一氧化氮合酶在自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质的分布

目的 探讨自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质内一氧化氮合酶阳性细胞和纤维的分布及其与自发性高血压的关系。方法 采用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法,并以计算机图像分析系统对脊髓胸腰部中间外侧核本部区ＮＡＤＰＨ－ｄ染色强度（Ａ值）进行半定量分析。结果１．在脊髓中间带灰质区,一氧化氮合酶阳性神经细胞和纤维主要见于胸腰部中间外侧核本部区和中央管周围,在中介核区也有少量分布。胸腰部中间外侧核本部区染色阳性细胞成群分布,细胞群的大小、间距随节段而稍有不同。一氧化氮合酶阳性细胞分布模式在自发性高血压大鼠和正常鼠两组之间未发现明显差异。２．在脊髓Ｔ２、Ｔ５、Ｔ８、Ｔ１１、Ｌ１各节段中间外侧核本部区,一氧化氮合酶阳性物质的Ａ值,自发性高血压大鼠比正常大鼠低。统计结果显示,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。结论 脊髓中间带灰质的交感神经节前     

家兔脊髓灰质细胞构筑的研究

本研究采用14只成年和幼年家兔的各节脊髓,作脊髓灰质分层研究。所用的脊髓切片为80μm、60μm和15μm的横或矢状切片以及2μm的半薄切片。对细胞体和髓鞘染色分别采用甲苯胺蓝、坚牢焦油紫、LuXol Fast Blue及对苯二胺。此外,还用显示灰质乙酰胆碱酯酶活性的方法协助分层研究。分层研究是根据Rexed对猫脊髓灰质分层的原则。研究结果发现家兔脊髓分层基本类似于猫,但在各层的范围及结构方面仍有一定不同。     

龟龄集对大鼠脊髓灰质内突触小泡蛋白变化的影响

目的：研究龟龄集对大鼠脊髓灰质内突触小泡蛋白的影响，探索龟龄集的抗衰老功效。方法：采用免疫组织化学结合图像分析法，对龟龄集喂药鼠和对照鼠的脊髓颈膨大、胸髓、腰膨大和骶尾髓灰质内突触小泡蛋白的免疫反应产物进行了观测。结果：对照和喂药鼠各自的脊髓各段后角内突触小泡蛋白免疫反应产物的灰度值不同，均以脊髓胸段最小，腰膨大最大；脊髓后角内免疫反应产物的灰度值均低于前角。对照组脊髓各段后角内突触小泡蛋白免疫反应产物的灰度值均明显高于喂药组。结论：龟龄集可延缓神经元的衰老，防止脊髓灰质内突触小泡蛋白的丢失，增强动物肢体感觉的灵敏性和活动的灵活性。     

P物质在自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质的分布

为探讨自发性高血压的发病机理，本实验用免疫细胞化学方法结合体视学分析，研究了自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质内Ｐ物质免疫反应阳性纤维和终末的分布。结果如下：（１）Ｐ物质免疫反应产物在自发性高血压大鼠和京都种正常血压大鼠脊髓中间带灰质分布的模式未见明显差异；（２）在脊髓Ｔ２、Ｔ５、Ｔ８、Ｔ１１、Ｌ１ 各节段的中间外侧核本部区的平均光密度值，自发性高血压大鼠高于京都种正常血压大鼠（Ｐ＜ ０．０５）。这一结果提示，在自发性高血压大鼠，脊髓胸腰部中间外侧核本部区Ｐ物质免疫反应阳性产物表达增加。而该区Ｐ物质表达的增加意味着该区交感节前神经元机能状态的某种改变，这种改变可能与自发性高血压大鼠血压的升高和维持有关。     

