分离大鼠原代肝细胞的改进方法

目的：建立一种简便、经济、高效分离原代大鼠肝细胞的方法，适用于体外药物代谢研究。方法：改进方法采用低浓度胶原酶“软消化”方式，并增加预孵育过程。比较传统分离方法和改进方法在细胞产量、活率以及胶原酶用量上的差异，并将改进方法所得细胞分别与CYP2C、CYP2E、CYP3A典型底物及新药17-AAG共孵育，检测CYP450酶活性及其实际应用价值。结果：改进方法分离的肝细胞在细胞产量尤其是活率上明显高于传统方法，胶原酶用量大大降低，典型底物甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和睾酮经细胞代谢检测到典型羟基化代谢产物，17-AAG经孵育后与体内样品检测结果一致。结论：改进方法可明显提高细胞产量和活率，所得肝细胞具备良好的CYP450酶活性，适用于体外代谢研究，预测药物体内过程。     

重复高G应激后大鼠血清心肌酶谱的变化

目的 观察重复＋Gz应激对大鼠血清心肌酶谱的影响，进一步验证＋Gz对心肌的损伤效应。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组，＋1Gz组和＋10Gz（每组n=8)。＋10Gz组实验条件为：＋10Gz峰值30s,5次／d（间隔＋1Gz1min),3d／周，共3周；＋1Gz组每天＋1Gz暴露5min，对照组不受加速度作用。于末次＋Gz实验后次日断头片锴大鼠，收集血清，用全自动生化分析仪测定心肌酶谱的变化。结果 ＋1Gz组与对照组相比血清心肌酶谱无明显差别，＋10Gz组血清乳酸脱氢酶，α－羟丁酸脱氢酶，肌酸激酶及其同工酶，谷草转氨酶活性均较对照组和＋1Gz组显著升高（P＜0．05）。结论 重复＋Gz应激使大鼠血清心肌酶谱明显升高，进一步证实了高G应激可致心肌细胞损伤。     

氯胺酮对大鼠心肌细胞搏动频率及存活率的影响

目的 观察不同剂量的氯胺酮对大鼠心肌细胞搏动频率及存活率的影响,探讨其心肌变时效应以及是否存在细胞毒性。方法 ①取原代培养的SD大鼠心室肌细胞,随机分为6组,即对照组、1μmol/L、10μmol/L、60μmol/L、100μmol/L和300μmol/L氯胺酮组(n=15孔),在倒置相差显微镜下分别计数氯胺酮作用前及作用30min后心肌细胞的搏动频率。②原代培养的SD大鼠心室肌细胞,随机分为5组,即对照组、10μmol/L、60μmol/L、100μmol/L、300μmol/L氯胺酮组(n=16孔),用四唑盐比色法在酶标仪上测定氯胺酮作用1h后各组细胞的光密度值。结果 ①1μmol/L、10μmol/L、60μmol/L和100μmol/L氯胺酮组,给药前后心肌细胞搏动频率无明显变化(P>0.05);300μmol/L氯胺酮组心肌细胞的搏动频率由给药前的(104.5±4.2)/min减慢至(98.2±4.0)/min(P<0.01);②10μmol/L、60μmol/氯胺酮组光密度值与对照组比较无显著性差异(P>0.05);而100μmol/L、300μmol/L氨胺酮组光密度值分别较对照组降低9.9％(P<0.05)和16.1％(P<0.01)。结论 ①≤100μmol/L的氯胺酮不影响心肌细胞的搏动频率;300μmol/L的氯胺酮对心肌细胞起负性变时效应;②高浓度、超临床浓度的氯胺酮降低心肌细胞的存活率,可能有一定的心肌毒性。     

