4种神经功能评分法在大鼠局灶性脑缺血模型中的比较研究

目的：对比研究前肢踩空实验、Longa 5分、Ludmila Belayev 12分及提尾悬空摇摆实验（EBST）4种神经功能评分法在大鼠缺血性卒中模型恢复期的适用情况。方法 SD 大鼠随机分为大脑中动脉栓塞（MCAO）组与假手术组（Sham）。线栓法制作大鼠MCAO缺血90min后再灌注模型,Sham组插栓至大脑中动脉后立即拔出线栓。于造模后2h,1d,3d,7d,10d,14d,17d,21d,24d,28d采用4种神经功能评分法进行神经功能缺损评估,对评分结果进行统计学分析。结果 MCAO组与Sham组间4种行为学评分比较,前肢踩空实验（ P＜0．05）、Longa 5分（P＜0．01）、Ludmila Belayev 12分（P＜0．01）3种评分法随时间点变化有统计学差异,EBST随时间变化没有统计学差异（ P＞0．05）。对两组间每个时间点的行为学评分进行两两比较结果显示,Longa评分法在7d,10d,14d,17d,21d,24d,28d没有统计学差异（P＞0．05）,EBST在21d,24d,28d没有统计学差异（P＞0．05）。结论前肢踩空实验、12分评分法均能较好地评估大鼠MCAO模型慢性恢复期神经功能缺损情况。 Longa评分、EBST不能有效评估大鼠MCAO模型慢性恢复期神经功能缺损情况。     

远隔缺血后适应对脑缺血/再灌注损伤保护作用的研究

目的 研究远隔缺血后适应（remote ischemic postconditioning,RIPostC）对脑缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）梗死体积及神经功能的影响.方法大鼠缺血2 h再灌注,即刻进行RIPostC 3个循环.神经功能评分采用Longa评分法、前肢踩空试验和12分评分法3种方法分别在脑缺血后8、24 h,3、7、14和30 d进行神经功能评分,并留取脑组织标本,进行苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色,计算脑梗死体积;部分大鼠应用头颅磁共振成像扫描进一步明确了大鼠的脑缺血状况.结果 Longa评分显示,与对照组相比,RIPostC组大鼠在7 d的神经功能评分降低,但差异无统计学意义;前肢踩空试验和12分评分法结果均显示：与对照组相比,RIPostC组大鼠3 d和7 d的神经功能评分显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）.脑梗死体积分析显示,RIPostC组与对照组相比,RIPostC组大鼠在脑缺血再灌注损伤后8和24 h、3和7 d的脑梗死体积均明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）.结论 RIPostC可以减少大鼠脑缺血后8和24 h、3和7 d的脑梗死体积,改善脑缺血后3d和7d的神经功能评分,具有神经保护作用.     

线栓法大鼠脑缺血再灌注损伤模型的实验研究

目的:探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)损伤模型的建立及其稳定性评价,以及再灌注时间对脑梗死体积的影响。方法:SD雄性大鼠70只,随机分为假手术组(n=5)及MCAO/R组(n=65),MCAO/R组用改良的Zea-Longa法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,观察大鼠神经功能缺损,采用Longa评分法对大鼠神经行为学进行评分。分别于再灌注3 h、6 h、12 h、24 h、2 d、3 d、5 d、7 d后断头处死大鼠,取脑组织0.2%TTC染液进行染色。测量不同时间组脑梗死体积百分比,比较各组间大鼠神经功能缺损及脑梗死体积百分比。结果:MCAO/R组大鼠造模稳定性可达86.95%;与假手术组比较,MCAO/R组大鼠均出现神经功能缺损,脑梗死体积百分比在6 h组逐渐增大,3 d组达到高峰,5~7 d组下降。结论:线栓法制作大鼠脑局部缺血再灌注损伤模型是一种稳定性好、可重复性高的造模方法;随再灌注时间的延长脑梗死体积百分比先逐渐增大,而后逐渐减小。     

