原发性肝癌转化基因的RFLPs研究(Ⅱ)中国汉族人癌基因N—ras对限制酶Hind Ⅲ的RFLPs

用~(32)p 标记的人癌基因 N-ras 探针 p52C-分别与经限制性核酸内切酶 Hind Ⅲ消化的原发性肝癌患者手术切除的肝癌组织 DNA 以及作为对照的人工流产胎儿绒毛的DNA 进行分子杂交以观察其 RFLPs。结果发现有8.6kb、5.2kb 和6.5kb 三种首报的等位片段,它们在全部标本中出现的频率分别为100%、53.8%和23%。就基因型而言,8.6kb 纯合子占23%,8.6kb/5.2kb 杂合子占54%,8.6kb/6.5kb 杂合子占23%。在首报的三种等位片段中,6.5kb 的片段仅出现于肝癌组织 DNA。     

原发性肝癌转化基因的RFLPs研究(Ⅰ) 中国汉族人基因组癌基因N-ras对限制酶Eco RI的RFLPs

用原发性肝癌患者手术切除的肝癌组织的 DNA 和肝癌患者、肝癌患者一级亲属与对照组个体白血细胞的 DNA 以及人工流产胎儿绒毛的 DNA 分别经限制性核酸内切酶 Eco RI 酶解、琼脂糖凝胶电泳分离、Southern 转移、并用~(32)P-标记的癌基因 N-ras 探针作分子杂交,以观察其 RFLPs。结果在中国汉族人基因组癌基因 N-ras 的左段意外地发现4.0kbp,7.8kbp,12.0kbp 等3个未见报告的特异等位片段,而未发现已见报告的8.8kbp,9.0kbp 或9.2kbp 的片段;在该基因的右段则除已见报告的7.0kbp 片段外还获得1个未见报告的12.8kbp 的等位片段。未探查出这些 RFLPs 与肝癌易感性的相关性。     

中国人胃癌组织和正常组织基因组DNA中癌基因Ha—ras的RFLP研究

本文报道以 pHS-49为探针,分析中国人群中36例胃癌患者癌组织和25例正常人体组织基因组 DNA 中 Ha-ras 基因的 BamHI 限制性片段长度多态性。发现了10种不同长度的等位片段和17种基因型,其中4种小于6kb 的 BamHI 片段是迄今国外未见报道的,这可能是中国人群遗传多态性的一个特征。此外,在胃癌组织中发现 Ha-ras 的一些等位基因和基因型的频率明显高于正常人群。对两名胃癌患者家系中的11名成员作了RFLP 分析,发现有些成员出现3条和4条限制性片段的杂合个体,表明这些个体的染色体上含有的 Ha-ras 基因不止一份拷贝。对上述现象的可能原因作了分析和讨论。     

Ha-ras在正常人和胃癌患者DNAs的限制性片段长度多态性研究

以癌基因 Ha-ras 为探针,对10例正常人组织和22例人胃癌组织的 DNA 用限制性内切酶 Bam HI 酶切后,再通过瑟慎印迹法(Southern Blot)杂交,发现正常组织中的 Ha-ras 常见等位片段的出现频率高于胃癌组织,而稀有等位片段的出现频率低于胃癌组织;正常组织中Ha-ras常见等位基因纯合子的出现频率高于胃癌组织,而稀有杂合子的出现频率低于胃癌组织。提示 Ha-ras 限制性片段长度多态性(RFLPs)和胃癌可能存在着连锁关系。     

U937细胞c—fos癌基因限制性多态性分析

本文分别用ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨＩ、ＨａｅⅢ限制性内切酶对Ｕ９３７细胞基因组ＤＮＡ和正常人基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析，结果表明Ｕ９３７细胞存在ｃ－ｆｏｓ基因限制性多态性改变，并伴随着基因扩增。     

U_（937）细胞c──fos癌基因限制性多态性分析

本文分别用ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ、ＨａｅⅢ限制性内切酶对Ｕ９３７细胞基因组ＤＮＡ和正常人基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，结果表明Ｕ９３７细胞存在Ｃ──ｆｏｓ基因限制性多态性改变，并伴随着基因扩增。     

食管癌组织p53抑癌基因等位基因杂合缺失及突变的研究

目的：为了探讨ｐ５３抑癌基因在原发性食管癌中的改变以及与食管癌的发生、发展可能存在的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），配合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析法，对４８例新疆地区原发性食管癌及正常组织中ｐ５３抑癌基因的等位基因杂合缺失（ＬＯＨ）及突变进行了检测。结果：ＲＦＬＰ分析显示ｐ５３外显子４和内含子６的ＬＯＨ分别为８／１８和４／１３。ＳＳＣＰ分析显示，ｐ５３外显子５～８的突变率为５０％（２４／４８），且突变多出现在食管癌发展的较晚阶段。结论：ｐ５３基因缺失、突变可能在食管癌发生、发展过程中起重要作用     

