基因芯片技术检测142例尖锐湿疣HPV基因型的临床分析

目的：评价核酸分子快速导流杂交基因芯片技术（HybriMax）检测尖锐湿疣（CA）组织中人乳头瘤病毒（HPV）基因型的临床应用。方法：采用HybriMax技术,对142例尖锐湿疣患者皮损组织进行HPV感染分型检测。结果：在受检的CA患者中21种HPV亚型共检出18种,未发现HPV18、35和56型。142份CA组织标本中HPV阳性137例,总检出率是96,48％,单一基因型别阳性率是58．45％（83／142）,多重基因型别阳性率是38．03％（54／142）;各基因型别检出率由高到低依次是HPV6（64．08％）、11（34．51％）、52（7．75％）、33（7．04％）、58（7．04％）、16（5．63％）、59（4．23％）、31（3．52％）和68（3．52％）。高危型HPV检出率为42．96％（61／142）,高危型HPV多以混合感染形式存在,其多重感染率达到86．89％（53／61）,其主要基因型中女性高危HPV型感染率55．56％（20／36）明显高于男性的31．13％（33／106）。结论：尖锐湿疣主要基因型感染是低危型HPV6,高危型HPV感染率高并多以混合感染形式存在。HybriMax技术检测尖锐湿疣患者HPV基因型准确性高,并可快速分型,是临床HPV感染分型检测有效方法。     

巨大型锐湿疣与鳞状细胞癌及癌前病变关系的研究

目的：观察女性生殖道普通尖锐湿疣、巨大型尖锐湿疣、上皮不典型增生及太细胞癌的细胞增殖活性和人类乳头状瘤病毒感染的主要亚型分布，探讨这4种病变之间的内在联系。方法：采用核仁组成区嗜银蛋白染色（AgNOR）、免疫组化染色（SP法）以及原位分子杂交（ISH）和聚合酶链反应（PCR）检测这4种病变中PCNA、P53、C－erbB-2的表达以及HPV6／11和HPV16／18亚型的分布。结果：巨大型尖锐湿疣和上皮不典型增生的AgNOR颗粒面积／核面积比，以及PCNA的阳性指数（PI）和平均吸光度这些反映细胞增生活性的指标上差异无显著性。但与普通尖锐湿疣和鳞状细胞癌两组相比较，其差异有非常显著性（P＜0．01）。在癌基因蛋白P53的表达上，此4组病变之间均有不同。C－erbB-2在鳞状细胞癌组中阳性率较高，而其余3组病变之间阳性率差异无显著性。普通尖锐湿疣感染的HPV亚型主要是低危型的6／11型（16／22例），鳞状细胞癌和上皮不典型增生主要感染的HPV亚型为高危型的16／18型（9／14例和3／6例）。巨大型尖锐湿疣感染的HPV亚型中两者均高：HPV6／11为66．67％（8／12例），HPV16／18为41．67％（5／12例）。结论：巨大型尖锐湿疣是一类无论在组织形态、生物学特征和病原学基础等方面均有异于普通尖锐湿疣的特殊类型。     

外阴鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒感染与端粒酶和生存素的关系

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)6/11、16/18在外阴鳞状细胞癌(vulvarsquamouscellcarcinoma,VSCC)组织中的感染情况及其与人端粒酶逆转录酶(hTERT)和凋亡抑制基因生存素(survivin)表达的关系。方法:采用PCR检测HPV6/11、16/18在31例VSCC及13名正常人皮肤组织中的感染情况,同时用原位杂交法检测hTERTmRNA的表达,免疫组化法检测生存素蛋白的表达。结果:①HPV6/11、16/18在VSCC患者的阳性率分别为25.81%和38.17%,正常对照者为阴性。VSCC患者与正常对照者HPV16/18阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)。②VSCC患者hTERTmRNA、生存素蛋白表达的阳性率与正常对照者比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且VSCC患者hTERTmRNA表达与生存素蛋白表达的阳性率呈明显的正相关(P<0.05)。③hTERTmRNA在HPV16/18阳性组中的表达明显强于HPV16/18阴性组,生存素蛋白在HPV16/18阳性组中的表达低于其在HPV16/18阴性组中的表达。结论:HPV感染及hTERT、生存素表达在VSCC发生发展中起一定作用;VSCC中hTERT与生存素的表达具有一定的相关性。     

