HCV单克隆抗体的制备及其应用的初步研究

目的:丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染已成为全球公认的健康难题,目前并没有很好的疫苗和特效药,尽早检出HCV感染者是实现丙型肝炎早期诊断、阻断传播的重要途径。方法:研究通过免疫Core-NS4B融合重组蛋白,制备抗HCV单克隆抗体,并获得5H5和4E7-HRP最优的抗体配对组合,检测120例血清,同时与HCV-RNA检测做比较。结果:阴性血清均未测出阳性,HCV阳性标测出23例阳性,检出率77%,HCV-RNA测出26例,检出率87%;HCV可疑标本测出15例阳性,HCV-RNA测出17例;单项ALT增高的标本测出2例阳性,HCV-RNA测出1例。结论:研究所获得的抗体能够用于HCV抗原检测,具有巨大的潜力,为建立HCV抗原检测试剂盒奠定了基础,为临床检测提供了实验依据。     

毒死蜱单克隆抗体的制备及ELISA检测方法研究

[目的]制备毒死蜱单克隆抗体,为建立毒死蜱残留检测方法奠定基础。[方法]以毒死蜱原药与3-巯基丙酸为起始原料,合成半抗原并对其进行结构鉴定。利用该半抗原与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联制备毒死蜱人工免疫抗原和包被抗原,再取已免疫的经过筛选的Balb／c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合,用间接ELISA和间接竞争ELISA方法对2株细胞进行鉴定,并测定与其他农药的交叉反应率。[结果]获得两株稳定分泌毒死蜱单克隆抗体的细胞株,其检测范围为0．04～0．42mg／L,半数抑制浓度为0．135mg／L,最低检测限为0．03mg／L,与杀螟硫磷、对硫磷和马拉硫磷几乎没有交叉反应。[结论]成功制备两株分泌毒死蜱抗体的单克隆细胞株,初步建立了毒死蜱间接ELISA检测方法。     

间接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定豚毒鱼类中河豚毒素的研究

将河豚鱼样品的组织匀浆用０．１％乙酸溶液煮沸２次，合并滤液用乙醚脱脂２次，将水相用０．０５ｍｏｌ／ＬＰＢＳ稀释后（调ｐＨ６．５～７．０）供ＥＬＩＳＡ检测之用。结果表明，本法的最低检出浓度为１．０×１０－３ｍｇ／Ｌ（０．１ｎｇ／检测孔），线性范围为０．０１～１．０ｍｇ／Ｌ，方法的加标回收率为７３．８％～１１７．４％。用传统的小鼠生物试验比较了方法的准确性。测定结果表明，两种方法之间在统计学上无显著性差异（配对ｔ检验，Ｐ＞０．２），并具有良好的相关性（ｒ＝０．９１６）。     

人源抗TNFα单克隆抗体的制备及初步鉴定

应用抗ＴＮＦ单抗治疗菌血症和内毒素休克已证明是一种有效的策略，人源抗ＴＮＦ抗体较鼠单抗或其它动物来源的单抗具有更大的应用前景。我们用一个混合的人抗体组合噬菌体抗体库，针对人重组ＴＮＦα进行筛选获得了对人重组ＴＮＦα具有亲和性和特异性的噬菌体抗体。然后我们又建立一个人抗体轻链库，用以对筛选到的抗体进行轻链置换。结果获得了与人重组ＴＮＦα具有更高亲和力的噬菌体抗体。对该抗体在大肠杆菌中所做的可溶性表达表明，其Ｆａｂ片段能与人重组ＴＮＦα结合。ＤＮＡ测序表明该抗体属ＩｇＧⅢ亚类并含有一条κⅢ亚类的轻链     

伏马菌素B1免疫检测方法的研究

本研究建立了用于检测粮食、饲料中伏马菌素Ｂ１（ＦＢ１）的快速、灵敏、简便的免疫检测方法—建立在单克隆抗体基础上的直接竞争性酶联免疫吸附测定方法（ＤＣ—ＥＬＩＳＡ法）;其最低检出浓度为１０ｎｇ／ｍｌ,线性范围在１０ｎｇ～５μｇ／ｍｌ。对新疆、安徽、黑龙江、哈尔滨四省市玉米样品中的ＦＢ１含量进行了测定,结果表明１５６份样品中有３４份检出ＦＢ１,阳性率为２１．７９％,含量在０．１８～３１．３２μｇ／ｇ范围内,平均含量为１２．０４μｇ／ｇ。     

