表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线辐射后小鼠表皮细胞凋亡的影响

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]脂质体对急、慢性中波紫外线（UVB）辐射后BALB／c小鼠表皮细胞凋亡的影响。方法：EGCG脂质体局部外用于BALB／c小鼠背部皮肤,将小鼠分为5组,分别给予中波紫外线180mJ／cm^2照射1次为急性损伤组：30mJ／cm^2每天照射1次,持续30d,为慢性损伤组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测小鼠表皮中的凋亡细胞。结果：急性损伤组中接受UVB照射的小鼠表皮中大部分细胞发生凋亡,EGCG脂质体未表现出对表皮细胞凋亡的影响;慢性损伤组中照光加药组的凋亡细胞多于其他组,EGCG脂质体表现为促凋亡作用（P〈0．05）。结论：EGCG脂质体不影响急性大剂量UVB辐射所致的表皮细胞凋亡;对慢性低剂量UVB辐射有促凋亡作用。     

UVB诱导皮肤免疫抑制和表没食子儿茶素没食子酸酯光保护作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对不同剂量中波紫外线（UVB）慢性辐射BALB／c小鼠皮肤的保护作用。方法 EGCG局部外用于小鼠背部皮肤后予不同强度UVB辐射，每日1次，连续1个月，RT-PCR法检测IFN-γ和IL-10mRNA的表达水平变化。结果 不同剂量UVB慢性辐射后小鼠皮肤中IFN-γ mRNA表达水平较对照组降低（P〈0．01），IL-10mRNA表达水平较对照组升高（P〈0．01），并与UVB辐射强度呈一定剂量依赖关系。EGCG处理后可影响UVB辐射诱导上述细胞因子表达（P〈0．01）。结论 UVB辐射下调IFN-1和上调IL-10转录水平，可能与UVB辐射诱导局部免疫抑制有关。     

黄芩苷对中波紫外线诱导后BALB/c小鼠表皮光产物形成的干预作用

目的 观察中波紫外线（UVB）诱导BALB/c小鼠皮肤表皮细胞光产物的形成和清除情况,以及黄芩苷的干预作用。方法 将黄芩苷（1 mg/cm2）连续3 d外用于BALB/c小鼠表皮24 h后,采用免疫组织化学法及免疫印迹法检测180 mJ/cm2 UVB辐射后1 h、24 h和48 h小鼠表皮内环丁烷嘧啶二聚体（CPD）的产生和清除情况。结果 CPD仅在接受UVB辐射的小鼠皮肤内出现。相对于UVB辐射后1 h光产物的平均值,UVB辐射组1 h、24 h和48 h,CPD的信号强度分别为（100 ± 5.22）％、（75.34 ± 8.22）％和（42.11 ± 3.24）％;经过黄芩苷处理后的小鼠接受UVB辐射后1 h、24 h和48 h,CPD的信号强度分别为（81.45 ± 5.22）%、（32.14 ± 6.33）%和（5.21 ± 3.15）%;而丙酮处理后的小鼠接受UVB辐射后1 h、24 h和48 h,CPD的信号强度分别为（106 ± 8.21）%、（70.23 ± 4.13）%和（41.22 ± 4.21）%。结论 外用黄芩苷能抑制UVB辐射诱导光产物的形成,并在48 h内加速光产物的清除。黄芩苷是一种有效的紫外线防护剂。     

表没食子儿茶素没食子酸酯减轻UVB诱导的朗格汉斯细胞凋亡作用

目的 研究中波紫外线(UVB)对人表皮朗格汉斯细胞(LC)的光损伤作用以及绿茶活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的光保护作用。方法 采用密度梯度离心和免疫磁珠的方法分离纯化人表皮LC,将分离纯化的LC随机分为对照组、30 mJ/cm² UVB辐射组以及辐射后加用200μg/mL EGCG处理组,4h后以PI染色并经流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 30 mJ/cm² UVB辐射组的凋亡率明显高于对照组,EGCG干预组的凋亡率低于单纯UVB辐射组,但仍高于非照射对照组;且辐射后S期细胞数明显增加。几乎没有G₂/M期的细胞,EGCG处理辐射细胞后,S期细胞数减少。结论 UVB可诱导人表皮LC凋亡,而EGCG具有一定的保护作用。     

