多西环素纳米脂质体缓释凝胶生物相容性及细胞毒性

目的评价自制多西环素纳米脂质体缓释凝胶的生物相容性,及对体外培养小鼠成纤维细胞的毒性。方法选取体外培养的小鼠成纤维细胞L-929,采用琼脂覆盖试验,根据倒置显微镜下观察和计算的培养不同时间点L-929细胞的平均褪色指数和溶解指数,评价样品的细胞毒性分级情况。以最大剂量法,于白色豚鼠背部对称部位分别进行注射诱导和敷贴激发致敏,观察激发后48h内皮肤红斑和水肿反应程度。SD大鼠用20%样品水溶液连续灌胃7d,观察临床症状并计算食物利用率。结果L-929细胞环素纳米脂质体缓释凝胶培养不同时间点的细胞毒性分级为1(阴性对照为0)。致敏试验显示,48h内白色豚鼠背部皮肤无明显红斑和水肿反应。SD大鼠经样品灌胃7d后,无毒性反应表现;与等量蒸馏水灌胃的对照组比较,体质量和食物利用率无明显差异。结论多西环素纳米脂质体缓释凝胶无潜在细胞毒性及致敏作用,是一生物相容性良好的牙周缓释制剂。     

多西环素纳米脂质体缓释凝胶生物相容性及细胞毒性

目的 评价自制多西环素纳米脂质体缓释凝胶的生物相容性,及对体外培养小鼠成纤维细胞的毒性.方法 选取体外培养的小鼠成纤维细胞L-929,采用琼脂覆盖试验, 根据倒置显微镜下观察和计算的培养不同时间点L-929细胞的平均褪色指数和溶解指数,评价样品的细胞毒性分级情况.以最大剂量法,于白色豚鼠背部对称部位分别进行注射诱导和敷贴激发致敏,观察激发后48 h内皮肤红斑和水肿反应程度.SD大鼠用20%样品水溶液连续灌胃7 d,观察临床症状并计算食物利用率.结果 L-929细胞环素纳米脂质体缓释凝胶培养不同时间点的细胞毒性分级为1(阴性对照为0).致敏试验显示,48 h内白色豚鼠背部皮肤无明显红斑和水肿反应.SD大鼠经样品灌胃7 d后,无毒性反应表现;与等量蒸馏水灌胃的对照组比较,体质量和食物利用率无明显差异.结论 多西环素纳米脂质体缓释凝胶无潜在细胞毒性及致敏作用,是一生物相容性良好的牙周缓释制剂.     

PHEMA微孔人工角膜支架材料对成纤维细胞生长的影响

目的：研究微孔聚甲基丙烯酸β－羟乙酯（poly(2-hydroxyethl methecylate),PHEMA) 对成纤维细胞生长的影响并与无孔PHEMA材料进行比较。结果：通过含材料浸渍液的培养基培养成纤维细胞来评价微 孔和无孔的PHEMA材料的细胞毒性，分别于24、48和72h用0．5％台盼蓝法对每组进行细胞活力的测定。结果：成纤维细胞在含材料浸渍液的培养基中生长良好，培养24、48和72h后细胞活力与对照组差异无显著性（P＞0．05）；微孔PHEMA与无孔PHEMA之间对细胞活力影响亦无明显差异（P＞0．05）。结论：微孔PHEMA材料具有良好的生物相容性，是理想的人工角膜支架材料。     

聚乳酸-甲壳素接骨板的体外细胞毒性研究

目的：利用体外细胞培养技术，对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行研究，为临床应用作首期准备。方法：将材料浸提液与小鼠成纤维细胞接触2、4、7d后，用分光光度仪在588nm波长处测定吸光度，用细胞增殖度试验法评价材料的细胞毒性；采用细胞形态学试验法，在倒置显微镜下观察材料与小鼠成纤雏细胞共培养时，细胞形态学发生的变化，评价材料的细胞毒性。结果：该材料细胞毒性为0级，无细胞毒性。结论：聚乳酸-甲壳素接骨板具有良好的细胞相容性。     

Cre/LoxP 系统联合SV40 LTag 诱导可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系的建立