大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化

目的:研究正常大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化规律。方法:应用免疫荧光染色技术,检测Nestin、NeuN、MAP2、GFAP、CNPase阳性细胞在大鼠胚胎期及生后脊髓内的分布及变化情况。结果:胚胎发育早期,脊髓中央管、灰质、白质均可检测到Nestin阳性细胞,生后Nestin阳性细胞数量逐渐减少。大鼠脊髓神经元的发生呈现明显的背腹模式,孕14d(E14)脊髓内可检测到NeuN阳性细胞,E16 NeuN阳性细胞逐渐增多,腹侧NeuN阳性细胞核体积较大,分布较稀疏,背侧神经元细胞核体积较小,分布较密集。MAP2染色结果与NeuN一致。胶质细胞的分化、成熟在生后初期进行,P4可检测到GFAP及CNPase阳性细胞,主要分布于脊髓白质内,P30在脊髓灰质内可检测到GFAP阳性细胞,细胞分支较多且短。结论:正常大鼠脊髓发育中神经干细胞的分化呈现一定规律性,向神经元方向化较早且呈明显的背腹模式,胶质细胞的分化较晚。     

大鼠脊髓灰质向孤束核的投射——HRP法研究

本实验用微电泳法将10％HRP导入20例实验动物的一侧孤束核,标记细胞出现在颈、胸、腰、骶(C_1-S_3)各节段的脊髓灰质内,多见于注射部位的同侧。标记细胞出现的数量以腰髓最多,骶髓最少,其在脊髓灰质各板层的分布也不相同,各板层均可见到,但以Ⅱ—Ⅵ板层分布最多。标记细胞以中、小型为主,可见长梭形、圆形、三角形及星形细胞。本文还就体壁与内脏两种感觉终末在孤束核内的会聚及其意义进行了讨论。     

大鼠脊髓边缘细胞初级传入特点的研究

将６只Ｗｉｓｔｅｒ大鼠脊髓Ｌ（１～３）段双侧后根切断，并将ＨＲＰ注入小脑内。术后分别在２、３、４天灌杀，取出Ｌ（１～３）脊髓节段，对ＨＲＰ标记的脊髓边缘细胞及其与溃变末梢的突触联系进行了电镜观察。结果表明，在脊髓边缘细胞的胞体或近侧树突表面发现有少量的溃变终末。根据溃变终末内小泡的形状，它们属于Ｓ型和Ｆ型即球形和扁平形小泡。根据溃变终末的外形又可分为圆型和细长型。按不同术后存活期，这些终末显示的溃变特点有所不同。术后２天溃变终末主要呈电子密度增高象；术后３天溃变终末中的线粒体肿胀、溶解以及部分突触小泡溶解；术后４天的溃变终末内则表现突触小泡和线粒体大部溶解消失。各类溃变末梢周围均可见到有胶质细胞突起包绕或充填。本研究进一步证明，作为脊小脑前束起始细胞的脊髓边缘细胞所接受的外周传入从性质和特点上均与脊小脑后束的起始细胞有所不同。这些结构的不同说明脊髓边缘细胞在向小脑输送信息中有其特殊功能。     

大鼠胸腰段脊髓向下橄榄核的定位投射

目的　探讨大鼠胸腰段脊髓向下橄榄核的定位投射。方法　将菜豆白细胞凝集素 (PHA L)分别注入T5到L5的不同脊髓节段 ,顺行追踪脊髓到下橄榄核的投射。实验分为三个组 ,分别是T5 7、T8 10 、L2 5组。结果　T5 7组可以在MAO尾侧半近中间的位置观察到标记末梢 ,T8 10 组的标记末梢位于其稍外侧 ,L2 5组的标记末梢位于MAO尾侧半的末端 ;在DAO ,T5 7组的标记末梢出现在DAO的中间位置 ,T8 10 组的标记末梢位于其稍外侧 ,L2 5组的标记末梢出现在DAO的末端。结论　胸腰段脊髓到下橄榄核的投射存在着明确的定位投射关系 ,T5 L5段脊髓到MAO尾侧半和DAO的投射 ,表现出从胸段到腰段 ,标记末梢依次由内侧向外侧排列的规律。结合先前所做的胸腰段脊髓向小脑中央核的投射的研究 ,讨论了胸腰段脊髓、下橄榄核和小脑中央核之间的联系     