SEB双单克隆抗体免疫检测试剂盒研制

为了确定食品有否ＳＥＢ污染，我们以单抗１Ｄ２为包被抗体，２Ｄ１为酶标抗体，４２℃５小时为包被条件，研制了ＳＥＢ双单克隆抗体快速免疫检测试剂盒。在ＳＥＢ浓度为０．１～３０μｇ／Ｌ的范围内，浓度和测量的Ａ值呈直线相关，相关系数Ｒ＝０．９７８６，ａ＝－９．８９４５，ｂ＝３４．２４７７，检测灵敏度为０．１μｇ／Ｌ，人工样品回收率在９５％以上。该试剂盒具有快速、灵敏、准确的特点，适合医院、食品卫生检验单位使用     

Occupational asthma (OA) with sensitization to diphenylmethane diisocyanate (MDI) presenting at the onset like a reactive airways dysfunction syndrome (RADS)

BACKGROUND: Two types of OA are distinguished: immunological (OA with sensitization) and non-immunological, i.e., irritant induced asthma or reactive airways dysfunction syndrome (RADS). METHODS: We describe the case of a worker who developed respiratory symptoms after a spill of diphenylmethane diisocyanate (MDI) at the workplace. RADS was initially diagnosed and the worker resumed working. The progressive worsening of symptoms and the appearance of symptoms-work relationship one year later, when concentrations of isocyanates were no longer "irritant," suggested immunological OA. RESULTS: The diagnosis was confirmed by specific inhalation challenge test, followed by removal from exposure and complete recovery. CONCLUSIONS: In the case of RADS due to an agent with both irritant and sensitizing properties, history should be repeatedly assessed for a possible symptom-work relationship. If this is found, further investigations should be carried out, including specific inhalation challenges, to confirm the possibility of immunological OA.     

甲苯二异氰酸甲酯所致支气管哮喘患者的支气管激发试验及免疫学研究

对18例临床上诊断为支气管哮喘的TDI作业者进行变应原BPT,并与其它免疫学指标对比观察。发现BPT阳性14例(占77.8％),其中速发反应7例,迟缓反应6例,双相反应1例。BPT阳性者的肺功能指标FVC、FEV_1、MMF、PF、V_(75)、V_(50)、V_(25)等均有明显降低。免疫指标中以IgA、特异性IgE的增高为著,各占7例及9例,并与BPT阳性反应相一致。以上证明了TDI哮喘的变态反应机理,特别是与IgE介导的速发型反应有关。此外,BPT作为一种病因诊断手段,有明显的特异性及实用性。     

甲型肝炎病毒TZ84株单克隆抗体在甲型肝炎抗体检测中的应用

将不同位点的甲型肝炎 (甲肝 )病毒 (HAV)TZ84单克隆抗体 (单抗 )或酶标单抗进行混合做包被和酶 ,代替现有试剂中的多克隆抗体 (多抗 ) ,采用竞争抑制法对试剂的灵敏度和可靠性进行测定 ,并通过 2 2 9份甲肝灭活疫苗临床观察血清甲肝病毒抗体的检测 ,对单抗试剂的应用进行研究 ,并对该单抗试剂进行评价。结果表明 :该单抗试剂的灵敏度为 94 % ,特异度均为 98% ,最低检出浓度的变异系数为 9 3% ;单抗试剂、多抗试剂和雅培试剂的最低检出浓度分别为 5 5、98、31mIU/ml。单抗试剂的灵敏度高于多抗试剂 ,特异度低于多抗试剂。     

