区CpG岛高甲基化状态有关     

长链非编码RNA GAS5在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA中的生长停滞敏感基因5(GAS5)mRNA在肝细胞性肝癌组织中的表达及其临床意义。方法回顾性收集2013年9月至2016年7月期间于重庆医科大学附属第一医院行根治性切除手术、术后病理学检查证实为原发性肝细胞性肝癌的120例患者的癌组织及其癌旁组织,应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测两类组织中GAS5 mRNA的表达,并分析其表达与肝细胞性肝癌患者临床病理学特征的关系,同时探索其对肝细胞性肝癌患者预后的影响。结果肝细胞性肝癌组织中GAS5 mRNA的表达水平低于癌旁组织(P0.01)。GAS5 mRNA的表达与肿瘤直径、肿瘤数量、术前甲胎蛋白(AFP)水平、淋巴结转移、TNM临床分期和肿瘤分化程度均相关(P0.05)。Cox比例风险回归模型结果表明,GAS5 mRNA的表达与预后有关(P0.05)。结论 GAS5 mRNA有望成为肝细胞性肝癌早期诊断和预后判断的标志物。     

人甲胎蛋白增强子驱动自杀基因靶向杀伤肝癌细胞的实验研究

目的 探讨人AFP增强子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷自杀基因系统体内外靶向杀伤肝癌细胞的效应.方法 构建人AFP增强子驱动的pAFP-cDNA3.1-TK自杀基因真核表达质粒;利用脂质体将质粒转染入AFP阳性肝癌细胞株HcpG2和AFP阴性肝癌细胞株SMMC7721;采用RT-PCR和Western blot检测TK mRNA和蛋白表达;MTT检测细胞的存活率;观察丙氧鸟苷对肝癌细胞体外增殖、生长曲线和细胞凋亡的作用,以及丙氧鸟苷体内抑制肿瘤生长的效应.采用t检验分析相关数据.结果 成功构建pAFP-cDNA3.1-TK自杀基因真核表达质粒并转染入肝癌细胞;AFP阳性肝癌细胞株HepG2中能检测到TKmRNA和蛋白表达;丙氧鸟苷呈剂量和时间依赖性抑制转染后肝癌细胞株HepG2的生长并诱导其凋亡;AFP阴性肝癌细胞株SMMC7721中没有TKmRNA和蛋白表达,细胞增殖、生长曲线和凋亡均不受影响,两者比较,差异有统计学意义(t=2.58,2.73,3.12,P＜0.05).丙氧鸟苷可以特异性地抑制转染后肝癌细胞株HepG2治疗组中肿瘤的生长,肿瘤抑制率为46%,而在转染后肝癌细胞株SMMC7721治疗组中,对肿瘤生长无明显抑制作用,两者比较,差异有统计学意义(t=3.36,P＜0.05).结论 人AFP增强子驱动的HSV-TK/丙氧鸟苷自杀基因系统可以靶向杀伤AFP阳性肝癌细胞,抑制肿瘤生长.     

GPC-3 mRNA与GGT联合检测诊断AFP阴性原发性肝细胞肝癌

目的：探讨外周血单核细胞磷酸肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）mRNA联合血浆γ-谷氨酰转肽酶（GGT）检测诊断甲胎蛋白（AFP）阴性原发性肝细胞肝癌（HCC）的价值。方法：采用RT-PCR方法分别检测39例AFP阴性HCC患者、39例非HCC肝病患者及40例健康自愿者外周血单核细胞GPC-3 mRNA的表达;用全自动生化分析仪检测39例AFP阴性HCC患者血浆GGT水平（>58 U/L为阳性）,分析两者单独和联合检测阳性率的差异。结果：39例HCC患者外周血单核细胞GPC-3 mRNA表达检出率为62%（24/39）,而在非HCC的肝病患者及健康对照者外周血单核细胞中GPC-3 mRNA表达均为阴性,特异度达100%;39例HCC患者血浆GGT升高阳性率80%（31/39）。GPC-3 mRNA联合GGT检测的阳性率95%,明显高于两者单独检测的阳性率（均P<0.05）。结论：AFP阴性HCC患者外周血单核细胞中GPC-3 mRNA有较高的特异性表达,GPC-3 mRNA联合GGT检测有助于AFP阴性的HCC早期发现。     