BrdU标记检测大鼠垂体前叶细胞的增殖功能

目的:为了观察大鼠垂体前叶细胞中各类激素细胞的增殖水平,建立一种快速、准确、灵敏、无同位素污染的检测垂体前叶细胞增殖的方法。方法:应用原代培养大鼠垂体前叶细胞,加入5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)标记细胞增殖,用抗BrdU抗体进行免疫细胞化学染色,观察大鼠垂体前叶细胞中各类激素细胞增殖能力。结果:大鼠垂体前叶细胞可见Br-dU阳性标记内分泌细胞,其细胞核内可见棕褐色阳性颗粒,核浆比例增大,呈颗粒状,提示处于细胞增殖期。免疫细胞双重染色表明,体外培养垂体前叶的生长激素细胞、催乳素细胞、促肾上腺皮质激素细胞均具有一定的增殖能力。结论:BrdU标记是一种有效的标记垂体前叶细胞增殖的方法,为探究大鼠垂体前叶细胞中各类激素细胞增殖能力提供了理论基础。     

CNTF基因在大鼠脊髓中的表达及生后发育的变化

目的 观察CNTF基因在大鼠脊髓中的表达以及生后发育过程中的变化。方法 以地高辛标记（dig）－CNTF cDNA为探针,采用原位杂交法,观察CNTF mRNA在大鼠脊髓中的分布;采用TR－PCR法,半定量分析大鼠生后发育过程中,脊髓CNTF mRNA表达水平的变化。结果 CNTF mRNA原位杂交阳性信号存在于正常大鼠脊髓白质的腹索、外侧索周边的部分胶质细胞中;灰质中未能发现阳性杂交信号。RT－PCR结果显示,大鼠生后1d脊髓细胞中即可见CNTF mRNA表达,但表达量较低;出生15d表达量迅速增加;30d时最高;60d时的表达量有下降的趋势。结论 大鼠脊髓白质的部分胶质细胞可表达CNTF mRNA;大鼠出生后1d CNTF mRNA即有表达,之后随脊髓的发育而呈动态变化的趋势。     

妊14脊髓植入成鼠损伤脊髓前后的发育分化

在光电镜下观察了Ｅ１４胎鼠脊髓及其被植入成鼠损伤脊髓后７，１５，３０，６０，１２０和２４０天时的结构变化。结果表明：Ｅ１４胎鼠脊髓主要由神经上皮细胞和神经母细胞构成。前者的超微结构特征是胞浆内富含游离核糖体，后者是在游离核糖体的基础上出Ｇｏｌｇｉ丛，仙质网等细胞器。     

脑红蛋白在成年大鼠脊髓中的分布

目的观察脑红蛋白（NGB）在成年大鼠脊髓中的分布。方法制备成年大鼠脊髓的冰冻切片,用免疫组织化学染色方法研究NGB蛋白在成年大鼠脊髓内的分布及细胞定位。结果在脊髓的颈、胸、腰段,NGB免疫反应阳性细胞主要分布于脊髓灰质中,其范围包括灰质脊髓前角、中间带和后角。NGB免疫反应阳性物质广泛存在于脊髓灰质神经元的胞浆中。结论NGB蛋白在大鼠脊髓灰质有广泛的表达,提示NGB在脊髓功能活动中可能起重要作用。     

体外诱导的皮肤源性神经干细胞在大鼠受损伤脊髓内的存活、分化和迁移

目的探讨经体外诱导的皮肤源性神经干细胞能否在大鼠脊髓半横断损伤处存活、迁移和分化.方法应用转染绿色荧光蛋白基因新生大鼠的皮肤在体外经分离细胞、培养、诱导增殖以及用免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞等过程,将诱导产生的皮肤源性神经干细胞移植入大鼠脊髓半横断损伤处,30 d和60 d后用免疫细胞化学染色法观察移植细胞的存活、迁移和分化.结果皮肤分离细胞在培养10 d时,呈悬浮生长的细胞已增殖成若干细胞球,并呈nestin免疫细胞化学阳性染色,表明是神经干细胞球.在体内可观察到脊髓损伤处有许多带有绿色荧光的移植皮肤源性神经干细胞,有些还迁移到较远的宿主脊髓组织内.存活的移植细胞有些呈现nestin阳性、MAP2阳性及GFAP阳性.结论经体外诱导的皮肤源性神经干细胞能够在受损伤的大鼠脊髓内存活、迁移并分化为神经元样细胞和星形胶质样细胞.     

