内质网应激和糖脂代谢紊乱的关系及中药干预研究

内质网是细胞内重要的钙离子贮存器,也是蛋白合成后修饰、折叠及转运的重要场所.在细胞缺乏能量、脂质过度负荷、钙离子稳态失衡、分泌蛋白合成增加等条件下,新生肽链的修饰、折叠、组装受到干扰,将引起未折叠蛋白在内质网中堆积,使细胞发生内质网应激 (endoplasmic reticulum stress,ERS).     

细胞内钙离子分析

钙离子是人体内重要的阳离子 ,具有极其重要的生理功能 ,如 :作为第二信使 ,完成生物信号的跨膜传递 ,维持神经、肌肉正常兴奋性 ,调节腺体分泌等。测定细胞内游离钙离子的含量及其变化是研究细胞功能的重要方法。现着重对细胞内游离钙离子的测定方法加以叙述。1　钙离子的生理钙离子广泛存在于细胞内、外液 ,具有重要的生理功能。细胞内的钙离子主要贮存于线粒体和内质网内。细胞外液中的钙离子浓度远高于细胞内液 ,如 :神经细胞在静息状态下细胞内游离钙离子浓度为 10 - 8～ 10 - 7ｍｏｌ/Ｌ。细胞外浓度为 10 - 4～ 10 - 3ｍｏｌ/Ｌ[1] …     

疗效好、副作用少的钙通道阻断剂:硝苯地平控释片——三种主要钙通道阻断剂降压外作用的比较

钙通道阻断剂(CCB)是一组化学结构不同,作用机制也不尽相同的药物,可选择性阻断钙离子经钙通道进入细胞内,从而使细胞内钙离子浓度降低。早在1960年,德国Knoll制药公司合成了第一个CCB———维拉帕米;1966年,德国学者Albrecht Flechenstein首次提出了“Calcium antagonist(钙拮抗剂)”的概念;1969年,拜耳公司合成了一种新的化合物—BAY A1040,它就是后来的Nifedipine(硝苯地平);1972年,拜耳公司向外界公布了硝苯地平的化学结构式,由此衍生出一系列的二氢吡啶类CCB。CCB能在离子通道水平选择性阻断钙离子进入平滑肌细胞内,从而降低…     

参附注射液保护阿霉素心肌毒性机理研究

目的:观察参附注射液保护阿霉素心脏毒性的作用机理.方法:急性分离单个心肌细胞,运用TILLVISION钙离子荧光成像及分析系统,观察不同组间单个心肌细胞内游离钙离子的浓度变化.结果:阿霉素可引起心肌细胞内钙离子水平显著升高(P＜0.01),参附注射液干预可显著降低异常心肌细胞内游离钙离子浓度;同时,参附注射液还可抑制咖啡因诱导的内钙释放.结论:参附注射液对阿霉素心脏毒性的保护作用可能是通过抑制肌浆网的内钙释放,避免心肌细胞内钙超载,从而维持细胞内钙离子水平,达到保护心肌的作用.     

N-烷基氟哌啶醇季铵盐的合成及对细胞钙离子的影响

目的：合成N-烷基氟哌啶醇季铵盐衍生物并研究其对血管平滑肌细胞钙离子的作用。方法：以氟哌啶醇为原料,将其与碘代烷在回流的情况下进行反应而得到相应季铵盐衍生物。以激光扫描共聚焦显微镜技术测定活细胞内钙离子的动态变化。结果：合成了6个新化合物(Ⅰ—Ⅵ),其中化合物Ⅳ量效依赖地使KCl诱导的细胞内钙荧光强度出现持续性下降。结论：Ⅳ具有抑制KCl诱导的血管平滑肌细胞电压信赖性钙通道的开放作用,从而降低细胞内的钙离子浓度。     

钙荧光剂Fura2和Fura2/AM的合成(论著摘要)

