HBV宫内感染的传播途径及其机理的研究

目的 探讨HBV宫内感染的传播途径及其机理。方法 应用PCR技术检测HBV感染孕妇羊水、阴道分泌物、乳汁、脐血中HBV DNA；免疫组织化学技术检测胎盘组织中HBsAg和HBcAg的表达。结果 HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性孕妇的羊水、阴道分泌物、乳汁、脐血中均检测到了HBVDNA，阳性率分别为48．28％（14／29）、27．59％（8／29）、37．93％（11／29）和24．14％（7／29）；健康对照组孕妇的上述样品中均未检出HBVDNA；HBV感染孕妇胎盘组织各层细胞均可表达两种抗原，但阳性细胞数目从母体面到胎儿面逐渐减少，阳性细胞的着色强度逐渐减弱。健康对照组孕妇胎盘组织中未发现HBsAg和HBcAg阳性染色细胞。结论 孕妇感染HBV后可通过多种途径传播，而羊水感染是导致胎儿感染的重要传播途径。     

胎盘滋养层细胞的乙型肝炎病毒感染与宫内感染机制

目的：检测HBV对胎盘、胎肝和滋养层细胞的感染情况，探讨HBV的宫内感染机制。方法：研究对象包括20例孕妇胎盘组织、6例引产胎儿胎肝组织及体外培养的胎盘滋养层细胞。ELISA法检测孕妇外周血、胎儿脐血和6个月婴儿外周血HBV标志物；荧光定量PCR法检测血清和滋养层细胞中的HBV DNA；免疫组织化学法和免疫荧光法检测胎盘、胎肝组织及滋养层细胞中HBV标志物的表达；末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口标记法（TUNEL）检测胎盘和滋养层细胞凋亡情况。结果：孕妇血清HBV DNA水平与胎儿脐血HBV DNA水平相关，脐血HBV DNA阳性者其母血HBV DNA〉1.0×10^7拷贝／mL；6例胎盘组织和3例引产胎儿胎肝组织中可见HBsAg免疫组织化学染色阳性细胞，其中1例胎肝组织中发现HBcAg阳性细胞；体外培养滋养层细胞与HBV DNA阳性血清共孵育后，可检测到HBsAg的表达，亦可检测到HBV DNA。体内和体外实验均检测到HBV感染后滋养层细胞凋亡呈增加趋势，且胎盘细胞的凋亡与脐血HBV DNA水平相关。体外实验结果显示，随感染时间的延长，滋养层细胞凋亡呈增加趋势。6个月后，12例新生儿有1例血清HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性，6例抗-HBs阳性。结论：HBV宫内感染的机制可能是通过HBV感染胎盘屏障而使胎儿发生HBV宫内感染。HBV在胎儿组织器官内的定位和复制可能是新生儿发生慢性HBV感染的重要因素。滋养层细胞凋亡可能是胎盘屏障阻断HBV宫内传播的一种保护性机制。     

乙型肝炎病毒e抗原阳性孕妇所生婴儿联合免疫接种后乙型肝炎病毒血清学标志物的动态变化

目的 观察HBeAg阳性且HBV DNA高载量孕妇所生婴儿用乙型肝炎疫苗联合免疫接种后的母婴阻断效果及HBV血清学标志物的动态变化.方法 回顾性分析HBeAg阳性且HBVDNA≥106拷贝/ml孕妇127例,婴儿出生后即刻及第15天于臀大肌注射高效价乙型肝炎免疫球蛋白200 IU,出生时与第1、6个月于右上臂肌肉注射乙型肝炎疫苗20μg,随访其婴儿至12个月龄.用酶联免疫吸附法及荧光定量PcR检测婴儿出生时及第1、7、12个月时的HBV血清学标志物和HBV DNA载量,观察婴儿出生时HBV血清学标志物模式、母婴传播率、疫苗接种后的HBV宫内感染率、抗-HBs阳性保护率及HBV血清学标志物动态变化.结果 127例孕妇分娩婴儿均为单胎,出生时29例婴儿HBsAg为阳性,其中11例合并HBV DNA阳性,母婴垂直传播率为22.83％.随访至1个月,10例婴儿合并HBV DNA阳性从而发生HBV宫内感染,表现为HBsAg、HBeAg及抗-HBc均为阳性.2例婴儿HBsAg弱阳性,伴有抗-HBs滴度的产生,后续随访中均转阴,乙型肝炎宫内感染率为7.87％.非宫内感染婴儿出生时HBeAg及抗-HBc阳性率分别为96.58％和98.29％,免疫接种后婴儿HBeAg及抗-HBc逐步转阴,均未产生抗-Hbe.非宫内感染婴儿均产生有效乙型肝炎保护性抗体,乙型肝炎疫苗及高效价乙型肝炎免疫球蛋白联合免疫接种后,婴儿抗-HBs滴度从出生至12个月龄逐步上升,母源性HBeAg滴度逐步下降以至转阴.结论 乙型肝炎疫苗联合高效价乙型肝炎免疫球蛋白免疫接种能明显降低HBV母婴传播,增强婴儿乙型肝炎表面抗原保护性抗体,体内母源性HBeAg及抗-HBc亦随之降低甚至转阴.     

