甘草与海藻 大戟 芫花配伍对大鼠肝脏CYP2E1酶活性及mRNA表达的影响

目的研究甘草与海藻、大戟、芫花合用对CYP2E1酶活性的影响及在mRNA水平的调控作用。方法采用高效液相色谱法测定CYP2E1活性;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)评价药物对CYP2E1 mRNA水平的影响。结果甘草单用能明显诱导CYP2E1酶活性,与海藻、大戟、芫花合用后对CYP2E1酶活性的诱导作用没有甘草单用明显。CYP2E1 mRNA水平基本与酶活性水平相平行。结论甘草与海藻、大戟、芫花合用后诱导CYP2E1酶活性,酶活性变化可能主要通过影响基因转录来实现。     

甘遂与甘草合用对甘遂毒性成分甘遂萜酯A、甘遂萜酯B代谢的影响

目的研究甘遂与甘草合用对甘遂中毒性成分甘遂萜酯A(Kansuinine A,KA)和甘遂萜酯B(Kansuinine B,KB)代谢的影响。方法将正常对照组、甘草组、甘遂与甘草合用组大鼠给予相应药物处理10 d后,制备肝微粒体。将甘遂的毒性成分KA、KB与各组肝微粒体进行体外共孵育,测定孵育后体系中KA、KB的浓度,用于评价KA、KB的代谢情况。另取正常大鼠肝微粒体,分别加入CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19的抑制剂红霉素、盐酸苯海拉明、苯溴马隆、西咪替丁和氟康唑,与KA、KB进行体外共孵育,检测孵育后体系中KA、KB的浓度,阐明参与KA、KB代谢的CYP酶亚型。取正常大鼠肝微粒体,分别加入甘草酸与甘草次酸,与KA、KB体外共孵育,测定孵育后体系中KA、KB的浓度,评价甘草酸与甘草次酸对KA、KB代谢的影响。结果甘遂与甘草合用组微粒体中KA、KB的含量明显高于正常对照组和甘遂组,表明甘遂与甘草合用使甘遂中毒性成分KA、KB的代谢受到抑制。与红霉素、盐酸苯海拉明、苯溴马隆、西咪替丁和氟康唑共孵育的微粒体中KA、KB的含量均明显高于空白对照组,表明CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19均参与了KA、KB的代谢。与甘草酸和甘草次酸共孵育,体系中KA、KB的浓度明显高于空白对照组。CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2表明甘草酸和甘草次酸能够抑制KA、KB的代谢。结论 CYP2C19均可能参与了甘遂毒性成分KA、KB的代谢,甘遂与甘草合用能够抑制CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2及CYP2C19的活性,而使KA、KB的代谢减慢,产生蓄积;另外,甘草中主要成分甘草酸和甘草次酸能够抑制KA、KB的代谢,这可能是甘遂与甘草合用毒性增加的原因之一。     

甘草与海藻提取液合用对CYP3A1/2酶活性及mRNA表达的影响

目的:研究甘草与海藻提取液合用对CYP3A1/2酶活性的影响及在mRNA水平的调控作用。方法:采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;采用RT-PCR评价药物对CYP3A1、CYP3A2 mRNA水平的影响。结果:甘草、海藻提取液合用后诱导了CYP3A1/2的酶活性;合用后诱导CYP3A1、CYP3A2 mRNA表达。结论:甘草、海藻提取液合用后诱导CYP3A1/2酶活性,酶活性增强可能主要由诱导其mRNA水平来实现。     

海藻、大戟、甘遂和芫花分别与不同剂量的甘草配伍对小鼠肠功能的影响

目的探讨海藻、大戟、甘遂和芫花分别与不同剂量的甘草配伍对肠功能的影响。方法采用均匀设计进行分组。小鼠分别ig给予海藻甘草、大戟甘草、甘遂甘草或芫花甘草合煎液1次,分别于给药后20,60,30和20min后,再ig给予5%印度墨汁混悬液0.2ml。给予墨汁20min后处死小鼠,测定小肠推进率(IPR)。结果大戟甘草合煎液组小鼠在总给药剂量0～30g·kg-1范围内且总给药剂量一定时,随甘草剂量的增加小鼠IRP降低(R=0.7853,P<0.05)。芫花甘草合煎液组总给药剂量低于5g·kg-1时,小鼠IRP未见明显变化;总给药剂量>5g·kg-1且一定时,小鼠IRP随甘草呈剂量依赖性增加(R=0.8414,P<0.05)。海藻甘草合煎液和甘遂甘草合煎液组海藻和甘遂与甘草配伍比例的变化对IRP无明显影响。结论在一定的总给药剂量范围内,大戟甘草合煎液对小鼠肠功能的影响与配伍比例密切相关,甘草剂量增加时小鼠肠功能减弱。芫花甘草合煎液对小鼠肠功能的影响也与配伍比例密切联系,甘草剂量增加时肠功能增强。     