莫诺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经功能的影响

目的观察中药山茱萸的有效成分莫诺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经功能的影响。方法Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、莫诺苷小剂量组(30 mg/kg)、莫诺苷中剂量组(90 mg/kg)、莫诺苷大剂量组(270 mg/kg)、维生素E(VE)(35 mg/kg),采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血30 min后再灌注3 d,应用Zea Longa法、爬网格、平行木、吊绳、Ludmila Belayev 12分评分法,观察莫诺苷对神经功能缺损的改善作用。结果与模型组比较,莫诺苷给药组(小、中、大剂量)Zea Longa法评分均差异极显著(P0.01);与模型组比较,莫诺苷给药组(小、中、大剂量)吊绳法评分均差异极显著(P0.01);Ludmila Belayev 12分评分法评分与模型组比较,莫诺苷大剂量组差异极显著(P0.001),中剂量组差异极显著(P0.01)。结论莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠有改善行为学评分的作用。     

缺血后适应对大鼠缺血再灌注损伤时Bcl-2及GAP-43表达变化的影响

目的 观察缺血后适应对大鼠缺血再灌注损伤时Bcl-2和GAP-43表达变化的影响.方法 50只成年健康雄性SD大鼠随机分为缺血2h再灌注组（n=25）、缺血4.5 h后适应组（n=25）.线栓法制备大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,Lumila Belayev12分、Zea Longa5分和悬吊实验术后24 h进行神经功能评分,TTC法染色后测量脑梗死体积,免疫组织化学方法和Western Blot检测Bcl-2及GAP-43蛋白.结果 与缺血2h再灌注组相比,缺血4.5 h后适应组神经功能评分和脑梗死体积差异没有统计学意义（P＞0.05）.缺血4.5 h后适应组Nogo-A表达降低,GAP-43表达增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 缺血后适应能够改善神经功能损伤,减小脑梗死体积,增加GAP-43的表示以及减少Nogo-A的表达,对缺血的脑组织起保护作用.     

大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型改良的实验研究

目的通过对大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型神经功能缺失评分的计算和脑梗死体积的测量,评价改良的大鼠MCAO再灌注模型,为实验研究提供可重复性好、稳定可靠的动物模型。方法20只SD大鼠随机分为A、B两组,A组用头端烧制成圆球的传统"圆头线栓",B组采用头端用万能胶包裹成梭形膨大的改良"梭头线栓"制作大鼠MCAO模型,阻断大脑中动脉血供3h后将"线栓"拔出,造成再灌注损伤。采用"盲法"分别于再灌注10min和再灌注24h对大鼠进行神经功能缺失评分;再灌注24h后处死大鼠,脑切片TTC染色,数码相机照相,采用图像分析系统测量脑梗死体积比;根据统计结果评价改良的MCAO再灌注模型,分析MCAO再灌注后神经功能缺失评分与脑梗死体积比之间的关系。结果B组大鼠脑梗死体积比大于A组(P<0.01);B组大鼠脑梗死体积比明显较A组稳定,变异系数(coefficient of variation,CV)分别为CVB=0.12,CVA=1.08);再灌注10min和再灌注24h对大鼠进行神经功能缺失评分,B组评分均高于A组(P<0.05);MCAO再灌注模型大鼠神经功能缺失评分与脑梗死体积比的大小成线性相关关系(r=0.873,P<0.01)。结论采用改良的"梭头线栓"制作MCAO再灌注模型,神经功能缺失评分和脑梗死体积比变异度小、稳定性高,是可靠的制模方法;神经功能缺失评分能反映脑梗死的严重程度,可用作评价药物疗效的指标。     

雌激素预处理减轻双侧卵巢切除大鼠脑缺血再灌注损伤程度

目的 研究雌激素预处理对双侧卵巢切除大鼠脑缺血再灌注损伤程度的影响.方法 60只雌性SD大鼠,随机分为三组:假手术组、模型组(MCAO 组)及雌二醇组(E2 MCAO 组),采用线栓法制备双侧卵巢切除大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,脑缺血2 h、再灌注24 h,观察各组死亡率、神经功能缺损评分、脑梗死体积比、雌激素水平并分析比较.结果 与模型组比较,雌二醇组的死亡率、神经功能缺损评分、脑梗死体积比降低,雌激素水平升高.结论 雌激素预处理能减轻双侧卵巢切除大鼠脑缺血再灌注损伤程度.     

