Expression of CHOP/GADD153 in Luteinizing Granulosa Cells of Ovary with Polycystic Ovary Syndrome

目的:探讨内质网应激相关因子CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达.方法:收集因PCOS不孕、行IVF-ET取卵时的黄体颗粒细胞(PCOS组,n=45)及因男方因素不孕、行IVF/ICSI-ET取卵时的黄体颗粒细胞(对照组,n=45),应用RT-PCR和Western blotting方法检测患者卵巢黄体颗粒细胞CHOP/GADD 153的表达.结果:PCOS组CHOP/GADD153mRNA水平(0.45±0.20)及蛋白水平(0.62±0.26)均较对照组(分别为0.40±0.18、0.56±0.17)有增高趋势,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:内质网应激标志蛋白CHOP/GADD 153在PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达无明显改变,推测PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞内质网应激尚处于保护性阶段.     

PCOS患者卵巢胰岛素抵抗的发生机理探讨

目的:探讨胰岛素抵抗/高胰岛素血症在PCOS生殖功能障碍中的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞,行体外培养,分别用不同浓度胰岛素处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblot检测黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA及蛋白的表达。采用放射免疫法检测血清性激素及空腹血清胰岛素(FIN)水平;采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FPG)水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果:①PCOS患者血清LH、LH/FSH、T、FIN及HOMA-IR均明显高于对照组(P<0.05);②0mU/ml胰岛素时,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1mRNA及蛋白的表达水平明显高于对照组(P<0.05),而IRS-2mRNA及蛋白的表达水平较对照组明显降低(P<0.05);③10mU/ml胰岛素对二组患者黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白的表达均无影响(P>0.05);④100mU/ml或1000mU/ml胰岛素作用后,二组患者IRS-1mRNA及蛋白的表达水平均明显增高(P<0.05),而IRS-2mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:PCOS患者胰岛素抵抗/高胰岛素血症通过提高卵巢颗粒细胞IRS-1的表达,降低IRS-2的表达参与患者卵巢生殖功能障碍的发生。     

Apelin/APJ在PCOS模型大鼠卵巢中的表达及意义

目的:探讨Apelin/APJ在多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠卵巢组织中的表达。方法:21日龄SD大鼠肌肉注射脱氢表雄酮(DHEA),建立PCOS大鼠模型(实验组,n=15),并以等量溶剂油代替DHEA为对照组(n=15),观察卵巢相对重量;HE染色观察卵巢改变;测定E2、T、P、FSH、LH水平;采用免疫组织化学法观察Apelin/APJ在PCOS卵巢中的分布与表达;荧光定量RT-PCR(quantitative RT-PCR)检测Apelin/APJ mRNA表达,Western-blotting检测Apelin/APJ蛋白表达。结果:apelin/APJ分别表达于大鼠卵泡膜细胞、颗粒细胞;实验组卵泡内膜、颗粒细胞中Apelin/APJ mRNA及蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论:apelin/APJ的异常表达可能与PCOS复杂的发病有关。     

罗格列酮对体外培养的PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨罗格列酮改善PCOS卵巢局部胰岛素抵抗的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度罗格列酮(0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L)处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA的表达及蛋白含量。结果:①基础状态下,PCOS组IRS-1mRNA表达及蛋白含量较对照组显著增加;IRS-2mRNA表达及蛋白含量较对照组显著降低(P<0.05);②不同浓度罗格列酮作用后,PCOS组IRS-1mRNA及蛋白表达显著降低,IRS-2mRNA及蛋白表达显著增加,并呈剂量依赖性,而正常对照组无变化。结论:PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗,其原因可能与IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达异常有关;罗格列酮可通过提高黄素化颗粒细胞IRS-2的表达,降低IRS-1的表达,改善PCOS患者卵巢局部胰岛素抵抗。     

P38蛋白激酶抑制剂SB203580对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞PI3K通路的影响

