骨关节炎欠骨细胞凋亡调控基因的研究

目的 比较分析正常人及老年性骨关节炎患者软骨细胞ｂａｘ、ｂｃｌ－２的表达及细胞凋亡状况。方法 取９例骨关节炎患者的关节软骨做实验标本,以６例无骨关节炎病史的意外死亡者关节软骨作为正常对照,采用逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测dirｂａｘ、ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达,免疫组化检测ｂａｘ、ｂｃｌ－２蛋白;应用ＴＵＮＥＬ方法进行凋亡细胞原位检查。结果 骨关节炎患者和正常对照软骨细胞都能表达ｂａｘ、     

SOX2基因对骨关节炎软骨细胞凋亡的影响研究

目的 探讨SOX2基因对人骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡的影响及机制。方法 以正常软骨组织作为对照,通过Western blotting检测OA软骨组织SOX2蛋白表达。从人OA中分离软骨细胞,参照Lipofectamine TM2000说明将重组体pcDNA3.1-SOX2及空载体pcDNA3.1转染软骨细胞,并设置空白对照组。AG490作为JAK2/STAT3信号通路抑制剂,各组细胞处理48 h,通过流式细胞术、ROS试剂盒分别检测各组细胞凋亡率及ROS水平。Western blotting检测JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3的蛋白相对表达量。结果 人OA软骨组织SOX2表达明显低于在正常软骨组织表达（0.065±0.009 vs 0.313±0.028, P<0.05）。转染pcDNA3.1-SOX2的OA软骨细胞SOX2表达明显高于空白组（0.556±0.048 vs 0.122±0.013, P<0.05）。pcDNA3.1-SOX2可明显降低OA软骨细胞凋亡率(3.11±0.42 vs 8.54±0.68)及ROS水平(23.46±2.15 vs 52.67±4.41),上调p-JAK2（0.142±0.013 vs 0.065±0.009）和p-STAT3表达（0.218±0.020 vs 0.126±0.015）（P<0.05）,AG490（15.23±1.13 vs 8.15±0.62）可诱导OA软骨细胞凋亡,而pcDNA3.1-SOX2可减弱AG490对OA软骨细胞凋亡促进作用（P<0.05）。结论 SOX2可抑制OA软骨细胞凋亡,其机制可能与激活JAK2/STAT3信号通路有关。     

骨关节炎软骨细胞凋亡机制的研究进展

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种常见的关节退行性疾病,严重影响人类健康.近年研究显示,软骨细胞过度凋亡在OA的发病中产生了重要影响.软骨细胞凋亡的机制目前尚不明确,一般认为,体内外各种凋亡诱导因子通过刺激细胞内多条信号转导通路,导致下游凋亡途径的激活,最终大多汇集为caspase级联放大反应这一共同通路.阐明关节软骨细胞凋亡的机制,将有助于OA的防治.为此,本文针对这方面的研究现状作了简要的综述.     

柚皮苷抑制骨关节炎软骨细胞凋亡实验研究

目的研究柚皮苷在炎症环境下对人骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法采用不同浓度（0、0．1、1、10、100 mg／L）柚皮苷对 OA 软骨细胞进行预处理2 h 后,加入或不加入炎症因子混合液（白细胞介素-1β5 ng／ml 和肿瘤坏死因子-α20 ng／ml）共作用24 h。首先检测柚皮苷对炎症环境下软骨细胞活性和凋亡的影响,然后检测软骨细胞在柚皮苷作用下的一氧化氮（NO）水平及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）-3、caspase-8活性变化情况。结果柚皮苷预处理后软骨细胞在炎症因子刺激下发生凋亡显著减轻,且其抑制细胞凋亡作用具有浓度依赖性。进一步分子生物学检测显示,柚皮苷对 NO 生成及激活的 caspase 信号转导通路具有明显抑制作用。结论柚皮苷能有效抑制人 OA 软骨细胞凋亡,其作用机制可能是柚皮苷阻断了 NO 产生并抑制了下游的 caspase 信号通路,有望应用于 OA 治疗新药的研发。     