贝母、乌头合用对大鼠肝脏CYP450的调控作用

目的:研究乌头、贝母合用对主要药物代谢酶和蛋白质水平的影响,阐明中药产生相互作用的机制。方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和Western Blot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA及蛋白水平的影响。结果:乌头、贝母合用后CYP1A2、CYP2E1的酶活性均有下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP2E1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降;CYP3A1的蛋白质表达水平上升。RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP2E1的mRNA水平下降;CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平上升。结论:乌头、贝母合用后抑制CYP1A2、CYP2E1的酶活性,酶活性下降可能主要通过影响基因转录进而影响其蛋白水平来实现。     

“藻戟芫遂俱战草”之实验与临床研究述要

本文综述近年相反药甘草与海藻、大戟、甘遂、芫花配伍应用的实验与临床研究现状。     

马钱子碱与甘草次酸、甘草苷配伍后对大鼠肝脏CYP450的影响(英文)

马钱子碱每日低、中、高(3,15和60 mg·kg-1)剂量以及高剂量马钱子碱和甘草次酸(每日25 mg·kg-1)、甘草苷(每日20 mg·kg-1)配伍,分别对Wistar大鼠连续灌胃给药7天后,检测不同给药组对CYP3A、CYP1A2、CYP2E1和CYP2C的酶活性和mRNA表达的影响。与对照组相比,高剂量马钱子碱使CYP3A活性下降24.5%,CYP2C的活性下降34.6%,而使CYP2E1的活性提高了146.1%。另一方面,与高剂量组相比,甘草次酸配伍组使CYP2E1的活性降低了51.4%,CYP1A2的活性降低了33.5%;甘草苷配伍组使CYP2E1的活性降低了41.1%,CYP2C的活性降低了37.7%。实验结果表明,马钱子碱和甘草次酸、甘草苷配伍后,可以在一定程度上影响上述CYP450酶的mRNA表达和酶活性。因此推测配伍后甘草苷对马钱子碱所致CYP450酶异常变化的拮抗作用,以及甘草次酸对CYP2E1和CYP1A2活性的抑制作用,可能是甘草降低马钱子毒性的重要机制之一。     

临床治疗剂量氯氮平人体内代谢机制研究

目的本课题主要探讨临床治疗剂量氯氮平的代谢机制，为临床合理用药提供指导。方法15例精神分裂症男性住院病人，单用氯氮平治疗，达到稳态浓度后，采用自身前后对照设计试验，研究氟西汀抑制前后氯氮平及其代谢产物药代动力学参数的变化及其与酶活性的相关性。CYP1A2、CYP3A4和CYP2136的活性分别用咖啡因、咪达唑仑和右美沙芬探测。体内氯氮平及其代谢产物、咪哒唑仑及其代谢产物、尿中右美沙芬及其代谢产物用HPLC-MS测定。血中咖啡因及其代谢产物用HPlC-UV测定。数据用SPSS软件进行统计分析。结果氯氮平合用氟西汀后，氯氮平的Cmax、AUC0-24显著增加，t1/2增加趋势，但没有显著性差异。代谢产物去甲氯氮平的AUC0-24显著降低，Cmax和t1／2无显著性差异。N-氧化氯氮平的Cmax和AUC0-24显著性降低，t1／2没有显著性差异。合用氟西汀前后CYP1A2活性无差异，CYP3A4和CYP2D6活性显著降低。合用氟西汀前后CYP1A2活性分别与合用氟西汀前后氯氮平的AUC0-24以及去甲氯氮平的AUC0-24相关，与N-氧化氯氮平的AUC0-24无显著相关。CYP3A4和CYP2D6活性与氯氮平、去甲氯氮平、N-氧化氯氮平的AUC0-24均无显著相关，但是合用氟西汀后CYP3A4活性变化与N-氧化氯氮平的AUC0-24变化显著相关，CYP2D6活性变化与去甲氯氮平的AUC0-24变化显著相关。结论临床剂量氯氮平的代谢途径为去甲基化和N-氧化，其中去甲基代谢为主要代谢途径主要由CYP1A2催化。CYP3A4和CYP2D6不是催化CLZ代谢的主要酶，但是CYP3A4参与了CLZN-氧化代谢，CYP2D6参与去甲基代谢。     