人载脂蛋白E基因型测定方法的建立

目的：建立一种准确、简便和经济的适用于大范围测定载脂蛋白Ｅ基因型的方法。方法：自中血中采用ＴＫＭ法提取人基因组ＤＮＡ,ＰＣＲ－ＲＦＬＰ确定载脂蛋白Ｅ的基因型,硝酸银染色聚丙烯酰胺凝胶,若银染效果不佳可用硝酸脱色后重染。结果：ＴＫＭ法获得ＤＮＡ在产量和质量上均能满足ＰＣＲ需求;电泳凝胶经银染可得清晰的ＤＮＡ特异带,据此能准确确定样品载脂蛋白Ｅ的基因基因型;用硝酸溶液脱色后的凝胶经重染仍可得到清晰的图     

人骨肉瘤组织线粒体DNA控制区PCR-RFLP分析

目的比较分析人骨肉瘤组织mtDNA控制区的序列和正常人的差异.方法用ApaⅠ,AvaⅡ,BamHⅠ,EcoRⅤ,HaeⅢ和KpnⅠ共6种限制性内切酶,对20例骨肉瘤组织进行了PCR产物限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析.结果 20例骨肉瘤组织DNA均扩增出长1 451 bp的线粒体控制区特异性目的片段,没有发现长度多态性.8例骨肉瘤组织在mtDNA 16 519位核苷酸处发生了T→C的突变,占40%(8/20),其中骨母细胞型4例,占40%(4/10),软骨母细胞型2例,占40%(2/5),纤维母细胞型2例,占40%(2/5),各亚型之间没有显著性差异(P＞0.05);7例组织第16 132位核苷酸处的A缺失,占35%(7/20),其中骨母细胞型3例,占30%(3/10),软骨母细胞型2例,占40%(2/5),纤维母细胞型2例,占40%(2/5),各亚型之间没有显著性差异(P＞0.05);4例组织既有16 519位核苷酸处T→C的突变,又有16 132位A的缺失,占20%(4/20).这两种突变在20例骨肉瘤病例以及各亚型中占的比例均显著高于正常人群相应位点的多态性变异.结论这两种突变在骨肉瘤细胞mtDNA中发生率较高,可能在骨肉瘤的发生发展中发挥重要的作用.     

人胃癌c—Ha—ras基因的限制片段长度多态性

以~(32)P-dATP 标记的克隆的人 c-Ha-ras 基因为探针,通过 Southern吸印杂交,鉴定了 c-Ha-ras 基因座位在胃癌患者瘤组织及其远端组织 DNA 中,3种 Bam HI 限制片段长度的多态性,并在2个病例中发现了可能的移位。     

中国人群中Wilson病家系和正常人D13S4区限制性片段长度多态性分析

用Southern blot技术,以13q22-31上的plE8探针对中国人群中4个Wilson病(WD)家系和10例正常人D13S4区见MspⅠ酶切片段长度多态性(RFL)分析。结果表明:A、B两杂交片段出现的频率分别为46.9％和53.1％,这和国外报道的频率0.49/0.51是一致的,同时对WD家系成员A、B两杂交片段出现频率和正常人相比较,经统计学处理,x~2=0.026<3.8,P>0.05。无显著性差异。并对中国人群中WD遗传异质性、连锁不平衡以及WD家系成员的临床前诊断做了探讨,为WD基因的研究和基因水平的诊断提供了科学依据。     

PTTG蛋白和c-myc蛋白在原发性肝细胞癌中的表达

目的 :研究PTTG蛋白和c -myc蛋白与原发性肝细胞癌 (HCC)发生的关系。方法 :应用免疫组织化学方法 (SP法 )检测 6 1例人肝细胞癌和癌旁肝组织中PTTG蛋白和c -myc蛋白的表达。结果 :PTTG蛋白和c-myc蛋白在肝癌中阳性率分别为 78.7% (48/ 6 1)和 6 7.2 % (41/ 6 1) ,在癌旁组织中阳性率分别为 91.8%(5 6 / 6 1)和 83.6 % (5 1/ 6 1) ,相关性研究显示PTTG蛋白和c -myc蛋白表达关系密切 (P <0 .0 0 5 )。结论 :PTTG和c-myc蛋白过度表达参与了人肝细胞癌的发生发展过程。     