远隔缺血预适应对大鼠局灶性脑缺血后诱导型一氧化氮合酶的影响

目的：研究远隔缺血预适应（ remote ischemic preconditioning,RIPC）对大鼠脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达的影响,以探讨 RIPC 保护脑缺血损伤的相关机制。方法应用线栓法制作大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,将21只健康雄性 SD 大鼠采用数字表法随机分为3组：假手术组（sham,n=7）,MCAO 组（n=7）,RIPC＋MCAO 组（n =7）。在 MCAO 手术前连续3 d,进行远隔肢体缺血预适应处理（双侧股动脉夹闭10 min/放开10 min,每天3次）。在缺血2 h-再灌注24 h 后进行神经功能评分,TTC 染色检测脑梗死体积,采用 Western blotting 方法检测梗死侧脑组织的 iNOS 蛋白表达水平。结果1）在 MCAO 手术过程中,3组实验动物的生理指标均在正常范围内,且组间差异无统计学意义。与 sham 组相比,MCAO 组大鼠再灌注24 h 时神经功能缺损评分显著升高、脑梗死体积明显增大（P〈0.05）。而 RIPC＋MCAO 组大鼠神经功能较 MCAO 组大鼠得到明显改善、脑梗死体积显著减少（P〈0.05）。2）再灌注24 h 时,与 sham 组相比,MCAO 组大鼠脑梗死侧 iNOS 蛋白表达显著增加（P〈0.05）。与 MCAO 组相比,RIPC＋MCAO 组大鼠脑梗死侧 iNOS 蛋白表达显著降低（P〈0.05）。结论 RIPC 处理对大鼠脑缺血损伤具有保护作用,其机制与降低脑缺血大鼠脑内 iNOS 蛋白表达有关。     

大鼠脑缺血模型致不同类型行为学特点及其与梗死体积关系的研究

目的分析线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)脑缺血模型不同类型的行为学特点,以及行为学表现与脑梗死体积之间的关系。方法成年雄性SD大鼠101只,线栓法制作MCAO脑缺血模型,栓塞100 min后再灌注,术后24 h进行磁共振成像(MR)扫描确定梗死部位及梗死灶体积。根据脑梗死部位不同将大鼠分为:皮质梗死组(CIG,n=51)、皮质下梗死组(SIG,n=24)和无梗死组(NIG,n=26)。采用前肢使用不对称测试、前肢放置测试和神经功能缺损程度(NSS)评分等多种行为学评价方法,评价各组大鼠MCAO术后第2天的神经功能缺失症状。并分析不同行为学特点与梗死体积之间的关系。结果在前肢使用不对称测试中,CIG组、SIG组分别与NIG组有统计学差异(q=3.72、3.28,P<0.05),而CIG组、SIG组之间无统计学意义(q=0.44,P>0.05);在肢体放置测试与NSS评分中,CIG组与SIG组、NIG组之间均有显著的统计学差异(q=10.28、12.02;11.48、11.98,P<0.01),而SIG组与NIG组之间均无统计学差异(q=1.74、0.50,P>0.05)。CIG组、SIG组大鼠的脑梗死体积大小与前肢使用不对称、肢体放置、NSS这3种行为学表现之间均无相关性(CIG组:r=-0.087、0.243、-0.226;SIG组:r=0.279、0.010、0.110,P>0.05)。结论制作大鼠MCAO模型可以出现不同的梗死类型,各种类型的行为学表现特点也不完全一样,出现这种差异可能与梗死灶体积的大小无关,而与梗死类型有关。     