宫颈尖锐湿疣的分化程度与HPV亚型的关系

为探讨宫颈尖锐湿疣的分化程度与HPV感染亚型的关系,用PCR方法分析宫颈尖锐湿疣的HPV亚型,电镜观察宫颈尖锐湿疣的超微病理变化,免疫组化方法检测宫颈尖锐湿疣中HPV抗原表达。结果显示,扁平型宫颈尖锐湿疣HPV6/11的感染率明显高于HPV16/18的感染率(P<0.01),乳头型宫颈尖锐湿疣HPV16/18的感染率明显高于HPV6/11的感染率(P<0.01);扁平型宫颈尖锐湿疣主要表现为凹空细胞,乳头型宫颈尖锐湿疣主要表现为细胞核的病理性改变;具有凹空细胞的宫颈尖锐湿疣中,HPV6/11的阳性率明显高于HPV16/18的阳性率(P<0.01),以细胞核病理性改变为特征的宫颈尖锐湿疣中,HPV16/18的阳性率明显高于HPV6/11的阳性率(P<0.01);HPV抗原的表达仅见于HPV6/11感染且凹空细胞明显的宫颈尖锐湿疣。结果表明,宫颈尖锐湿疣的分化程度与HPV感染亚型有关。     

包头地区尖锐湿疣的发病人群及HPV的型别分析

目的 分析包头地区尖锐湿疣（CA）的发病人群及其人工乳头瘤病毒（HPV）的型别。方法 用HPV通用型和特异型引物6／11、16／18、16、18型对CA组织进行聚合酶链反应（PCR）检测。结果 通用型100％、6／11型66．8％、16型1％、6／11＋16／18型13．3％,其它型10．5％。结论 包头地区CA感染以HPV6／11型为主。HPV感染高峰年龄是20－40岁。女性明显高于男性,尤其是生育期妇女。     

尖锐湿疣皮损中HPV类型及p53、bcl—2分子表达研究

目的 探讨尖锐湿疣(CA)中HPV（人乳头瘤病毒）感染类型及其p53和bcl－2（B细胞淋巴瘤样因子2）分子在HPV6／11阳性尖锐湿疣发病中的可能作用。方法 用PCR法检测了22例CA皮损中HPV6／11和HPV16／18,用免疫组化方法检测了尖锐湿疣组织中p53和bcl－2分子的表达。结果 （1）所有标本均为HPV6／11阳性,未检测出HPV16／18;（2）40．9％的尖锐疣皮损在表皮角质形成细胞中有p53蛋白的表达,但阳性细胞数量较少,主要散在分布于基底层;（3）bcl－2蛋白在CA及鳞状细胞癌中未见表达。结论 （1）HPV6／11是CA的主要致病病毒;（2）CA中部分出现p53分子表达提示这部分细胞可能已出现恶性转化倾向;（3）bcl-2可能与角质形成细胞来源的良性增生性疾病以及恶性肿瘤关系不大。     

山东省潍坊市尖锐湿疣患儿乳头瘤病毒检测和型别分析

目的 检测山东省潍坊市尖锐湿疣患儿中人乳头瘤病毒（HPV）感染情况及基因亚型。 方法 采用基因扩增技术及导流杂交分型技术,对24例患儿疣体的HPV进行检测分型。 结果 24例尖锐湿疣检出23例HPV阳性,阳性率95.8% ,20例单一型HPV感染占87.0%,混合感染型3例占13.0%;感染型别依次是HPV6（9/23）,HPV16（6/23）,HPV11（5/23）,HPV58（3/23）,HPV18（2/23）,HPV53（1/23）。 结论 该地区尖锐湿疣患儿HPV型别以6、16、11、58、18为主,患儿感染HPV型别与生活中密切接触者感染的型别相似。     