强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞TNF-α表达的抑制作用

目的探讨强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞TNF-α表达的抑制作用及其可能机制。方法健康雄性SD大鼠18只,右颈静脉及左心室插管,随机均分为3组:假伤组,大鼠给以假烫;烧伤组,制作30%TBSAⅢ度烫伤后,常规给以液体复苏;强化组,烫伤后给以强化胰岛素治疗,液体总量同烫伤组。测定伤后0、1、2、3、4、5、6h的血糖及左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LV-EDP)。伤后6h处死动物,留取左心室组织,分别用ELISA和定量PCR法测定TNF-α蛋白及其mRNA水平,Westernblot观察p-IκBα和IκBα变化。同时用烧伤血清培养新生鼠心肌细胞,观察胰岛素及其活化抑制剂LY294002对p-IκBα水平的影响。结果与假伤组比较,烧伤组动物伤后出现应激性高血糖反应,LVSP降低,LVEDP升高,左心室组织TNF-α蛋白及mRNA水平升高,p-IκBα蛋白表达增高,IκBα蛋白表达降低(P<0.05或0.01)。烧伤大鼠经强化胰岛素治疗后,血糖维持在4.5～5.2mmol/L之间,左心室功能得到明显改善,左心室组织TNF-α蛋白及mRNA水平显著降低,κBα的磷酸化和降解明显减轻(P<0.05或0.01)。LY294002能够消除胰岛素对烧伤血清培养心肌细胞κBα磷酸化的抑制作用。结论强化胰岛素可能通过减少IκBα的磷酸化降解而降低NF-κB活化,进而抑制心肌细胞TNF-α的转录与表达,发挥改善心肌功能的作用。     

激光心肌血运重建对慢性缺血心肌收缩功能影响的实验研究

目的研究激光心肌血运重建(TMLR)对慢性缺血心肌局部和整体心室收缩功能的影响.方法采用中国实验小型猪10只,在全麻、呼吸机辅助呼吸下,经左侧2～3肋间进胸,于冠状动脉左旋支起始段放置Ameroid收缩环,4～6周形成慢性缺血心肌模型.随机分为TMLR组和对照组,每组各5只.TMLR组应用高功率(800W)CO2激光于左心室侧壁以能量18～20J激光打孔10个(直径1mm,孔间距1mm),对照组不作处理.采用2D超声心动图仪检测左心室射血分数(LVEF)、室壁增厚率(RT)和节段室壁运动指数(WMSI)评价心室局部和整体功能.采用小剂量多巴酚丁胺负荷超声(LDDSE)评价心功能储备.经颈静脉放置Swan-Ganz导管测量心排血量(CO,L/min)评价血流动力学变化,分别于正常状态、治疗前和治疗后6周检测.结果治疗后6周,静息下TMLR组RT从术前19.18±1.82增加到48.44±9.87(P＜0.01),并接近于正常,WMSI从术前1.29±7.13E-02减低到1.16±0.11(P＜0.05),RT和WMSI改善比对照组显著.LDDSE(5μg*min-1*kg-1)示两组RT、WMSI无显著差异,而LDDSE(10μg*min-1*kg-1)示TMLR组WMSI(1.03±5.59E-02)比对照组(1.14±2.71E-02)明显改善(P＜0.01),两组间以及各组治疗前后EF、CO均无明显改变.结论TMLR可改善慢性缺血心肌局部收缩功能、节段室壁运动,增加心功能储备.     

胰岛素抑制糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的作用及机制

目的 观察胰岛素治疗2型糖尿病(T2DM)大鼠后心肌细胞线粒体凋亡的变化,探讨胰岛素通过线粒体发挥抗凋亡作用的机制.方法 雄性Wistar大鼠采用链脲佐菌素(STZ)+高脂饮食诱发2型糖尿病.22只大鼠随机分为早干预组(IE组,n=7)、晚干预组(IL组,n=7)和糖尿病组(DM组,n=8),另选8只在鼠作为正常对照组.IE组和IL组分别于成模第1、4周给予诺和灵30R皮下注射,而DM组和正常对照组予以等量生理盐水皮下注射.8周后比较各组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、心肌细胞凋亡指数的差异,并观察各组心肌细胞超微结构变化、线粒体膜电位及活性氧改变.结果 与正常对照组相比,DM组大鼠血糖、心重(HW)/体重(BW)比值升高(P<0.05),SOD、GSH、膜电位均明显降低(P<0.01),而MDA、TUNEL凋亡指数则明显升高(P<0.01),活性氧产生速率增快.电镜下DM组大鼠线粒体嵴断裂,溶解、空泡化.与DM组比较,IE组上述指标均有改善(P<0.05),但IL组上述指标的改善不明显.结论 胰岛素干预对糖尿病大鼠心肌细胞有抗凋亡作用,且早期干预优于晚期干预.     