Fura2和Fura2/AM是最新一代钙离子荧光指示剂,对钙离子有较高的灵敏度,比Quin2和Quin2/AM的荧光强30倍,可以测定细胞内钙离子的浓度,是目前研究钙离子在生命科学中的生理生化功能的有力武器。本实验参考Grynkiewicz等方法,首先合成Fura2/ME,然后经氢氧化钾水解,再酸化和酯化,成功地合成了Fura2和Fura2/AM。作者分别以间甲苯酚和对苯二酚为原料合成双硝基化合物8,经5％铂碳催化氢     

8 Hz/130 dB次声对大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响

目的: 探讨8 Hz,130 dB次声作用对海马细胞内钙离子浓度的影响. 方法: 将48只SD大鼠随机分为6个组,即对照组、次声作用1 d组、次声作用7d组、次声作用14 d组、次声作用21 d组、次声作用28 d组. 采用急性细胞分离技术,通过钙离子荧光探针及激光共聚焦显微镜观察大鼠脑海马细胞内钙离子浓度变化. 结果: 频率8 Hz,声压级130 dB次声分别作用2 h/d后,海马细胞内钙离子浓度于1 d组即有增高(P<0.01),7 d组仍呈增高趋势,至14 d组达高峰并呈现细胞内钙离子超载征象,至28 d组已回落. 结论: 8 Hz,130 dB次声作用不同时间可导致海马细胞内钙离子浓度不同程度增高,随作用时间延长,海马细胞对次声作用呈现适应性.     

钙和钙通道阻滞剂对SMAO休克家兔疗效的实验研究(摘要)

目前一些研究提示,休克时钙离子大量流入细胞,造成细胞内钙超负荷,是导致细胞不可逆损伤的重要因素。钙通道阻滞剂能阻滞钙离子向细胞内流,缓解细胞内钙超负荷,减轻细胞损伤,而对休克产生积极治疗作用。但曾有人认为,休克时血钙下降,心     

内质网应激及其相关性凋亡与缺血性脑损伤

1细胞凋亡与缺血性脑损伤 内质网（endoplasmic reticulum，ER）在细胞内分布广泛，是真核细胞中重要的细胞器，其内膜表面积占细胞所有膜结构的50％，体积占细胞总体积的10％，参与重要的生理功能的维持，其基本生理功能包括负责蛋白质的合成转运、信号肽识别、糖基化修饰等过程以及钙离子的贮存和调节，信号转导及细胞内钙的再分布。内质网巨大的膜结构为细胞内活性物质的反应提供了一个广阔的平台，     

大鼠膀胱平滑肌过度充盈后钙离子分布的变化

目的观察大鼠膀胱平滑肌细胞钙离子在亚细胞水平的分布变化,同时探讨钙离子超微结构示踪方法.方法健康雌性Wistar大鼠10只,分实验组(膀胱过度充盈2 h 排空后2 h)和正常对照组各5只,用草酸钾-戊二醛灌注固定取膀胱组织制样透射电镜观察.结果示踪钙离子呈20 nm直径高电子密度细颗粒状,正常对照组大鼠膀胱平滑肌示踪钙离子数量少,散在分布于滑面内质网内,实验组示踪钙离子在损伤肌细胞内数量明显增多,弥漫密集分布,尤其聚集在线粒体周围.结论急性尿潴留时膀胱平滑肌功能和结构损害与细胞内钙超载密切相关.钙示踪法是观察细胞内钙超载的可靠方法.     

氨培养胎鼠神经细胞钙离子浓度变化与凋亡的相关性

目的 观察体外培养神经细胞在氨作用下钙离子浓度变化与凋亡的关系,探讨氨毒性机制.方法 体外培养胎鼠神经细胞7d,实验分组为对照组、低氨组和高氨组;分别作用24 h后,用流式细胞仪测定神经细胞凋亡比率,用Fluo-3/AM荧光探针测定细胞内钙离子浓度.结果 对照组神经细胞有少量凋亡,细胞内钙离子浓度正常,随着NH4CL浓度的提高,细胞内钙离子浓度明显升高,神经细胞凋亡增加.低氨组和对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,高氨组和低氨组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 氨诱导神经细胞凋亡与细胞内钙离子浓度相关.     

