组胺H4受体在肺癌中减弱表达研究

目的研究肺癌组织中组胺H4受体（HH4R）的mRNA表达。方法应用RT-PCR方法,测定人类36例肺正常组织、51例肺癌患者癌旁组织、5l例肺癌组织的组胺H4受体基因mRNA的表达情况。结果人类肺组织富含组胺H4受体表达,HH4R表达为肺癌组织〈癌旁组织〈正常组织。结论在肺癌发展过程中,人类肺组织中组胺I-14受体mRNA表达明显减弱。     

肝细胞癌组织中TGF-β1基因mRNA和蛋白表达的研究

目的　从转录和翻译两个水平探讨转化生长因子 β1(TGF β1)在肝细胞癌 (HCC)中的表达。方法　用免疫组化技术 ,分别检测 36例肝癌组织和癌旁肝组织中TGF β1及转化生长因子 β1Ⅱ型受体 (TβRⅡ )蛋白的表达 ;用原位杂交方法检测 2 6例肝癌组织和癌旁肝组织中TGF β1mRNA的表达 ,并将TGF β1蛋白与TGF β1mRNA ,TGF β1mRNA与TβRⅡ蛋白进行比较。 结果　 (1)肝癌组织中TGF β1mRNA、TGF β1蛋白表达均明显高于癌旁组织 (P <0 0 1) ;肝癌组织TβRⅡ蛋白表达明显低于癌旁组织 (P <0 0 1)。 (2 )肝癌组织中TGF β1mRNA与TGF β1蛋白呈正相关 ,TGF β1mRNA与TβRⅡ蛋白表达呈负相关。 结论　肝癌组织中TGF β1基因的变化发生在多个水平 ;TGF β1在肝癌发生中发挥重要作用 ;TGF β1抑制作用的减弱主要是由于TβRⅡ蛋白表达减弱引起。本研究为肝癌发病机制和基因治疗提供理论依据。     

组胺H4受体在结直肠癌组织中表达及临床意义

目的 观察结直肠癌组织中组胺H4受体的表达变化及其临床意义.方法 分别采用免疫组化SP法和RT-PCR法检测80例结直肠癌(观察组)及28例癌旁正常组织(对照组)中的组胺H4受体及mR-NA.结果 观察组组胺H4受体阳性9例,对照组为26例,两组H4阳性率差异有统计学意义(x2=63.0576,P＜0.01);观察组中组胺H4受体表达在有淋巴结转移患者中的表达阳性率为43.5％ (27/62),明显高于无淋巴结转移患者的5.6％ (1/18)(x2=8.8511,P＜0.01);Ⅰ～Ⅱ期结直肠癌组织中H4表达阳性率为28.6％(8/28),明显高于Ⅲ～Ⅳ期的3.8％ (2/52)(x2=10.1727,P＜0.01).观察组组胺H4受体mRNA表达量为(1.122±0.046)(A值),明显高于对照组的(0.154±0.012)(A值)(t=109.7429,P＜0.05).结论 组胺H4受体在结直肠癌组织有表达异常,表达量与病理分期相关.     

Glypican-3基因在肝细胞癌组织中的表达

目的观察Glypican-3基因在肝细胞癌中的表达和突变关系。方法采用RT-PCR和SSCP分别检测48例肝细胞癌肿瘤组织、癌旁组织和正常肝组织中Glypican-3mRNA的表达和基因突变。结果Glypican-3 mRNA在肿瘤组织中的阳性表达率为77．1％，癌旁和正常肝组织中未见表达；Glypican-3表达与肝癌临床分期、细胞分化程度均有显著相关性（P〈0．05）；肝细胞癌组织中未发现Glypican-3基因突变。结论正常基因型Glypican-3在肝细胞癌中的过度表达可能是作为“安全卫士”来对抗癌基因的异常表达，从而发挥抑癌作用。     

人肝癌组织GGT异常表达与逆转录巢式PCR分析

为探讨肝癌组织中γ-谷氨酰转肽酶（GGT）的表达与改变,将自身配对的肝癌、癌周及远癌组织总RNA纯化,分析不同分子形式GGT表达,并以逆转录巢式PCR（RT－PCR）扩增GGT5’-末端非编码区基因。结果：肝癌、癌周和远癌组总RNA浓度呈明显的梯度升高趋势（P＜0．05）;肝癌组总GGT比活性和不同分子形式GGT均明显高于癌周和远癌组（P＜0．05）;RT－PCR扩增GGT基因片段,在肝癌、癌周和远癌组阳性率分别为95．8％、87．5％和79．2％。提示肝癌组织中GGT呈异常表达,GGT基因分析可望成为监测肝细胞癌变的灵敏方法。     

