壮族大学生中HIV-1感染相关基因CCR5多态性的初步研究

目的:了解CCR5Δ32基因突变在广西壮族人群基因组中的分布,初步估计壮族人群对人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染的遗传易感性.方法:分别抽取50名壮族大学生外周血6 ml,从血中提取DNA样品,对其基因组DNA中CCR5基因进行PCR扩增.结果:在50名壮族大学生外周血中未检测到CCR5Δ32基因突变.结论:50名壮族大学生对HIV-1可能较易感.     

广西罗城仫佬族人群HIV-1感染相关基因CCR5多态性的初步研究

目的:了解广西仫佬人群中HIV辅助受体CCR5△32和CCR5-894C缺失等位基因突变频率和多态性的特点,为评估该民族人群对HIV的遗传易感性和艾滋病的防治提供理论依据。方法:以197例仫佬族为研究对象,应用PCR和DNA测序等方法检测CCR5△32和CCR5-894C缺失突变体。结果:未发现CCR5△32和CCR5-894C缺失突变体。结论:由于未发现CCR5△32和CCR5-894C缺失突变体,推测仫佬族人群对HIV-1病毒感染可能具有较大的遗传易感性。     

CCR5Δ32等位基因多态性与贵州特殊人群HBV感染的相关性

目的：探讨CCR5Δ32等位基因在贵州世居少数民族（彝、瑶）与汉族人群的分布,并分析CCR5位点突变与HBV的关系。方法：采用PCR技术分别扩增贵州92份黔西彝族、101份威宁彝族、138份荔波瑶族以及165份毕节汉族CCR5编码区片段,通过琼脂糖凝胶电泳对CCR5Δ32多态性进行分析,最后抽取样本并进行DNA测序验证。结果：经过PCR特异性扩增,琼脂糖凝胶电泳后,496份样本均未发现CCR5Δ32突变型和杂合子。DNA测序验证所有样本CCR5基因未发生32碱基缺失的突变。结论：CCR5Δ32的分布有较明显的地域和种族差异,该位点与HBV感染的相关性有待于进一步深入研究。     

CCR5Δ32基因突变与银屑病的相关性研究

目的 探讨CCR5Δ32突变与广东籍寻常型银屑病的相关性。方法 通过PCR方法分别扩增241份广东籍汉族银屑病患者及150份正常对照者CCR5编码区片段,通过2.5%琼脂糖凝胶电泳观察CCR5Δ32的多态性,最后抽取样本通过DNA测序进行验证。结果 PCR特异性扩增未发现患者和正常对照有纯合突变或杂合突变。测序亦未发现CCR5Δ32突变。结论 未发现CCR5Δ32突变与广东籍汉族寻常型银屑病的相关性。二者的关系还需进一步扩大样本量进行研究。     

中国人群中HIV-1辅助受体CCR5基因新突变位点及CCR5-894C缺失基因多态性分析

目的：研究中国人群HIV-1辅助受体CCR5基因编码区新的单核苷酸多态性（SNP）位点;分析CCR5-894C缺失等位基因在中国普通人群和HIV-1高危人群中的分布特点和相关意义。方法：针对CCR5编码区用2对引物进行PCR扩增,设计测序引物对45例汉族人样本进行PCR产物直接测序,用DNAstar分析测序结果,寻找SNP位点。采用错配PCR-RFLP法对中国汉族、蒙族、藏族普通人群,性传播疾病和静脉吸毒高危人群及HIV-1携带者,共627份样品进行了CCR5-894C缺失等位基因分型。结果：在45例汉族人CCR5基因编码区共发现6个SNP位点,4个（184A→G、503G→T、668G→A、99G→T）引起氨基酸改变,两个无义突变;此外还发现1个单碱基缺失（894C缺失）,引起移码突变和提前终止。其中184A→G、503G→T、999G→T三个中国汉族人所特有的SNP位点为首次发现,它们的等位基因频率分别为1.11％,21.1%和10.0％;其中503G→T分布明显不符合Hardy-Weinberg平衡。汉、藏、蒙等民族的普通人群CCR5-894C缺失等位基因频率为1.11％,0.53%和0.在汉族HIV-1性传播、静脉吸毒传播的高危人群中,HIV-1阳性个体和阴性个体间CCR5-89C缺失等位基因频率差异无显著意义,与汉族普通人群比较差异也无显著意义。结论：中国人CCR5基因的SNP位点有自己的特点,共发现4个引起氨基酸改变的SNP位点（其中3个为首次发现）,1个引起移码突变的单碱基缺失。汉族人群中存在CCR5-894C缺失突变,但突变频率很低。这些SNP和缺失突变对于HIV-1感染和艾滋病病程的影响值得进一步研究。     