8-甲氧沙林对黑素细胞内游离钙浓度及细胞骨架蛋白形成的影响

目的:观察8-甲氧沙林对体外培养黑素细胞内游离钙浓度、细胞骨架蛋白形成的影响.方法:正常人黑素细胞取自包皮环切术切取的包皮,用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内游离钙浓度,用罗丹明结合毒伞素对细胞骨架蛋白进行特异性染色.结果:8-甲氧沙林可使细胞内游离钙离子浓度升高,促进黑素细胞骨架蛋白合成.结论:8-甲氧沙林可能通过诱导黑素细胞内钙离子浓度升高和细胞骨架actin蛋白生成,从而影响黑素细胞的迁移.     

钙离子拮抗剂与动脉粥样硬化的干预

钙拮抗剂（Calcium Channel Blockers,CCB）是选择性地阻滞钙离子经钙通道进入细胞内,从而使细胞内钙离子浓度降低的一类药物。早在70年代初已从实验研究发展到临床研究,因发现钙离子拮抗剂能在离子通道水平选择性阻滞钙离子进入平滑肌细胞内,从而减少细胞内的钙离子浓度,选择性扩张小动脉,并影响平滑肌细胞的功能,现已被广泛地用于治疗心绞痛、高血压、心律失常等心血管疾病。由于临床应用的进展,     

细胞内钙离子的测定方法

如何测定细胞内钙离子一直是药学界十分关注的问题。但是,直接测定细胞内钙离子的方法只是近几年来才开始逐步建立。经过长期的实验和摸索,人们发明和应用了多种测定细胞内钙离子的手段。尽管一些方法目前尚未趋于成熟,但该领域中的研究进展仍较为迅速。综观细胞内钙离子的各种测定方法,迄今为止,较为成熟并经常应用者有如     

胰腺细胞缩胆囊素和胆碱能受体对细胞内Ca~2 的调节

本文使用Fura-2做为细胞内钙离子荧光指示剂,在大白鼠胰腺分离细胞观察缩胆囊素和乙酰胆碱对细胞内钙离子的影响及其相互作用.结果表明1nmol/L缩胆囊素和lmmol/L乙酰胆碱分别使细胞内钙离子浓度从基础水平的122±8nmol/L增高至360±32nmol/L和380±20nmol/L,半最大有效浓度分别为0.45nmol/L及54μmol/L。不同剂量的缩胆囊素和乙酰胆碱彼此不同程度抑制对方的作用,后加入的试剂提高细胞内钙离子浓度的幅度与先加入的试剂所引起的增加幅度成反比,加入各自相应的受体拮抗剂可使细胞恢复对另一激素(蛙皮素)刺激的反应。说明了缩胆囊素受体和胆碱能受体的相互调节影响细胞内钙离子的活动.加入受体拮抗剂后,细胞恢复反应过程中的时间动力学改变可能与受体阻滞后钙离子通道关闭的程度和时间有关.     