抗VLA-4单克隆抗体动员的外周血干细胞重建辐射损伤小鼠造血的初步研究

目的 观察抗VLA-4单克隆抗体动员的外周血干细胞对辐射损伤小鼠造血重建的效果。方法 8.5 Gy~(60)Co γ射线照射的BALB/c小鼠,分别接受经生理盐水(实验1组)及抗VLA-4单克隆抗体(实验2组)动员的外周血干细胞移植,观察受体小鼠的4周存活率、外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞(BMN),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)及脾集落形成单位(CFU-S)等指标。结果 实验2组小鼠的4周存活率、WBC、BMNC,CFU-GM、CFU-S数均明显高于对照组、实验1组,差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论 抗VLA-4单克隆抗体能有效动员小鼠外周血干细胞,并能成功重建辐射损伤小鼠的造血功能。     

随机肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位及其应用

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阴断,模拟表位的共有序列为:异亮氨酸—精氨酸—脯氨酸—蛋氨酸—缬氨酸—X—X,X为任意氨基酸。以其中阻亲和力最强的克隆(P2)建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200~8000pg/ml,检测下限为150pg/ml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。     

单抗早孕胶乳凝集抑制试验试剂的研制及初步应用

通过细胞融合技术筛选了一株抗HCG的单克隆抗体1F_7。其小鼠腹水效价为10000(胶乳凝集法),免疫球蛋白分类为IgGl,亲和性为2.2×108M~(-1),其主要针对β-HCG上的某一决定簇。用该单抗和高效价的HCG致敏的羧化聚苯乙烯胶乳制成了单抗旱孕胶乳凝集抑制试验的试剂盒。该试剂盒的敏感度为0.63IU/ml左右,和促黄体激素(LH)、促滤泡激素(FSH)无交叉反应,该试剂的稳定性相当好,在室温避光处可保存一年。通过临床355例标本考核,其阳性率为99.2％,其阴性率为100％。     

噬菌体展示肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位的研究

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阻断,模拟表位的共有序列为IRPMVXX,X为任意氨基酸。以其中的P2号克隆建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～8000pgml,检测下限为150pgml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。     

抗PSMA单克隆抗体在荷人前列腺癌瘤裸鼠体内的放射免疫显像实验研究

目的研究^131I标记的抗前列腺特异膜抗原(PSMA)单克隆抗体(^131I-Ed-5))在荷人前列腺癌瘤裸鼠体内的分布及对肿瘤的靶向定位性能。方法建立荷人前列腺癌裸鼠移植瘤模型，用^131I标记抗PSMA单克隆抗体Ed-5，^131I-Ed-5经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内，于注射后24、48、96、144h7照相后断颈处死，取脏器称湿重并计数，测定肿瘤和血液、肝、肺等重要脏器的单位重量放射性比值(T／NT)、各组织摄取百分比(％ID／g)。结果在注射^131I-Ed-5后96h，肿瘤显影清晰，随时间延长其边缘更清晰。在注射^131I-Ed-5后24—144h内，裸鼠体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚；96h肿瘤对^131I-Ed-5的摄取率为32．30％ID／g，各组织的T／NT比值也达到最高，其中肿瘤／肌肉高达7.08。给予注射^131I—NMIgG的对照组中，未出现放射性浓聚，而呈全身分布。结论Ed-5具有良好的免疫活性和对前列腺癌的靶向定位作用，可望用于前列腺癌导向诊断与放射免疫治疗。     

赭曲霉毒素A免疫学检测方法的研究

目的 建立敏感、特异和快速针对赭曲霉毒素A的酶联免疫吸附试验检测方法，研制具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 利用B细胞杂交瘤技术，建立能够分泌抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并获得抗赭曲霉毒素A单克隆抗体。结果 建立赭曲霉毒素A的间接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法(ELISA)。该方法的最低检出浓度为0.5ng/ml，线性范围2～500ng/ml，线性方程Y=0.272X 1.07(r=0.9978)。方法的加标回收率为79.0％～119.7％。利用该方法对北京市售的大米、小麦样品进行检测。结果表明．小麦样品的污染率为60.71％，最大值为8.26μg/kg；大米样品的污染率为17.86％，最大值为3.44μg/kg。结论 该方法简单、快速、灵敏。完全可以满足实际工作的需要。     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与中和效应