老年高血压患者CCR基因多态性研究

目的 探索中国老年汉族人群中CCR5和CCR2基因多态性与原发性高血压的相关性.方法 入选的高血压患者(n=187)和非高血压对照者(n=98)均为中国老年汉族人群,提取外周血基因组DNA.采用PCR法检测CCR5Δ32突变,PCR-测序法检测CCR2 64I基因型.结果 所有被研究者中均未发现CCR5Δ32突变基因型.高血压组中CCR2 64I杂合子59例(31.55%),纯合子16例(8.56%),CCR2 64I等位基因频率为24.3%;非高血压对照组中CCR2 64I杂合子34例(34.69%),纯合子4例(4.08%),CCR2 64I等位基因频率为21.4%.等位基因多态性在该群体中呈Hardy Weinberg平衡分布,两组等位基因频率及基因型比较有差别,但均无统计学意义(P>0.05).结论 该研究在中国老年汉族人群中未检出CCR5Δ32突变基因型,且未证实CCR2 64I基因位点与高血压相关.     

HIV-1原发感染者病毒辅助受体特征分析

目的 观察HIV-1感染者在原发感染早期的不同阶段,体内病毒对CCR5和CXCR4辅助受体利用特点及演变情况.方法 以高危人群前瞻性队列研究的方式随访发现12例HIV-1原发感染者,分别收集感染最早期和病毒载量稳定期(病毒调定点)的血浆,提取病毒RNA,反转录(RT)-PCR,套式PCR扩增env gp160基因,连接到TA克隆载体,测序分析,以Geno2pheno、PSSMx4r5PSSMsinsi、SVM、Charge Rule 5种在线生物信息学工具预测病毒株CCB5和CXCR4辅助受体利用情况.结果 12例原发感染者感染早期病毒利用CCR5嗜性者有11例,利用CXCR4辅助受体1例;1例在随访10个月时检出辅助受体的转换;不同基因型预测方法的结果一致性88.3%.结论 HIV-1原发感染者早期病毒主要利用CCR5受体,也有利用CXCR4受体,原发感染者在感染1年内可能发生辅助受体的转换;以基因型预测CCB3或CXCR4辅助受体宜选用多种不同的分析方法.     

HIV-1原发感染者病毒辅助受体特征分析

目的 观察HIV-1感染者在原发感染早期的不同阶段,体内病毒对CCR5和CXCR4辅助受体利用特点及演变情况.方法 以高危人群前瞻性队列研究的方式随访发现12例HIV-1原发感染者,分别收集感染最早期和病毒载量稳定期(病毒调定点)的血浆,提取病毒RNA,反转录(RT)-PCR,套式PCR扩增env gp160基因,连接到TA克隆载体,测序分析,以Geno2pheno、PSSMx4r5PSSMsinsi、SVM、Charge Rule 5种在线生物信息学工具预测病毒株CCB5和CXCR4辅助受体利用情况.结果 12例原发感染者感染早期病毒利用CCR5嗜性者有11例,利用CXCR4辅助受体1例;1例在随访10个月时检出辅助受体的转换;不同基因型预测方法的结果一致性88.3%.结论 HIV-1原发感染者早期病毒主要利用CCR5受体,也有利用CXCR4受体,原发感染者在感染1年内可能发生辅助受体的转换;以基因型预测CCB3或CXCR4辅助受体宜选用多种不同的分析方法.     

