WWOX基因与肿瘤的相关性研究进展

WWOX,即包含WW域的氧化还原酶基因,是近年来发现的新的抗肿瘤基因,目前,在清楚了解其基因序列和蛋白质结构的基础上,又发现其具有促进细胞凋亡、抑制肿瘤生长等生物学作用.但对其具体的抑癌机制仍不甚明确,而且对其是否可被认定为抑癌基因也存在争议.随着对WWOX基因功能研究的不断深入,WWOX与肿瘤的相关性会日渐明了,其在...     

抑癌基因WWOX甲基化与肿瘤的研究进展

含WW域的氧化还原酶(WW domain-containing oxidaseredurase,WWOX)是位于人类16号染色体q23.3-24.1脆性位点区域的抑癌基因,WWOX基因参与调控肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移等生物学行为.近年研究发现WWOX基因在乳腺癌、肝癌、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌、胃癌、膀胱癌等多种肿瘤中低表达或不表达,可能与DNA甲基化共价修饰抑制其转录有关,DNA甲基转移酶抑制剂去甲基化治疗能内源性地恢复WWOX表达,抑制肿瘤的发生发展.肿瘤的发生由遗传学和表观遗传学共同调控,抑癌基因甲基化是肿瘤早期发生过程中的频发事件,有望成为肿瘤早期诊断、预后评估的潜在标志物和抗肿瘤治疗靶点.本文就WWOX作为抑癌基因,着重阐述其甲基化与肿瘤的研究进展.     

WWOX基因、p53基因与食管癌的研究现状

许多研究表明WWOX(WW domain containing ox-idoreductase)基因,与p53基因的点突变、缺失与下调及蛋白表达异常在多种肿瘤,如乳腺癌、多发骨髓瘤、前列腺癌、卵巢癌、肺癌及食管癌中频发出现,对这些肿瘤的发生和进展过程中起着关键性的作用.因此探讨WWOX、p53基因的结构及功能对阐明肿瘤的发病机制具有重要的意义.本文就WWOX基因、p53基因与食管癌的研究现状做一综述.     

WWOX基因与恶性肿瘤的研究进展

含有氧化还原酶的WW结构域(WW domain containing oxidoreductase,WWOX)基因是由Bednarek等[1]在染色体脆性位点FRA16D(16q23.3-24.1)区域克隆出的一个新的基因.近年研究发现WWOX基因与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关,被认为是一个新的候选抑癌基因.本文就WWOX基因与恶性肿瘤的研究进展作一综述.     

抑癌基因WWOX在口腔肿瘤的研究进展

WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因是近年来研究较多的抑癌基因,被认为与多种肿瘤相关,可通过多种途径诱导肿瘤细胞的凋亡而发挥抑制肿瘤的作用。目前该基因在口腔肿瘤中的功能机制仍未完全明了,有待于进一步研究,对WWOX基因的深入研究将会为口腔肿瘤的预防、诊断、治疗及预后等方面提供新的思路。     

抑癌基因WWOX在消化道肿瘤中的研究进展

WWOX基因定位于染色体16q23.3～24.1,位于染色体普通脆性位点FDR16D,包含9个外显子,编码414个氨基酸,WWOX可能与p53、Bmi1、survivin、p73、Ap2α/γ、c-Jun、ErbB4、Runx2等相互作用而发挥凋亡作用。在多种消化道肿瘤中均发现WWOX基因杂合子缺失,WWOX mRNA表达低下或缺失,WWOX蛋白表达水平低。     

膀胱移行细胞癌组织与尿沉渣细胞WWOX基因启动子甲基化相关性研究

目的探讨膀胱移行细胞癌组织与其对应尿沉渣细胞中氧化还原酶的WW结构域(WWOX)基因启动子区CpG岛的甲基化状态以及二者甲基化的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测54例膀胱癌患者手术切除的癌组织及尿沉渣细胞中WWOX基因启动子区甲基化状态。结果 54例膀胱癌患者癌组织中WWOX基因启动子区的甲基化率达35.2%,对应的尿沉渣细胞中甲基化率为29.6%,分别与各自对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且膀胱癌组织WWOX基因启动子区的甲基化和对应的尿沉渣细胞的甲基化存在明显的相关性(r=0.881,P<0.05)。不论是在癌组织还是尿沉渣细胞中,WWOX基因启动子区甲基化率随着癌组织分级的增加逐渐升高(P<0.05)。结论 WWOX基因启动子区的异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,尿沉渣细胞中WWOX基因启动子区的异常甲基化可能是膀胱癌早期诊断的分子标志物之一。     