死胎胎盘组织中HBcAg表达的临床和病理研究

观察乙型肝炎病毒在胎盘、肝组织中的表达和引起胎盘组织的病理改变情况。采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎，常规尸检，取胎盘、肝组织，SP法检测HBsAg，常规病理观察；回访婴母产前静脉血HBV的检测结果。HBcAg阳性颗粒在死胎胎盘的蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞、绒毛毛细血管内皮细胞浆、血管中呈点、灶关分布，细胞的核不着色。HBV呈单项阳性、小三阳、大三阳的婴母分娩的死胎胎盘组织中HBcAg阳性率；死胎胎盘的蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞、绒毛毛细血管内皮细胞中HBcAg阳性率，彼此比较，差异不显著（P＞0．05）。死胎胎盘绒毛发育迟缓、慢性绒毛炎、单脐动脉的发生经；HBV呈单项阳性、小三阳、大三阳的婴母分娩的死胎肝组织中HBcAg阳性率，彼此比较，差异显著（P＜0．05）。HBV绩婴传播可能还存在一种从母体面向胎儿的细胞转移方式；HBV可以导致胎盘发育不良和屏障功能障碍；死胎胎盘组织中HBcAg阳性经与孕妇HBV静脉中HBV标志无关；胎盘组织中可能存在HBC复制；死胎肝组织中HBcAg阳性表达与孕妇HBV感染状态、静脉中HBV标志有关。     

乙型肝炎病毒低水平复制引起丙氨酸氨基转移酶升高三例

病例1：男，43岁，慢性乙型肝炎，ALT 350IU／L，HBV-M：“HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗-HBc阳性”，HBVDNA3．1×10^5拷贝／ml。给予拉米夫定100mg／d治疗6个月，HBV DNA降至〈5．0×10^5拷贝／ml，ALT复常，HBV—M转为“HBsAg阳性、抗HBe阳性、抗-HBc阳性”；继续治疗1年后仍维持上述结果停药。停药后2个月ALT升高至103IU／L，HBV DNA8．68×10^2拷贝／ml，     

乙型肝炎病毒胎盘垂直传播的机制

目的 研究胎盘组织中HBV感染与胎儿宫内感染的关系.方法 携带HBshg的孕妇,血清HBV DNA阴性12例:血清HBV DNA阳性19例;血清HBV DNA阳性,孕晚期拉米夫定治疗16例;血清HBV DNA阳性,孕晚期免疫球蛋白(HBIG)治疗19例.使用免疫组化与原位聚合酶链反应(In situ polvmerase chain reaction,IS PCR),检测胎盘组织中的HBcAg与乙型肝炎共价环状DNA(HBV covalently closed circular DNA,HBV cccDNA).结果 胎盘绒毛炎发生率与婴儿发生宫内感染率具有明显相关性(P＞0.05);胎盘HBcAg的感染率与婴儿发生宫内感染率之间具有明显的相关性(P＞0.05);治疗后,胎盘HBVccc DNA感染与婴儿发生宫内感染没有显著差异性(P＞0.05).结论 胎盘组织发生炎症,使部分绒毛发生纤维素样坏死,胎盘屏障受损,通透性增加,HBV易通过胎盘屏障感染胎儿;HBcAg在胎盘中的表达,表明HBV感染与复制,是导致宫内感染的危险因素;阻断治疗可能抑制了感染胎盘组织cccDNA复制,使宫内感染的危险性降低.     