慢性乙型肝炎和性传播疾病人群中辅助受体基因多态性的检测及分布特点

本课题研究乙型肝炎、HIV-1感染者和性病患者中CCR5，CCR2和SDF1等位基因的分布及其特点。我们通过收集乙型肝炎患者(268例)、艾滋病感染者(130例)和性病(259例)的血液标本共657份，应用QIAGEN全血细胞基因组提取试剂盒，分离纯化人血细胞基因组DNA样品。应用PCR或PCR～RFLP分析CCR5，CCR2-64I和SDF1-3’A等位基因突变频率和分布特点。研究结果表明：在乙型肝炎、性病和HIV-1感染者人群中，CCR5A32的突变频率分别为0．19％、0％和0％。在259例个体性病患者中只有1例男性发生了杂合子突变，而在乙型肝炎和HIV-1感染者人群中没有检测出CCR5△32突变基因，可见，CCR5△32的突变率较低。反之，CCR2-64I的突变频率较高，与前述3种病人对应的突变频率分别为19．3％、19．6％和20．7％。进而分析发现SDF1-3’A等位基因在乙肝、性病和HIV-1感染人群中的突变率分别为27．8％，27．4％和26．9％。应用X^2检测与统计学分析显示在乙肝，性病和HIV-1感染人群中CCR2-64I和SDF1-3’A等位基因突变分布之间无连锁关系。小结：突变频率很低的CCR5△32基因型在上述3种类型传染病的发病过程中可能不起主要作用；而突变频率较高的CCR2-64I和SDF1-3’A基因型的功能及其在上述3种传染病进程中的意义有待进一步研究。     

老年高血压患者CCR基因多态性研究

目的探索中国老年汉族人群中CCR5和CCR2基因多态性与原发性高血压的相关性。方法入选的高血压患者(n=187)和非高血压对照者(n=98)均为中国老年汉族人群,提取外周血基因组DNA。采用PCR法检测CCR5Δ32突变,PCR-测序法检测CCR2-64I基因型。结果所有被研究者中均未发现CCR5Δ32突变基因型。高血压组中CCR2-64I杂合子59例(31.55%),纯合子16例(8.56%),CCR2-64I等位基因频率为24.3%;非高血压对照组中CCR2-64I杂合子34例(34.69%),纯合子4例(4.08%),CCR2-64I等位基因频率为21.4%。等位基因多态性在该群体中呈Hardy-Weinberg平衡分布,两组等位基因频率及基因型比较有差别,但均无统计学意义(P>0.05)。结论该研究在中国老年汉族人群中未检出CCR5Δ32突变基因型,且未证实CCR2-64I基因位点与高血压相关。     

ZFNs和TALEs在艾滋病基因治疗中的价值

随着对HIV病毒研究的深入以及传统治疗手段的局限性,通过基因治疗达到控制甚至治愈艾滋病受到重视。CCR5（趋化因子受体5）作为HIV-1进入人类白细胞的主要受体蛋白之一,其突变型CCR5Δ32携带者表现出一定抗HIV-1感染能力。本文综述两类基因工程酶ZFNs和TALEs在艾滋病基因治疗中的应用价值。     

CCR5与艾滋病的防治

人类获得性免疫缺乏症——艾滋病主要由于HIV-1病毒感染，在体内快速繁殖并导致宿主白细胞的大量破坏所致。在HIV进入白细胞过程中，结构正常的CCR5蛋白质起到促进HIV入胞的通道蛋白的功能。临床观察表明，CCR5的不同基因型个体对HIV的易感性有明显差异，在CCR5的几种基因变异型中，CCR5-△32的杂合子HIV携带者从病毒携带状态转变为艾滋病患者的时间较正常CCR5野生型人群长，     