 目的探索可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞的建立方法。方法采用胰酶消化法分离培养大鼠皮肤成纤维细胞;逆转录病毒载体（SSR69）转染成纤维细胞,筛选稳定表达SV40 LTag 的永生化成纤维细胞;用表达Cre 重组酶的腺病毒感染永生化成纤维细胞,筛选获得回复后成纤维细胞。对原代、永生化及回复后成纤维细胞,倒置显微镜下观察细胞生长状态;采用细胞生长曲线法测定细胞增殖能力。免疫荧光染色检测Vimentin 在原代及永生化成纤维细胞中的表达情况,平板克隆实验评价回复后成纤维细胞的致瘤性。结果提取了大鼠皮肤成纤维细胞,并筛选出表达SV40 LTag 的永生化成纤维细胞,二者形态无明显差异,均贴壁生长,呈长梭形或多角形,但永生化成纤维细胞体外增殖能力明显高于原代成纤维细胞（P < 0.05）,在体外培养传代>25 代。细胞免疫荧光提示两种细胞均在细胞质内表达Vimentin。回复后成纤维细胞不表达SV40 LTag,其体外增殖能力与原代细胞无明显差异（P > 0.05）,无致瘤性。结论应用Cre/LoxP系统联合SV40 LTag 可以建立可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系     

大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞的分离和体外培养

目的建立大鼠乳鼠背部皮肤组织和尾尖部皮肤组织成纤维细胞的体外培养方法,并比较二者的区别。方法分别取大鼠乳鼠的背部和尾尖部皮肤组织,利用组织贴块法分离和培养皮肤成纤维细胞,用酶消化法进行细胞传代培养,采用梯度温度冻存细胞。倒置显微镜下观察成纤维细胞的形态,用细胞骨架波形蛋白抗体进行鉴定。结果光学显微镜下3~5 d可见细胞从组织块游出,7 d细胞数量增多,10 d可贴满培养瓶壁;且大鼠乳鼠背部和尾尖部来源的皮肤成纤维细胞波形蛋白表达均为阳性。结论大鼠乳鼠背部和尾尖部来源的皮肤成纤维细胞的生物特点无差别,均可作为皮肤成纤维细胞的取材部位。     

口腔正畸用磁块镀氮化钛膜后细胞毒性研究

目的：评价正畸用磁块表面镀氮化钛膜后的细胞毒性。方法：选用L-929小鼠成纤维细胞，采用MTT比色法，以镀镍膜、未镀膜磁块的浸提液作为对照，对镀TiN膜磁块的浸提液进行体外细胞毒性研究。结果：在镀TiN膜磁块的浸提液中，L-929小鼠成纤维细胞的增殖率高于90％，所测试材料的浸体液无细胞毒性。结论：磁块表面镀TiN膜后，有良好的细胞相容性。     

真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA的建立及其在人皮肤成纤维细胞的表达活性

目的：建立在人皮肤成纤维细胞中稳定表达的细胞株,为组织型纤溶酶原激活因子（TPA）功能分析和对缺血性心脏疾病基因治疗提供理论依据。方法：构建真核表达载体pcDNA3.1（+）TPA,然后将其转入人皮肤成纤维细胞,经G418筛选后,用RT PCR,ELISA和发色底物法观察外源性TPA表达情况。结果：真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA在人皮肤成纤维细胞中获有效表达,酶联免疫吸附法TPA蛋白表达定量检测结果为每24小时643.5ng/106个细胞,高于未转pcDNA3.1（+）TPA的皮肤成纤维细胞每24小时19.2ng/106个细胞;发色底物法测得外源性TPA活性为每24小时122.6U/106个细胞,亦高于未转pcDNA3.1（+）TPA的皮肤成纤维细胞每24小时5.8U/106个细胞。结论：pcDNA3.1(+)TPA转入人皮肤成纤维细胞后,外源性TPA基因获有效表达,该细胞模型将成为TPA功能研究和缺血性心脏病基因治疗的重要方法。     

评价细胞毒性方法的探讨

目的:探讨评价细胞毒性的方法.方法:分别采用MTT法、MTS法和传统的血球计数法比较医用高分子材料的浸提液对小鼠成纤维细胞(L-929)相对增殖率的影响.结果:采用3种测定方法测定此类医用高分子材料,均呈现出高的细胞相对增殖率,其细胞毒性为1级,即无细胞毒性.结论:在常规细胞毒性测试法的基础上采用MTT法和MTS法,能更快捷准确地测定细胞的增殖反应.MTS法与MTT法相比较,其灵敏度更高,操作更简便.     

颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性

目的:利用体外细胞培养技术,对有机硅改性聚丙烯酸酯类颜面赝复体粘接剂-1(FPSA-1)的细胞毒性进行评价.方法: 采用MTT法评价FPSA-1的细胞毒性.利用体外培养的小鼠肺成纤维细胞(L-929),在培养液中分别添加500,750 mL/L FPSA-1浸提液,于加样后2,4,7 d用MTT法显色,用多道扫描酶标仪测A490nm值,计算相对增殖率,对FPSA-1的细胞毒性进行评价.结果: 随着时间推移,不同浓度的FPSA-1浸提液对L-929细胞增殖均无明显作用(P>0.05),各浓度FPSA-1浸提液加样后2,4,7 d之间差异无统计学意义(P>0.05),提示L-929细胞增殖与浸提液浓度无明显相关性,FPSA-1的细胞毒性分级为1级.结论: FPSA-1无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种有发展前景的颜面赝复体粘接材料.     