尖锐湿疣高危人群分泌物人乳头瘤病毒基因分型检测结果及临床分析

目的分析尖锐湿疣高危人群分泌物人乳头瘤病毒（HPV）基因分型检测结果及临床特点。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）对尖锐湿疣高危人群分泌物标本进行HPV—DNA分型检测。结果436例分泌物中，总阳性率35．1％。其中6／11型101例次，16型52例次，18型43例次。尖锐湿疣治疗后3～6个月复查，男、女阳性率分别44．7％和46．8％。性伴或配偶患尖锐湿疣，受检男、女阳性率为30．8％和46．3％。非尖锐湿疣性病患者男、女阳性率分别为27．9％和29．1％。自检男、女阳性率分别为19．0％和38．0％。可疑CA男、女阳性率分别为13．3％和39．5％。结论分泌物检测中HPV6／11型最多。非尖锐湿疣性病患者、性伴或配偶患尖锐湿疣、可疑尖锐湿疣和要求自检患者均可发生HPV感染，尖锐湿疣治疗后3～6个月仍有HPV残留，因这些患者均属于尖锐湿疣高危人群，应进行HPV检测。     

尖锐湿疣人乳头瘤病毒的基因分型

目的：检测尖锐湿疣中人乳头瘤病毒（HPV）的基因型别。方法：用通用引物进行聚合酶链反应,扩增尖锐湿疣中HPV DNA,用生物素标记的特异性基因分型探针,对聚合酶链反应扩增后的HPV DNA进行斑点杂交,结果：50例尖锐湿疣标本经PCR扩增后48例HPV DNA阳性,阳性标本中HPV6,11,16,18型的检出率分别为16．7％（8／48）,37．5％（18／48％）,14．6％（7／48）,4．2％（2／48）,多重型别检出率为22．9％（11／48）,结论 HPV11型感染是尖锐湿疣发病的首要原因。     

人乳头瘤病毒6,11的原位检测

目的：探讨组织原位检测HPV的方法。方法：应用免疫组化法、DNA原位杂交法、PRINS（primed insitu labeling)技术检测34例尖锐湿疣（CA）和8例女阴假性湿疣（pseudo-condyloma)组织中人乳头瘤病毒抗原（HPV－Ag)和病毒核酸序列（HPV－DNA）。结果：尖锐湿疣组织中HPV－Ag阳性率为70．6％（24／34），原位杂交法HPV（6，11）－DNA阳性率为91．2％（31／34），PRINS法HPV（6，11）－DNA阳性率为100％（34／34）。原位杂交法及PRINS法与免疫组化法阳性率比较差异均有显著性（P均＜0．05）；女阴假性湿疣组织中均为阴性。结论：PRINS法检测HPV－DNA，敏感快速，阳性率高于免疫组化和原位杂交法。     

HPV6／11相关尖锐湿疣皮损中PCNA和Ki-67蛋白的表达

目的 :为了解增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigenPCNA)和细胞增殖相关核抗原Ki- 6 7在尖锐湿疣 (CA)皮损中的表达和意义。方法 :用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶免疫组化方法 (简称SP法 )检测经多聚酶联反应 (polymerasechainreactionPCR)证实人乳头瘤病毒 (HPV)DNA6 / 11阳性的 2 7例CA皮损和 10例正常皮肤。结果 :(1)CA皮损和正常皮肤均表达PCNA和Ki- 6 7。 (2 )CA皮损基底细胞和棘细胞表达PCNA和Ki- 6 7均显著高于正常皮肤。结论 :PCNA和Ki- 6 7只能反映CA皮损的增殖状态而不能反映其增殖性质。     

MDM2蛋白和MDM2 mRNA在尖锐湿疣中的表达

目的 研究尖锐湿疣中MDM2蛋白及MDM2 mRNA的表达情况,探讨MDM2在尖锐湿疣增殖及癌变中的作用。方法 分别采用免疫组化染色及原位杂交方法检测外阴尖锐湿疣和正常人皮肤组织中MDM2蛋白及mRNA的表达情况,同时用PCR法检测人乳头瘤病毒(HPV)型别。结果 32例外阴尖锐湿疣中MDM2蛋白阳性表达18例(56.25%),MDM2 mRNA阳性表达22例(68.75%)。MDM2蛋白与mRNA共同阳性表达14例。PCR检测示尖锐湿疣皮损中HPV6/11型28例(87.5%),HPV16/18型4例(12.5%)。在18例MDM2蛋白阳性表达的标本中,HPV6/11型15例,HPV16/18型3例。在22例MDM2 mRNA阳性表达的标本中,HPV6/11型18例,HPV16/18型4例。而正常人皮肤中MDM2蛋白及MDM2 mRNA均未见表达。结论 MDM2的异常表达可能与尖锐湿疣过度增殖及癌变有关。     