The expression of WWOX and p73 in acute myeloid leukemia

目的 研究WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)和p73基因在急性髓细胞白血病(AML)中异常表达的临床意义及其机制.方法 收集AML患者骨髓58例,非白血病患者骨髓31例作为对照组,采用RT-PCR检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR检测WWOX基因启动子区和p73基因第一外显子区的甲基化情况.结果 58例AML患者中,28例WWOX基因mRNA阳性表达,30例p73基因mRNA阳性表达;23例WWOX基因启动子区存在甲基化,21例p73基因第一外显子区存在甲基化.对照组中WWOX与p73基因mRNA均有表达29例,均未见甲基化现象.WWOX和p73基因在AML中mRNA的表达以及甲基化状态与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致其基因的沉默,使其mRNA表达减少或缺失,在AML的发病机制中起一定作用,WWOX与p73基因甲基化的检测对AML的诊断和疗效有一定意义.     

人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞过表达WWOX基因的基因表达谱分析及WWOX基因的抑癌作用机制

目的：分析人口腔鳞状细胞癌（OSCC） Tca8113细胞过表达包含WW域的氧化还原酶（WWOX）基因的基因表达谱变化,探讨WWOX基因的抑癌作用机制。方法：Tca8113细胞分为WWOX基因过表达组和对照组。采用携带WWOX基因的pGV287-LV-WWOX慢病毒颗粒和携带空载体的pGV287-LV慢病毒颗粒分别感染2组Tca8113细胞。采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）和Western blotting法检测2组Tca8113细胞中WWOXmRNA和蛋白表达情况。采用基因芯片技术筛选差异表达基因并进行生物学分析。采用定量PCR法检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的差异表达基因的mRNA相对表达水平。结果：慢病毒感染后,WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOXmRNA相对表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOX蛋白表达水平升高。基因芯片筛选出差异倍数（FC）1.5倍以上的基因共347个,其中表达上调171个,表达下调176个。生物信息学分析显示这些基因分布于癌症、p53信号、MAPK信号和白细胞介素2（IL-2）等多条信号传导通路。WWOX基因过表达组MAPK信号通路中的丝裂原活化蛋白激酶2（MAP2K）、孤核受体4A1（NR4A1）、双特异性磷酸酶5（DUSP5）和双特异性磷酸酶6（DUSP6） mRNA相对表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,而成纤维生长因子受体2（FGFR2） mRNA相对表达水平较对照组明显降低（P<0.05）。结论：WWOX基因过表达导致Tca8113细胞的基因表达谱发生变化,WWOX基因的抑癌作用机制与调节MAPK信号途径的多个基因表达有关联。     

WWOX基因mRNA在卵巢上皮癌细胞系和组织中的表达及其临床意义

目的：探讨WWOX基因mRNA在卵巢上皮癌耐药细胞系和组织中的表达及其临床意义。方法：采用RT-PCR和Northern blot方法检测卵巢上皮癌细胞中的WWOX基因mRNA表达。采用RT-PCR方法检测46例卵巢上皮癌,20例良性卵巢上皮肿瘤和20例正常卵巢组织中WWOX基因mRNA表达并分析与其临床病理的相关性。结果：①WWOX基因在卵巢上皮癌细胞系A2780和SKOV3表达不一致,而在其诱导的耐药细胞中有部分表达;②卵巢上皮癌组织中的WWOX阳性表达率明显高于良性和正常组织（P〈0.05）,虽然WWOX mRNA在恶性复发组织中的表达率及相对表达水平高于恶性敏感组,但是差异无统计学意义（P〉0.05）;③卵巢上皮癌组织中WWOX mRNA在肝转移者和术后残余灶〉2cm者中表达阳性率明显低于无肝转移和术后残余灶≤2cm者（P〈0.05）,而表达与其组织学类型、手术病理分期等其他临床病理因素均无相关性（P〉0.05）;④WWOX基因表达阳性者中位生存时间为（35.00±17.58）个月。WWOX阴性者中位生存时间为（93±0）个月（P〉0.05）。结论：WWOX基因可能在卵巢上皮癌的发生发展中发挥了某些作用。     

WWOX基因慢病毒载体的构建及其在卵巢癌细胞中的表达

目的：构建及鉴定WWOX基因慢病毒载体,观察WWOX基因在人卵巢癌PEO1细胞株中的表达,为进一步研究WWOX基因的作用机制及其功能奠定基础。方法：采用PCR技术从克隆质粒模板中获得全长WWOX基因,将WWOX基因亚克隆到慢病毒载体PCDH—CMV—MCS-EF1-copGFP中,构建慢病毒载体表达质粒PCDH—WWOX,通过双酶切验证后,慢病毒表达质粒与慢病毒包装质粒pPACKH1-GAG,pPACKH1-REV,Pvsv-G共转染293T细胞,获得携带WWOX基因及EGFP基因的重组慢病毒Lenti WWOX,并转染靶细胞人卵巢癌PEO1细胞株。通过RT—PCR和Western Blot验证Lenti WWOX在PEO1细胞株中的表达。结果：测序结果显示成功构建重组慢病毒载体表达质粒PCDH—WWOX;表达质粒与辅助包装质粒共转染包装细胞293T后能产生慢病毒颗粒并能有效感染靶细胞PEO1,转导效率约为60％,有WWOX基因mRNA和蛋白水平的高表达。结论：本实验成功构建了携带WWOX基因慢病毒表达载体,包装成病毒后能有效感染卵巢癌PEO1细胞。     