大鼠实验性脑缺血耐受模型的建立与评价

目的建立大鼠大脑中动脉局灶性缺血再灌注及缺血耐受模型,探讨该模型的应用价值。方法将84只Wistar大鼠随机分成预缺血＋再缺血（IP＋MCAO）组：预缺血10min后分别于再灌注1、3、7、14、21d后给予2h大脑中动脉阻塞,然后再灌注22h后处死;假手术＋再缺血（SS＋MCAO）组：假手术代替预缺血,在假手术后按前述不同时间点给予2h大脑中动脉阻塞,然后再灌注22h后处死;假手术对照（SS＋SS）组：两次均为假手术。模型建立后通过神经功能评分、TTC染色测定脑梗死体积、苏木精-伊红染色观察病理改变对模型进行评估。结果IP＋MCAO组预缺血后3、7d神经功能评分与SS＋MCAO组相比较,差异有显著意义（t=4.025、2.683,P〈0.05）;IP＋MCAO组预缺血后1、3、7d脑梗死体积与SS＋MCAO组比较明显减小,差异有显著意义（t=8.940～10.554,P〈0.05）。结论线栓法制备脑缺血耐受模型切实可行,具有一定的应用价值。     

EFFECTS OF TRANSCRANIAL MAGNETIC STIMULATION ON MOTOR CORTICAL EXCITABILITY AND NEUROFUNCTION AFTER CEREBRAL ISCHEMIA-REPERFUSION INJURY IN RATS

Objective To clarify the effects of repetitive transcranial magnetic stimulation （rTMS） on rat motor cortical excitability and neurofunction after cerebral ischemia-reperfusion injury. Methods After determined awake resting motor threshold （MT） and motor evoked potentials （MEPs） of right hindlimbs, 20 Sprague-Dawley rats were subjected to middle cerebral artery occlusion （MCAO） reperfusion injury, then rTMS were applied to rTMS group （n = 10） at different time, while control group （n = 10） received no stimulation. A week later, MT and MEPs were evaluated again, as well as neurological deficits and infarct volume. The effects of rTMS and MCAO reperfusion injury on these parameters were analyzed. Results： After MCAO reperfusion, both MT level and neurological deficit scores increased, distinct focal infarction formed, and latency of MEP elongated. Compared with the control group, the increased extent of MT and neurological scores of rats receiving rTMS were significantly lower （P〈 0.05）, as well as the infarct volumes reduced significantly（P 〈 0.05）. But MEP was not affected by rTMS obviously. There was a positive linear correlation between postinjury MT and infarct volume （r = 0.64, P 〈 0.05）. Conclusion rTMS may facilitate neurofunction recovery after cerebral ischemia-reperfusion. Postinjury MT could provide prognostic information after MCAO reperfusion injury.     

电针上调δ阿片受体的表达减轻大鼠急性缺血性脑损伤

目的：探讨δ-阿片受体（delta—opioid receptor，DOR）在电针抗急性脑缺血损伤中的作用。方法：51只大鼠随机分为假手术组、假电针组、模型组、电针组、DOR拮抗剂＋电针组。除假手术组外，其余各组均用大脑中动脉线栓法致大鼠局部脑缺血并行再灌注。电针干再灌注时开始．持续30min。再灌注24h后检查神经功能缺损程度、脑梗死体积。另取12只大鼠分为假手术组、模型组、电针组和DOR拮抗剂＋电针组．蛋白印迹法检测脑组织中DOR蛋白的表达。结果：与模型组、假电针组比较，电针组脑梗死体积减小（P〈0．05），神经功能缺损评分增加（P〈0．05）。电针组60kD的DOR蛋白表达较模型组增加（P〈10．05），36kD的DOR蛋白表达有增加趋势，但差异无统计学意义。DOR拮抗剂＋电针组脑梗死体积、神经功能缺损评分与模型组和假电针组比较，差异无统计学意义．DOR蛋白表达和模型组比较。差异亦无统计学意义。结论：电针通过增加DOR的表达减轻缺血性脑梗死和神经功能缺损。     