目的:通过研究P38蛋白激酶抑制剂SB203580对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞PI3K通路的影响,探讨PCOS胰岛素抵抗发生的受体后机制。方法:收集在我院行体外受精/卵细胞内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕并伴有PCOS不孕患者的卵泡黄素化颗粒细胞进行体外培养(n=10),将每份细胞样本分种于两个培养瓶,一份采用P38丝裂原活化的蛋白激酶信号转导通道(MAPK)抑制剂SB203580处理(PCOS+IN组),一份未加抑制剂(PCOS组)。另收集行IVF/ICSI-ET助孕的非PCOS患者的卵泡黄素化颗粒细胞作为对照组(N-PCOS组,n=10)。Western blot法检测各组颗粒细胞中p-P38MAPK、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)/Akt以及葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)表达。结果:PCOS组的p-P38MAPK蛋白表达显著高于N-PCOS组,p-Akt/Akt、GLUT-4蛋白表达量较N-PCOS组显著降低(P0.05);SB203580处理后p-P38MAPK蛋白表达明显降低;p-Akt/Akt、GLUT-4蛋白表达量仍较N-PCOS组低,但较SB203580未处理组表达量高(P0.05)。结论:PCOS患者的卵巢颗粒细胞中P38/MAPK通路活性升高,磷脂酰肌醇-3激酶途径/Akt(PI3K/Akt)途径活性降低;卵巢颗粒细胞中P38/MAPK途径与PI3K/Akt途径存在相互联系,P38/MAPK通路阻滞剂SB203580可能通过阻断P38MAPK途径的表达,从而提高卵巢颗粒细胞PI3K/Akt通路的活性,提高GLUT-4表达。     

控制性超促排卵周期多囊卵巢综合征患者生长分化因子-9和骨形成蛋白-15的初步研究

目的:探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达及其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的关系。方法:选择接受IVF-ET治疗的PCOS患者45例,同期输卵管因素不孕患者103例作为对照组。应用免疫组织化学、Real-time PCR技术检测患者卵巢颗粒细胞GDF-9、BMP-15蛋白和mRNA的表达,并分析与IVF-ET的临床结局关系。结果:GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组患者卵巢颗粒细胞胞质均呈阳性表达,PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。多元线性回归分析显示,颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平与优质胚胎数呈正相关关系(P0.05)。临床妊娠组的颗粒细胞GDF-9mRNA、BMP-15 mRNA表达水平高于未妊娠组(P0.05)。结论:COH周期PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平可能与胚胎发育潜能存在相关性。     

多囊卵巢综合征患者颗粒细胞自噬的发生及影响因素

目的探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者颗粒细胞自噬的发生及影响因素。方法取卵日收集行体外受精/卵胞质内单精子显微注射(IVF/ICSI)的PCOS患者和非PCOS患者的卵泡液和颗粒细胞,检测患者卵泡液性激素以及颗粒细胞自噬相关基因的表达,进一步将患者的颗粒细胞自噬相关基因与卵泡液性激素和临床结局等指标进行相关性分析。结果 PCOS患者颗粒细胞自噬相关基因BECN1(2.13±0.94)和ATG7(1.38±0.45)mRNA水平显著高于非PCOS组患者颗粒细胞(1.46±0.52,P=0.002;1.16±0.29,P=0.026)mRNA水平;PCOS患者卵泡液黄体生成素(LH)[(5.32±4.14)IU/L]、雌二醇(E2)[(990.36±390.53)mg/L]和睾酮(T)[(53.18±28.36)nmol/L]水平显著高于非PCOS组患者卵泡液[(2.38±1.34)IU/L,P=0.001;(715.61±325.18)mg/L,P=0.007;(24.44±15.12)nmol/L,P=0.000],PCOS患者卵泡液P4[(12.81±6.78)mg/L]水平显著低于非PCOS组患者[(17.77±9.60)mg/L,P=0.036]。相关性分析显示,颗粒细胞中BECN1 mRNA水平与血清基础T水平(r=0.490,P=0.000)、卵泡液T水平(r=0.329,P=0.031)、血清抗苗勒管激素(AMH)(r=0.337,P=0.018)均呈显著正相关。结论 PCOS患者颗粒细胞自噬可能存在异常激活,可能为PCOS发生的重要机制。     