WWOX基因与肿瘤的研究

包含氧化还原酶的WW结构域（ww domain containing oxidoreductase，WWOX）基因是2000年由Bednarek和Ried等同时发现的一个新的候选抑癌基因，它位于染色体16q23．3—24．1区域，即普通型脆性位点FRA16D上。这个特殊位置使其近年来颇受重视，人们希望能通过研究它的表达与肿瘤发生的关系来找到早期诊治肿瘤的办法。大量实验已经证实，WWOX基因的表达异常在多种肿瘤，如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、多发骨髓瘤、前列腺癌及食管癌中频繁出现。但其作用机制尚不完全清楚，目前研究认为，主要机制与其产物调节细胞凋亡有关。     

Zebularine对HL-60及K562细胞株WWOX基因甲基化的影响

目的:探讨去甲基化药物1-(β-D-呋喃核糖苷)-1,2-二氢嘧啶-2-酮(Zebularine,Zeb,折布拉林)处理HL-60及K562细胞后WWOX甲基化水平的变化,分析Zeb在白血病治疗中的意义。方法:Zeb处理HL-60及K562细胞,以5-氮杂-2脱氧胞苷(5-Aza-CdR,地西他滨)作为阳性对照,MSP法检测WWOX基因启动子及第一外显子甲基化状态;QRT-PCR检测WWOXmRNA的表达,并分析不同细胞株药物处理组与处理前组甲基化情况与mRNA表达的关系。结果:1.药物处理前,K562细胞WWOX基因启动子甲基化PCR扩增出阳性条带,非甲基化扩增阴性;第一外显子甲基化PCR扩增阴性,而非甲基化PCR扩增出阳性条带;药物处理后启动子及第一外显子甲基化PCR均不能扩增出阳性条带,而非甲基化扩增阳性。2.Zeb与5-AzaCdR处理前后,HL-60细胞WWOX基因启动子及第一外显子甲基化PCR扩增均阴性,非甲基化均扩增出阳性条带。3.经Zeb与5-Aza-CdR处理后,K562细胞WWOX基因mRNA表达升高,处理前后比较差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度的Zeb处理组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。4.Zeb与5-Aza-CdR处理前后,HL-60细胞WWOX基因mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Zeb能够发挥去甲基化作用,上调K562细胞WWOX基因mRNA表达,具有浓度依赖性,对HL-60细胞WWOX基因mRNA表达无明显影响。     

膀胱移行细胞癌WWOX基因启动子区甲基化及mRNA表达及其临床意义

目的探讨膀胱移行细胞癌组织中WWOX基因启动子区CpG岛的甲基化状态以及WWOX基因表达缺陷的意义及其与CpG岛甲基化的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)分析WWOX基因启动子区甲基化状态和WWOX mRNA表达量及其二者的相关性。结果 54例膀胱癌组织中,WWOX基因启动子区的甲基化率达35.2%,而对应的癌旁正常组织中甲基化率仅为7.4%,二者差异有统计学意义(χ2=12.43,P<0.05)。WWOX基因启动子区甲基化率随着癌组织分级的增加逐渐升高(P<0.05)。WWOX mRNA在膀胱癌组织中的表达量明显低于对应的癌旁正常组织中的表达量,二者差异有统计学意义(t=9.73,P<0.05)。WWOX mRNA的表达水平与WWOX基因启动子区的甲基化状态密切相关(r=0.377,P<0.05)。结论 WWOX基因表达的缺失与膀胱癌的发生有密切的关联,WWOX启动子区的异常甲基化是导致膀胱癌组织WWOX mRNA转录受阻的重要原因之一。WWOX启动子区甲基化改变在膀胱移行细胞癌的早期发生发展中有重要作用。     

WWOX抑癌基因与消化道肿瘤研究进展

WWOX基因定位于染色体16q23．3—24．1。位于染色体普通脆性位点FDR16D。其DNA序列、mRNA、蛋白结构已基本清楚,其具体作用机制虽存在争议,但作为抑癌基因的观点已确立。在多种消化道肿瘤中均发现WWOX基因杂合子缺失,WWOXmRNA表达低下或缺失,WWOX蛋白表达水平低。     

