富铁对HL-60细胞增生及化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响

探讨铁对HL-60细胞增生及化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响,采用HL-60细胞与不同浓度的三氯化铁、三氯化铁加阿糖胞苷、三氯化铁加足叶乙甙、阿糖胞苷、足叶乙甙共同体外培养6h、12h、24h、48h,用细胞生长、活力测定、形态学观察、流式细胞学检测分析和DNA电泳,免疫组化方法检测bcl-2基因等细胞凋亡指标观察三氯化铁的作用.结果显示,100μmol/L三氯化铁促HL-60细胞增生最明显,凋亡率最低,bcl-2阳性表达率最高,100μmol/L三氯化铁分别加用阿糖胞苷、足叶乙甙与HL-60细胞共同培养时凋亡率比单用阿糖胞苷、足叶乙甙低(P＜0.05).可以认为一定量的铁有促进HL-60细胞增生、抑制HL-60细胞凋亡的作用,对于白血病患者,不适当的铁剂补充可能带来不利的影响.     

富铁对HL—60细胞增生及化疗药物诱导HL—60细胞凋亡的影响

探讨铁对HL－60细胞增生及化疗药物诱导HL－60细胞凋亡的影响,采用HL－60细胞与不同浓度的三氯化铁、三氯化铁加阿糖胞苷、三氯化铁加足叶乙甙、阿糖胞苷、足叶乙甙共同体外培养6h、12h、24h、48h,用细胞生长、活力测定、形态学观察、流式细胞学检测分析和DNA电泳,免疫组化方法检测bcl-2基因等细胞凋亡指标观察三氯化铁的作用。结果显示,100umol/L三氯化铁促HL－60细胞增生最明显,凋亡率明低,bcl-2阳性表达率最高,100umol/L三氯化铁分别加用阿糖胞苷、足叶乙甙与HL－60细胞共同培养时期凋亡率 比单用阿糖胞苷、足叶乙甙低（P＜0.05)。可以认为一定量的铁有促进HL－60细胞增生、抑制HL－60 细胞凋亡的作用,对于白血病患者,不适当的铁剂补充可能带来不利的影响。     

多药耐药细胞系HL60／HHT的建立及耐药机理的初步探讨

为探讨ＨＬ６０／ＨＨＴ细胞系耐药性的分子机理,采用反复短期暴露法建立ＨＬ６０／ＨＨＴ细胞系,并检测其ｂｃｌ－２和ｂａｘ的含量。结果表明,建立了多药抗性ＨＬ６０／ＨＨＴ细胞,其ｂｃｌ－２水平赤ＨＬ６０的１．５０倍,有显著性差异。其ｂａｘ蛋白在二种细胞中均低水平表达（ＨＬ６０１５．９２,ＨＬ／６０／ＨＨＴ１７．６３）,差异无显著意义。     

阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡

阿糖胞苷诱导ＨＬ－６０细胞凋亡仇志根吴马伴吟细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种不同于细胞坏死的死亡方式，正常细胞和肿瘤细胞均有凋亡。如何诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤治疗的新热点。我们以不同浓度的阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，观察了凋亡细...     

全反式维甲酸对抗肿瘤药物促进HL-60细胞凋亡作用的影响

目的 观察诱导分化剂对抗肿瘤药物促进ＨＬ－６０细胞凋亡的影响。方法 采用苏木精染色,流式细胞仪及ＤＮＡ电泳的方法,研究全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）分别与阿糖胞苷,长春新碱,鬼乙叉甙,柔红霉素４种抗肿瘤药协同作用后ＨＬ－６０细胞凋亡的发生情况。结果 当先以ＡＴＲＡ作用ＨＬ－６０细胞３天后再分别给予抗肿瘤药物,发现各个药物经起的凋亡细胞的数量减少６０％以上,反之先以抗肿瘤药作用后再以ＡＴＲＡ处理ＨＬ－６０     