卡托普利对左心室心肌血管紧张素Ⅱ—1型受体mRNA及其受体蛋白的影响

目的观察卡托普利对左室心肌血管紧张素Ⅱ-1型受体mRNA表达及其受体蛋白的影响,探讨卡托普利逆转左室重构的机制。方法36只大鼠分为假手术组、模型组和卡托普利组,每组12只。采用RT—PCR方法检测心肌组织AT1 mRNA的表达,采用免疫组织化学染色方法观察心肌组织AT1受体蛋白的改变。结果模型组大鼠左心室心肌组织AT1 mRNA表达较假手术组升高（P〈0．01）,卡托普利组左心室心肌组织AT1 mRNA表达较模型组显著下降（P〈0．01）。模型组大鼠左心室心肌组织AT1受体蛋白较假手术组升高（P〈0．01）,卡托普利组左心室心肌组织AT1受体蛋白较模型组显著下降（P〈0．01）。结论压力负荷所致心肌肥厚大鼠左心室心肌中AT1基因转录与AT1蛋白合成水平是升高的;卡托普利对压力负荷所致心肌肥厚大鼠左心室心肌AT1基因转录与翻译水平均有影响。     

五步蛇毒对大鼠海马组胺受体H_1 mRNA和蛋白质表达的影响

目的研究五步蛇毒对大鼠海马组胺受体H1mRNA及蛋白质表达的影响。方法用半定量RT-PCR和Western blot方法,检测腹腔注射五步蛇毒后不同时相大鼠海马组胺受体H1mRNA及蛋白质表达的变化。结果五步蛇毒处理后,大鼠海马组胺受体H1mRNA及蛋白质的表达在各时相点均发生变化,且其mRNA和蛋白质表达均为先下调后上调。结论五步蛇毒对大鼠脑区海马组胺H1受体mRNA和蛋白质表达都有影响。H1受体mRNA和蛋白质表达的改变对大脑的生理功能有一定的影响,可能是该蛇毒致脑功能障碍的分子基础之一。     

Expression and significance of PUMA gene in hepatocellular carcinoma

目的 研究p53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)基因mRNA及其功能蛋白在肝癌组织中的表达及其临床意义.方法 用半定量RT-PCR和Western blot方法检测42例肝癌患者的癌组织及其癌旁组织和42肝良性病变组织的PUMA mRNA及其编码蛋白表达.结果 癌组织、癌旁组织和肝良性病变PUMA mRNA的表达量分别为0.81±0.07、0.97±0.04和1.76±0.06,PUMA蛋白的表达量分别为0.48±0.19、0.61±0.12和1.11±0.34;肝癌组织及癌旁组织的PUMAmRNA及其蛋白表达量明显低于肝良性病变组织高于(P＜0.05).结论 PUMA基因在肝癌组织中的表达下调,与癌的发生呈负相关.     

HO-1在原发性肝癌中的表达及意义

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在肝癌组织中的表达及意义。方法分别用RT-PCR、免疫组化检测35例肝癌标本、癌旁组织、正常肝组织的HO-1mRNA及HO-1蛋白表达情况,探讨HO-1在肝癌组织中表达及意义。结果肝癌组织中的HO-1mRNA表达明显高于癌旁组织、正常肝组织(P<0.05),肝癌组织中的HO-1表达高于癌旁组织及正常肝组织(P<0.05)。结论HO-1mRNA、蛋白表达在原发性肝癌组织中表达上调与肝癌演变、发展密切相关,并提示HO-1对肝癌细胞存在保护作用。     

血晶素促进缺氧大鼠肺组织诱导型血红素氧合酶基因的表达

目的　研究血晶素 (Hemin)对缺氧大鼠肺组织诱导型血红素氧合酶 (HO 1)表达的影响。方法　常压缺氧 15d复制缺氧性肺动脉高压大鼠模型 ,分为 3组 :正常对照组、单纯缺氧组和血晶素组。应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测大鼠肺组织HO 1mRNA水平 ,双波长分光光度法检测动脉血中一氧化碳血红蛋白 (COHb)的含量 ,并用右心导管检测右心室收缩压。结果　缺氧 15d大鼠肺组织HO 1mR NA水平及血中COHb较正常大鼠升高 (P <0 0 1) ,同时右心室收缩压 (RVSP)升高 (P <0 0 1)。经血晶素干预后 ,使缺氧大鼠HO 1mRNA和COHb进一步增高 ,而RVSP降低(P <0 0 1或P <0 0 5 )。结论　血晶素能够上调HO 1基因在缺氧大鼠肺组织中的表达 ,促进内源性CO生成 ,抑制大鼠缺氧性肺动脉高压的形成     