用提取的Ａ型产气荚膜梭菌α毒素包涵体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合和克隆化，经ＥＬＩＳＡ筛选，共获得７株稳定分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，分别命名为１Ａ８、１Ｃ３、１Ｄ５、１Ｄ８、１Ｆ１、１Ｈ１和２Ｅ３。经鉴定，７株ＭｃＡｂ的Ｉｇ亚类有ＩｇＧ１（１Ｄ８）、ＩｇＧ３（１Ａ８、１Ｃ３和２Ｅ３）和ＩｇＭ（１Ｄ５、１Ｆ１和１Ｈ１）。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为：１∶５１２～１∶１０２４和１∶１０６～１∶１０８。尤为重要的是，２Ｅ３杂交瘤细胞株分泌的ＭｃＡｂ不仅能够中和α毒素的磷脂酶Ｃ活性和溶血活性，而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用     

职业病患者的医院感染相关因素与护理对策

目的探讨职业病患者的医院感染相关因素及护理对策。方法对2009年1—12月111例职业病住院患者进行回顾性调查,收集相关因素资料。结果慢性苯中毒、三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎的患者医院感染发生率较高,占总感染者(20例次)的65%。结论采取有效措施,积极预防和控制医院感染相关因素,可提高职业病患者的生活质量。     

江苏省人群中甲3型流感抗体的血清学监测

目的:了解江苏省人群中甲3型流感抗体水平及其流行病学特征,为流感的预防提供科学依据。方法:利用微量半加敏血凝抑制试验方法,检测江苏省不同地区(南京、徐州、无锡)、不同自然人群〔养禽场农工、养猪场农工、靠近(<500 m)及远离(>1 000 m)养殖场居民〕中甲3型流感抗体水平,结合流行病学资料,应用单因素和多因素分析方法进行统计分析。结果:人群甲3型抗体阳性率为90.23%,抗体保护率为59.21%,平均抗体GMT为1∶40.00。甲3型抗体水平存在地区、年龄差异,徐州地区抗体水平高于其它两地区,25岁以下年龄组抗体水平高于其他年龄组,其中15岁以下年龄组抗体阳性率和抗体GMT最高。结论:江苏省人群中甲3型流感抗体水平较高,甲3亚型流感病毒如果不发生大的变异,近期不会引起流行。     

双价肾综合征出血热灭活疫苗加强免疫后中和抗体反应

目的：双价肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）灭活疫苗基础全程３针免后１年半加强１针免疫,观察两型的中和抗体反应水平。方法：对免疫志愿者加强免疫前和免疫后２０d采血,以空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）检测血清中ＨＦＲＳⅠ型（７６－１１８）和Ⅱ型（ＳＥＯＶ）中和抗体。结果：血学检测加强免疫后Ⅰ型中和抗体滴度ＧＭＴ１：２８．２９,Ⅱ型中和抗体滴度为１：３２．４９,比加强免疫前两型中和抗体滴度高３－１０倍。结论：加强免疫实属必要。     

老年非霍奇金淋巴瘤R-CHOP14治疗方案疗效评价

目的对利妥昔单克隆抗体联合CHOP方案(R-CHOP14)治疗老年非霍奇金淋巴瘤(NHL)的临床疗效、不良反应进行研究和分析,并了解其对免疫功能的影响。方法采用回顾性研究分析方法,将70例老年非霍奇金淋巴瘤患者分为R-CHOP14组24例、CHOP14组23例及CHOP21组23例,6个疗程后,观察3组的临床疗效及不良反应的发生情况。结果R-CHOP14组患者的完全缓解率为70.8%,总有效率为83.3%;CHOP14组患者的完全缓解率为39.2%,总有效率为65.2%;CHOP21组患者的完全缓解率为34.8%,总有效率为56.6%;RCHOP14组患者的完全缓解率高于CHOP14组及CHOP21组;疗效差异有统计学意义(P<0.05);3组患者间不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论R-CHOP方案治疗老年非霍奇金淋巴瘤疗效好,不良反应小,效价比高,耐受好,但会使免疫功能受损,感染发生率增加。