乙酰胆碱酯酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳已广泛用于蛋白质的检定,也是检查乙酰胆碱酯酶(AChE)纯度的方法之一,其凝胶电泳条可用考马斯亮兰使蛋白质染色。本文将组织化学酶活性染色法应用于凝胶条,并在此基础上又试验了凝胶条上膦酰化及重活化AChE的处理及染色方法,取得良好效果。     

制备电泳中蛋白质区带定位与染色方法的比较

制备电泳中蛋白质区带定位与染色方法的比较张津辉蒋中华陈惠鹏军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和非解离聚丙烯酰胺凝胶电泳（非解离ＰＡＧＥ）在实验室中常用于制备少量天然或重组蛋白质以供研究其理化性质和...     

中药壁虎及其伪品蜥蜴的凝胶电泳鉴别

目的 目前中药壁虎以假充真现象较多，为了探求更便捷，准确的壁虎与伪品蜥蜴的鉴定方法，以探讨其古方中分部位用药的相关实验依据。方法 利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(SDS—PAGE)，观察壁虎及其伪品蜥蜴的电泳迁移率，并且对比其躯干，头，足及尾部等部位蛋白电泳区带的差异。结果 经实验鉴别，壁虎与蜥蜴的电泳图谱差异显，各有其特有谱带；而且同一样品的不同部位之间谱带亦有区别。结论 SDS—PAGE图谱可以做为壁虎及其伪品蜥蜴的有效鉴别依据，在古方中将动物分成各部位来用药的机理有进一步探究的必要。     

银染法聚丙烯酰胺凝胶电泳在抗c—myc基因核酶体外切割？…

目的：验证银染法聚丙烯酰胺凝胶电泳在抗ｃ－ｍｙｃ基因核酶体外切割活性测定中的应用。方法：针对ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分序列，设计并构建抗ｃ－ｍｙｃ基因核酶和靶ＲＮＡ体外转录载体。体外转录生成核酶和靶ＲＮＡ分子，进行切割反应后经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染法显色判定结果。结果：银染法聚丙烯酰胺凝胶电泳表明，所设计的核酶可有效地切割靶ＲＮＡ分子。结果：银染法聚丙烯酰胺凝胶电泳用于核酶体外切割活性的测     

重组人肝细胞生成素的理化性质研究

目的 :研究重组人肝细胞生成素 (hepatopoietin ,HPO)的理化性质。方法 :在大肠杆菌中表达的人HPO ,经凝胶过滤和离子交换柱层析进行纯化 ;通过还原型SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)、非还原型SDS PAGE及基质辅助激光解析飞行时间质谱 (MAIDI TOF MS)等方法分别测定了人HPO的相对分子质量 ;采用等电聚焦电泳测定了人HPO的等电点 ;采用内源荧光光谱和圆二色光谱法研究了人HPO的稳定性。结果与结论 :复性后的重组人HPO主要以双体形式存在 ,其相对分子质量为 30 0 0 0 ,等电点在 5.2～ 6 .0之间。在 70℃以下、pH 2 .6以上 ,人HPO分子内部构象基本不变     

HPCE TOF—MS和ESI—MS法研究重组人白细胞介素—2的质量

目的：建立测定重组人白细胞介素－2（IL－2）表达的正确性、产物的纯度和均一性的方法。方法：采用了高效毛细管电泳（HPCE）、时间飞行质谱（TOF－MS）和电喷雾质谱法（ESI－MS）。结果：IL－2样品中存在相对分子量约为15745－15795的杂质，其主成分IL－2在表达和纯化过程中被修饰，其相对分子量比理论值增加了143．8％。结论：HPCE、TOF－MS和ESI－MS法有正交互补性，测定结果可相互印证，质谱法是纯度测定的一种重要工具。     

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳三种银染方法比较

目的　探讨DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)三种银染方法的特点及其适用性。方法　采用非变性PAGE垂直板对不同稀释度的 pBR 32 2MspⅠ分子量标准进行电泳分离 ,利用二种硝酸银染色法和一种银氨染色法染色 ,分析其灵敏度和噪声。结果　分子量Marker的所有条带都能染出灵敏度均为 2 5ng。在至少一个条带能染出的灵敏度方面 ,银氨染色法 ( 6 .2 5ng)低于其他两种方法。结论　时间方面Carlos等所建立的银染方法最快 ,仅需 2 0min。银氨法的噪声最低 ,结果易于保存。Brant等所建立的银染方法在实际应用中不占优势     

家兔、豚鼠和小鼠SIgA及抗IgA的制备与纯化

用高速离心、葡聚糖凝胶G200层析和制备电泳等法,从家兔、豚鼠和小鼠初乳制备出三种动物的SIgA。家兔和豚鼠SIgA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显示两条区带,交叉对流免疫电泳分析表示两条带同属IgA。小鼠SIgA PAGE仅显示一条带。用所获SIgA分别制备绵羊抗三种动物SIgA血清,血清经自行设计的不同组分吸收原固相免疫吸附剂吸收后,免疫电泳时抗体与乳清仅显示一条沉淀弧,对IgA专一,对其它Ig无交叉反应。     