甘草、红景天、黄芪粗提物对中波紫外线诱导小鼠皮肤组织白介素—10的影响

目的探索甘草、红景天、黄芪等粗提物对中波紫外线（uw3）损伤BALB／c小鼠皮肤组织的保护作用及其机制。方法将54只BALB／c小鼠用随机数字法分为9组（每组6只）：正常对照组、UVB对照组、溶剂对照组、UVB＋5％与10％甘草组、UVB＋5％与10％红景天组、UVB＋5％与10％黄芪组。其中,正常对照组不予处理,UVB对照组单独给予UVB照射,溶剂对照组给予外涂蒸馏水＋UVB照射,其余各处理组分别给予外涂相应浓度药物＋UVB照射,连续1个月。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组小鼠背部照射部位皮肤组织匀浆上清液中白介素（IL）．10水平。结果经UVB慢性照射后小鼠皮肤中Ⅲ—10水平为（838．8±114．34）pg／ml,较正常对照组（568．45±78．8）pg／ml显著增高（P〈0．01）,经不同剂量甘草、红景天、黄芪粗提物水溶液处理后可进一步上调IL-10水平,以甘草组最为明显,但IL-10水平与粗提物浓度之间无明显依赖关系。结论在受到UVB慢性照射后小鼠皮肤组织中IL-10表达水平增加,甘草、红景天、黄芪粗提物水溶液可进一步上调其IL-10水平,上述3种药物对UVB诱导的小鼠皮肤损伤的保护作用可能与上调IL-10表达水平有关。     

绞股蓝皂苷对光损伤BALB/c小鼠皮肤p53、p21蛋白表达的影响

目的 探讨绞股蓝皂苷（GP）抗光损伤的作用机制。方法 80只雌性BALB/c小鼠随机分为8组,每组10只,分别为：空白对照组（未加任何处理）、UVB模型组、GP组Ⅰ（先涂GP后照UVB）、GP组Ⅱ（先照UVB后涂GP）、维生素E组Ⅰ（先涂维生素E乳膏后照UVB）、维生素E组Ⅱ（先照UVB后涂维生素E乳膏）、基质组Ⅰ（先涂基质后照UVB）、基质组Ⅱ（先照UVB后涂基质）。中波紫外线（UVB）照射BALB/c小鼠建立光损伤模型,根据以上分组对光损伤小鼠皮肤进行干预。运用蛋白Western印迹法检测各组小鼠表皮中p53蛋白、p21蛋白的表达。结果 BALB/c小鼠表皮p53蛋白的表达：空白组p53蛋白（0.11 ± 0.08）与UVB模型组（0.22 ± 0.12）相比低表达,GP组Ⅰ（0.44 ± 0.23）高于空白组（P < 0.01）,GP组Ⅱ（0.48 ± 0.24）高于空白组（P < 0.01）及UVB模型组（P < 0.05）,维生素E组Ⅰ（0.49 ± 0.29）及维生素E组Ⅱ（0.50 ± 0.27）均与GP组作用相似。小鼠表皮p21蛋白的表达各组间差异无统计学意义。结论 1.5% GP乳膏抗光损伤的作用机制之一可能与上调表皮细胞中p53蛋白表达量有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线损伤小鼠皮肤的保护作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对紫外线UVA,UVB辐照引起的皮肤损伤的保护作用。方法将36只雄性BALB/c小鼠随机分成6组,用UVA,UVB紫外灯管照射小鼠背部脱毛后的皮肤,诱导皮肤损伤模型建立。在当天照射结束后半小时之内进行相应的药物涂抹,最后一次照射结束后24h取小鼠背部皮肤,组织病理学切片、染色后镜下观察其组织形态变化;氧化还原试剂盒测定氧化应激程度;蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白表达量。结果 5%EGCG组和10%EGCG组与模型组相比,小鼠皮肤状态明显改善,干燥、红肿状态减轻,皮肤组织中胶原蛋白含量高于模型组,氧化应激反应低于模型组,凋亡蛋白表达量低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 EGCG可以保护因紫外线辐照而受损的皮肤。     

Caspase-3在UVB诱导人皮肤成纤维细胞凋亡中的作用

目的：评价caspase-3在UVB诱导皮肤成纤维细胞凋亡中的作用。方法：皮肤成纤维细胞经150mJ／cm2 UVB照射后,用MTF法检测细胞活性,用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,用抑制剂Z-DEVD-FMK抑制caspase-3活性后,检测凋亡细胞数量。结果：UVB明显抑制成纤维细胞的活性,并导致细胞凋亡,并呈时间-效应关系;加入抑制剂Z-DEVD-FMK抑制了UVB导致的细胞凋亡。结论：Caspase-3在UVB照射诱导皮肤成纤维细胞凋亡中发挥重要作用。     