正常大鼠离体工作心脏收缩和泵血功能指标的测定分析

报道了82例正常大鼠离体工作心脏收缩和泵血功能指标的测定结果。Vpm为1.85±0.65ml/s,dP/dt_(max)为279±39kPa/s,泵功能指标CO、CF和AF分别为43.2±7.6、8.5±1.2和35.2±4.5ml/min,雌雄间各指标无差异性。Vpm与dP/dt_(max)、LVSP、CO、CF和AF高度相关。对14只大鼠离体工作心脏进行了动态观测,90min内各指标稳定。     

不同水平急性+Gz暴露对大鼠心肌超微结构的影响

目的 研究不同水平急性 Gz暴露对大鼠心肌超微结构的影响,为进一步完善高性能战斗机飞行员抗荷措施提供实验依据。方法 20只雄性Wistar大鼠随机分为4组(n=5)：正常对照组、 20Gz组、 10Gz组和 5Gz组。采用梯形加速度曲线, 20Gz暴露30S, 10Gz暴露1.5min, 5Gz暴露1．5min并间隔30min重复3次。暴露后5h取左心室心肌组织常规透射电镜观察。结果 20Gz和 10Gz暴露均可造成明显的心肌细胞和血管内皮细胞水肿,肌原纤维排列疏松,线粒体和细胞核损伤。 20Gz暴露还可造成部分心肌纤维断裂、收缩带形成和线粒体膜破裂。 5Gz重复暴露也造成心肌细胞和血管内皮细胞轻度水肿,但未见心肌超微结构器质性损伤。结论 高 Gz暴露可造成大鼠心肌超微结构损伤,中等强度 Gz反复暴露心肌细胞也可出现轻度可逆性损伤反应,提示应重视高 Gz暴露对飞行员心脏影响的研究和防护。     

长期尾部悬吊对大鼠左心室乳头肌等长收缩性能的影响

观察头低位－３０°尾部悬吊１３周对大鼠左室乳头肌等长收缩性能的影响。结果表明，１３周尾部悬吊大鼠左室乳头肌的静息张力与发展张力较同步对照组分别下降１６％和３３％；最大张力速率与最大张力下降速率分别下降３３％和２８％。     

过度训练对大鼠心肌细胞凋亡的影响

为了研究过度训练对大鼠心肌细胞凋亡的影响 ,通过对大鼠进行力竭性游泳训练建立大鼠过度训练模型 ,用DNA原位末端标记法检测心肌细胞的凋亡 ,并用免疫组化的方法检测心肌细胞中bcl- 2和Fas蛋白的表达情况。结果发现 :①过度训练时 ,大鼠心肌细胞凋亡显著增加。心肌细胞凋亡可能是过度训练影响心血管功能的病理生理机制。②过度训练时 ,大鼠心肌细胞中bcl- 2蛋白的表达显著下降 ,Fas蛋白的表达轻度增加。因此 ,过度训练抑制bcl- 2蛋白的表达而促进Fas蛋白的表达 ,这可能是过度训练时大鼠心肌细胞凋亡发生的基因调控机制。③过度训练时 ,大鼠心肌组织和血清中SOD活性显著下降 ,MDA含量显著增加。因此 ,过度训练时机体抗氧化能力下降 ,导致氧自由基生成增多。这可能也是心肌细胞凋亡的调节机制。     

Effect of hypoxia on water-electrolyte metabolism and human renal function with different degrees of motor activity]

It was demonstrated that a prolonged (24 days) bed rest at altitudes of 2200 m and 3200 m as well as at sea level was accompanied by an increased renal excretion of fluids and osmotically active substances, including electrolytes. Exercises done during bed rest indiced a smaller increase of the renal excretion of sodium and potassium. However, as bed rest continued the differences between the groups of test subjects disappeared. The levels of hypoxia and exercises used in the study proved inefficient to prevent changes in the fluid-electrolyte metabolism occurring during bed rest.     

不同程度高尿酸血症飞行人员并发症及合并症现况分析

目的 分析不同程度高尿酸血症飞行人员的并发症及合并症情况,了解高尿酸血症飞行人员代谢异常的现状.方法 回顾空军特色医学中心2015年1月—2019年12月收治住院的高尿酸血症飞行人员的相关病例情况.以血清尿酸水平分为420～<480μmol/L组、480～<540μmol/L组、540～<600μmol/L组和≥600...     