生物活性负压封闭吸引材料的生物学评价

目的:对制备的生物活性聚乙烯醇/壳聚糖复合泡沫材料进行生物学评价,为临床应用提供实验依据.方法:对该材料进行细胞毒性试验、急性全身毒性试验、溶血试验、皮肤刺激试验、热源试验和微核试验.结果:该材料的细胞毒性为Ⅰ级,对细胞生长和增殖无明显抑制作用,无急性全身毒性反应,无溶血反应,无皮肤刺激性,无热源反应,无致突变作用.结...     

MMT法评价多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料的细胞毒性

目的制备多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖（nHA/CS）,对其进行细胞毒性检测。方法采用共沉淀法和粒子沥滤法制备多孔nHA/CS。分离培养大鼠成骨细胞,碱性磷酸酶（ALP）染色进行成骨细胞进行鉴定,倒置显微镜下观察培养过程中细胞的形态和增殖情况。MTT检测多孔nHA/CS支架材料对成骨细胞增殖的影响,评价细胞毒性。结果细胞可在多孔nHA/CS周围贴壁生长,并且附着、增殖,其生长及功能不受抑制。结论多孔nHA/CS无细胞毒性,有利于细胞的黏附和增殖,可以用于骨组织工程支架材料。     

氯化甲基汞抗大鼠C6胶质瘤细胞的体外研究

目的：通过体外实验探讨氯化甲基汞（MMC）抗大鼠C6胶质瘤细胞的作用。方法：体 外培养C6胶质瘤细胞,分为空白对照组和MMC给药实验组（将0.08～10.00 μmol•L MMC按浓度梯度分为8组）。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度MMC对体外养C6胶质瘤细胞的增殖抑制和杀伤作用,采用流式细胞仪测定MMC对C6胶质瘤细胞凋亡和细胞周期的影响。结果：1.25、2.50、5.00和10.00 μmol•L^-1的MMC在体外均可抑制C6胶质瘤细胞的增殖,C6胶质瘤细胞存活率明显低于对照组（P<0.05）,增殖抑制作用随浓度的增加而增强。2.50、5.00和10.00 μmol•L^-1 MMC 作用于C6胶质瘤细胞4、8、16和32 h后细胞存活率明显低于对照组（P<0.05）,细胞杀伤作用随浓度的增加和时间的延长而增强。0.31、0.63、2.50、5.00和10.00 μmol•L^-1 MMC作用于C6胶质瘤细胞24h后细胞凋亡/坏死率明显高于对照组（P<0.05）。1.25、2.50和5.00 μmol•L^-1 MMC 作用于C6胶质瘤细胞72 h后,G₀/G₁期细胞百分率明显高于对照组（P<0.05）,S期细胞百分率明显低于对照组（P<0.05）。结论：MMC能够杀伤大鼠C6胶质瘤细胞,抑制增殖,诱导凋亡,具有应用于胶质瘤治疗 的潜在价值。     

大鼠乳鼠腹主动脉血管内皮细胞的培养与鉴定

目的：研究大鼠乳鼠腹主动脉血管内皮细胞的培养与鉴定方法。方法：取出生5~7d左右的大鼠乳鼠的腹主动脉血管,用组织块法在含20%胎牛血清及内皮细胞生长添加剂和肝素的DMEM培养基中培养,倒置相差显微镜观察内皮细胞形态和生长特征,免疫荧光方法进行血管内皮细胞Tie2相关抗原的鉴定。结果：来自于大鼠乳鼠腹主动脉的血管内皮细胞在改良的培养基中进行体外培养,能够保持增殖和传代的能力,且Tie2抗原鉴定呈阳性。结论：成功分离大鼠乳鼠腹主动脉组织并且获得体外原代培养大鼠乳鼠腹主动脉内皮细胞。用组织培养方法可以获得较满意的血管内皮细胞。     