骨关节炎细胞凋亡与一氧化氮的调控作用

凋亡是有核细胞在一定条件下 ,启动自身内部机制 ,通过内源性ＤＮＡ内切酶的激活而发生的细胞自然死亡过程。目前已认识到细胞凋亡在胚胎发生、器官发育、炎症损伤、肿瘤发生及保持机体的稳态中发挥着至关重要的作用[1] 。骨关节炎 (ＯＡ)是以关节软骨基质降解为特征的退行性关节疾病 ,其发生发展与软骨细胞凋亡及一氧化氮的调控异常有关 ,现将近年有关文献综述如下。1　细胞凋亡与ＯＡ发病　　Ｂｌａｗ等[2 ] 用ＴＵＮＥＬ法、透射电镜和流式细胞仪技术对7例正常人和 16例ＯＡ病人关节软骨的软骨细胞进行了研究 ,结果显示ＯＡ病人软骨细胞…     

Caspase-1表达和软骨细胞凋亡在骨关节炎的意义

目的观察骨关节炎（osteoarthritis,OA）关节软骨标本的Caspase-1表达和软骨细胞凋亡的程度,初步探讨两者的相关性和与OA病变程度的关系。方法选取2007年3月至2007年11月进行关节置换的OA患者的关节软骨标本26例作为OA组,男8例,女18例;髋20例,膝6例;年龄52～81岁,平均60岁。选取截肢的正常关节软骨标本10例作为对照组,男7例,女3例;年龄16～45岁,平均40岁;均排除结构性破坏。按改良Mankin病理评分进行分级,将标本分成正常软骨组0～1分（A组）即对照组;OA软骨轻度退变组2～5分（B组）、OA软骨中度退变组6～9分（C组）和OA软骨重度退变组10～14分（D组）,B～D组即OA组。分别采用HE染色和番红O/固绿染色后,采用免疫组化和TUNEL检测法,检测软骨细胞中Caspase-1的表达和凋亡细胞阳性率。结果 （1）对照组Caspase-1表达低于OA组;Caspase-1的表达与Mankin评分呈正相关;（2）对照组的凋亡细胞阳性率低于OA组的凋亡细胞阳性率;软骨凋亡细胞阳性率与Mankin病理评分呈正相关;（3）A～D组Caspase-1的表达和凋亡细胞阳性率不存在相关性。结论 （1）Caspase-1与OA发生发展有关,能反应OA软骨的病变进展程度;（2）软骨细胞凋亡是OA的可能发病机理,其凋亡率可能影响OA病程进展。     

骨关节炎早中期关节软骨YKL-40表达与软骨细胞凋亡的关系

背景：软骨细胞凋亡是骨关节炎（osteoarthritis,OA）发病过程中重要的病理学特征。YKL-40是壳质酶蛋白家族的一种糖蛋白,但不具有壳质酶活性,在关节炎软骨、滑膜、巨噬细胞等均有表达,可能与炎症的状态、组织重塑等功能有关。YKL-40在OA早中期中的作用尚有待研究。目的：探讨OA早中期关节软骨YKL-40表达与软骨细胞凋亡率（apoptosisindex,AI）的关系。方法：通过前交叉韧带切断术（anterior cruciate ligament transaction,ACLT）建立SD大鼠膝关节OA模型,组织学评估软骨退变程度,采用改良Mankin评分系统进行评估,免疫组织化学法检测YKL-40的表达情况及软骨细胞AI,观察两个指标的表达特点,分析两者在此病变过程中的关系。结果：随造模时间的延长,软骨出现退变并逐渐加重,YKL-40的表达与软骨细胞AI呈正相关。结论：软骨细胞凋亡是OA早中期的重要事件,YKL-40可能为OA早中期病理过程中软骨细胞凋亡的重要影响因子。     

骨关节炎软骨退变基因调控的研究进展

骨关节炎是一种最常见的关节病变,该病不仅发生关节软骨损害,还累及整个关节,包括软骨下骨、韧带、关节囊、滑膜和关节周围肌肉,最终发生关节软骨退变、纤维化、断裂、溃疡及整个关节面的损害。骨关节炎发病以中老年居多,目前我国60岁以上     