铁剥夺诱导HL-60细胞凋亡及对化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 探讨铁剥夺对HL－60细胞凋亡及对化疗药物诱导HL－60细胞凋亡的影响。方法 HL－60细胞与不同浓度的铁螯合剂－去铁胺（DFO）、DFO加化疗药物、化疗药物、DFO加化疗药物及三氯化铁、三氯化铁共同培养6h、12h、24h、48h。通过测定细胞活力,观察细胞形态学变化,应用流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等方法观察细胞凋亡;通过亲和免疫组化方法检测c-myc基因表达,从而确定DFO及DFO与化疗药物联合应用对HL－60细胞的作用。结果 DFO单用可降低HL－60细胞活力、抑制HL－60细胞增殖、诱导HL－60凋亡,并可使c-myc基因表达增加,其作用强度随培养时间延长及DFO浓度增加而增加。DFO与化疗药物联合时,可增加化疗药物诱导HL－60细胞凋亡的作用。该作用可被等摩尔的三氯化铁抵消。结论 铁剥夺可影响HL－60细胞DNA的合成,诱导其凋亡,并提高HL－60细胞对化疗药物的敏感性。因此,铁剥夺可作为临床上白血病治疗或辅助治疗的方法之一,不适当补铁或升高血红蛋白将影响化疗疗效。     

bcl-2和bax蛋白在儿童急性白血病表达及临床意义

目的　检测儿童急性白血病（ＡＬ） 患儿ｂｃｌ－ ２ 及ｂａｘ 蛋白表达水平,探讨其在急性白血病发病机制中的作用及对临床化疗,预后估计的价值。方法　流式细胞仪测定白血病细胞ｂｃｌ－ ２／ｂａｘ 蛋白抗原。结果　①４１ 例ＡＬ细胞均不同程度表达ｂｃｌ－ ２ 和ｂａｘ,ｂｃｌ－ ２ 阳性细胞率为５ ．５％ ～５２ ．４％ 。ｂａｘ 蛋白阳性率为４ ．８％ ～４２．７ ％ 。但在急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ） 和急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ） 间无显著差异（ Ｐ＞ ０．０５） ;②ｂｃｌ－ ２ 高表达（ ≥２１ ％） 病例的白细胞计数,髓外浸润例数明显高于低表达组,差异具有显著性（ Ｐ＜０ ．０５）。ｂａｘ 蛋白表达阳性率则与此无关;③ｂｃｌ－２ 蛋白在未缓解组及复发难治组均高表达,与完全缓解组及初诊组相比,差异极为显著（Ｐ＜ ０．０１）。ｂａｘ 蛋白在上述四组中无明显差异;④随ｂｃｌ－ ２／ｂａｘ 蛋白比率增高,临床缓解率明显下降。ｂｃｌ－ ２／ｂａｘ 蛋白比值＜ １ ,完全缓解率（ＣＲ）４８ ％ ,ｂｃｌ－ ２／ｂａｘ 蛋白比值≥１ ,ＣＲ 率１９％ 。结论　急性白血病ｂｃｌ－ ２ 蛋白高表达者,化疗效果差,预后不良;ｂｃｌ－ ２／ｂａｘ 蛋白比率增高,临床缓解率     

bcl-2基因调控作用与细胞凋亡在神经母细胞瘤发生发展中的作用

目的：探讨ｂｃｌ－２基因调控作用与细胞凋亡在神经母细胞瘤（ＮＢ）发生发展中的作用。方法：应用ＬＳＡＢ免疫组化及ＴＵＮＥＬ技术检测ＮＢ中ｂｃｌ－２蛋白表达和细胞凋亡。结果：１７例ＮＢ均有ｂｃｌ－２蛋白表达阳性细胞及凋亡细胞，表达指数（ＢＥＩ）９．８％～６１．８％，凋亡指数（ＡＩ）２０‰～１６７‰，二者呈负相关。年龄＜１岁、Ⅰ～Ⅱ及Ⅳ－Ｓ期、ＦＨ型ＮＢ的ＢＥＩ低于年龄≥１岁、Ⅲ～Ⅳ期及ＵＨ型，但差异无显著性意义。ＡＩ在不同分组间差异有显著性意义，且ＡＩ与术后生存时间呈正相关。结论：ｂｃｌ－２基因异常表达可能与神经母细胞或原始神经嵴细胞逃脱凋亡，不能正常成熟或消退，而发展成ＮＢ及ＮＢ的进展有关。ＡＩ高预后好。ＢＥＩ和ＡＩ的检测可为了解ＮＢ的发病机制和判断预后提供实验依据及手段。     