二甲基苯蒽?巴豆油联合 NB－ UVB 照射构建鳞状细胞癌动物模型

@@@@目的：建立二甲基苯蒽？巴豆油外涂联合窄谱中波紫外线（NB－UVB）照射诱导小鼠皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）动物模型。方法：取120只健康小鼠，随机分为4组：A组（40只）外涂二甲基苯蒽？巴豆油，联合NB－UVB照射；B组（40只）涂二甲基苯蒽？巴豆油；C组（20只）仅照射NB－UVB；D组（20只）仅外涂丙酮液。定期肉眼观察小鼠背部皮肤的变化，并于第5、15、20周统计各组存活小鼠数及荷瘤小鼠数，计算荷瘤率。20周时取肿瘤组织行组织病理检查，分别计算各组小鼠皮肤鳞癌的发生率。结果：第20周时A、B、C、D组小鼠荷瘤率分别为86．7％、66．7％、21．1％、0。鳞癌发生率分别为：56．7％、21．2％、0、0。 A组与B组相比鳞癌发生率差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：外涂二甲基苯蒽？巴豆油联合NB－UVB较单独外涂二甲基苯蒽？巴豆油可以提高小鼠皮肤鳞癌的发生率。     

黄芩苷对中波紫外线辐射后小鼠皮肤氧化应激及DNA损伤的影响

目的观察黄芩苷对中波紫外线(UVB)辐射后小鼠皮肤氧化应激及DNA损伤的影响。方法将黄芩苷外搽于Balb/c小鼠皮肤,检测180mJ/cm2UVB辐射后24h小鼠皮肤厚度及过氧化氢和CPDs产量。结果无论是UVB辐射前还是辐射后外用黄芩苷均明显减轻紫外线辐射造成的小鼠皮肤增厚。外用黄芩苷还可减少因UVB辐射诱导的小鼠皮肤组织中过氧化氢和CPDs产量。结论黄芩苷可抵抗UVB诱导的小鼠皮肤增厚,减少光产物表达,并通过减少活性氧簇的产生而发挥抗氧化作用。     

紫外线对皮肤角质形成细胞和成纤维细胞产生MMP-1和MMP-3的影响

目的:研究中波紫外线辐射对体外培养的表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞产生基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-3的直接和间接影响,研究绿茶中的主要活性成分表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对此影响的保护作用。方法:体外培养角质形成细胞株HaCaT和真皮成纤维细胞,中波紫外线辐射、不同浓度IL-6刺激及EGCG处理后,ELISA方法测定上清液中Pro-MMP-1和MMP-3蛋白含量,半定量RT-PCR方法测细胞中mRNA含量。结果:UVB30mJ/cm2辐射后角质形成细胞分泌的pro-MMP-1和MMP-3并未增加(P>0.05),真皮成纤维细胞合成和分泌MMP-1和MMP-3mRNA含量和蛋白水平均显著增加(P<0.05),IL-6(8、16、24pg/mL)可显著增加成纤维细胞产生MMP-1和MMP-3(P<0.05)。EGCG(0.15、0.3mM)能够显著抑制紫外线诱导成纤维细胞产生MMP含量的增加(P<0.05),但IL-6刺激成纤维细胞所产生的MMP-1和MMP-3的增加不受EGCG的影响(P>0.05)。结论:中波紫外线辐射并不能直接导致角质形成细胞分泌MMP-1和MMP-3增加,但紫外线辐射后角质形成细胞分泌的IL-6可促进成纤维细胞产生MMP。EGCG对IL-6刺激成纤维细胞产生MMP增加没有影响,但它可以显著抑制紫外线辐射直接导致的成纤维细胞产生MMP-1和MMP-3的增加,对防治皮肤光老化可能有一定作用。     