定量PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及其临床意义

目的:了解不同临床类型乙型肝炎患者HBV DNA含量并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测163例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,应用ELISA法检测上述患者HBV感染血清免疫学标志物(HBV-M),并对两者进行比较。结果:血清HBV DNA水平在不同乙型肝炎临床类型中无显著性差异(P>0.05);与HBV-M对比,HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性病人的检出率为87.76％,HBsAg、抗-HBe、抗HBc病人的检出率为45.71％,HBsAg、抗-HBc病人的检出率为42.86％,抗-HBc单项阳性病人的检出率亦达40.00％;血清HBVDNA含量与黄疸的程度及转氨酶水平的高低未见相关。结论:提示HBV DNA的复制状态与不同乙型肝炎临床类型无明显相关关系;HBV DNA含量高低与肝功能受损程度亦无相关关系。     

HBsAg和HBcAg融合表达质粒对HBV转基因小鼠的体液免疫治疗效应

目的观察融合表达质粒pcDNA3．1-SC对HBV复制和表达的抑制效果。方法 构建融合表达质粒pcDNA3．1-SC，以100μg肌肉接种C57，BL／6 HBV DNA转基因小鼠，2、4周后各加强免疫1次。然后动态检测小鼠血清抗-HBs、抗-HBc的诱生，以及肝组织HBsAg、HBcAg和血清HBV DNA的消长情况。结果接种后4、8、12周，小鼠血清抗-HBs阳转率分别达到55％、67％和33％；而抗-HBc阳转率低于20％；同时，与接种前相比，肝组织内HBsAg、HBcAg表达和血清HBV DNA水平呈逐渐减弱的趋势，在接种后8周，有1／3的小鼠已不能检出。结论融合表达质粒pcD—NA3．1-SC能够在一定程度上抑制转基因小鼠体内的HBV DNA复制和抗原表达，提示了研制乙型肝炎治疗性DNA疫苗的可能性。     

HBsAg血清转换后乙型肝炎患者的临床与病理特点

目的 观察HBsAg阴转出现抗-HBs后,乙型肝炎患者的临床与病理学特征.方法 收集21例血清HBsAg阴转、出现抗-HBs的乙型肝炎患者,总结其临床特点,苏木精-伊红染色、Masson三色、Gomori网织纤维染色及HBsAg、HBcAg免疫组织化学染色分析肝穿刺组织病理形态特征.结果 21例乙型肝炎患者均有急性肝炎史,无肝炎家族史,血清抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性;其中2例血清HBV DNA检测阳性,分别为4.9×103和2.3×104拷贝/mL;组织学观察18例有轻度慢性炎性反应,15例有轻度纤维化;肝组织中HBsAg、HBcAg免疫组织化学染色均阴性.结论 发生HBsAg血清转换的乙型肝炎患者仍有肝脏炎性反应和纤维化,但病变较轻.     

脐带血乙肝标志物筛查乙肝病毒宫内感染的探讨

目的探讨脐带血乙肝标志物用于筛查乙肝病毒宫内感染的可能性。方法收集175例HBsAg阳性孕妇新生儿脐带血及24 h外周血,进行乙肝标志物和HBV DNA检测,6月龄时随访查外周血HBsAg。结果脐带血HBsAg阳性的新生儿外周血HBV DNA均为阳性,6月龄随访HBsAg阳性率均为100%。7例出生时注射了HBIG和乙肝疫苗的HBV DNA阳性的新生儿HBsAg随访阴转;8例脐带血HBsAg和HBV DNA均阴性的婴儿因直接母乳喂养HBsAg随访阳转。结论脐带血表面抗原可以作为筛查胎儿乙肝病毒宫内感染的指标。     

Mechanism of intrauterine infection of hepatitis B virus

AIM:To explore the possible mechanism of intrauterine infection of hepatitis B virus (HBV).METHODS: HBV DNA was detected in vaginal secretion and amniotic fluid from 59 HBsAg-positive mothers and in venous blood of their newborns by PCR. HBsAg and HBcAg in placenta were determined by ABC immunohistochemistry.RESULTS:The rate of HBV intrauterine infection was 40.1% (24/59). HBV DNA was detected in 47.5% of amniotic fluid samples and 52.5% of vaginal secretion samples respectively.HBsAg and HBcAg were detected in placentas from HBsAg-positive mothers. The concentration of the two antigens decreased from the mother‘s side to the fetus‘s side, in the following order:maternal decidual cells>trophoblastic cells> villous mesenchymal cells>villous capillary endothelial cells. However, in 4 placentas the distribution was in the reverse order. HBsAg and HBcAg were detected in amniotic epithelial cells from 32 mothers.CONCLUSION:The main route of HBV transmission from mother to fetus is transplacental, from the mother side of placenta to the fetus side. However, HBV intrauterine infection may take place through other routes.     