多药耐药基因产物P-糖蛋白在正常人体组织中的分布和细胞定位

采用两种抗P—糖蛋白抗体免疫组化检测了32份正常人体组织中多药耐药基因产物P—糖蛋白(P－gp)。结果发现，肾上腺、肾、肝、大肠、小肠、胰腺及甲状腺中P－gp高度表达。在肾上腺和甲状腺中，P－gp弥散分布于细胞浆质。在肾脏中，P—gp在近曲小管上皮细胞的管腔侧分布较多。在肝脏中，P—gp在肝细胞的胆管面和小胆管上皮细胞的管腔侧分布较多。在大肠中，P－gp表达水平有愈向远瑞愈高的趋势，阳性颗粒主要位于粘膜技状上皮细胞的管腔面。在小肠上皮细胞和胰腺小胰管上皮细胞P—gp分布也有朝向管腔侧较多的极性特点。P—gp在正常人体组织中的高度表达与其生理功能有关。     

肝细胞癌及癌旁组织中白蛋白mRNA和甲胎蛋白mRNA的表达

目的：检测肝细胞癌及癌旁组织白蛋白ｍＲＮＡ和甲胎蛋白ｍＲＮＡ表达，为外周血肝细胞癌转移指标提供依据。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测１８例肝细胞癌和１３例癌旁肝组织中白蛋白ｍＲＮＡ。结果：①白蛋白ｍＲＮＡ在１８例癌及１３例癌旁组织中均有高表达；②白蛋白ｍＲＮＡ检出率明显高于第一轮ＰＣＲ甲胎蛋白ｍＲＮＡ（Ｐ〈０．００１）；③白蛋白ｍＲＮＡ和甲胎蛋白ｍＲＮＡ可同时在癌组织中表达。结论：选择检测白蛋白ｍＲＮ     

DNA拓扑异构酶在人体组织的分布及其与肿瘤的关系

作者检测了人体多种组织器官及相应肿瘤组织的拓扑酶Ⅰ及Ⅱ的活力,结果表明,除睾丸组织拓扑酶Ⅰ和Ⅱ活力显著高于其它组织外,其余各组织拓扑酶Ⅰ和Ⅱ的活力水平基本一致;肿瘤组织与非肿瘤组织拓扑酶Ⅰ活力无明显差异;恶性肿瘤组织的拓扑酶Ⅱ活力较良性肿瘤及非肿瘤组织明显升高。     

SO-Rb50人视网膜母细胞瘤株抗癌基因及癌基因的检测

以SO-Rb50第327代细胞,提取其基因组DNA,以正常人血细胞为对照,检测其Rb抗癌基因和c-myc癌基因。结果表明,该细胞株Rb基因完全缺失,c-myc原癌基因扩增3倍。此为以该细胞株在体外进一步研究肿瘤生长调控和逆转提供依据。     

抑癌基因p16在肝细胞癌及癌旁组织中的分布,表达及意义

目的 :探讨抑癌基因 p16与原发肝癌 (primaryhepatocellularcarcinoma ,HCC)发生及恶性程度的关系。方法 :p16是一种新的抑癌基因 ,应用免疫组织化学法检测了 6 9例HCC和 6 3例癌旁组织的 p16表达。结果 :p16蛋白免疫组织化学阳性信号为棕黄色颗粒 ,主要分布在胞浆 ,少数细胞核内也可见阳性显色 ,p16蛋白在癌组织及癌旁组织中的阳性率分别为 2 6 5 % (18/6 9)和 92 % (5 8/6 3) ,两者比较差异显著 (P <0 0 1)。 6 9例HCC标本 ,Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中 p16蛋白的检出率分别为 5 2 6 % (10 /19)、 2 3 3 % (7/30 )、5 % (1/2 0 ) ,p16蛋白在高分化HCC中的表达率明显高于低分化HCC组 (P <0 0 5 )。结论 :抑癌基因 p16的表达和分布与HCC发生、发展及恶性程度有密切的关系 ,提示p16基因失活可能发生在HCC的早期     

中国人St14/Taq I RFLPs及其在产前诊断中的应用

血友病A是人类最常见的遗传性出血性疾病,大约10,000名出生男婴中有一人受累。病因是凝血第Ⅷ因子基因缺陷。我们用与FⅧ基因紧密连锁的一段基因外DNA克隆St14为基因探针对FⅧ基因的TaqⅠ多态性进行了研究。利用这一多态性为遗传标志,成功地进行了一例血友病A高危胎儿的产前基因诊断。