茶多酚EGCG及UVB对角质形成细胞水通道蛋白3表达及EGFR/ERK信号传导途径的影响

目的 探讨茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）及中波紫外线（UVB）对角质形成细胞水通道蛋白3（AQP3）的表达及信号传导途径的影响。 方法 20例健康人每日外涂不同浓度EGCG乳膏,2周后测定皮肤含水量及经皮水分丢失（TEWL）变化。对培养的人角质形成细胞分别予以10-7,10-6,10-5 mol/L的EGCG处理后予以UVB照射,或者用EGFR/ERK的磷酸化抑制剂处理后予以UVB照射,Western印迹检测AQP3蛋白表达变化以及EGFR/ERK信号传导途径变化。 结果 健康人皮肤予以不同浓度EGCG乳膏处理后,皮肤含水量显著增加,经皮水分丢失明显减少。UVB照射前予以10-7,10-6,10-5 mol/L EGCG处理,AQP3表达明显升高,分别为172.36 ± 12.42,320.66 ± 15.51,368.10 ± 11.39,与单纯UVB照射组（灰度值设为100.00）比较差异具有统计学意义（t值分别为12.16,26.75,38.62,P值均 < 0.05）。UVB照射前予以EGFR磷酸化抑制剂PD153035（1.0 μmol/L）和ERK磷酸化抑制剂U0126（10 μmol/L）处理后,AQP3表达也明显升高,分别为413.85 ± 25.27,268.85 ± 16.33,与单纯UVB照射组比较,差异具有统计学意义（t值分别为35.16,19.25,P值均 < 0.05）。UVB照射可以激活角质形成细胞EGFR/ERK信号传导途径,预先予以EGCG处理可以显著抑制EGFR/ERK的磷酸化。结论 EGCG可以增强皮肤屏障功能。UVB照射可以下调角质形成细胞AQP3表达,而EGCG处理可以上调AQP3表达,其机制可能与抑制UVB照射诱导的EGFR/ERK活化有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对中波紫外线诱导人原代表皮黑素细胞光损伤干预作用的研究

目的:观察中波紫外线(UVB)诱导人原代表皮黑素细胞光产物的形成和清除情况,以及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的干预作用.方法:选择10、20、40、80、100 mg/L 5种浓度EGCG作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,测定细胞增殖活性.采用免疫斑点印迹技术在30 mJ/cm2UVB照射及EGCG干预下.分别取照射后0.5 h和24 h检测环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)的产生和清除量.结果:低浓度(＜20 mg/L)EGCG能促进黑素细胞增殖.UVB照射后黑素细胞内光产物形成较快,但清除缓慢.EGCG对UVB诱导光产物的形成无明显影响,但能加速光产物的清除(P＜0.05).结论:EGCG能加速UVB照射后黑素细胞内光产物的清除.     

茶多酚单体对中波紫外线辐射培养的成纤维细胞氧化损伤的保护机制研究

目的：探讨茶多酚的活性单体表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)对紫外线辐射氧化损伤的保护机制。方法：用722分光光度计测定培养的人皮肤成纤维细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)的活性，以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量；采用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)方法测定成纤维细胞合成基质金属蛋白酶1(MMP1)以及其组织抑制因子—1(TIMP—11的mRNA表达水平。结果：EGCG可以减少中波紫外线(UVB）辐射引起的丙二醛沉积，增加抗氧化酶的活性；并且可以抑制UVB诱导的MMP1 mRNA表达，减少胶原蛋白的降解。对TIMP—1的表达则没有观察到显著变化。结论：EGCG可以对UVB辐射损伤的体外培养成纤维细胞起到保护作用。     

Protective effect of epigallocatechin gallate on the immune function of dendritic cells after ultraviolet B irradiation

Aim  To investigate the protective effect of epigallocatechin gallate (EGCG) on the immune function of dendritic cells (DCs) after ultraviolet B irradiation (UVB) and its underlying mechanisms.
Methods  The monocytes were isolated from peripheral blood and cultivated into DCs with cytokines, such as granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and interleukin (IL)-4. DCs were harvested after cultivation for 7 days and subjected to irradiation with different dosages of UVB. Then, 200 μg/mL of EGCG was added in certain groups 24 h before irradiation. DCs simply treated with UVB or treated with both UVB and EGCG were co-cultured with lymphocytes, and Mono-nuclear cell direct cytotoxicity (MTT) assay was used to detect the ability of DCs to stimulate proliferation of lymphocytes. Surface markers CD80, CD86, human leukocyte antigen(locus)-DR (HLA-DR), and CD40 were detected using flow cytometry, and the levels of IL-10 and IL-12 secreted from DCs 24 h after cultivation were measured using ELISA.
Results  UVB irradiation was able to inhibit the ability of DCs to stimulate the proliferation of lymphocytes and surface expressions of CD80, CD86, HLA-DR, and CD40 on DCs in a dose-dependent manner. The inhibition rate of DCs was improved to some extent after treatment with 200 μg/mL of EGCG. UVB showed no significant influence on the secretion of IL-10 and IL-12 from DCs, while EGCG was able to down-regulate the secretion level of IL-12 and up-regulate that of IL-10.
Conclusions  EGCG can antagonize the inhibitory effect on DCs induced by UVB irradiation. This function has some relationship with its protecting effect of the expression of the costimulating molecules on the surface of DCs and the secretion level of IL-10 and IL-12.     