针对人免疫缺陷病毒1型辅助受体CCR5 RNA干扰表达载体的构建

目的:抑制细胞表面人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的辅助受体CCR5表达, 阻止HIV-1进入靶细胞.方法:设计CCR5靶向的发夹状siRNA,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹pRNAT-U6.2-siCCR5后转染U937细胞,采用RT-PCR和流式细胞术分别检测CCR5基因mRNA和蛋白表达的变化.结果:重组子pRNAT-U6.2-siCCR5,经过测序鉴定与设计一致.RT-PCR检测显示, 转染pRNAT-U6.2-siCCR5细胞的CCR5基因表达水平显著降低于未转染对照组和转染空载体细胞(P<0.05).未转染对照组U937细胞表面CCR5的表达率为(83.10±6.52)%, 转染空载体组为(81.44±4.97)%,转染pRNAT-U6.2-siCCR5组为(1.94±0.06)%,3组间差异有统计学意义(P<0.05).结论:成功构建出沉默细胞CCR5基因表达的siRNA载体.     

人CCR5Delta32基因的克隆及其重组慢病毒载体的构建

目的:克隆人CCR5Delta32基因并构建含目的基因的重组慢病毒载体pLenti-CCR5Delta32,用于获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的基因治疗研究. 方法:从CCR5Delta32突变个体外周血单个核细胞(PBMCs)内提取人基因组DNA,利用PCR技术扩增CCR5Delta32全长基因,经EcoRI单酶切后与pUCm-T载体连接,随后转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序. 再将鉴定正确的CCR5Delta32基因亚克隆至慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO并进行酶切鉴定及DNA序列分析. 结果:经PCR扩增获得约650 bp的DNA片段,测序结果与GenBank上的序列完全一致,克隆的目的基因已经正确插入到慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO中. 结论:成功克隆了人CCR5Delta32基因并构建了含目的基因的重组慢病毒载体pLenti-CCR5Delta32,为进一步AIDS基因治疗研究奠定基础.     

中国汉族人群中HIV抗性的CCR5-△32、CCR2-64和SDF1-3′A等位基因型和多态性研究(英文)

目的　为了评估中国汉族人群对HIV感染的遗传易感性 ,我们检测和分析了相应人群的CCR5 △ 32、CCR2 6 4I和SDF1 3’A等位基因的突变频率和多态性。方法　被研究的人群包括 12 5 4例中国普通汉族人 (918例男性、336例女性 ) ,年龄范围在 15 - 80岁之间 ,他们中没有HIV感染者。应用PCR和PCR/RFLP等分子生物学方法检测了CCR5 △ 32、CCR2 6 4I和SDF1 3’A等位基因型 ,用直接DNA测序法进一步证实其准确性。结果　我们发现在汉族人的CCR5基因编码中的确存在△ 32碱基缺失突变 (频率为 0 0 0 119,n =12 5 4) ,并可能经过孟德尔方式遗传 ;而CCR2 6 4I和SDF1 3’A等位基因的突变频率分别是 0 2 0 0 2 3(n =12 5 1)和 0 2 873(n =893)。可见汉族人群的CCR2 6 4I和SDF1 3’A突变频率高于美国白人 ,并且在基因多态性组成上与美国白人不同。统计学分析表明中国汉族人群中上述三个等位基因型的分布符合Hardy Weinberg平衡。结论　上述结果提示中国汉族人群中CCR5 △ 32遗传突变可能不是抗HIV感染的主要因素 ,因此汉族人群对性传播的R 5病毒株可能有较大的遗传易感性。中国汉族人群具有较高的CCR2 6 4I和SDF1 3’A等位基因突变频率及其在抗HIV感染中的意义尚待阐明     