外阴鳞状细胞癌中人乳头状瘤病毒感染与基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶抑制剂1的关系

目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)6/11、16/18在外阴鳞状细胞癌(简称外阴鳞癌)组织中的感染情况及与基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)蛋白表达的关系.方法 用原位杂交法检测HPV6/11、16/18在26例外阴鳞癌、21例外阴上皮内瘤病变(VIN)及10例外阴正常皮肤组织中的感染情况.同时用免疫组化法检测MMP-9、TIMP-1蛋白的表达.结果 HPV6/11、16/18在外阴鳞癌、VIN中的感染率分别为69.23%(18/26)和38.46%(10/26),42.86%(9/21)和28.57%(6/21),正常对照组没有感染.MMP-9、TIMP-1蛋白在外阴鳞癌、VIN、正常对照组中的阳性表达率分别为92.31%(24/26)和76.92%(20/26),90.48%(19/21)和80.95%(17/21),80.00%(8/10)和50.00%(5/10).HPV6/11的外阴鳞癌组、VIN组与正常对照组比较差异有显著性(P<0.05),HPV16/18的外阴鳞癌组与正常对照组比较差异有显著性.外阴病变各组MMP-9、TIMP-1阳性表达率与正常对照组比较差异均有显著性.在外阴鳞癌中MMP-9蛋白表达较TIMP-1蛋白表达强(P<0.05).MMP-9在有HPV6/11和HPV16/18感染患者中的表达较无感染者强,而TIMP-1蛋白的表达差异无显著性.结论 在外阴鳞癌的发生发展中HPV的感染起一定作用,当MMP-9的表达强于TIMP-1表达时可能是外阴鳞癌侵袭的一个指标,HPV感染可能会进     

Stat1和含SH2区域的SHP-1在尖锐湿疣中的表达

目的 探讨JAK/STAT通路中信号转导和转录激活因子Stat 1和含SH2区域的酪氨酸磷酸酶SHP-1在尖锐湿疣中的异常表达。方法 原位杂交技术诊断HPV6/11相关尖锐湿疣,SP免疫组化染色技术检测40例HPV6/11阳性尖锐湿疣患者皮损、20例正常人皮肤(包皮)中Stat 1和SHP-1的表达及分布。结果 尖锐湿疣皮损中Stat 1和SHP-1的表达均强于正常人上皮中的表达,两者比较差异均有统计学意义(前者W=382.5,P<0.01;后者W=369,P<0.01)。尖锐湿疣患者皮损中Stat 1和SHP-1阳性细胞主要分布于棘细胞层,Stat 1阳性反应定位于胞浆或胞核,SHP-1阳性反应主要定位于胞浆。尖锐湿疣患者中Stat 1和SHP-1的表达呈显著相关性(tau-b=1.0,P<0.01)。结论 HPV6/11阳性尖锐湿疣中Stat 1和SHP-1表达增强,提示HPV6/11感染时可能通过JAK/STAT通路,在角质形成细胞过度增殖中起作用。     