大鼠局灶性缺血预处理诱导的脑缺血耐受研究

目的　观察局灶性缺血预处理所诱导的脑缺血耐受现象及其存在的时间窗。方法　 86只 SD大鼠随机分为 PC、PC+ MCAO及 SS+ MCAO三组 ,分别给予 10 min大脑中动脉缺血预处理 ( PC)、PC+ 2 h大脑中动脉阻塞 ( MCAO)及假手术 ( SS) + 2 h MCAO,其中后两组又据 PC与 MCAO间隔不同分为 1d,3 d,7d,14d,2 1d,2 8d 6个亚组 ,MCAO后 2 4h处死 ,比较各组神经功能评分、梗死体积、含水量及组织病理变化。结果　单纯 PC不引起神经功能缺损及梗死形成 ;MCAO前 1～ 2 8d给予 PC组神经功能缺损均轻于 SS组 ( P<0 .0 1) ,其中 3 d组最明显 ;MCAO前 1～ 14d给予 PC者较 SS组梗死体积缩小 ( P<0 .0 5 ) ,尤以 3 d及 7d组明显 ,分别减小 5 3 .7%和49.9% ( P<0 .0 1) ;MCAO前 3 d给予 PC组脑含水量低于 SS组 ( P<0 .0 5 )。结论　 10 min大脑中动脉预缺血不会引起神经损害但已足以诱导缺血耐受的产生 ;缺血耐受作用出现于 PC后 1d,其后 14d内给予 MCAO均可使梗死体积减小 ,而对神经功能的保护作用持续时间更长 ,至少可达 4周     

基于扩散张量成像初探苍艾挥发油对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

  目的  利用MRI扩散张量成像技术研究经鼻吸入苍艾挥发油对大鼠脑缺血再灌注损伤模型的神经保护作用。  方法  24只健康成年雄性 SD 大鼠,按照随机分配原则,分为假手术组、中动脉阻闭再灌注（middle cerebral artery occlusion, MCAO）组和苍艾挥发油（volatile oil of Cang Ai, VOCA）组。采用Zea Longa评分于造模后即刻和造模后第7天对各组大鼠神经功能损伤程度进行评估。用 7.0T磁共振对3组大鼠在造模成功后3 h、3 d、7 d行冠状位扩散张量成像（diffusion tensor imaging, DTI）扫描,对最大梗死层面的纹状体区和运动平层区DTI的表观扩散系数（apparent diffusion coefficient, ADC）和各向异性分数（fractional anisotropy, FA）进行测量,然后计算相对表观扩散系数(rADC)和相对各向异性分数（rFA）。造模7 d后采用 TTC 染色法对各组大鼠脑梗死体积进行评估,并对rFA、rADC与神经功能缺损评分进行相关性分析。  结果  假手术组苏醒后无神经功能缺损,MCAO组与VOCA组均有不同程度神经功能缺损,造模后7 d时VOCA组神经功能缺损评分小于MCAO组（P<0.05）。DTI扫描结果显示,造模后3 h以及3 d,VOCA组大鼠纹状体rADC值均高于MCAO组（P<0.05）,7 d时3组无明显差异（P>0.05）。VOCA组运动皮层区rADC值在造模后3 h高于MCAO组（P<0.01）,3 d、7 d时差异无统计学意义。VOCA组纹状体rFA值在造模后3 d和7 d均高于MCAO组（P<0.05）。MCAO组与VOCA组大鼠运动皮层区rFA值在3个时间点的组间差异均无统计学意义。TTC染色结果显示假手术组无梗死区,VOCA组脑梗死体积小于MCAO组（P<0.05）。相关性分析显示MCAO组和VOCA组大鼠纹状体rFA值（r=?0.847）、运动皮层rADC值（r=?0.647）、运动皮层rFA值（r=?0.660）与神经功能缺损评分均呈明显相关性（P<0.05）。  结论  VOCA在脑缺血再灌注后能有效通过降低缺血区细胞的毒性水肿及加快神经纤维束恢复来保护MCAO大鼠的神经功能。rFA、rADC值可作为评价脑缺血再灌注后神经功能恢复的有效指标。     