60例孕妇HBV血清标志物水平与母婴传播的关系分析

目的 探讨孕妇乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物水平与母婴传播的关系。方法 采取60例孕妇、脐带、新生儿血清用美国雅培试剂做HBV血清标志物（HBVM）包括：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb定量分析,用荧光定量PCR法测HBV DNA。结果 HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性母亲的新生儿脐血HBV M阳性率91．67％,新生儿血HBV M阳性率85％,母血HBsAg、HBeAg、HBcAb滴度显著高于脐血、新生儿血,且母血、脐血、新生儿血HBV M水平依次降低;HBV DNA阳性率也依次降低,分别为58、33％、10％、6、67％,滴度也依次降低。HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性母亲,HBsAg、HBcAb阳性母亲和单项HBsAg阳性母亲的新生儿脐血、新生儿血HBV M阳性率较低。新生儿血以HBeAg阳性为主,滴度明显高于正常值,HBsAg滴度仅略高于正常值。结论 母婴垂直传播与母亲HBeAg高滴度有密切关系,与母亲HBV DNA阳性或阴性关系并不十分密切。检测脐血和新生儿血HBsAg、HBV DNA阴性并不能排除HBV感染,不如检测HBsAg、HBeAg更有意义,更经济。     

HBsAg阳性孕妇免疫接种阻断HBV宫内感染疗效的Meta分析

目的评价HBsAg阳性孕妇产前应用乙肝免疫球蛋白（HBIG）或联用乙肝疫苗阻断胎儿HBV宫内感染的有效性及安全性。方法计算机检索6个数据库,手检9种期刊,并追查参考文献,纳入国内外符合纳入标准的随机对照试验和半随机对照试验,由两名评价员独立筛查文献,评价质量和提取资料。用Revman 4.2.10软件分析数据。采用χ2检验鉴定研究间异质性,使用固定效应或随机效应模型合并结果。结果HBsAg阳性/HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG总剂量600 IU,胎儿HBV宫内感染率〈空白对照组（RR=0.42,95%CI=0.21-0.83,P=0.01）,新生儿HBV DNA阳性率低于空白对照组（RR=0.30,95%CI=0.10-0.85,P=0.02）,新生儿HBeAg阳性率Anti-HBs阳性率与空白组比较差异无统计学意义;总剂量大于600 IU时,宫内感染率〈空白对照组（RR=0.39,95%CI=0.26-0.58,P〈0.000 01）,新生儿Anti-HBs阳性率与对照组比较差异无统计学意义。HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG总剂量〉600 IU,胎儿HBV宫内感染率、新生儿HBeAg阳性率、新生儿HBV DNA阳性率、新生儿Anti-HBs阳性率与对照组比较差异均无统计学意义;总剂量600 IU组新生儿HBeAg阳性率和新生儿HBV DNA阳性率与对照组比较差异有统计学意义。结论HBsAg阳性/HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG可降低胎儿HBV宫内感染率;HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG阻断宫内感染的疗效尚不清楚。     

Relationship between HBV viremia level of pregnant women and intrauterine infection:neated PCR for detection of HBV DNA

ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＨＢＶｖｉｒｅｍｉａｌｅｖｅｌｏｆｐｒｅｇｎａｎｔｗｏｍｅｎａｎｄｉｎｔｒａｕｔｅｒｉｎｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：ｎｅａｔｅｄＰＣＲｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＨＢＶＤＮＡＺＨＡＮＧＳｈｕＬｉｎ,ＨＡＮＸｉａｏＢ...     

乙型肝炎病毒母婴传播产前免疫阻断的研究

目的评价不同方案乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）预防HBV宫内感染的疗效，探讨其作用机制，并了解其对病毒变异的影响。方法以无症状HBV携带孕妇及其新生婴儿为研究对象，将无症状HBV携带孕妇在产前检查时随机分为HBIG A组：26例孕妇于产前3、2、1妊娠月和分娩前分别肌肉注射HBIG200～400U（HBsAg阳性者注射HBIG200U、HBsAg和HBeAg双阳性者注射HBIG400U）；HBIG B组：29例孕妇于产前3、2、1妊娠月分别肌肉注射HBIG200U；对照组：26例孕妇产前未接受任何特殊治疗。3组均留取孕中期产检时（应用HBIG前）和临产日使用HBIG前后的静脉血标本，新生儿于生后联合免疫前留取外周血，酶免疫测定法（EIA）检测HBV标志，荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HBV DNA以及PCR扩增HBV DNA S基因区片段并测序。结果55例新生儿为HBIG组（A和B）母亲所生，宫内感染率为14．5％，对照组为35．7％（χ^2=4．896，P=0．027）。HBIG A组HBsAg和HBeAg双阳性母亲所生的8例新生儿有3例宫内感染，对照组8例新生儿均有宫内感染（χ^2=7．273，P=0．007）；HBIGB组7例新生儿有5例宫内感染，但差异无统计学意义（χ=2．637，P=0．104）。3组孕妇孕中期血清HBsAg与HBV DNA水平相当，但分娩前HBIG A组孕妇HBsAg及HBV DNA均低于HBIG B组和对照组。HBIG A组新生儿血清抗-HBs检出率为38．5％。3组产妇分娩前均未检测到抗-HBs。HBV S区碱基替代突变率和氨基酸变异数在HBIG组（A和B）和对照组之间差异均无统计学意义。18例宫内感染儿，HBV S区碱基替代突变率和氨基酸变异数在HBIG组（A和B）和对照组之间差异均无统计学意义。结论孕妇产前注射HBIG阻断HBV母婴传播的免疫效果肯定，按HBV携带不同状态使用两种不同剂量HBIG，并于分娩前加用一次，效果更佳；经胎盘使胎儿获得被动免疫是HBIG重要作用机制；无症状携带HBV孕妇产前使用HBIG并未增加HBV S区的变异，HBV S区变异并非是发生宫内感染的主要原因。     