血管内皮生长因子在卵巢过度刺激综合征发病机理中作用的初步研究

目的通过对卵巢过度刺激综合征(OHSS)患者血管内皮生长因子(VEGF)水平和表达的测定,初步探讨VEGF在OHSS发病机理中的作用.方法采用酶联免疫吸附试验方法对14例中、重度OHSS患者(OHSS组)和同期13例非OHSS患者(对照组)取卵日卵泡液、人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射日、胚胎移植(ET)日血清VEGF水平进行测定;采用免疫组织化学方法和逆转录聚合酶链反应技术检测取卵日卵巢黄素化颗粒细胞VEGF及其mRNA的表达.结果 OHSS组和对照组的卵泡液、hCG注射日血清VEGF水平分别为(1 257.2±648.0)与(1 745.1±802.4) ng/L,(250.1±109.5)与(196.7±81.7) ng/L,两组比较,差异无显著性(P>0.05);OHSS组ET日血清VEGF水平及注射hCG后血清VEGF水平变化程度,显著高于对照组[分别为(342.9±158.5)与(222.2±84.6) ng/L,(92.8±106.7)与(25.9±21.8) ng/L,P<0.05].OHSS组取卵日卵巢黄素化颗粒细胞VEGF mRNA的表达,显著高于对照组,VEGF/β肌动蛋白比值分别为1.50±0.60、0.96±0.56(P<0.05).两组取卵日卵巢黄素化颗粒细胞有较活跃的VEGF表达.结论 VEGF在OHSS的发病机理中可能起一定的作用.     

使用GnRH-a超促排卵时卵泡发育数与妊娠相关血浆蛋白-A的关系

目的:探讨超排卵周期卵泡发育数与卵泡颗粒细胞妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)的关系。方法:根据取卵时卵泡发育数不同,将卵巢对超排卵药物的反应分为低反应型(卵泡数≤3个,A组,n=5)、中反应型(卵泡数4-13个,B组,n=20)和高反应型(卵泡数≥14个,B组,n=14)。采用RT-PCR法和ELISA法测定卵泡颗粒细胞PAPP-A mRNA的表达量及其蛋白含量。结果:A组PAPP-A mRNA表达量显著低于B、C组(分别为0.368±0.084、0.572±0.187、0.605±0.188,P<0.05和P<0.01)。A组与B、C组相比,PAPP-A蛋白含量减少,差异有显著性(分别为0.371±0.111mIU/ml、0.531±0.181mIU/ml、0.503±0.154mIU/ml,P<0.05)。结论:颗粒细胞中的PAPP-A含量可能影响超排卵周期卵泡发育数。     

来曲唑联合促性腺激素超促排卵用于PCOS患者行IVF-ET的临床研究

目的:研究来曲唑(LE)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者超促排卵行IVF-ET中的应用。方法:90例PCOS患者随机分成LE组(n=49)和GnRHa长方案组(对照组,n=41),比较组间的促排卵天数、促性腺激素(Gn)使用剂量、获卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率和临床妊娠率以及卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率。结果:LE组与对照组的Gn剂量分别为18.0±6.6支和29.3±9.5支,促排卵天数分别为7.8±1.3 d和10.0±1.2 d,获卵数分别为7.9±4.1个和19.8±7.2个,MⅡ卵率分别为74.5%和82.9%,启动周期中-重度OHSS发生率4.1%(2/49)vs 29.3%(12/41),差异均具有统计学意义(P<0.05),而组间的种植率和临床妊娠率(33.3%vs27.5%和51.1%vs 48.5%)差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LE用于PCOS超促排卵行IVF-ET与传统的GnRHa长方案相比,在不影响临床妊娠率的前提下,可以有效减少促排卵时间和Gn使用剂量,降低OHSS发生风险,具有极大的临床应用前景。     

