鼠伤寒沙门氏菌主要外膜蛋白和微孔蛋白诱导细胞免疫及免疫保护的比较

对鼠伤寒沙门氏菌主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ：）和微孔蛋白（Ｐｏｒｉｎ）诱导ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠产生细胞免疫（ＣＭＩ），即迟发型变态反应（ＤＴＨ）和白细胞介素２（ＩＬ－２）的能力进行了检测，并观察了用５００ＬＤ５０的鼠伤寒沙门氏菌和伤寒沙门氏菌以腹腔途径攻击经ＭＯＭＰｓ，Ｐｏｒｉｎ免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠所产生的主动免疫、交叉免疫和Ｔ细胞转移免疫保护的能力。发现：诱导ＣＭＩ的能力，ＭＯＭＰｓ（ＤＴＨ，０．６８±０．０５；ＩＬ—２，４２３００±１７０００）优于Ｐｏｒｉｎ（ＤＴＨ，０．３６±０．０２；ＩＬ－２，２６２００±４９００），Ｐ＜０．０１；而诱导主动免疫（ＭＯＭｓ：９０％，Ｐｏｒｉｎ：７０％）、交叉免疫（ＭＯＭＰｓ：３３．３％，Ｐｏｒｉｎ：２２．２％）和Ｔ细胞转移免疫保护（ＭＯＭＰｓ：７１．４％，Ｐｏｒｉｎ：４２．９％）二者差别均没有显著意义（Ｐ＞０．０５）。结果提示：虽然鼠伤寒沙门氏菌ＭＯＭＰｓ和Ｐｏｒｉｎ均能诱导较强的ＣＭＩ和免疫保护能力，但两者能力不同。     

鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白和微孔蛋白诱导细胞免疫及免疫保护…

对鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白（ＯＭＰｓ）和微孔蛋白诱导ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠产生细胞免疫，即迟发型变态反应和白细胞介素２的能力进行了检测，并观察了用５００ＬＤ５０的鼠伤寒沙门氏菌和伤寒沙门氏菌以腹腔途径攻击经ＯＭＰｓ，ｐｏｒｉｎ免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠所产生的主动免疫、交叉免疫和Ｔ细胞转移免疫保护的能力，发现：ＣＭＩ的能力，ＯＭＰｓ优于ｐｏｒｉｎ；而主动免疫保护率，交叉免疫保护率和Ｔ细胞转移免疫保护率均没有显     

鼠伤寒患者血清中鼠伤寒杆菌外膜蛋白抗体的分析

本文对鼠伤寒患者抗鼠伤寒杆菌外膜蛋白（ＯＭＰ）的体液免疫应答进行了分析，发现恢复期患者血清中存在高效价的ＯＭＰ抗体，而且以ＩｇＧ型抗体为主（＞１：５１２０）。免疫印迹试验（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）分析恢复期血清识别的主要是３６ＫＤ蛋白带，即微孔蛋白（Ｐｏｒｉｎ）。提示ＯＭＰ有可能用于诊断鼠伤寒杆菌感染及作为保护性抗原制备亚单位疫苗。     

鼠伤寒杆菌外膜蛋白诱导免疫应答的初步探讨

本文采用Schnaitman处理法提取了鼠伤寒杆菌的外膜蛋白(OMP)。用提取的OMP免疫家兔和小鼠,经ELISA方法测定家兔、小鼠及鼠伤寒感染患者血清中抗-OMP抗体效价,并用小鼠作足垫肿胀实验和主动及血清被动免疫保护实验。结果免疫动物和病人血清中都含有较高滴度抗体,免疫小鼠足垫出现明显的DTH反应。50μg OMP免疫小鼠可保护500 LD_(50)毒株攻击,0.2ml免疫血清也能够被动保护以上同样量的毒株攻击。这些结果表明,实验提取的OMP有较强的免疫原性和明显的免疫保护作用。应用Western blot分析兔、鼠及病人免疫血清均能识别36KD蛋白带,36KD蛋白带可能是鼠伤寒杆菌的主要免疫原。     

鼠伤寒杆菌外膜蛋白免疫原性初步研究

研究目的寻找鼠伤寒杆菌与免疫相关组分,探讨鼠伤寒杆菌外膜蛋白作为亚单位疫苗预防鼠伤寒杆菌感染的可能性。研究背景鼠伤寒沙门氏菌感染甚为普遍,而目前尚缺乏有效的防疫方法,制备有效疫苗是控制鼠伤寒杆菌感染和流行的重要措施。研究方法采用Schnaitman所描述的方法提取鼠伤寒杆菌OMP分别免疫小鼠和家兔后分离血清,用ELISA方法测定免疫血清抗体滴度。用小鼠作足垫肿胀试验作为测定细胞免疫指标。用免疫印迹试验分析免疫血清和鼠伤寒感染患者恢复期血清。研究结果鼠伤寒杆菌外膜蛋白能诱发小鼠和家兔产生高效价抗体,并能诱发小鼠产生明显的DTH反应,所有免疫血清均识别36KD蛋白带。结论鼠伤寒杆菌外膜蛋白具有较强的免疫原性,能诱发动物产生体液免疫和细胞免疫。36KD蛋白带可能是鼠伤寒杆菌主要免疫原。     