去铁胺联合阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡作用的实验研究

目的：探讨铁螯合剂联合阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的作用。方法：实验分为5组：空白对照组、去铁胺组、阿糖胞苷组、去铁胺+ 阿糖胞苷组、去铁胺+阿糖胞苷+三氯化铁组。上述各组与HL-60细胞共同培养6,12,24,4 8 h。通过测定细胞活力、形态学变化、流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等观察细胞凋亡等方法观察诱导HL-60细胞的作用。结果：去铁胺+阿糖胞苷可协同降低HL-60 细胞活力、抑制HL-60细胞增殖、诱导HL-60细胞凋亡,其作用随培养时间延长及药物浓度增加而增强。结论：铁螯合剂协同阿糖胞苷具有增强诱导HL-60细胞凋亡 的作用。     

细胞凋亡与白血病的发病机制及临床意义

细胞凋亡是细胞死亡的一种生理现象，它与细胞坏死有着本质的区别。它维持着体内细胞数的动态平衡，它的失衡与某些免疫性疾病、血液系统疾病及肿瘤的发生、发展有密切关系。本文综述了细胞凋亡的特殊；ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ、ｐ５３、ｂｃｒ／ａ ｂｌ基因对细胞凋亡的调控与白血病发生的关系；某些细胞因子、化疗药物通过诱导细胞凋亡治疗白血病方面的研究进展；以及利用基因共作技术促进白血病细胞凋亡等方面的进展。     

铁超载与铁剥夺对HL-60细胞bcl-2和cmy-c基因的影响

目的探讨铁超载与铁剥夺对HL60细胞bc12和cmyc基因表达的影响。方法体外培养HL60细胞,分别加入不同浓度的三氯化铁(FeC13)。采用免疫组化LASB法测定凋亡相关基因bc12及cmyc表达。结果不同浓度的FeC13作用于HL60细胞6h、12h、24h、48h,bc12表达显著高于对照组。尤以100μmolLFeC13组显著,与对照组相比差异显著(P<0.05)。不同浓度DFO作用于HL60细胞一定时间后,其cmyc表达增高。结论铁超载时bc12高表达,铁剥夺时cmyc高表达。     

脐血CD3AK细胞培养上清液对白血病细胞株HL-60细胞的影响

目的在体外实验中,研究脐血CD3AK细胞培养上清液（cord blood CD3AK supematant,CS）对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响。方法以不同浓度的CS（10％CS、15％CS、20％CS）作用于不同时间（3d,6d和9d）的HL-60细胞为实验对象,应用细胞计数法结合锥虫蓝拒染法研究CS诱导的HL-60增殖情况。应用流式细胞仪分析CS作用前后细胞周期及细胞表面分化标志CD11b的变化,光学显微镜下观察细胞形态变化,氯化硝基唑蓝（NBT）还原实验研究细胞的NBT还原阳性百分率,从而研究HL-60细胞的分化。应用电子显微镜观察细胞凋亡,原位末端标记法研究CS作用前后HL-60细胞的凋亡变化。结果随CS作用时间的延长和剂量的增加,细胞增殖速度逐渐减慢。细胞周期分析显示,CS作用后G0期和G1期显著增多,S期显著减少,G2期和M期无明显变化,说明CS使细胞阻滞在G0和G1期。随CS作用时间的延长,细胞体积逐渐增大,3d后被诱导的细胞表面开始表达分化标志物CDm并出现细胞核型变化,NBT阳性细胞增多,随cs浓度的增加和作用时间的延长,这些变化越明显。20％CS诱导72h后,被诱导的细胞出现凋亡,随诱导时间延长,凋亡细胞增多。结论CS能抑制HL-60细胞的增殖,诱导HL-60细胞分化和凋亡。     