胰岛素增敏剂对多囊卵巢综合征患者卵巢局部胰岛素抵抗的影响

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢局部胰岛素抵抗状态及胰岛素增敏剂——曲格列酮(troglitazone)对改善卵巢局部胰岛素抵抗的作用。方法收集11例PCOS患者(PCOS组)和排卵功能正常的33例输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞(卵巢细胞),进行体外培养,并经不同浓度的胰岛素及胰岛素样生长因子1(IGF-1)作用后,观察卵巢细胞糖原和DNA合成的变化,同时观察卵巢细胞胰岛素受体(IR)、IGT-1受体(IGF-1R)、胰岛素受体底物(IRS)的表达。结果(1)不同浓度IGE-1作用后,PCOS组卵巢细胞的DNA合成增加约为对照组的2倍,曲格列酮可抑制IGF-1的这一作用。(2)胰岛素作用后,PCOS组卵巢细胞的糖原合成量与对照组比较,明显降低;而曲格列酮作用后,两组卵巢细胞中胰岛素促糖原合成作用均增加。(3)与对照组比较,PCOS组卵巢细胞：[RS-1的表达(相对灰度,下同)升高,IRS-2表达降低。曲格列酮可降低IRS-1的表达水平,升高IRS-2的表达水平。结论(1)PCOS患者存在卵巢局部的胰岛素抵抗现象。(2)卵巢局部胰岛素抵抗与PCOS患者卵巢高反应状态相关。(3)曲格列酮可增加卵巢细胞对胰岛素的敏感性。     

再生基因Reg IV在多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠卵巢中的表达

目的:探讨再生基因Reg IV在多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠卵巢组织中的表达情况。方法:采用Poretsky法用胰岛素联合hCG诱导SD大鼠建立PCOS模型,观察大鼠体质量变化及卵巢相对质量;测定血清T、LH、FSH、E2、Ins水平;HE染色观察卵巢形态改变;免疫组织化学方法检测Reg IV蛋白在卵巢组织的定位表达;定量RT-PCR和Western blotting分别检测Reg IV在mRNA水平和蛋白水平的表达。结果:Reg IV分别表达于大鼠颗粒细胞、卵泡膜细胞以及黄体等部位;模型组卵巢中Reg IV mRNA及蛋白表达均低于正常对照组(P<0.05)。结论:Reg IV的表达下调可能与PCOS的发病有关。     

卵泡刺激素对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素的影响

目的 研究卵泡刺激素(FSH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素(AMH)的影响.方法 选择2008年8月至2009年12月于中山大学附属第六医院生殖中心就诊的33例PCOS患者,从其直径为8～10 mm的窦卵泡中分离颗粒细胞,并分为以下3组进行培养:未经FSH刺激的颗粒细胞(未刺激组,n=12);外源性FSH刺激的颗粒细胞(体外刺激组,n=12),此组颗粒细胞来源同未刺激组;对患者行FSH促排卵治疗,采集FSH体内刺激的颗粒细胞(体内刺激组,n=21).分别采用ELISA法和实时荧光定量PCR技术检测培养液中颗粒细胞分泌的AMH水平,及AHM mRNA表达水平;构建AMH荧光报告载体,检测卵巢颗粒细胞中AMH启动子的活性.结果 培养液中颗粒细胞分泌的AMH水平,未刺激组为(11.4±4.0)μg/L,体外刺激组为(7.9±1.1)μg/L,体内刺激组为(5.6±1.7)μg/L,体内、体外刺激组分别与未刺激组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).AMH mRNA表达水平未刺激组为2.5±1.2,体外刺激组为1.5±0.5,体内刺激组为1.1±0.7,未刺激组高于体内、外刺激组,分别比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).未刺激组颗粒细胞中AMH启动子的活性为11.5±2.3,体外刺激组为8.7±2.4,体内刺激组为6.8±2.4,未刺激组高于体内、外刺激组,分别比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 FSH可能通过抑制PCOS患者卵巢颗粒细胞中AMH的启动子活性及其mRNA表达,抑制AHM的过度分泌,促进卵泡的生长发育.     

卵巢细胞线粒体动力学变化与多囊卵巢综合征

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是常见的女性内分泌疾病之一.PCOS患者颗粒细胞中调节线粒体动力学平衡关键因子表达水平的异常,提示PCOS患者卵巢细胞清除功能异常,线粒体的能力降低.卵巢细胞中异常线粒体的积聚不仅会影响细胞的胰岛素敏感性及甾体激素合成能力,还会直接降低卵泡细...     