鼠伤寒杆菌外膜蛋白的提取和分析鉴定

采用超声波破碎、Tritonx-100处理和超速离心的方法提取鼠伤寒杆菌外膜蛋白(OMP)。经电镜和SDS-PAGE分析鉴定,鼠伤寒杆菌的主要OMP带位于36～41kD之间,应用Western blot分折抗-OMP的免疫血清,显示血清抗体所识别的主要是36kD蛋白带。试验证明,用该种方法提取OMP是可行的,36kD蛋白可能是OMP中主要免疫原。     

鼠伤寒沙门菌L型变异引起细菌质粒和外膜蛋白的丢失

目的；了解鼠伤寒沙门菌Ｌ型变异对细菌质粒和外膜蛋白的影响。方法；在鼠伤寒沙门菌Ｌ型的诱导传代过程中，取传不同代的Ｌ型细菌提取质粒，观察质粒图的变化。提取鼠伤寒沙门氏菌稳定Ｌ型的外膜蛋白，通过聚丙烯胺凝胶电泳观察外膜蛋白的变化。     

鼠伤寒沙门菌L型变异引起细菌质粒和外膜蛋白的丢失

了解鼠伤寒沙门菌Ｌ型变异对细菌质粒和外膜蛋白的影响。方法：在鼠伤寒沙门菌Ｌ型的诱导 传代过程中,取传不同代的Ｌ型细菌提取质粒,观察质粒图谱的变化。提取鼠伤寒沙门菌稳定Ｌ型的外膜蛋白,通 过聚丙烯酰胺凝胶电泳观察外膜蛋白的变化。结果：鼠伤寒沙门菌Ｌ型在诱导传代过程中原菌的质粒逐渐以致全 部丢失,大多数外膜蛋白亦丢失。结论：鼠伤寒沙门菌发生Ｌ型变异后,原菌的质粒不能稳定遗传,且有外膜蛋白 的丢失。     

鼠伤寒沙门菌L型变异对噬菌体敏感性的影响

目的：探讨鼠伤寒沙门菌的Ｌ型变异对噬菌体敏感性的影响。方法：用１２株鼠伤寒沙门菌分型噬菌体对３株体外诱导的鼠伤寒沙门菌Ｌ型及其原菌做噬菌体敏感性检测。结果：裂解原菌的噬菌体大多不能裂解其Ｌ型菌，只有少数噬菌体能同时裂解原菌及其Ｌ型菌。结论：鼠伤寒沙门菌的Ｌ型变异可引起噬菌体受体的丢失，从而导致对相应的噬菌体不再敏感。     

鼠伤寒脂多糖表位模拟位的筛选

目的获得模拟脂多糖抗原表位的噬菌体环状展示肽。方法用抗鼠伤寒菌脂多糖单克隆抗体2F4为靶分子,亲和筛选噬菌体随机环七肽库,双夹心ELISA及特异性抗原抑制试验鉴定阳性克隆。结果经三轮筛选,随机挑选38个克隆,其中34个克隆显示与2F4结合。鼠伤寒沙门氏菌脂多糖可抑制噬菌体克隆与2F4结合,所有克隆的半数抑制浓度为(0.125~0.250)μg/ml。挑选10个克隆测序并推导氨基酸序列,其中7个克隆出现P-X-WAS-X-W保守序列;10个序列中非极性氨基酸含量平均值为71.4%。结论噬菌体展示环七肽可模拟鼠伤寒沙门氏菌脂多糖抗原表位。     

鼠伤寒沙门菌L型的诱导及其超微结构观察

目的：获得稳定的鼠伤寒沙门菌Ｌ型菌株，了解其超微结构。方法：用羧苄青霉素将５株鼠伤寒沙门菌诱导为Ｌ型，透射电镜观察其超微结构。结果：诱导出的鼠伤寒沙门菌Ｌ型呈典型的油煎蛋样菌落，菌体呈显著多形性，且难以回复。电镜下可见巨型体、球形体和丝状体多完全缺壁，少数有部分细胞壁残留。原生小体完全缺壁，部分呈空心状。有些巨型体内有大量原生小体产生。结论：获得的鼠伤寒沙门菌Ｌ型是细胞壁严重缺陷的稳定Ｌ型，是对其生物学特性和致病性进行深入研究的良好材料。     

儿童鼠伤寒沙门菌败血症24例临床分析

目的:探讨儿童鼠伤寒沙门菌败血症的临床特点及疗效。方法:对确诊为鼠伤寒沙门菌败血症的24例儿童患者进行回顾性分析,研究其临床表现及疗效。结果:婴幼儿多见,平均年龄9个月,主要表现为发热、消化道症状,外周血白细胞16例(66.7%)正常、2例(8.33%)减少,6例增高(25%),临床分离株对头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、左氧氟沙星、亚胺培南敏感率分别为83.3%、87.5%、91.7%、66.7%、100%,24例初治均采用头孢曲松钠,22例血培养正常,2例仍为阳性,根据药物敏感试验选用抗生素治疗后均治愈。结论:头孢三代耐药率相对较低,是治疗婴幼儿鼠伤寒沙门菌败血症的首选药物。     