基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子与原发性肝癌侵袭转移关系研究

目的　探讨原发性肝癌中MMP 9和VEGF基因的表达 ,探讨其与原发性肝癌侵袭转移的关系。方法　采用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)技术 ,检测 41例原发性肝癌手术切除肿瘤组织、癌旁组织标本的MMP 9和VEGF基因表达。结果　肝癌组织和癌旁 1cm、5cm组织中分别有 70 7%、48 9%、41 5 %MMP 9表达阳性和 75 6%、5 3 7%、46 3 %VEGF表达阳性 ,癌组织的MMP 9和VEGF表达水平显著高于癌旁 5cm组织 (P <0 0 1) ,癌组织与癌旁 1cm组织MMP 9和VEGF表达水平无显著性差异。癌组织中MMP 9和VEGF的表达水平与有无包膜、门静脉癌栓有显著性差异 (P <0 0 5 )。MMP 9与复发、AFP阳性有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,而VEGF与之无差异。结论　MMP 9和VEGF基因的过度表达与肝癌侵袭转移密切相关 ,MMP 9可作为判断预后的指标     

B超发现的未能扪及的睾丸肿块

探讨对于临床上体检不能扪及而由Ｂ超检查发现的睾丸肿块的诊治方法。对方法对有关病例的超声检查表现及其病理结果进行回顾性分析。结果近１０年来６００多例因子各种原因行阴囊超声检查的患者中,共发现１４例１６处体检未能扪及的睾丸肿块。患者平均年龄４２．４岁,肿块直径平均１２．１ｍｍ,除１例外其余肿块均表现为低回声团块。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3促进肝细胞癌侵袭和转移的初步研究

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）是否能促进肝细胞癌（HCC）侵袭、转移。 方法通过siRNA靶向沉默GPC3在人肝癌细胞Hep3B、HepG2中的表达,慢病毒介导GPC3在人肝癌细胞SMMC-7721和SK-HEP-1中过表达,用于体外细胞功能试验和建立体内裸鼠原位种植瘤模型。Western blotting、qPCR检测GPC3、上皮间质转化（EMT）相关分子N-Cadherin、E-Cadherin、SNAIL、Vimentin和基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-3、MMP-7的表达。 结果过表达GPC3的Hep3B、HepG2细胞株的迁移和侵袭能力显著大于GPC3低表达的SMMC-7721、SK-HEP-1细胞株（P<0.05）;小鼠肝脏原位癌模型显示,过表达GPC3的HCC肝脏转移发生率明显高于GPC3低表达者（P<0.05）。过表达GPC3可以降低E-Cadherin,上调N-Cadherin的表达;干扰GPC3表达后,E-Cadherin表达上调,N-Cadherin表达下调。GPC3过表达可显著上调MMP-2、MMP-3、MMP-7的表达（P<0.05）。 结论GPC3可通过诱导HCC发生EMT和分泌MMPs,促进HCC细胞迁移和侵袭。     

整合素β3与Fas蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的 探讨整合素β3(Integin-β3)和Fas蛋白在胃癌组织中的表达、相互关系及意义.方法 应用免疫组织化学方法 检测48例胃癌组织及12例正常胃黏膜中Integrin-β3和Fas蛋白的表达.结果 胃癌组织中Integrin-β3阳性率显著高于正常胃黏膜(72.9%比25.0%,P＜0.01);正常胃黏膜中Fas蛋白阳性率显著高于胃癌组织(83.3%比33.3%,P＜0.01);Integin-β3阳性率与淋巴结转移、TNM分期显著相关(P＜0.01),而与肿瘤细胞分化程度无相关性(P＞0.05);Fas蛋白阳性率与淋巴结转移、TNM分期及肿瘤细胞分化程度均无相关性(P均＞0.05).胃癌组织中Integrin-β3与Fas表达具有显著等级负相关(r=-0.429,P＜0.01).结论 htegrin-β3的表达与胃癌细胞的浸润与转移密切相关.     