Progress in allergy signal research on mast cells: up-regulation of histamine signal-related gene expression in allergy model rats

Brown Norway allergy model rats sensitized to toluene 2,4-diisocyanate (TDI) were developed. Histamine H(1) receptor mRNA level was elevated in nasal mucosa of allergy model rats after the provocation with TDI, which was followed by H(1)-receptor up-regulation. Elevation of histamine H(1) receptor mRNA was partially suppressed by d-chlorpheniramine and olopatadine, antihistamines. Histamine induced increase in histamine H(1) receptor gene expression in vitro, and the protein kinase C-delta isoform was suggested to mediate the gene expression. On the other hand, elevation of histamine H(1) receptor mRNA was completely suppressed by dexamethasone in allergy model rats. Provocation with TDI also induced mRNA elevation of histidine decarboxylase, a sole histamine-forming enzyme, followed by the increase of both HDC activity and histamine content in nasal mucosa of allergy model rats. HDC mRNA elevation and increase in both HDC activity and histamine level were almost completely suppressed by dexamethasone. These observations suggest that histamine H(1) receptor up-regulation and increase in histamine level play an important role in allergy through the regulation of histamine signaling.     

盐酸二甲双胍对非酒精性脂肪肝大鼠脂肪组织相关基因表达的影响

目的:从基因表达水平上分析盐酸二甲双胍对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠模型的干预效果及其作用机制。方法:以高脂饲料饲喂雄性Wistar大鼠诱发NAFLD,并分别进行盐酸二甲双胍干预与蒸馏水灌胃对照,每组8只,为期4周。通过逆转录和定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)方法检测脂肪组织中脂联素、瘦素、肿瘤坏死因子(TNF)-α、抵抗素和解偶联蛋白2的mRNA相对水平并进行t检验。结果:与对照组比较,药物干预组脂联素mRNA相对水平略有上升(P>0.05),瘦素mRNA和TNF-αmRNA相对水平显著下降(P<0.05)。2组样品中均未检测到抵抗素和解偶联蛋白2的mRNA。结论:盐酸二甲双胍可能主要是通过促进脂联素基因表达和抑制TNF-α基因表达来调节肝脏脂肪代谢、改善肝细胞脂肪变性和炎症反应,从而发挥其对NAFLD的干预作用。     

Genomic structure of the rat and mouse histamine N-methyltransferase gene

Northern blotting analysis revealed different tissue distribution patterns of HMT mRNA between mice and rats. In the mouse, mRNA expression was detected in the brain, kidney and liver. In the rat, there was an extremely high mRNA signal only in the kidney. We isolated and characterized the rat and mouse histamine N-methyltransferase (HMT) genes from genomic DNA libraries. The rat HMT gene consists of 6 exons and 5 introns. The mouse HMT gene structure was similar to that of the rat, but had one additional exon 5' upstream from the exon containing a start codon, resulting in seven exons. Several long interspersed repetitive elements were located in the 5' flanking region of the rat and mouse HMT gene. Despite high sequence conservation of the regions around exon 6 and the 3' flanking region, the 5' flanking region had little similarity between the rat and mouse. Marked sequence similarities between rat and mouse introns were present near splice sites and outside the junction residues, suggesting the evolutionary relationship between the structural features of the rat and mouse HMT genes. This observation may explain the species difference of the tissue expression pattern of HMT mRNA.     

肝癌发生过程中的PTEN基因表达

目的 探讨肝癌PTEN基因的表达及与肝癌发生的关系.方法 应用RT-PCR法检测37例肝癌癌灶及非癌组织中PTEN基因mRNA表达,并通过凝胶图像系统分析其相对表达量.同时采用免疫组化方法分析肝癌组织中PTEN蛋白的定位.结果 癌灶PTEN mRNA表达率为48.6%(18/37),非癌组织为100.0%(37/37),癌灶组织中TEN基因表达显著低于非癌(P<0.01).免疫组化检测肝癌癌灶组织中PTEN蛋白表达率为37.8%(14/37),显著低于非癌组织中的94.6%(35/37)(P<0.01).结论 PTEN基因下调或缺失可能与肝癌的发生发展有密切相关.     