红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后神经元保护作用

目的 观察促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）对大鼠脑缺血再灌注后的梗死体积及神经功能缺损评分的影响。方法 线栓法复制大鼠左侧中动脉缺血再灌注模型，缺血2h，于再灌注开始时经腹腔注入重组人促红细胞生成素（3000U／kg），再灌注后2h，12h，24h，48h，72h，7d及10d测定大鼠神经功能缺损评分后，断头取脑，用2％氯化三苯基四氮唑（TTC）标记梗死体积。结果 对照组缺血再灌注后2h已经出现梗死灶，随着时间的延长，梗死灶体积逐渐增大，24h时梗死体积最大。EPO治疗组与相应时间点对照组相比，梗死灶体积明显缩小（P〈0．05），神经功能缺损评分明显减少（P〈0．05）。结论 24h时达最大，EPO能使梗死灶体积明显缩小、神经功能缺损评分明显减少，对损伤神经元有保护作用。     

人脐血干细胞对局灶性脑缺血大鼠神经生长因子水平及神经功能的影响

目的探讨经静脉移植脐血干细胞治疗大鼠脑缺血模型的疗效以及对其神经功能恢复的影响。方法 LudmilaBelayev法建立大鼠大脑中动脉闭塞梗塞模型,33只大鼠随机数字表法分成生理盐水组、依达拉奉组和移植组。分别在造模1 d后经尾静脉注射生理盐水、依达拉奉和脐血干细胞进行观察。结果造模前3组血清NGF(OD值)比较差异无统计学意义(P>0.05);造模后3～40 d,依达拉奉组和脐血干细胞组血清NGF(OD值)水平下降较生理盐水组差异有统计学意义(P<0.05);而在治疗后的7、14、21、28、40 d,脐血干细胞组血清NGF(OD值)水平明显高于依达拉奉组(P<0.05)。与此同时,造模前3组神经功能评分均为0分,治疗后3组神经功能评分均有所提高,其中依达拉奉组和脐血干细胞组较生理盐水组差异有统计学意义(P<0.05);而依达拉奉组和脐血干细胞组比较,治疗后的第3、5、7 d神经功能评分差异无统计学意义(P>0.05);但治疗后的第14、21、28、40天,脐血干细胞组的神经功能评分优于依达拉奉组(P<0.05)。结论实验提示经静脉移植的脐血干细胞可迁移至大鼠局灶缺血侧脑组织,提高大鼠神经生长因子水平,并显著改善大鼠神经系统功能。     

高血压大鼠脑缺血再灌注损伤的观察

目的：观察大鼠脑缺血再灌注损伤。方法：选ＳＤ 大鼠,制备肾血管性高血压大鼠（ＲＨＲ）,以线栓法复制大脑中动脉梗阻（ＭＣＡＯ） ３ ｈ 后再灌注２１ ｈ（Ａ 组）;ＭＣＡＯ６ ｈ 后再灌注１８ ｈ（Ｂ组）;ＭＣＡＯ２４ ｈ（Ｃ组）。于ＭＣＡＯ 后６ ｈ 及２４ ｈ 进行神经功能障碍评分,ＴＴＣ染色后以图像分析技术测脑梗塞体积。结果：Ａ 组大部分动物无神经功能障碍及梗死灶出现;Ｂ、Ｃ两组均全部出现不同程度神经功能障碍及梗死灶,且Ｂ组较Ｃ组更严重,具有显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）。结论：高血压大鼠线栓法脑缺血６ ｈ 后再灌注１８ ｈ 可引起显著的再灌注损伤