地塞米松、利多卡因、对比剂对胶原酶活性影响的实验研究

目的 研究激素类药物(地塞米松)、麻醉药物(利多卡因)、对比剂(欧乃派克)是否会影响胶原酶的溶解活性.方法 取相同质量的椎间盘髓核组织,用相同浓度的胶原酶进行溶解.设对照组(未加药物)和实验组,不同实验组分别加入一定量的药物(地塞米松、利多卡因、欧乃派克).24 h后通过检测各组溶液中羟脯氨酸含量测定胶原酶的溶解效果.统计分析对照组和实验组的差异.结果 ①地塞米松组、利多卡因组、欧乃派克组溶液中的羟脯氨酸含量明显低于对照组,尤其以利多卡因组为甚,P值分别＜0.05和＜0.01.②地塞米松 利多卡因组;地塞米松 欧乃派克组;利多卡因 欧乃派克组;地塞米松 利多卡因 欧乃派克组溶液中的羟脯氨酸含量明显低于对照组低,同时也分别比地塞米松组、利多卡因组、欧乃派克组低,差异有统计学意义.结论 地塞米松、利多卡因、欧乃派克可不同程度地抑制胶原酶的溶解活性,任何两者或三者同时使用会进一步加剧对胶原酶活性的抑制.因此在使用胶原酶治疗腰椎间盘突出症时,不要把这些药物与胶原酶同时使用,以免影响胶原酶的治疗效果.     

Rheological blood indicators during motor activity of various degrees

Blood rheological parameters of essentially healthy people were examined during exercises of a maximal workload and 14-day head-down tilt. The results obtained indicate that in the people performing normal and increased motor activity some rheological parameters were different. Changes in the rheological parameters of blood after head-down tilt and exercises with a maximal workload suggest the existence of a blood viscosity threshold above which physical work capacity declines significantly. The capacity can be restored through a correction of blood viscosity in the recovery period. The basic rheological properties of blood can be improved by regular physical training.     

Comparison of three methods of DNA extraction from human bones with different degrees of degradation

There is a necessity for deceased identification as a result of many accidents and sometimes bones are the only accessible source of DNA. So far, a universal method that allows for extraction of DNA from materials at different stages of degradation does not exist. The aims of this study were: the comparison of three methods of DNA extraction from bones with different degree of degradation and an evaluation of the usefulness of these methods in forensic genetics. The efficiency of DNA extraction, the degree of extract contamination by polymerase chain reaction (PCR) inhibitors and the possibility of determining the STR loci profile were especially being compared. Nuclear DNA from bones at different states of degradation was isolated using three methods: classical, organic phenol–chloroform extraction, DNA extraction from crystal aggregates and extraction by total demineralisation. Total demineralisation is the best method for most cases of DNA extraction from bones, although it does not provide pure DNA. DNA extraction from aggregates removes inhibitors much better and is also a good method of choice when identity determination of exhumed remains is necessary. In the case of not buried bones (remains found outside) total demineralisation or phenol–chloroform protocols are more efficient for successful DNA extraction.     

妊娠期绵羊不同程度高原缺氧模型的建立

目的 应用西北人工实验舱建立妊娠期绵羊不同程度高原缺氧模型,并评估其氧合状态及氧化损伤程度.方法 采用24只人工授精配种成功的妊娠期绵羊,随机均分为平原对照组(LAC)、轻度低氧暴露组(MHE)和重度低氧暴露组(SHE).用人工实验舱模拟西北地区高原低氧低压低温环境,通过调节温度、湿度、压力和空气氧含量等参数制备MHE与SHE动物模型,分别于建模前(0d)与建模后7、15、30、90、120d检测3组动物氧合状态、生命体征及行为模式,动态检测肝脏组织氧化损伤标志物的水平.结果 经不同条件人工实验舱造模30d(MHE组)及90d(SHE组)后,妊娠期绵羊动脉血气指标分别达到轻度和重度缺氧诊断标准.建模后90d,与LAC组比较,MHE组及SHE组妊娠期绵羊呼吸频率减低(P＜0.05),心率升高(P＜0.05),运动减少,且SHE组饮食较MHE组减少;建模后120d,MHE组及SHE组妊娠期绵羊蛋白质氧化损伤的生物标志物羰基(CO)和细胞氧化损伤的生物标志物丙二醛(MDA)水平均明显高于LAC组(P＜0.05),且SHE组明显高于MHE组(P＜0.05).结论 应用西北人工实验舱成功建立了妊娠期绵羊不同程度高原缺氧模型.高原低氧环境可引起妊娠期绵羊氧化应激损伤.     