外阴恶性肿瘤中P21~(WAF1/CIP1) P53及HPV6/11 HPV16/18的检测和意义

目的　探讨P2 1WAF1/CIP1,P5 3及HPV6/11,16/18与外阴恶性肿瘤的关系。方法　P2 1WAF1/CIP1,P5 3用免疫组化SP法检测 ;HPV6/11,16/18用原位杂交法 (ISH)检测。结果　P2 1WAF1/CIP1,P5 3在外阴恶性肿瘤组、外阴上皮内瘤变 (VIN)组、正常对照组中的阳性检测率分别为 40 .0 0 % (12 /3 0 )、63 .3 3 % (19/3 0 ) ,5 2 .3 8% (11/2 1) ,47.62 % (10 /2 1) ,0 (0 /10 )和 0 (0 /10 ) ;外阴病变各组P2 1WAF1/CIP1,P5 3与正常组比较差异均有显著性 (P均 <0 .0 5 ) ;HPV6/11、16/18在外阴恶性肿瘤组、VIN组中的阳性检测率分别为 60 .0 0 % (18/3 0 )和 3 3 .3 3 % (10 /3 0 ) ,42 .86% (9/2 1)和 2 8.5 7% (6/2 1) ,正常对照组没有检测出 ;HPV 6/11阳性率外阴恶性肿瘤组、VIN组与正常组比较差异均有显著性 (P均 <0 .0 5 ) ;外阴恶性肿瘤组HPV16/18阳性率与正常组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　P2 1WAF1/CIP1P5 3及HPV感染在外阴恶性肿瘤的发生发展中可能起一定的作用     

外阴HPV相关疾病中p~(53),cyclinD1和ki67蛋白表达及其与HPV感染的关系

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)在外阴HPV相关疾病—尖锐湿疣(CA)、外阴上皮内瘤变(VIN)和外阴鳞状细胞癌(VSCC)中的感染情况及与p53,cyclinD1,ki67蛋白表达的关系。方法 在110例外阴HPV相关疾病中应用核酸分子快速导流杂交基因分型技术检测HPV16/18,HPV6/11的表达,同时用免疫组化SP法检测p53,cyclinD1,ki67蛋白的表达,并与10例正常组织进行对照。结果 HPV16/18在CA组,VIN组及VSCC组的阳性表达率均高于正常对照组,而且其阳性表达率随外阴上皮恶性程度增加而增加;HPV6/11在CA组及VINⅠ组的阳性表达率均高于VINⅡ组及VINⅢ组和正常对照组;以上差异均有统计学意义(P均<0.05)。HPV6/11在VSCC组无阳性表达,HPV16/18感染与p53,ki67表达呈正相关,与cyclinD1表达无相关性。HPV6/11感染与p53,cyclinD1,ki67表达无相关性。结论 HPV16/18感染与重度外阴上皮内瘤变及外阴鳞状细胞癌密切相关;HPV6/11感染是尖锐湿疣及轻度外阴上皮内瘤变的重要病因。HPV16/18感染与p53,ki67蛋白表达呈正相关,它们在外阴鳞状上皮恶变过程中有着协同的作用。     

核因子κB和c-myc在尖锐湿疣皮损角质形成细胞中的表达

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)和c-myc在尖锐湿疣皮损角质形成细胞中的表达。方法 采用原位杂交方法检测尖锐湿疣50例,确定为HPV6/11阳性;采用免疫组化En Vision二步法检测50例尖锐湿疣患者皮损和25例正常人皮肤(包皮)中NF-κB和c-myc的表达及分布。结果 ①与正常人皮肤对照组相比,尖锐湿疣皮损角质形成细胞中NF-κB和c-myc的表达均有不同程度增强(前者U=6.286,P<0.01;后者U=4.356,P<0.01)。NF-κB表达主要分布于棘细胞层,阳性信号定位于胞浆。c-myc表达主要分布于表皮全层或棘细胞层和基底层,阳性信号定位于胞核。②尖锐湿疣皮损中,NF-κB与c-myc的表达呈正相关(r=0.89,P<0.01)。结论 在HPV6/11感染时,角质形成细胞中转录因子NF-κB和c-myc的表达增高,可能均参与HPV感染细胞增殖的调控。     

温州地区尖锐湿疣组织人乳头瘤病毒检测及型别分析

用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）通用引物（ＧＰ）及型特异性引物（ＳＰ）６、１１、１６、１８对４２例尖锐湿疣（ＣＡ）组织和４８例对照组进行多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测。结果：ＣＡ组织五组引物扩增阳性率分别为８５．７％（３６／４２）、７３．８％（３１／４２）、１９．１％（８／４２）、２．４％（１／４２）、４．８％（２／４２），多重型别阳性率为１１．９％（５／４２）；对照组ＨＰＶ阳性率为６．３％（３／４８）。表明本地区ＣＡ以ＨＰＶ６型感染为主