WWOX和p73基因在急性髓细胞白血病中的表达

目的研究WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)和p73基因在急性髓细胞白血病(AML)中异常表达的临床意义及其机制。方法收集AML患者骨髓58例,非白血病患者骨髓31例作为对照组,采用RT-PCR检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR检测WWOX基因启动子区和p73基因第一外显子区的甲基化情况。结果 58例AML患者中,28例WWOX基因mRNA阳性表达,30例p73基因mRNA阳性表达;23例WWOX基因启动子区存在甲基化,21例p73基因第一外显子区存在甲基化。对照组中WWOX与p73基因mRNA均有表达29例,均未见甲基化现象。WWOX和p73基因在AML中mRNA的表达以及甲基化状态与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致其基因的沉默,使其mRNA表达减少或缺失,在AML的发病机制中起一定作用,WWOX与p73基因甲基化的检测对AML的诊断和疗效有一定意义。     

FHIT、WWOX蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的 探讨脆性位点抑癌基因FHIT和WWOX蛋白在子宫内膜癌的表达及临床意义.方法 对56例肿瘤标本应用免疫组织化学SP法检测FHIT和Ww0X蛋白在子宫内膜癌组织中的表达.结果 FHIT和WWOX两种基因蛋白表达与子宫内膜癌临床分期、组织学分级厦淋巴结转移密切相关(P<0.05).在同一标本中,二者表达有密切相关性和较好的一致性(P<0.05).结论 FHIT和WWOX蛋白的表达与卵巢上皮性癌的浸润和转移密切相关,检测其表达异常对判断肿瘤的分化、临床进展以及推测预后有一定的参考价值[1].     

卵巢上皮性癌组织中WWOX与Bcl-xl基因的表达及其意义

目的 研究卵巢上皮性癌中WWOX与Bcl-xl基因的蛋白表达及其相关性.方法 应用免疫组化SP法检测39例卵巢上皮性癌、7例交界性卵巢肿瘤、10例良性卵巢上皮性肿瘤、15例正常卵巢组织中WWOX与Bcl-xl蛋白的表达情况.结果 卵巢上皮性癌组织中WWOX蛋白阳性表达率为64.10%(25/39),显著低于交界性卵巢肿瘤(6/7,85.71%)、良性卵巢上皮性肿瘤(10/10,100%)及正常卵巢组织(15/15,100%)中的阳性表达率(均P＜0.01);卵巢上皮性癌组织中Bcl-xl蛋白阳性表达率为53.85%(21/39),显著高于交界性卵巢肿瘤(2/7,28.57%)、良性卵巢上皮性肿瘤(1/10,10.00%)及正常卵巢组织(0/15,0)中的阳性表达率(均 P＜0.01).WWOX蛋白表达与卵巢上皮性癌的临床分期及病理学类型有关(P＜0.05),与病理学分级无相关性(P＞0.05).Bcl-xl蛋白表达与卵巢上皮性癌的病理学类型和病理学分级无关(P＞0.05),但与临床分期相关(P＜0.05).WWOX蛋白表达与Bcl-xl蛋白的表达呈明显负相关(r=-0.478,P＜0.01).结论 WWOX基因在卵巢上皮性癌组织中低表达,Bcl-xl基因在卵巢上皮性癌组织中高表达,可能在卵巢上皮性癌的发生和发展中起重要作用.     

结直肠癌中WWOX基因杂合性缺失的研究

目的检测结直肠癌组织中WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因的杂合性缺失,并探讨其与结直肠癌临床病理参数之间的关系。方法用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法检测结直肠癌组织中WWOX基因3个微卫星位点D16S3029,D16S504,D16S3096的杂合性缺失。结果 24例结直肠癌组织中有8例(33.3%)存在一个或一个以上位点的杂合性缺失(LOH)。按浸润深度分组,浆膜内LOH阳性率为9.09%(1/11),浆膜及浆膜外LOH阳性率为53.85%(7/13),两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 WWOX参与调控结直肠癌的发生发展,LOH可能是WWOX在肿瘤中失活的重要机制。     

肿瘤转移抑制基因KAI1在妇科肿瘤中的研究进展

KAI1基因是一种肿瘤转移抑制基因，主要参与调节细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的相互作用，使肿瘤细胞不易脱离原发灶，阻断了转移的粘附环节而抑制转移。KAI1蛋白正常表达在多种肿瘤的转移中有抑制作用，多方面研究显示KAI1基因缺失、突变和表达异常在妇科恶性肿瘤侵袭转移中也起到十分重要的作用。现就KAI1基因的结构、功能和在妇科恶性肿瘤细胞中的变化规律及其意义作一综述。