Nogo-A中不同功能片段对体外培养大鼠皮质神经元细胞内钙离子浓度的影响

目的研究Nogo-A主要功能片段Nogo-66、amino-Nogo对大鼠皮质神经元细胞内钙离子浓度的影响。方法体外原代培养并鉴定新生大鼠皮质神经元,将神经元按照干预药物不同分为对照组(给予Krebs-ringer液)、Nogo-66组、amino-Nogo组、amino-Nogo+尼莫地平组,以Fluo4/AM标记神经元细胞内钙离子,采用激光共聚焦显微镜技术检测药物干预1、3、5、7 min时各组神经元细胞内钙离子信号。结果加入药物后,对照组和Nogo-66组神经元细胞内钙离子信号强度在各时间点未见明显变化(P>0.05),而amino-Nogo组和amino-Nogo+尼莫地平组钙离子信号持续升高(P<0.05)。组间比较结果显示,在药物干预1 min时,4组间的神经元细胞内钙离子信号比较差异无统计学意义(P>0.05);在药物干预3、5、7 min时,Nogo-66组神经元细胞内钙离子信号与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05),而amino-Nogo组和amino-Nogo+尼莫地平组神经元细胞内钙离子信号与对照组和Nogo-66组同时间点比较均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在药物干预3 min时,amino-Nogo组神经元细胞内钙离子信号与amino-Nogo+尼莫地平组比较差异无统计学意义(P>0.05);在药物干预5、7 min时,amino-Nogo组神经元细胞内钙离子信号高于amino-Nogo+尼莫地平组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 amino-Nogo是Nogo-A中导致神经元细胞内钙离子浓度升高的责任功能片段。     

三七花总皂苷对人主动脉血管平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度的影响

目的:观察三七花总皂苷(PNFS)对血管平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度的影响.方法:采用去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖和钙超载模型,应用CCK-8法观察血管平滑肌细胞增殖活力;钙荧光指示剂Fluo-3/AM检测细胞内钙浓度变化.观察不同剂量PNFS对两者的影响.结果:PNFS能够改善去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖,降低细胞内钙离子浓度,并呈一定的量效关系.结论:PNFS对去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖有抑制作用,这一作用可能与降低细胞内钙离子浓度有关.     

顺铂诱导肿瘤细胞死亡中钙离子作用研究进展

顺铂诱导肿瘤细胞死亡存在多种分子机制,钙离子作为细胞内重要的第二信使,参与多种细胞功能调控.本文对钙离子在顺铂诱导肿瘤细胞氧化应激、自噬、凋亡过程中发挥的信号作用及相关机制的研究进行综述,总结钙离子对顺铂诱导肿瘤细胞死亡的影响,为提高顺铂化疗疗效、逆转顺铂耐药性提供参考.     

大鼠胰腺β细胞分泌颗粒内钙离子超微结构定位的研究

目的: 观察大鼠胰腺β细胞内钙离子在亚细胞水平的分布情况.方法: 用胶原酶原位灌注法分离大鼠胰岛,在含100 mL/L胎牛血清、11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI-1640培养基中培养过夜后,离心,将胰岛细胞团分为实验组(外源性胰岛素100 mU/L孵育240 min)和对照组(外源性胰岛素100 mIU/L孵育0 min),采用改进的焦锑酸钾沉淀的细胞化学方法对胰腺β细胞分泌颗粒内钙离子进行超微结构定位.结果: 超微结构显示胰腺β细胞内钙离子呈高电子密度的黑色颗粒状.对照组的胰岛素分泌颗粒内钙离子沉积明显高于实验组,并伴有钙离子外排.实验组胰腺β细胞靠近细胞膜区钙离子沉积增加.结论: 离子细胞化学定位法是研究组织中钙离子分布的有效方法.胰腺β细胞的分泌功能可能与胰岛素分泌颗粒内钙离子浓度密切相关.     

西比灵对缺血性神经元胞质内钙离子和细胞活性的影响

目的　研究类缺血状态下神经元胞质内游离钙离子及细胞活性变化 ,探讨缺血性神经元的损伤与细胞内钙离子的关系及西比灵的治疗意义 .方法　利用 Ca2 +指示剂 Flu- 3/AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的神经元 ,共聚焦技术检测细胞内荧光强度的变化 ,利用四唑蓝 (MTT)比色试验检测缺血性神经元的损伤程度 .结果　给予神经元类缺血处理 10 min后 ,缺血组神经元胞质内钙离子浓度和细胞损伤程度明显高于西比灵预处理组 (P<0 .0 1) .结论　西比灵可明显抑制神经元胞质内钙离子的升高 ,减轻由此引发的缺血性神经元的损伤程度