SWE联合灰阶超声评估不同分度子宫脱垂初产妇会阴体变化

目的利用实时剪切波弹性成像技术(SWE)联合灰阶超声探讨产后不同分度子宫脱垂初产妇会阴体弹性和形态的变化。方法选取2019年1月~2019年12月200例产后6~8周,患有子宫脱垂且经阴道单胎足月顺产的初产妇为观察对象。通过经阴道超声检查,结合POP分度标准,将患有Ⅰ度子宫脱垂的65例初产妇纳入B组,Ⅳ度子宫脱垂的46例初产妇纳入C组。收集同期健康已婚未育女性50例作为对照,纳入A组。分别在静息及缩肛状态下,测量三组观察对象会阴体的高度及深度,采集各组会阴体的杨氏模量值。结果三组观察对象的会阴体收缩幅度差值(高度、深度)在缩肛、静息两种状态下,差异有统计学意义(P均<0.05);静息及缩肛两种状态下健康对照组会阴体的平均杨氏模量值较Ⅰ度子宫脱垂组、Ⅳ度子宫脱垂组高,且Ⅰ度子宫脱垂组高于Ⅳ度子宫脱垂组,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论产后子宫脱垂初产妇会阴体弹性明显降低,收缩功能减弱,且会阴体收缩功能减低程度与子宫脱垂程度有关。     

不同创伤程度手术对围手术期患者胰岛素抵抗等指标的影响

目的探讨不同创伤程度手术对围手术期患者胰岛素抵抗(insulin resistence,IR)等指标的影响,了解围手术期IR与手术创伤程度的关系。方法 2016年3月—2016年12月唐山市开滦总医院、饶阳县医院及张北县医院择期行肝胆、胰腺手术患者100例(其中肝脏手术30例,胆囊手术38例,胰腺手术32例),根据手术创伤程度评分(OSS评分)将100例患者分为轻度创伤组(36例)、中度创伤组(33例)、重度创伤组(31例),分别于患者麻醉前(T_0)、术后拔出气管导管时(T_1)、术后第1天空腹(T_2)及术后第3天空腹(T_3)检测空腹血浆葡萄糖(FPG)、血浆胰岛素(FINS),稳态模式评估法(HOMA-IR)计算IR指数,定量胰岛素敏感性检测指数法(QUICKI)测定胰岛素敏感性指数(ISI),并计算不同时段△ISI变化情况。结果 T_1、T_2及T_3,3组患者血浆FPG水平、FINS水平、IR指数、ISI比较,差异均有统计学意义(P0.05),且重度创伤组血浆FPG水平、FINS水平、IR指数最高,ISI最低;同组患者,T_0、T_1、T_2及T_3血浆FPG水平、FINS水平、IR指数、ISI比较,差异均有统计学意义(P0.05),且T_2血浆FPG水平、FINS水平、IR指数最高,ISI最低。3组患者同时段△ISI值比较,差异均有统计学意义(P0.05),且重度创伤组最高;同组患者不同时段△ISI值比较,差异均有统计学意义(P0.05),且△ISI_2最高;Pearson相关分析显示,围手术期IR指数与OSS评分呈正相关(r=0.938,P0.001)。结论不同手术创伤程度患者不同时间有不同程度的血浆FPG水平、FINS水平、IR指数、ISI的变化,以术后第1天变化显著。IR出现时间早且随着手术创伤程度的加深而增强,随着时间及患者恢复逐渐下降。IR与手术创伤程度密切相关。     

Contraction of the canine gallbladder in different degrees of common bile duct obstruction.

C-terminal octapeptide of cholecystokinin was administered at six dose levels, 4-128 ng/kg, by 184 intravenous injections to three mongrel dogs under several pressure conditions of the biliary system. Gallbladder contraction was monitored radiographically. A good, dose-dependent contraction response resulted with intraductal pressures of 0 and 10 cm water. At 20 cm water, a markedly reduced and dose-independent response occurred. No contraction response was found with an intraductal pressure of 30 cm water. This animal experimental work suggests that in man, a contraction response of 30% or more may rule out significant common bile duct obstruction.     

飞行高度与血压变化的相关性分析

目的：探讨不同飞行高度中血压的变化。方法收集25名健康受试者,利用改装的卫生飞机分别于不同飞行高度1000、4000 m和6900 m对受试者进行收缩压和舒张压的监测。结果随着飞行高度的升高,收缩压和舒张压均有所下降。而在同一飞行高度时性别、年龄与收缩压差异有统计学意义。结论飞行高度升高导致收缩压和舒张压都下降,因此当使用卫生飞机转运患者时应注意飞行高度。