卵巢黄素化颗粒细胞瘦素信号转导分子STAT3磷酸化在多囊卵巢综合征发病中的作用

目的:探讨瘦素在多囊卵巢综合征(PCOS)发病中的作用。方法:选择行IVF-ET治疗的30例PCOS患者根据体重指数(BMI)分为肥胖者(BMI≥24)15例和非肥胖者(BMI<24)15例,及同期排卵功能正常或单纯输卵管因素不孕的非PCOS肥胖者和非肥胖者各15例,采用ELISA检测各组血清瘦素水平;采用放射免疫法检测各组空腹血清胰岛素(FIN)水平;采用葡萄糖氧化酶法测定各组空腹血糖(FPG)水平,利用稳态模型(HOMA)计算胰岛素抵抗指数(即HOMA-IR);采用Western blotting检测卵巢黄素化颗粒细胞信号转导分子STAT3磷酸化水平;同法检测不同浓度的瘦素(0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)体外对正常人卵巢黄素化颗粒细胞STAT3磷酸化(p-STAT3)的影响。结果:①血清瘦素水平PCOS肥胖者最高,其后依次为对照组肥胖者、PCOS非肥胖者和对照组非肥胖者,各组之间两两比较,差异均具有显著性(P<0.05);②PCOS患者血清瘦素水平与BMI和HOMA-IR均呈显著正相关(r=0.707,P<0.01;r=0.761,P<0.01);③STAT3水平肥胖PCOS组最高,其后依次为肥胖对照组、非肥胖PCOS组和正常对照组,各组间两两比较,差异均具有显著性(P<0.05);④正常人卵巢黄素化颗粒细胞经不同浓度瘦素处理48h后,p-STAT3水平呈不同程度增加,至瘦素浓度达到100ng/ml时,p-STAT3水平达到高峰,随后呈下降趋势。结论:瘦素可能通过激活JAK2/STAT3信号传导通路参与PCOS排卵障碍的发生。     

针灸联合宫内人工授精(IUI)治疗多囊卵巢综合征所致不孕——65例疗效观察

目的:观察针灸与药物促排卵配合宫腔内人工授精(IUI)治疗多囊卵巢综合征(PCOS)所致不孕的临床疗效。方法:125例PCOS患者随机分为2组:治疗组65例,在药物促排卵基础上于IUI术前、后加针灸治疗;对照组60例,在IUI术前单以药物促排卵治疗。结果:治疗组的周期排卵率为83.9%,妊娠率为36.9%,黄素化未破裂卵泡(LUF)发生率为4.1%,周期取消率为6.3%;对照组周期排卵率为69.9%,妊娠率为20%,LUF发生率为23.1%,周期取消率为21.4%,组间比较均有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论:针灸配合IUI治疗PCOS可有效提高临床妊娠率,降低了LUF及卵巢过度刺激综合征(OHSS)等并发症的发生率。     

单侧多囊卵巢与多囊卵巢综合征的比较研究

目的:探讨单侧多囊卵巢的临床病理特点及病因。方法:收集单侧多囊卵巢12例,与8例典型多囊卵巢综合征对照比较,分析其临床表现、生化参数、卵泡液中相关激素水平以及卵巢间质细胞超微结构。结果:单侧PCO患者临床表现多样,和典型PCOS比较,单侧PCO出现月经改变和不孕显著减少。单侧PCO组血清PRL和T水平显著高于正常对照组,P<0.05;LH水平显著低于PCOS组,P<0.01。单侧PCO卵泡液中T和INS的水平比正常侧卵巢组显著升高,P<0.01;LH水平显著低于PCOS组,P<0.05。单侧PCO间质细胞粗面内质网、光面内质网不同程度出现扩张,部分粗面内质网有脱粒现象;线粒体出现扩张。结论:单侧PCO是一种不同于PCOS的特殊疾病类型,其临床表现多样,对卵巢生殖和内分泌功能的损害比PCOS轻。单侧PCO与PRL和卵巢局部T异常分泌均有关。单侧PCO间质细胞超微结构改变介乎正常卵巢和典型PC0S之间。