牛小脑γ-氨基丁酸受体的溶液化及其纯化

牛小脑突触膜GABA受体经非离子型去垢剂(Nonidet P40)溶液化和超滤分离后于4℃冰箱或0℃放置5天左右,其[~3H]-GABA特异结合活性(cpm/mg蛋白)较膜结合GABA受体提高115倍,该结合活性至少可维持20天。根据该蛋白与[~3H]-GABA特异结合的可饱和性、可逆性、高亲和部位的存在及其配基专一性等,表明它仍具备膜结合GABA受体的特征。该受体蛋白不具有[~3H]-氟硝基安定的结合活性,在7.5%聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一染色区带,等电点5.2左右,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两种亚基,主要亚基为4.4万道尔顿。对该受体蛋白的理化性质及分子量大小进行了初步观察。     

三种方法纯化生物工程抗体片段的比较

比较3种不同纯化体系纯化生物工程抗－HBsFab的效率和效果，寻求高效，经济的生物工程产品批量纯化方法，采用增菌发酵抗－HBsFab阳性克隆，超声破菌法制备Fab上清，分别缓冲平衡抗Fab -Sepharose亲合胶，链球菌蛋白G（prot.G)-Sepharose胶和Ni-NTA离子螯合胶，对Fab上清进行过柱纯化，紫外光检测目的蛋白得率，SDS－PAGE鉴定产物的纯度并用HBsAg包被ELISA检测其生物活性，结果显示，等容积不同类别的胶体对目的蛋白的纯化效率依次为：Ni-NTA离子螯合胶＞prot.G-Sepharose胶＞抗－FabSepharose亲合胶；在各胶体饱和结合能力之内，3种方法中获高纯度产品，在SDS－PAGE中呈现单一区带：HBsAg包被ELISA检测结果为3种方法纯化制备的Fab在抗原结合能力上未显示明显差别，提示，3种纯化方法各有优势和应用限制，Ni-NTA法在经济性，实用性和纯化效率上明显优于其他两种方法。     

幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合表达产物的初步纯化及其在小鼠体内免疫效应活性分析

目的 :探讨幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白的免疫生物学活性。方法 :采用亲和层析、离子交换和凝胶过滤对幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白进行初步纯化 ,用粗纯化蛋白对小鼠进行免疫 ,然后分析其免疫活性。结果 :采用亲和层析或离子交换和凝胶过滤后 ,融合蛋白的纯度分别可达到 6 5 .6 %和90 .2 %。该融合蛋白可诱导小鼠产生抗幽门螺杆菌的胃肠黏液IgA和血清IgG抗体 ,并促使免疫小鼠脾脏T淋巴细胞CD4 CD8 比值的增加。结论 :重组热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白可以诱导在未来免疫预防中起积极作用的免疫应答反应     

西藏地区新分离环状病毒基因组特性研究

目的：对从西藏地区新分离的环状病毒（Ｔｉ３０１０株）进行分类和鉴定。方法：从病毒感染的ＢＨＫ１３单层细胞中提取病毒基因组ＲＮＡ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析ＲＮＡ的耐ＲＮＡ酶特性和基因组ＲＮＡ特征。结果：ＲＮＡ抵抗ＲＮＡ酶消化,基因组ＲＮＡ由１０个片段组成,带形分布为３－３－２－２,相对分子质量范围在（０．７２～３．１８）×１０６,总相对分子质量为１６．８４×１０６。结论：结合该病毒的一些生物学性状,显示了西藏地区特殊生态环境下新分离病毒的独有特征,Ｔｉ３０１０可能是环状病毒属的一个新成员。     

Radiolytic breakdown of sodium iodide (131I) in sodium iodide (131I) capsules

Sodium iodide (131I) capsules are widely used for both diagnosis and therapy. The radiochemical purity of both diagnostic and therapeutic capsules in use in Australia was studied by gel chromatography, high voltage electrophoresis and paper chromatography. It was found that in two of the three bands of therapeutic capsules examined, significant quantities of a labelled high molecular weight component was produced with the result that these capsules failed to meet British Pharmacopoeia, BP, and United States Pharmacopoeia, USP, requirements for radiochemical purity well before their quoted expiry time. The nature of the impurity has not been identified but it is thought to be either iodinated gelatin or an iodinated capsule component.     