丹红注射液对大鼠肝微粒体5种CYP亚型酶活性的影响

摘要目的研究丹红注射液对5种细胞色素P450亚型酶活性的影响,为临床合理用药提供参考。方法采用大鼠体外肝微粒体孵育法,分别以非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、睾酮为CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的探针药物,在大鼠肝微粒体孵育体系中孵育,用高效液相色谱（HPLC）法测定相应的代谢产物,比较空白对照组和丹红注射液低、中、高剂量组之间探针药物代谢率的差异,评价丹红注射液对各亚型酶活性的影响。结果在体外肝微粒体孵育体系中,丹红注射液低剂量组中CYP1A2 和CYP2C9活性与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）;中和高剂量组中CYP1A2和CYP2C9活性与空白对照组相比降低,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）;丹红注射液低、中、高剂量组中CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的活性与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性的半数抑制浓度（IC50）和抑制常数（Ki）分别为0.54%和0.226%。结论丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性有抑制作用,且为混合型抑制;对CYP2C9有弱抑制作用;对CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4酶活性无明显影响。     

甘草次酸在人细胞色素CYP450中体外代谢研究(英)

甘草根是中医临床常用解毒草药, 其活性成分甘草次酸主要是通过肝脏代谢。本文研究了人肝微粒体以及人源性CYP450s对甘草次酸的体外代谢影响, 以及甘草次酸对几种CYP450酶活性的影响。实验结果表明, 甘草次酸体外主要代谢酶为CYP3A4。体外药代动力学参数K_m, V_max和CL_int分别为18.6 μmol·L⁻¹, 4.4 nmol·mg⁻¹(protein)·min⁻¹和0.237 mL·mg⁻¹(protein)·min⁻¹。体外抑制试验显示, 50 μmol·L⁻¹甘草次酸可以抑制CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4酶的活性, 其抑制率可高达50%以上。     

京大戟和甘遂炮制前后大戟二烯醇的含量比较

目的:建立有毒中药京大戟与甘遂生品、醋制品中大戟二烯醇的含量测定方法,并比较两者炮制前后的含量变化。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil ODS(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(98∶2),柱温为30℃,流速为1.0mL·min-1,检测波长为210nm。结果:大戟二烯醇进样量在0.42～6.23μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9998);京大戟和甘遂生品的平均加样回收率分别为99.28%和99.80%,RSD分别为1.69%和1.83%(n=9)。京大戟中大戟二烯醇的含量明显高于甘遂,且醋制不会对大戟二烯醇的含量造成显著影响。结论:本方法能准确测定京大戟和甘遂中大戟二烯醇的含量。     

浅谈中药配伍减毒及现代研究

中药以配伍来减毒主要反映在两个方面:一是运用七情中"相杀"、"相畏"的关系,即一种药物能减轻另一种药物的毒副作用,如生姜能减轻和消除半夏的毒性,砂仁能减轻熟地滋腻碍脾的副作用等。二是多味功用相近药物同时配伍运用,这种方式既可利用相近功用药物的协同作用,又能有效减轻毒副作用的发生,如十枣汤之甘遂、大戟、芫花。本文从温热药、寒凉药的相关配伍减毒实例及现代研究进展来浅谈配伍的妙处。     

甘遂提取物对肿瘤瘤株Hep、S180的抑制作用观察

目的观察甘遂提取物作用于小鼠移植瘤细胞Hep、S180后的抑制作用。方法模型组、5-Fu组、甘遂提取物组（E）、5-Fu＋E组,每组10只小鼠分别于右前肢腋皮下接种瘤中注射Tween80溶液、5-Fu、甘遂提取物、甘遂提取物＋5-Fu。免疫组化检测Bcl-2表达。体外培养S180细胞,加入药物浓度为50μg/ml、10μg/ml、1μg/ml,培养48h,流式细胞仪测细胞凋亡率。结果模型组与各实验组移植癌和移植癌组织与药物注射引起肿瘤坏死的Bcl-2蛋白表达,在统计学上有显著差别（P〈0.05）。加入药物浓度为50μg/ml、10μg/ml、1μg/ml,流式细胞仪测定凋亡率分别为33.9%、28.8%和23.3%。结论中药甘遂对Hep、S180有明显的抑制作用。     

Cytotoxic diterpenoids from Euphorbia pekinensis

A new diterpenoid, named euphpekinensin, along with three known diterpenoids, was isolated from the roots of Euphorbia pekinensis for the first time and the structures were elucidated by spectral analysis. The 2D-NMR techniques such as 1H-1H COSY, HMQC, HMBC and NOESY spectra were mainly applied to determine the structure of the new diterpenoid. The four diterpenoids showed cytotoxic activity against human KB cells in vitro.     