乙酰化对鼠伤寒沙门菌酸耐受应答的影响

目的研究乙酰化／去乙酰化酶Pat／CobB对沙门菌酸耐受应答的影响。方法利用λ-Red同源重组系统分别敲除鼠伤寒沙门菌乙酰化酶／去乙酰化酶编码基因pat和cobB。利用生长曲线比较生长差异;Real-TimePCR检测参与酸应激的部分基因转录变化;采用Cfu计数法检验敲除株和野生株在对数期和平台期酸耐受应答中的差异。结果成功构建了鼠伤寒沙门菌pat和cobb敲除株。pat和cobb敲除不影响细菌生长,也不影响对数期和平台期的鼠伤寒沙门菌对酸的耐受应答能力。结论鼠伤寒沙门菌中编码乙酰化／去乙酰化酶的基因pat/cobB突变不会影响菌的生长,也不参与酸耐受应答。     

两种表达鼠精子受精素β蛋白的减毒沙门氏菌疫苗株的稳定性分析

目的 了解表达鼠精子抗原受精素β亚单位(Fertilin βsubumit,fβ)的两种重组减毒沙门氏菌疫苗株X4632(pFEC)和X4550(pFEC)的生长特性和体内外携带重组质粒的稳定性。方法 将两种重组沙门氏菌疫苗株X4632(pFEC)和X4550(pFEC)体外传代培养，观察比较其生长特性和所含重组质粒的稳定性；将该两种重组菌口服免疫BAIB／c雄性小鼠，观察重组菌侵入小鼠Peyer结、肠系膜淋巴结和脾脏等组织内繁殖生长情况和所回收重组菌携带质粒的阳性率。结果 该两种无抗药性的重组菌株在体内、外营养选择压力下均可较稳定携带重组质粒传代繁殖，X4550(pCFL)在体内可较稳定地定植于Peyer结、肠系膜淋巴结和脾脏；X4632(pCFL)可较稳定地定植于Peyer结，均可稳定表达被Fβ单抗识别的重组Fβ蛋日。结论 X4632(pFEC)、X4550(pFEC)疫苗株可作为递呈精子抗原的活菌载体。     

地中海贫血儿童脾切除术后体液和细胞免疫功能研究进展

地中海贫血（地贫）为遗传性疾病，不但引起血液系统损害，还导致心脏受损。目前除了基因治疗和造血干细胞移植外，主要是综合及辅助治疗。脾脏为异常红细胞破坏的主要场所之一，所以脾切除可减轻贫血症状，缓解病情发展。但因脾脏为免疫器官，有报道脾切除后易出现各种感染性疾病，尤其是小儿。本文复习近20年来的相关文献，对地贫脾切除患儿术后体液免疫和细胞免疫功能改变情况及与年龄的关系综述如下。     

变形链球菌表面蛋白pac基因A区片段在减毒鼠伤寒沙门氏菌的表达

【目的】检测携带变形链球菌表面蛋白 pac基因A区片段的重组质粒 pET 17b/A在减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1的表达情况。【方法】应用SDS PAGE技术检测重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1中是否有新的蛋白条带 ,Westernblot检测条带的抗原性。【结果】SDS PAGE显示重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1中有 35ku的新蛋白条带 ,Westernblot显示在相应的位置上有特异的条带。【结论】重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1表达的变形链球菌表面蛋白 pac基因A区片段具有抗原性。     

14种化合物对鼠伤寒沙门氏菌TA100的抗突变性

应用鼠伤寒沙门氏菌/微粒体试验研究了14种化合物的抗突变性。14种化合物是:(1)半胱氨酸、(2)桂皮酸、(3)芦丁、(4)鞣酸、(5)二氧化锗、(6)5氟尿嘧啶、(7)叶绿素铜钠、(8)β谷固醇、(9)维生素C、(10)香豆素、(11)维生素E、(12)L谷胱甘肽(氧化型)、(13)L谷胱甘肽(还原型)、(14)有机锗(GA)。实验按抑制突变、抗突变和去突变3种作用模式研究了化合物的抗突变效应。结果表明,除二氧化锗外,所有测试化合物均能抑制亚硝基胍(MNNG)和苯(并)芘[B(a)P]的致突变性。化合物1、2、3、4、6、8、10和12的抑制率在90％以上。14种化合物对MNNG的致突性有抗突变效应,12种化合物对B(a)P有抗突变效应,唯二氧化锗和GA对B(a)P无抗突变作用。在B(a)P作用于细胞前,14种化合物对B(a)P有直接的去突变作用。根据作用模式和作用潜力,1、2、3、4和10在14种化合物中是较好的抗突变剂,并呈现剂量-反应关系。每种化合物都有其有效剂量,化合物 2、6、7、8、10、11为500μg,化合物1、3、4、12、13、14为1000μg,化合物5、9为1250μg。研究表明,有必要选择有效的抗突变剂制成复方,并研究其协同作用。