UVB致成纤维细胞损伤及两种中药的保护作用研究

目的观察中波紫外线(UVB)辐射后成纤维细胞(FB)DNA光产物环丁烷嘧啶二聚体(CPD s)产生和清除情况及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和黄芩甙的干预作用。方法以30,60,90 m J/cm2UVB照射FB并予EGCG及黄芩甙干预处理,采用免疫细胞化学法在照光后不同时间检测CPD s的产生和清除情况。结果细胞损伤程度随照光剂量加大而加重;30 m J/cm2UVB照射后细胞CPD s生成量在辐射后1 h左右达到高峰,同时细胞也开始清除CP-D s,辐射后4 h内清除速率较快,4 h后清除速率逐渐降低,至24 h基本清除CPD s;EGCG和黄芩甙处理UVB辐射的细胞CPD s少于单纯照光组(P<0.05)。结论UVB辐射可以导致FB的DNA损伤而产生光产物CPD s;细胞损伤程度显示剂量依赖性;细胞自身有修复能力;EGCG和黄芩甙均可降低UVB辐射所致的光产物水平。     

紫外线诱导角质形成细胞凋亡和表没食子儿茶酚没食子酸酯保护机理的探讨

目的探讨不同剂量的中波紫外线(UVB)辐射对体外培养的人角质形成细胞(HaCaT细胞株)凋亡和死亡的影响,探讨表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对此影响的保护作用,以及与凋亡相关的bcl-2和Fas基因之间的关系。方法流式细胞仪检测不同剂量UVB辐照及EGCG处理后角质形成细胞凋亡和死亡数量以及bcl-2蛋白水平的变化,RT-PCR检测FasmRNA的表达水平。结果UVB辐照组凋亡细胞数和死亡细胞数显著高于对照组(P<0.01),bcl-2和FasmRNA量与对照组差异也有显著性(P<0.01)。UVB辐照126mJ/cm2组凋亡细胞数低于辐照42mJ/cm2组(t=2.39,P<0.05),但死亡细胞比例显著增加(t=4.82,P<0.01),两组bcl-2和FasmRNA表达量差异均无显著性(t=1.30,P>0.25;t=0.32,P>0.25)。UVB辐照42mJ/cm2立即加入EGCG组较辐照42mJ/cm2未加EGCG组凋亡和死亡细胞数降低(t=7.64,P<0.01;t=3.49,P<0.05),bcl-2增加(t=3.62,P<0.05),FasmRNA表达量减少(t=6.83,P<0.01)。结论小剂量UVB辐照可以诱导体外培养的角质形成细胞凋亡,大剂量UVB辐照则导致细胞死亡,EGCG通过与凋亡相关的bcl-2和Fas减少紫外线诱导的角质形成细胞凋亡。     

Mitigation of acute ultraviolet B radiation-mediated damages by baicalin in mouse skin

Background: Solar ultraviolet (UV) irradiation, in particular UVB with a wavelength range between 290 and 320 nm, induces different hazardous effects on the skin, including sunburn, photoaging and cancer. Protection against sun-induced damage is therefore a highly desirable goal. Chemoprevention is being investigated as a potential approach for the management of UV damages including skin cancer.
Aim: In this study, to determine the relevance of our in vitro findings to in vivo situations, we assessed the effects of baicalin on UVB-mediated damages in mice skin.
Methods: Balb/C hairless mice were topically pretreated (24 h before UVB) or post-treated (5 min after UVB) with baicalin (1 mg/cm² skin area/mouse/100 μl acetone) and were exposed to UVB 24 h later (180 mJ/cm²). The animals were sacrificed 1 and 24 h after the UVB exposure. Skin edema, histopathology changes, hydrogen peroxide (H₂O₂) and cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs)-positive cells were assessed to determine the UVB-induced photodamage.
Results: Our data demonstrated that a topical application of baicalin, either as a pretreatment or as a post-treatment, resulted in a significant decrease in UVB mediated increases in skin edema, skin hyperplasia and infiltration of leukocytes. Further, baicalin treatments (pre and post) also resulted in a significant decrease in UVB mediated (1) generation of H₂O₂ and (2) formation of DNA photolesions: CPDs.
Conclusion: Based on these data, we suggest that baicalin could be developed as an agent for the management of conditions elicited by UV exposure including skin cancer.