铁剥夺和铁超负荷对白血病细胞株HL-60凋亡的影响机制

目的探讨铁剥夺和铁超负荷对白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响及其机制,为临床采用铁剥夺策略治疗或辅助治疗白血病提供理论依据。方法在HL-60细胞培养基中分别加入不同浓度的去铁胺(DFO)或三氯化铁(FeCl3),造成细胞内铁剥夺或铁超负荷状态,采取噻唑蓝(MTT)法、DNA原位末端标记染色法(TUNEL)、免疫组化法检测铁剥夺和铁超负荷状态下HL-60细胞活力、凋亡率、细胞色素C(Cyt C)阳性细胞率。结果 DFO组细胞活力呈明显下降趋势,凋亡率呈显著上升趋势;FeCl3组细胞活力和凋亡率与对照组相比呈下降趋势;DFO组细胞胞浆内Cyt C阳性细胞率与对照组相比明显升高;而FeCl3组细胞浆内Cyt C阳性细胞率与对照组相比无明显差异。结论铁剥夺可促进线粒体释放Cyt C,诱导HL-60细胞凋亡;铁超负荷对线粒体释放Cyt C无直接影响作用。     

survivin反义寡核苷酸抑制HL-60细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的：探讨survivin反义寡核苷酸(ODN)对人白血病细胞系HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法：人工合成survivin基因反义和正义ODN,并进行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径分别转染HL-60细胞;应用RT-PCR和W estern B lot检测survivin mRNA和蛋白表达;应用MTT法检测survivin反义ODN对HL-60细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡比率。结果：体外培养的HL-60细胞可表达较强的survivinmRNA和蛋白;survivin反义ODN可呈浓度依赖性地抑制survivin mRNA和蛋白表达,1 000 ng/mL AS-ODN几乎完全抑制survivin mRNA和蛋白表达。MTT研究结果表明,survivin反义ODN可呈浓度依赖性地抑制HL-60细胞增殖,1 000 ng/mL AS-ODN对细胞生长的抑制率可达78.14%;诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M期。survivin正义ODN对survivin mRNA和蛋白以及HL-60细胞的增殖和细胞周期无明显的抑制作用。结论：脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸可抑制细胞增殖、诱导细胞发生G2/M期阻滞而促进细胞凋亡。     

血管内皮生长因子体外对人急性白血病细胞株HL-60细胞凋亡及相关基因表达影响的实验研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在体外对人急性白血病细胞株HL-60的凋亡及相关基因B细胞白血病-2(Bcl-2)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)和热休克蛋白90(Hsp90)表达的影响。方法采用彗星电泳法和流式细胞术等检测经VEGF处理后HL-60细胞株的细胞凋亡率,并观察VEGF对抗细胞凋亡诱导剂鬼臼乙叉(VP16)的效应。采用RT-PCR方法从mRNA水平分别检测该细胞株的Bcl-2、Mcl-1和Hsp90等基因的表达水平。结果三种浓度VEGF(2ug/L、20ug/L、100ug/L)处理的HL-60细胞株的凋亡明显受到抑制,并且VEGF可以对抗VP16诱导的细胞凋亡效应。2ug/L的VEGF处理HL-60细胞株18h后其细胞内的凋亡相关基因Bcl-2、Mcl-1和Hsp90的mRNA表达明显增加。结论VEGF可能通过提高Bcl-2、Mcl-l和Hsp90的基因表达增加而抑制急性白血病细胞株HL-60的凋亡;VECF可以抑制人急性白血病细胞的凋亡可能是白血病的发病机制之一。     

邻苯二甲酸正丁酯对HL-60细胞凋亡影响及其作用机制

目的探讨邻苯二甲酸正丁酯(DBP)对急性早幼粒细胞性白血病细胞系HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法用细胞形态学观察、DNA断裂百分率及DNA片段凝胶电泳法观察DBP对HL-60细胞增殖与凋亡的影响,用Fu-ra-2AM方法检测对HL-60细胞内游离钙离子浓度的影响,用免疫组织化学方法检测对细胞c-myc和bcl-2蛋白表达的影响。结果DBP可剂量和时间依赖性地抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡;引起HL-60细胞内钙重新分布,促进细胞外钙离子内流,升高细胞内游离钙([Ca2 ]i);下调白血病细胞c-myc和bcl-2蛋白表达。结论DBP可能通过提升HL-60白血病细胞内钙离子水平启动凋亡,且下调c-myc和bcl-2蛋白表达促进细胞凋亡,从而发挥其净化HL-60细胞的作用。     