基因工程人抗角蛋白抗体对角质形成细胞增殖的影响

目的：研究一株基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体在无血清培养的角质形成细胞中的免疫学活性，观察其对角质形成细胞增殖的影响。方法：利用从噬菌体抗体库中筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的质粒转化大肠杆菌，异丙基-D-硫代半乳糖苷(Pm)诱导表达出Fab抗体，用免疫组化观察对角质形成细胞的反应性，免疫印迹法检测所识别的角蛋白组分及用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定对细胞增殖的影响。结果：基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体仅识别角质形成细胞中相对分子质量为46000的角蛋白区带，呈现为一条很强的染色带；免疫组化染色呈明显胞浆阳性；该抗体明显抑制培养的角质形成细胞增殖，并且存在剂量依赖关系。结论：特异性抗相对分子质量为46000的基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体可能是角蛋白抗体家族中影响角质形成细胞增殖的有效成分。     

三种蛋白染色方法在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用

目的：比较ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）中蛋白染色的３种方法。方法：将ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中的蛋白分别用银染、同染和考马斯亮蓝染色,并对铜染或考马斯亮蓝染色后的蛋白进行相应的复染。结果：快速银染法灵敏度最高,但操作步骤繁琐,染色时间约５０ｍｉｎ;考马斯亮蓝染色灵敏度最低,需染色和脱色,时间约为１ｈ;铜染灵敏度介于银染和考马斯亮蓝染色之间,但染色时间仅５ｍｉｎ,不需脱色,且可直接用考马斯亮蓝或快速银染法复染。结论：用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行蛋白检测时,铜染可作为蛋白快速分析的首选方法。     

重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶的表达纯化和鉴定

目的对重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶（recombinant human betaine-homocysteine S-methyltrans-ferase,rhBHMT）进行表达纯化和鉴定。方法采用基因重组技术在原核系统表达BHMT蛋白,镍螯合亲和层析和Sephacryl S200层析进行纯化。产物经SDS-PAGE、HPLC、N端氨基酸序列检测与活性验证。结果终产物rhBHMT纯度达97.9%。相对分子质量为45 000,N端氨基酸序列与理论序列一致。结论从工程菌中获得具有活性的高纯度rhBHMT,产物均一,工艺稳定,为中试放大提供可靠依据。     

Anomalies in reduction-mediated technetium-99m labelling of monoclonal antibodies

A reduction-mediated technetium-99m labelling method has been evaluated with a range of tumour-specific monoclonal antibodies. Antibodies reduced with 2-mercaptoethanol (2-ME) had free sulphydryl groups, but their number was much higher than could be accounted for by only limited intra-chain reduction of disulphide bonds. Reduced antibody could be labelled efficiently with ^99mTc using an methylene diphosphonate (MDP) bone-scanning kit, although this seemed to depend on the presence of residual 2-ME in the preparations. With a carcinoembryonic antigen (CEA)-specific antibody, immunoreactivity of labelled antibody was confirmed, and after injection into nude with CEA-producing xenografts there was localisation into the tumours. Sephacryl S300 gel filtration showed the radiolabel eluting at a single discrete peak at the expected 150 kDa. However, examination of all of the labelled antibodies by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and autoradiography showed the presence of a large number of radiolabelled low molecular weight degradation products of the antibodies. These degradation products seemed to be formed in previously reduced antibodies during processing for PAGE, indicating some fragility of the reduced antibody. Offprint requests to: M.V. Pimm     

黄鱼鱼鳞胶原蛋白制备和纯化方法的研究

目的 采用缓冲液-醋酸法,模拟中试条件,研究黄鱼鱼鳞胶原蛋白的分离和纯化方法.方法 胶原蛋白的分离主要包括低温清洗、EDTA缓冲液浸泡、酸性缓冲液提取和透析纯化等4个工艺过程,用SDS-PAGE分析胶原蛋白的纯度,用差示扫描量热仪分析黄鱼胶原蛋白的热力学特性.结果 采用该工艺能获得纯净的黄鱼胶原蛋白.最佳工艺参数:浸提温度10℃以下、EDTA缓冲液(pH值7.5)浓度0.5 mol/L、醋酸缓冲液浓度0.5 mol/L、半透膜截流相对分子质量100 000.纯化的黄鱼胶原蛋白在SDS-PAGE上呈现114 000、124 000、200 000 3条谱带,热变性温度为37.7℃.结论 采用该法获得的黄鱼鱼鳞胶原蛋白可用于纯度要求较高的领域使用.     

PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的制备及表征

目的合成具有温度敏感性的PLGA-PEG-PLGA共聚物并对其表征。方法以混旋丙交酯、乙交酯和PEG1500为原料采用开环聚合法合成PLGA-PEG-PLGA共聚物,通过核磁共振、傅立叶红外确定产物组成,通过GPC确定共聚物相对分子量及相对分子量分布系数并用倒转试管法考察共聚物的温敏性。结果经过核磁共振表征、傅里叶红外表征测定表明产物为所需要的PLGA-PEG-PLGA共聚物,凝胶渗透色谱测定产物重均相对分子质量（Mw）在7400左右,数均相对分子质量（Mn）在6000左右,相对分子质量分布系数（Mw/Mn）在1.2左右,共聚物相变温度在3036℃之间。结论本实验的方法简单可行,所得共聚物具有良好的温敏性,相变温度和沉淀温度合适,可以用于药物控制释放和组织工程等领域。