肿瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的表达与分布

目的　观察肿瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的表达和分布。　方法　免疫组织化学ABC法显示大鼠脊髓和背根神经节中PTEN阳性免疫反应产物。　结果　背根节神经元及穿越背根节神经纤维轴突有阳性免疫反应产物存在 ;PTEN阳性免疫反应产物在脊髓主要位于灰质神经元。　结论　PTEN在成年大鼠腰段脊髓和背根节神经元及神经纤维轴突中表达。     

信号转导子与转录激活子3和细胞因子信号转导抑制因子-3蛋白在成年大鼠脊髓内的表达与定位

目的分析JAK-STAT信号转导途径重要成员STAT3蛋白和该途径抑制蛋白SOCS-3在大鼠脊髓内的表达和细胞内定位分布。方法免疫细胞化学技术和形态计量学方法。结果STAT3免疫阳性产物主要分布于脊髓前角运动神经元的胞浆内;SOCS-3免疫阳性产物广泛分布于脊髓前角及后角神经元内、部分胶质细胞及神经纤维内。在前角运动神经元内,SOCS-3免疫阳性产物主要分布于核内,有时也可分布于胞浆中。结论STAT3和SOCS-3广泛表达于正常大鼠脊髓内,其中SOCS-3具有核蛋白或胞浆蛋白两种存在形式。     

缺损运动神经元的大鼠脊髓内胚胎脊髓移植物的存活与生长

ＳＤ大鼠于出生２４ｈ内行左侧坐骨神经钳压术，造成左侧腰段脊髓前角运动神经元缺损。５￣１２周后，作为脊髓移植的受体鼠。供体为胚龄１３￣１４ｄ的ＳＤ大鼠胚胎，取其脊髓腹侧组织块作为移植物，植入受体鼠左侧腰段脊髓的背外侧部。将受体鼠右侧带神经的Ｍｕ长伸肌移放到脊椎旁，神经的断端插入胚胎移植物处。术后动物存活６￣８周，行组织学（包括电镜）、ＡＣｈＥ组织化学、ＣｈＡＴ免疫组织化学和ＨＲＰ逆行追踪等观察。结果     

胰岛素对大鼠移植的胚胎脊髓组织存活与生长的影响

用ＨＲＰ逆行追踪技术和体视学方法，探讨了胰岛素对移植在缺损运动神经元的脊髓内的胚胎神经元存活与生长有无促进作用。将１３￣１４ｄ胚龄大鼠脊髓腹侧组织块，移植到受体大鼠左侧腰段缺损运动神经元的脊髓背外侧部。同时将受体鼠右侧带神经的长伸肌移在左侧腰段脊椎旁，使其神经断端插入脊髓移植物的同一位置内。胰岛素组的胚胎移植物及覆盖其表面的硝酸纤维素膜，均经胰岛素生理盐溶注 过，对照组仅用单纯生理盐溶液浸泡。术后     

蛋白激酶Cγ在成年大鼠延髓和脊髓白质中的分布

目的 观察蛋白激酶Cγ亚型(PKCγ)在成年大鼠延髓和脊髓白质内的分布.方法 免疫组织化学ABC法显示PKCγ免疫阳性物质在延髓和脊髓颈、胸、腰、骶段白质内的表达和分布.结果 PKCγ免疫阳性物质分布于锥体、锥体交叉及脊髓颈、胸、腰、骶段后索腹侧中;延髓和脊髓背角神经元中也有PKCγ免疫阳性物质存在.结论 PKCγ免疫阳性反应产物广泛分布于成年大鼠延髓和脊髓白质内的皮质脊髓束中.PKCγ免疫阳性反应产物在延髓锥体和脊髓后索内的定位与大鼠皮质脊髓束的位置和走行一致,提示其在运动神经传导通路中可能起着重要作用.     

孤儿受体酪氨酸激酶在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的分布

目的　观察孤儿受体酪氨酸激酶 (Ret)在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的分布 ,探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对大鼠脊髓和背根节神经元的作用。　方法　采用Ret抗体免疫组织化学ABC法。　结果　Ret免疫反应存在于成年大鼠腰段脊髓神经元和背根节神经元中。　结论　Ret在大鼠腰段脊髓和背根节神经元中有一定的分布