中国人群CCR5△32、CCR2-64I、SDF1-3’A基因多态性与HIV-1感染相关性的Meta分析

目的探讨中国人群CCR5△32、CCR2-64I、SDF1-3’A三种基因的多态性与HIV-1感染之间的关系。方法检索国内外有关中国人群CCR5△32、CCR2-64I、SDF1-3’A基因多态性与HIV感染相关性的病例对照研究文献并进行Meta分析。结果符合CCR5△32的研究共14个,累计HIV感染者病例1607例,正常对照组1632例。杂合子(wt/mt)、纯合子(mt/mt)和杂合子加纯合子(wt/mt+mt/mt)与野生基因型(wt/wt)相比合并的OR值(95%CI)分别为1.156(0.808,1.654)、0.997(0.198,5.022)、1.149(0.808,1.634)。符合CCR2-64I的研究共12个,累计HIV感染者病例1415例,正常对照组1239例。杂合子(wt/mt)、纯合子(mt/mt)和杂合子加纯合子(wt/mt+mt/mt)与野生基因型(wt/wt)相比合并的OR值(95%CI)分别为1.005(0.844,1.197)、1.191(0.808,1.754)、1.028(0.870,1.214)。符合SDFl-3’A的研究10个,累计HIV感染者病例1179例,正常对照组1003例。杂合子(wt/mt)、纯合子(mt/wt)和纯合子加杂合子(wt/mt+mt/mt)与野生基因型(wt/wt)相比合并的OR值(95%CI)分别为1.010(0.830,1.228)、1.188(0.860,1.643)、1.038(0.861,1.250)。结论中国人群CCR5△32、CCR2-64I、SDFl-3’A三种抗性基因与HIV-1感染之间无相关性,显示CCR5△32、CCR2-641、SDFl-3’A三种基因对中国人群HIV-1感染可能不具有保护作用,提示中国人群可能为易感人群。     

CCR5:抗HIV-1药物的新靶点

CCR5为细胞膜蛋白,属于G蛋白偶联受体家族的成员,是HIV-1入侵机体细胞的主要辅助受体之一。在过去的几年中,对CCR5的生物学特性以及在HIV感染过程中所起作用的研究取得了明显的进展,以CCR5为靶点的HIV受体拮抗剂倍受关注,主要有以下4种：(1)趋化因子衍生物;(2)低分子量非肽类;(3)单克隆抗体;(4)肽类化合物。本文综述了近年来CCR5和以其为靶点的HIV受体拮抗剂的研究进展。     

HIV-1感染者及其密切接触者HIV-1抗性基因的研究

目的:研究CCR2-64I、SDF1-3'A2种HIV-1抗性基因在山东省HIV-1感染者及其密切接触者中的分布,以及它们对艾滋病病程进展和人群易感性的影响。方法:利用体外扩增PCR和限制性片段长度多态性分析RFLP检测目标人群中的HIV-1抗性基因,用统计学方法分析基因分布频率与病程进展和易感性的关系。结果:CCR2-64I、SDF1-3'A的突变频率分别为23.64%、23.94%,含SDF1-3'A1的患者平均潜伏期为(8.33±1.16)年,含CCR2-64I患者平均潜伏期为(8.94±1.17)年,野生纯合子患者为(7.42±1.33)年。结论:本研究首次阐明了CCR2-64I、SDF1-3'A在山东省HIV-1感染者及其密切接触者中分布的特点,并发现2种抗性基因的存在均可延缓感染者的病程。     

HIV-1感染者中枢神经系统的病毒学特征研究

目的 探讨HIV-1感染者中枢神经系统(CNS)的病毒学特征.方法 通过克隆测序分析病毒亚型,观察CNS中HIV-1变异性和离散率;依据V3环11/25法则并结合10例有偿献血HIV-1感染者尸检脑组织标本免疫荧光试验分析中枢神经HIV-1复合受体的使用.结果 有偿献血人群感染的HIV-1显示B和B’亚型特征,脑脊液(CSF)和外周血序列有嵌合现象;CSF C2-V5区序列变异性明显低于外周血,两者的离散率差异无统计学意义;依据11/25法则分析V3环序列可见中枢神经HIV-1大多数使用CCR5复合受体.结论 CNS HIV-1病毒变异性明显小于外周血;CNS HIV-1具有CCR5嗜性.