维甲酸调控IGF-2基因对软骨细胞促凋亡的作用

目的 探讨维甲酸对软骨细胞凋亡的影响及细胞内IGF-2的表达规律. 方法 1月龄雄性中国白兔1只,体重约500 g.取兔双膝关节股骨髁软骨,采用胰酶消化法体外培养白兔软骨细胞.取第2代软骨细胞,培养液内加入终浓度为1×10-6 mol/L的全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)25μL(实验组),作用24 h;对照组加入25μL DMEM液作为对照.采用细胞免疫组织化学法观察软骨细胞中Ⅱ型胶原的分泌变化,流式细胞仪检测软骨细胞凋亡率,RT-PCR半定量分析软骨细胞中IGF-2 mRNA的表达,Western blot印迹杂交鉴定软骨细胞中IGF-2蛋白质表达. 结果 实验组ATRA抑制了软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达.流式细胞仪检测实验组软骨细胞凋亡率为21%±2%,较对照组(5%±1%)增加了5倍;RT-PCR检测实验组IGF-2 mRNA的表达为0.2±0.1,较对照组(0.8±0.2)降低75%;Western blot印迹杂交分析发现,实验组软骨细胞IGF-2的表达为0.3±0.1,较对照组(0.7±0.2)降低了57%;各指标组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 维甲酸可能通过抑制软骨细胞靶基因IGF-2的表达,负性调节软骨细胞分泌和增殖功能,促进软骨细胞凋亡.     

治疗型关节炎护膝对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡基因Bcl-2及p53的影响

目的：通过检测OA护膝对日本大耳白兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡基因Bcl-2、p53mRNA表达的影响,探讨OA护膝防治兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的分子生物学机制。方法：健康6月龄日本大耳白兔54只,雌雄各半,空腹体重2～2．2kg,采用改良Huhh法复制膝骨性关节炎模型,随机分为6组,即正常组、模型组、对照组（微波组）、实验1组（电组）、实验2组（热组）、实验3组（护膝组）．正常组10只,常规饲养;模型组9只,造模后常规饲养;对照组9只,微波仪治疗30min,每日1次;实验1组9只,电（疏密波）治疗30min,每日1次;实验2组8只,热（热软膜）治疗30min,每日1次;实验3组9只,电热（OA护膝）治疗30min,每日1次,连续治疗16周时处死。采用荧光定量RT—PCR法检测各组膝关节软骨细胞Bcl-2、p53mRNA的表达水平。结果：16周时,各组所有抽提的兔关节软骨组织总RNA的OD260／OD280值均在1．80～2．00范围内,表明RNA纯度高：模型组、对照组、实验1组、实验2纽、实验3组关节软骨细胞p53的mRNA相对呈高表达,而关节软骨细胞Bcl-2的mRNA相对低表达,与正常组差异有统计学意义（P〈0．01）：关节软骨细胞Bcl-2、p53的mRNA相对表达水平,对照组、实验1组、实验2组、实验3组与模型组差异有统计学意义（P〈0．01）;对照组、实验1组、实验2组与实验3组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：OA护膝能提高关节软骨细胞Bcl-2 mRNA表达,减弱软骨细胞p53mRNA表达,从而抑制软骨细胞凋亡,延缓膝关节软骨的退变：     

京尼平苷对硝普钠诱导软骨细胞凋亡与细胞周期的影响

目的:研究京尼平苷(Geniposide)对硝普钠(SNP)诱导软骨细胞凋亡与细胞周期的影响.方法:3周龄SD大鼠,用于分离培养软骨细胞.将第Ⅱ代软骨细胞进行分组,噻唑兰染色(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,硝酸还原酶法检测培养液中NO含量.结果:京尼平苷干预SNP诱导软骨细胞凋亡后,细胞处于GO/G1期的百分比减少,S及G2/M期的细胞百分比增加;同时显著降低软骨细胞凋亡率及培养液中NO含量(r=0.917,P＜0.01).结论:京尼平苷干预SNP诱导软骨细胞凋亡,可降低培养液中NO含量,促进细胞增殖,这可能是京尼平苷治疗骨性关节炎的作用机制之一.     