血管内皮生长因子对人急性白血病细胞凋亡影响及相关基因表达的临床与实验研究

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)对人急性白血病细胞株HL-60凋亡及相关基因Bcl-2和Mcl-1表达的影响,并从临床水平验证VEGF对人急性白血病细胞凋亡的影响。方法：采用单细胞凝胶电泳、流式细胞术检测VEGF处理后的HL-60细胞凋亡率;采用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测VEGF处理的HL-60细胞的Bcl-2和Mcl-1的表达水平。采用免疫细胞化学方法分别检测8例初发和复发、14例完全缓解的急性白血病患儿及5例正常儿童骨髓细胞的VEGF和Mcl-1蛋白表达。结果：VEGF可以明显抑制人急性白血病细胞株HL-60的凋亡,并且可以对抗VP16诱导的细胞凋亡效应。VEGF孵育HL-60细胞株18h后,其细胞内的Bcl-2和Mcl-1的mRNA和蛋白表达水平明显增加。初发和复发组白血病患儿骨髓细胞的VEGF和Mcl-1蛋白表达水平高于完全缓解组。结论：VEGF可能通过同时提高Bcl-2和Mcl-1的mRNA和蛋白表达,抑制急性白血病细胞株HL-60的凋亡,可能是白血病的发病机制之一。VEGF,Bcl-2和Mcl-1表达的增加可能对人急性白血病细胞的发生发展及预后产生影响,有可能成为临床白血病预后的参考指标之一。     

热休克蛋白90抑制剂DMAG对白血病细胞株HL-60的作用

目的研究热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(DMAG)对白血病细胞株HL-60的抑制作用及相关机制。方法通过MTT法、流式细胞术检测HL-60细胞在DMAG作用下增殖及凋亡情况;流式细胞术检测HL-60细胞周期的改变;流式细胞术及Westen blot法检测HL-60细胞Raf蛋白含量;RT-PCR法检测raf-mRNA表达量的变化。结果 DMAG能抑制HL-60细胞的生长,并诱发凋亡。细胞周期分析显示,DMAG作用后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。DMAG能降低HL-60细胞Raf蛋白的含量,但raf-mRNA表达量无明显变化。结论 DMAG能引起HL-60细胞的凋亡,抑制其生长。DMAG引起HL-60细胞凋亡的机制与降低Raf蛋白含量有关。     

HL-60细胞铁池变化与凋亡相关基因关系的初步研究

目的探讨HL-60细胞铁池改变对凋亡相关基因表达的影响及可能的分子机制。方法实验分组为去铁胺(DFO)组、DFO+三氯化铁组及空白对照组,分别采用钙黄绿素检测HL-60细胞LIP、流式细胞术观察HL-60细胞凋亡和RT-PCR测定HL-60细胞bax、c-myc、rbmRNA表达。结果(1)不同浓度的DFO作用于HL-60细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,显示一定的时间剂量依赖性。(2)不同浓度的DFO作用于HL-60不同时间后,细胞凋亡增加,高于对照组(P<0.05)。(3)RT-PCR结果显示,DFO能明显上调c-myc、rb和baxmRNA表达(P<0.05)。结论DFO通过螯合细胞内铁,降低HL-60细胞LIP,诱导细胞凋亡;诱导HL-60细胞凋亡的作用可能与其降低细胞动态铁池,上调细胞凋亡相关基因c-myc、rb、baxmRNA表达密切相关。     

正常骨髓基质细胞对全反式维甲酸诱导分化HL-60细胞的作用

目的研究BMSC对ATRA抑制HL-60细胞增殖、诱导其分化的作用。方法分别将融合的基质细胞层(SC)、2%戊二醛固定的基质细胞层(FSC)和基质细胞,条件培养液(SCM)与HL-60细胞共同培养。SC、FSC、SCM组分别加或不加ATRA为实验组,另设阴性对照和ATRA对照组。通过细胞计数观察细胞增殖情况及通过细胞形态观察,NBT还原试验,分析细胞分化状态。结果细胞计数示SC、FSC、SCM各组均能抑制悬浮生长的HL-60细胞的增殖;SC和FSC能增强ATRA对HL-60细胞的抑制增殖作用(P<0·01)。SC、FSC、SCM各组的诱导分化率、NBT还原率等分化指标均与阴性对照组无差异(P>0·05);SC和FSC可促进ATRA对HL-60细胞的诱导分化作用(P<0·01)。结论BMSC可增强ATRA对悬浮生长的HL-60细胞的抑制增殖和诱导分化作用,这可能是通过BMSC与HL-60细胞之间的相互作用调节的。