肝癌患者血清中聚糖蛋白3检测的临床意义

目的 探讨血清聚糖蛋白3(GPC3)在肝癌研究中的临床应用价值.方法 应用生物素-链霉亲和素系统亲和力高的特点建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测681份不同人群血清中的GPC3.结果 (1)肝硬化组(42.9%)、肝癌组(41.4%)、肝癌复发组(61.1%)患者血清GPC3阳性率与正常人组(4.1%)及乙肝组(8.6%)差异有统计学意义(P<0.01);肝细胞型肝癌组(HCC)血清GPC3阳性率(45.9%)高于胆管细胞型肝癌组(ICC)(20.9%)(P<0.05);HCC组中直径≤3 cm的小肝癌及AFP≤20μg/L的肝癌血清中GPC3阳性率分别为36.0%、41.9%;AFP≤<20μgs/L且直径≤3 cm的小肝癌患者血清GPC3阳性率为44.4%(4/9).(2)联合血清AFP及GPC3,可将单独应用AFP时提示肝癌复发从77.7%提高到88.9%.(3)结肠癌肝转移病例血清中GPC3的阳性率为28.6%.(4)手术切除术前及术后2～16 d内HCC患者血清中GPC3的变化多样.(5)24例HCC组织GPC3阳性20例,其中血清GPC3阳性率为50%.结论 血清中GPC3的测定作为一种新的肿瘤标志物在肝癌的诊断特别是早期诊断、提示复发、转移及评价手术治疗效果中可能均有一定的意义.     

PTEN与hTERT在肝细胞肝癌中的表达及其相关性研究

目的　研究肝细胞肝癌组织中PTEN与hTERT的表达及其意义 ,并探讨两者在肝细胞肝癌中表达的相关性。方法　应用免疫组织化学 (SP法 )和半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)分析 5 8例肝细胞肝癌及对应癌旁组织中PTEN蛋白及PTENmRNA、hTERT蛋白及hTERTmRNA的表达情况 ,并探讨两者表达的相关性。结果　PTEN蛋白明确定位于肝细胞胞浆内。PTENmRNA和PTEN蛋白在肝细胞肝癌中的阳性率分别为 41.3 8% (2 4/ 5 8)、44 .83 % (2 6/ 5 8) ,明显低于癌旁肝组织的阳性率 10 0 % (5 8/ 5 8) ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。hTERT蛋白主要表达于肝细胞胞浆内 ,偶见核内表达。hTERTmRNA和hTERT蛋白在肝细胞肝癌中的阳性率分别为82 .76% (4 8/ 5 8)和 87.93 % (5 1/ 5 8) ,明显高于癌旁组织中的阳性率 2 4.14 % (14 / 5 8)、2 7.5 9% (16/5 8) ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。相关分析显示 ,PTEN与hTERT在肝细胞肝癌中的表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论　PTEN、hTERT在肝细胞肝癌的发生发展中起重要作用 ,有可能成为肝细胞肝癌的重要分子生物学检测指标 ,且两者表达呈负相关 ,提示PTEN可能在肝细胞肝癌的发生发展过程中对hTERT的活化起着调控作用。     

人类新的肝癌高表达基因HCCA3的克隆、鉴定及其临床病理学意义

目的 克隆新的肝癌相关基因并探索其在肝癌发生发展中的作用机制。方法 采用mRNA差异显示技术，分析肝癌和癌旁组织差异表达基因谱，获得的差异表达基因片断作为探针，筛选胎盘cDNA文库，以获得全长cDNA序列。通过Northern印迹杂交的方法，分析所获得的新基因在42例肝癌组织中的表达情况，并分析其临床和病理学意义。结果 克隆了一个新的肝癌相关基因，命名为HCCA3，该基因的全长cDNA 1706 bp，编码一个264个氨基酸的蛋白质，在人类肝癌中广泛表达(78．6％，33／42)，并与肝癌的浸润转移密切相关。结论 HCCA43是一个新的人类基因，在肝癌中的异常高表达可能对肝癌的发生发展具有重要的促进作用。