Molecular authentication of the traditional Chinese medicinal plant Euphorbia pekinensis

The ITS regions of Euphorbia pekinensis and six other Euphorbia species used as adulterants of E. pekinensis were sequenced to differentiate them. The sequences are identical among the individuals in the seven species studies. Diversity in DNA sequences among various species was found ranging from 8.3% to 43.8% in ITS1 and 7.6% to 36.6% in ITS2 region. Furthermore, based on the divergent ITS regions, species-specific primers, JDJp 1 and JDJp 2, were designed in the polymorphic regions of E. pekinensis to distinguish it from adulterants. These ITS-derived primers amplified a 281-bp-specific DNA fragment from E. pekinensis. No amplified product was observed using DNA of six adulterants.     

芫花根分级提取物的化学成分及抗炎活性研究

依次采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇分级提取芫花根,以GC MS分析各分级提取物(E1~E5)的化学成分,以小鼠网状内皮系统(RES)对刚果红的吞噬活性和小鼠毛细血管通透性为模型,评价其对急性炎症的抑制活性。E1~E5共检测出93种化合物,其中脂肪族化合物 75 种,芳香族化合物 13 种(主要为邻苯二甲酸酯衍生物),生物碱类化合物5种。其中,E5中芳香族化合物的含量最高,达 24.943%。E1~E5均能提升小鼠RES对刚果红的吞噬活性和显著抑制小鼠毛细血管通透性的增加,其中 E5 的活性最为显著。邻苯二甲酸酯衍生物的存在可能是芫花根分级提取物具有抗炎活性的物质基础。E1~E5对急性炎症的抑制作用可能是通过提升RES的吞噬活性和竞争性地与组胺受体结合来实现的。     

甘遂醋炙前后对脾淋巴细胞活力和腹腔巨噬细胞释放NO的量效关系比较研究

目的比较甘遂醋炙前后对脾淋巴细胞活力和腹腔巨噬细胞释放NO的量效关系,初步探讨甘遂醋炙减毒机制。方法采用MTT法分析脾淋巴细胞活力和Griess法分析大鼠腹腔巨噬细胞NO释放情况,比较甘遂生品、清炒品、醋润品和醋炙品的致炎毒性及量效关系比较。结果在9.5～4750 mg·L-1浓度范围内,甘遂生品组与阴性对照组比较,能够促进脾淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞NO的释放(P<0.01),药物作用呈现一定的量效关系;甘遂清炒组、醋润组和醋炙组与甘遂生品组比较,均能抑制脾淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞NO释放(P<0.05),其抑制顺序为醋炙品>醋润品>清炒品,且抑制作用呈现一定的量效关系。结论在9.5～4 750 mg·L-1浓度范围内,甘遂清炒品、醋润品和醋炙品均能降低甘遂的致炎毒性,且降低毒性作用呈现一定的量效关系,并提示在甘遂醋炙过程中加热和醋润两个炮制程序能够起到降低甘遂致炎毒性的协同作用,从而为探讨甘遂醋炙减毒机制提供了一定的依据。     

Two new casbane diterpenoids from the roots of Euphorbia pekinensis

From the roots of Euphorbia pekinensis, two new casbane diterpenoids, named pekinenins A (1) and B (2), were isolated. Their structures were elucidated as 18-hydroxy-1βH,2αH-casba-3E,7E,11E-trien-5-one (1), 5α-methoxy-1βH,2αH-casba-3Z,7E,11E-trien-18-oic acid (2) by a combination of 1D and 2D NMR spectroscopy and mass spectrometry. In the cytotoxicity assay of the two new compounds against Hela, MCF-7, and C6 human cancer cell lines, compound 1 showed moderate cytotoxic activity against two human cancer cell lines, Hela and C6, with IC(50) values of 42.97 and 50.00?μM, respectively.