Clusterin expression in adult human normal and osteoarthritic articular cartilage

OBJECTIVE: To characterize the expression pattern of clusterin in adult human normal and osteoarthritic cartilage. METHODS: Clusterin mRNA expression in adult human normal and osteoarthritic cartilage was investigated by analysis of cDNA libraries, TaqMan quantitative RT-PCR, microarray and in situ hybridization. RESULTS: Sequence analysis of ESTs from adult human normal and osteoarthritic cartilage cDNA libraries demonstrated that the abundance of clusterin in these libraries was equivalent to genes which have been more commonly associated with cartilage. To examine tissue distribution, TaqMan Quantitative PCR analysis was performed using RNA from a panel of individual normal tissues. Clusterin was expressed at significant levels in cartilage, brain, liver, and pancreas. The expression of clusterin mRNA was up-regulated in early osteoarthritic vs normal cartilage when analysed by microarray analysis. Using in situ hybridization, chondrocytes of normal cartilage expressed moderate levels of clusterin. Upper mid-zone chondrocytes in cartilage with early stages of osteoarthritic disease expressed high levels of clusterin mRNA. In advanced osteoarthritic cartilage, the overall expression of clusterin was reduced. CONCLUSION: The induction of clusterin has been associated with a variety of disease states where it appears to provide a cytoprotective effect. The increased expression of clusterin mRNA in the early stages of osteoarthritis (OA) may reflect an attempt by the chondrocytes to protect and repair the tissue. In contrast, the decrease in clusterin mRNA in the advanced osteoarthritic cartilage accompanies the final degenerative stages of the disease. An understanding of the expression of clusterin in osteoarthritis may allow consideration of this protein as a marker for cartilage changes in this chronic degenerative condition.     

一氧化氮对兔关节软骨细胞凋亡的影响

目的　探讨NO对软骨细胞凋亡的影响。方法　以NO供体硝普钠 3mmol/L和 6mmol/L诱导培养的兔关节软骨细胞凋亡 ,在加药处理后 4,8,12 ,16及 2 0小时取样检查 ,利用透射电镜技术、流式细胞术 ,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 ,观察细胞凋亡现象。结果　在 3mmol/L硝普钠诱导下 ,随着作用时间的延长 ,细胞从核边集到核裂解 ;加药后 12小时 ,凋亡率为 ( 12 .71± 3 .2 6) % ,2 0小时后的凋亡率已达 ( 93 .47± 4.12 ) % ;在 6mmol/L硝普钠诱导下 ,细胞出现肿胀、破裂成碎片等坏死变化。结论　高浓度的NO可诱导兔关节软骨细胞凋亡 ,过高浓度的NO可引起细胞坏死。细胞凋亡率异常增高可能是影响组织工程化软骨修复软骨缺损的原因之一     

自体软骨细胞移植修复猪膝关节软骨缺损的实验研究

目的评价传统和复层高密度培养（复层培养）的自体软骨细胞移植修复关节软骨缺损的效果。方法在8头猪16膝髌切迹上下共建立32个全层软骨缺损，右膝为空白和自体骨膜移植对照组，左膝为传统的自体骨膜覆盖下细胞注射移植组和自体骨膜覆盖下复层培养细胞移植组（上下缺损随机进入各对照和实验组）。术后5-6个月对缺损部位行大体、组织学、免疫组织化学检查。采用O’Driscoll软骨组织形态学评分评价软骨缺损的修复质量。结果四组的O’Driscoll软骨组织形态学评分分别为（3．14±1．95）分、（10．57±3．60）分、（16．29±2．63）分、（20．43±1．81）分，各组之间差异均有统计学意义（P〈0．01）。空白对照组缺损被少量的纤维组织覆盖；骨膜移植组被纤维组织和少量的纤维软骨修复，且与周围组织整合差。自体软骨细胞移植（注射组和复层培养组）缺损被塑形良好的修复组织覆盖，组织学、基质特殊染色示修复组织为纤维软骨和透明软骨，与周边软骨和软骨下骨整合良好。复层培养组修复组织的细胞形态、基质染色比注射细胞组更接近正常软骨。结论自体软骨细胞移植可成功修复全层关节软骨缺损。扩增后的软骨细胞经短期复层培养更有利于软骨缺损的修复。