氨基脲敏感型胺氧化酶介导的甲胺代谢产物对成纤维细胞的毒性作用

目的：研究氨基脲敏感型胺氧化酶（SSAO）催化甲胺（MA）产生的代谢产物对大鼠皮肤成纤维细胞（RSFCs）的毒性作用。方法：原代分离培养新生SDRSFCs,用高效液相色谱法检测细胞及培养基酶活性。MTT法检测细胞经过不同浓度MA和不同活性SSAO处理后的细胞活力,β半乳糖苷酶染色检测细胞衰老。结果：当SSAO为1．02×10^-3u／mL时,成纤维细胞活力随着培养体系中MA浓度的升高（0．2—1．0mmol／L）而降低。当MA为1．0mmol／L时,随着酶活性的增高（0．6×10^-3-1．58×10^-3u／mL）,细胞活力逐渐降低。给予SSAO抑制剂氨基脲或肼届嗪可显著抑制细胞活力下降。给予抗氧化剂谷胱苷肽可显著提高细胞活力,并显著降低培养基中甲醛浓度（P〈0．05）;如同时给予过氧化氢酶和谷胱苷肽,则细胞活力升高更明显。此外,0．2mmol／LMA作用3代,可引起肛半乳糖苷酶染色增强。结论：SSAO催化的MA氧化对RSFCs有明显的毒性作用,这种毒性作用由其代谢产物引起;在SSAO催化下低浓度MA可能与细胞衰老有关。     

人工气管材料体外细胞毒性和生物相容性研究

目的 :对自行研制的人工气管材料进行体外细胞毒性和生物相容性研究 ,以便为该植入材料应用于临床提供实验依据。方法 :参照 ISO10 993- 1:1992医疗器械生物学评价标准和要求 ,对人工气管材料进行了体外细胞与材料共培养试验、细胞毒性试验、溶血试验、急性全身毒性试验、致敏和热源试验。 结果 :(1)人工气管材料表面的细胞黏附生长良好 ,该材料对体外培养的细胞形态不构成损害 ,对细胞的生长和增殖均无明显抑制作用 ,细胞增殖指数和增殖指数百分率与空白对照组比较无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,而与阳性参照材料组比较差异具有显著性 (P<0 .0 1) ;(2 )溶血率均低于 5 %的国家标准 ,在体外不引起溶血反应 ;(3)该组分材料也无急性全身毒性反应、致敏和热源作用。结论 :该人工气管材料无细胞毒性和热源作用 ,不引起溶血反应和急性全身毒性反应 ,对细胞形态、生长和增殖不构成损害 ,具有良好的生物相容性。     

新型医用无镍不锈钢（BIOSSN4）的细胞毒性评价

目的：评价新型医用无镍不锈钢（BIOSSN4）的细胞毒性。方法：将BIOSSN4的浸提液与体外培养的小鼠成纤维细胞L929接触后,进行MTT实验来评定材料的细胞毒性,并与传统的医用316L不锈钢的生物学性能相比较。结果：BIOSSN4对细胞增殖的抑制作用小于316L不锈钢组,统计学分析结果显示：两种金属材料与阴性对照组的吸光度值之间的差异无统计学意义（P〉0.05）,与阳性对照组之间的吸光度值之间的差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：BIOSSN4无镍不锈钢具有微弱的细胞毒性,符合临床应用要求,为其应用提供了一定的生物学依据。     

奠基方含药血清对类多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能影响的研究

目的:观察奠基方含药血清对类多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞(GC)体外分泌功能的影响。方法:采用血清药理学方法,以不同类PCOS大鼠含药血清,与体外培养的颗粒细胞共同培养48 h,观察奠基方含药血清对类PCOS卵巢颗粒细胞雌激素(E2)、孕酮(P)分泌量的影响。结果:奠基方含药血清可明显增加颗粒细胞E2的分泌量,降低P的分泌量。结论:奠基方可通过调节颗粒细胞的分泌功能进而改善类PCOS的卵巢功能。     

载ACEshRNA表达质粒壳聚糖纳米转染培养的大鼠血管内皮细胞实验性研究

目的研究载血管紧张素转化酶短发卡RNA(ACEshRNA)表达质粒壳聚糖纳米颗粒对体外培养大鼠血管内皮细胞的转染效率。方法采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒,喷金扫描电子显微镜鉴定;通过静电吸附复合ACEshRNA表达质粒,采用琼脂糖凝胶电泳分析载体与DNA结合能力;用体外培养大鼠血管内皮细胞转染实验,评价体外壳聚糖颗粒的转染能力。结果体外对培养的大鼠血管内皮细胞的转染实验显示,绿色荧光蛋白的表达,说明该壳聚糖有一定的转染效率,且在壳聚糖与质粒体积比为1∶3时转染率最高。结论本研究制备的载ACEshRNA表达质粒壳聚糖纳米载体,能在体外培养的大鼠血管内皮细胞实现有效转染,并且为进一步转染条件的优化奠定实验基础。