Histamine H₁ receptor gene as an allergic diseases-sensitive gene and its impact on therapeutics for allergic diseases

Therapeutics targeting disease-sensitive genes are required for the therapy of multifactorial diseases. There is no clinical report on therapeutics for allergic disease-sensitive genes. We are focusing on the histamine H? receptor (H1R) as a sensitive gene. H1R mediates allergy histamine signals. H1R is a rate-limiting molecule of the H1R signal because the signal is increased with elevated receptor expression level. We discovered that the stimulation of H1R induced H1R gene expression through PKCδ activation, resulting in receptor upregulation. The mechanism of H1R gene expression was revealed to play a key role in the receptor expression level in studies using cultured HeLa cells and allergic rhinitis model rats. Preseasonal prophylactic treatment with antihistamines is recommended for the therapy of pollinosis. However, the mechanism of the therapy remains to be elucidated. We demonstrated that repeated pretreatment treatment with antihistamines in the allergic rhinitis model rats resulted not only in improvement of symptoms but also in suppressed elevation of H1R mRNA levels in the nasal mucosa. A clinical trial was then initiated. When symptoms and H1R mRNA levels in the nasal mucosa of pollinosis patients with or without preseasonal prophylactic treatment with antihistamines were examined, both symptoms and high levels of H1R mRNA were significantly improved in treated compared with untreated patients. These results strongly suggest that H1R is an allergic disease-sensitive gene.     

RNAi研究角蛋白18在肝癌增殖中的作用及不同中医治法的调节

目的观察不同中医治法对大鼠肝癌角蛋白18（CK18）表达的调控差异,及其在人肝癌细胞增殖中的作用。方法 （1）采用DEN诱发大鼠肝癌模型,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治法治疗后,检测肝癌组织（和正常肝组织）CK18表达的差异;（2）设计2个人CK18基因siRNA靶点,将重组质粒电转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果 （1）芯片结果显示,CK18基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的轻度调控作用,其中健脾益气治法下调作用较明显;（2）采用MTT法筛选到一个CK18基因RNA干扰有效靶序列,转染144h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制;（3）实时荧光定量PCR检测表明,转染72h后该基因的表达已明显降低。结论肝癌细胞恶性增殖有赖于CK18基因的高表达,目前常用治法对该基因的调控作用有限,因而该基因可望作为肝癌疗效筛选评价指标。     

Survivin和P53基因在慢性血吸虫病并大肠癌中的表达及意义

目的 探讨Survivin和P53基因在慢性血吸虫病并大肠癌中的表达及意义.方法 选取2010年至2015年大肠癌手术病人的病理标本,其中未患血吸虫的大肠癌病人34例,伴有血吸虫感染的大肠癌病人16例,通过PCR-SSCP方法检测P53基因第5~8外显子突变情况,利用 PT-PCR检测Survivin mRNA的表达,研究P53基因第5~8外显子突变情况和Survivin mRNA在大肠癌伴血吸虫病人和未伴血吸虫病人中的表达情况差异.结果 在所有入组人群的P53基因检测上,均无发现突变情况;而大肠癌合并血吸虫病的患者结直肠中Survivin mRNA的表达明显高于单大肠癌患者.结论 检测慢性血吸虫并大肠癌病人中Survivin的基因水平,能够了解血吸虫病对大肠癌的影响,为进一步寻找靶基因提供了线索.     

自发性癫痫大鼠海马电压门控性钠通道β_1亚基表达与基因突变分析

目的与正常Wistar大鼠作对比,探讨自发性癫痫大鼠(SER)海马中电压门控性钠通道β1亚基mRNA与蛋白的表达情况及基因突变分析。方法应用RT-PCR技术检测β1亚基mRNA的表达;免疫组化方法定位β1亚基蛋白;免疫印迹方法检测β1亚基蛋白的表达;直接测序技术筛查β1亚基全部外显子基因突变位点。结果SER海马β1亚基mRNA表达高于Wistar大鼠(P<0.05);免疫组化结果显示β1亚基蛋白在SER大鼠海马各区中均有表达,且位于细胞膜上;β1亚基蛋白的表达高于Wistar大鼠(P<0.01);直接测序法筛查了β1亚基全部外显子的突变位点,结果未见任何突变。结论SER海马β1亚基表达异常可能会促进癫痫样兴奋活动的产生,进而构成SER癫痫表型的发作基础。