Effect of hepatitis B immunoglobulin on interruption of HBV intrauterine infection

AIM: To evaluate the efficacy of hepatitis B immunoglobulin (HBIG) in interrupting hepatitis B virus (HBV) intrauterine infection during late pregnancy.METHODS: We allocated 112 HBsAg positive pregnant women into 2 groups randomly. Fifty seven cases in th HBIG group received 200 IU (unit) HBIG intramuscularly every 4 wk from the 28 wk of gestation to the time of delivery, while 55 cases in the control group received no special treatment. HBsAg, HBeAg, HBcAb, HBeAb, HBsAb and HBV DNA levels were tested in the peripheral blood specimens from all of the mothers at 28 wk of gestation, just before delivery, and in blood from their newborns within 24 h before administration of immune prophylaxis.RESULTS: The intrauterine infection rate in HBIG group and control group were 10.5% and 27.3%, respectively, with significant difference (P<0.05). It showed ascendant trend as HBV DNA levels in the peripheral blood increased before delivery.CONCLUSION: HBIG is potent to cut down HBV intrauterine infection rate significantly when administered to pregnant women regularly during late pregnancy. The possibility of HBV intrauterine infection increases if maternal blood HBV DNA≥10^8 copies/mL.     

孕期干预阻断乙肝病毒母婴垂直传播效果评价

目的　探讨孕期干预治疗阻断乙型肝炎病毒母婴垂直传播的效果。方法　将 6 0例 HBs Ag/ HBe Ag阳性孕妇分成治疗组 31例 ,对照组 2 9例。治疗组均在孕 2 6周起开始注射乙肝免疫球蛋白 (HBIG)及外用左旋咪唑涂布剂 ,采用 EL ISA法检测孕妇和新生儿血清 HBs Ag、HBAb、Hbe Ag、HBe Ab、HBc Ab,用 PCR电泳和 RT-PCR法测定 HBV- DNA及全长型和顿挫性转录体。分析母婴之间乙肝病毒分子水平上的关系。结果　新生儿外周血中 HBs Ag阳性者 2例 ,宫内感染率为 6 .4 5 %。对照组 4例 ,宫内感染率 13.7%。与对照组比较差异有显著性。 (P<0 .0 1) ,两组都有超过一半的患儿携带顿挫型病毒转录体。结论　携带 HBV孕妇于孕晚期给 HBIG和左旋咪唑涂布剂联合治疗后 ,可有效降低婴儿 HBs Ag和 HBV- DNA携带率     

Relationship of hepatitis B virus infection of placental barrier and hepatitis B virus intra-uterine transmission mechanism

AIM： To explore the mechanism of intra-uterine transmission, the HBV infection status of placental tissue and in vitro cultured placental trophoblastic cells was tested through in vivo and in vitro experiments. METHODS： A variety of methods, such as ELISA, RT- PCR, IHC staining and immunofluorescent staining were employed to test the HBV marker positive pregnant women＇s placenta and in vitro cultured placental trophoblastic cells. RESULTS： The HBV DNA levels in pregnant women＇s serum and fetal cord blood were correlated. For those cord blood samples positive for HBV DNA, their maternal blood levels of HBV DNA were at a high level. The HBsAg IHC staining positive cells could be seen in the placental tissues and the presence of HBV DNA detected. After coincubating the trophoblastic cells and HBV DNA positive serum in vitro, the expressions of both HBsAg and HBV DNA could be detected. CONCLUSION： The mechanism of HBV intra-uterine infection may be due to that HBV breaches the placental barrier and infects the fetus.