银染PCR－SSCP法检测人纤维源性肿瘤p53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测８７例良恶性人纤维源性肿瘤ｐ５３基因５～８号外显子点突变。结果显示：人纤维源性肿瘤ｐ５３基因总的点突变率为２１．８％，其中５、６、７、８号外显子所占百分率分别为７．７％、３８．５％、２６．９％和２６．９％。随着肿瘤恶性程度的增加，ｐ５３基因点突变增加。ｐ５３基因点突变与肿瘤的分化程度及转移有密切关系，ｐ５３基因点突变的检测有可能成为判断纤维源性肿瘤恶性程度，转移潜能及预后的一项指标。我们的结果还显示银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法是检测基因突变的有效、快速、简便的方法。     

银染PCR—SSCP法检测人纤维源性肿瘤p53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测８７例良恶性人纤维源性肿瘤ｐ５３基因５￣８号外显子点突变。结果显示：人纤维源性肿瘤ｐ５３基因总的点突变率为２１．８％，其中５、６、７、８号外显子所占百分率分别为７．７％、３８．５％、２６．９％和２６．９％。随着肿瘤恶性程度的增加，ｐ５３基因点突变增加，ｐ５３基因点突变与肿瘤的分化程度及转移有密切关系，ｐ５３基因点突的检测有可能成为判断纤维源性肿瘤恶性程度，转移潜能及预     

多种肿瘤抑制基因在视网膜母细胞瘤中存在状态的研究

目的 深入研究视网膜母细胞瘤（ＲＢ）内多种肿瘤抑制基因的存在状态。方法 综合利用ＳＳＣＰ分析、ＤＮＡ序列测定以及多重ＰＣＲ等技术,检测分析ＲＢ肿瘤内Ｒｂ、ｐ５３,ｐ１６,ｐ１５及ｐ１２等肿瘤抑制基因是存在缺失与点突变。结果 约７４％的ＲＢ肿瘤有Ｒｂ基因点突变,１６％显示,ｐ１６基因缺失,但ｐ５３及ｐ２１基因除多态性外未检测到真正的点突变。结论 ＲＢ的发病和病变的进展主要是由于以Ｒｂ基因为核心的代谢     

AL细胞在基因突变研究中的应用

突变是指生物体遗传物质发生了改变。体细胞突变可能与肿瘤等许多基因性疾病相关，性细胞突变则可影响后代，造成显性死亡或可遗传性改变。许多因素如物理、化学、生物等均可引起基因突变，基因本身也可发生自发性突变。基因突变包括点突变、大片段的缺失或插入突变及移码...     

肿瘤启动研究进展

本文综述了ras基因点突变和反应修饰两种肿瘤启动机制;动物实验、细胞转化试验、转染试验及转基因动物四种肿瘤启动模型;动物肿瘤发生率、细胞转化率、“微小酶变化灶”以及ras基因点突变四种肿瘤启动检测终点或标记,并展望了肿瘤启动研究的前景。     

肝细胞癌肿瘤抑制基因p53过度表达及点突变的研究

应用一种敏感的ＡＲＦ免疫组经和ＰＣＲ、银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测了本地区３８例肝细胞癌组织中肿瘤抑制基因ｐ５３的过度表达及点突变，结果发现１６例有ｐ５３蛋白过度表达（４１．２％），７例有ｐ５３基因２４９位密码子点突变，２例２４９位密码子外第７外显子点突变。９例ｐ５３基因有突变的肝癌中８例ｐ５３蛋白阳性，两者符合率为８８．９％，ｐ５３基因蛋白过度表达和点突点与ＨＣＣ分化和转移有关。本组ＨＣＣ ｐ５     

中国人群结,直肠癌P53基因失活突变热点的研究

ｐ５３基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，野生型ｐ５３基因的丢失或失活可能是细胞转化和肿瘤产生的重要步骤。本次研究，通过对３０例结、直肠癌患者手术后活检标本的分析，探讨中国人群中结、直肠癌ｐ５３基因失活突变在不同突变位点上的分布状态，并认为ｐ５３基因的Ａｒｇ－１３５－Ｈｉｓ是失活突变热点。在此基础上，对肿瘤标本ｐ５３基因突变与切除范围以外的边缘组织进行了比较。２０例病人突变仅存在于肿瘤组织，而正常组织没有突变。有两例患者，在肿瘤组织和边缘组织中均存在突变，边缘组织突变是杂合型，提示了患者的预后不良。     

甲状腺肿瘤组织中p53基因248位密码子突变及其蛋白过度表达

近年来的研究表明，野生型ｐ５３基因发生点突变后，失去阻止细胞分裂和抑癌功能，在肿瘤的发生发展和预后中发挥重要作用。目前已在多种恶性肿瘤中发现ｐ５３基因的点突变，如结肠癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、肺癌等［１］，为研究甲状腺癌中是否存在ｐ５３基因突变，作者用...     

P53基因突变与甲醛致癌研究

本文采用PCR和DNA序列分析对甲醛诱发的大鼠鼻腔鳞状细胞癌及其建立的肿癌细胞系P53肿瘤抑制基因突变进行了初步研究．结果显示：①所测11个大鼠鼻腔鳞癌有5个肿瘤的P53基因发生了点突变．而且是纯合性改变；②所测8株肿瘤细胞系有5株细胞的P53基因分别在高度保守区的第132，271位密码子发生了点突变，这种突变与细胞的致瘤性(裸鼠接种)有关．与细胞体外建株无关；     

利用定点突变技术构建突变nm23-H1和EGFP融合基因

背景与目的以前的研究已经证明nm23-H1基因是肿瘤转移抑制基因，但其抑制肿瘤转移的分子机制目前还不完全清楚。基因定点突变技术可以精确地改变基因的特定碱基序列，获得突变蛋白质。本研究的目的是应用基因定点突变技术构建突变型nm23-H1-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因，为进一步研究肿瘤抑制基因nm23-H1的功能、生化作用机制提供理论基础和实验依据。方法以逆转录病毒PLXSN-野生型nm23-H1-EGFP质粒为突变模板，应用QuikChange^TM定点突变方法，简单、快速、高效地引入nm23-H1^S44A、nm23-H1^P96S、nm23-H1^H118F、nm23-H1^S120G四个点突变和一个联合位点突变nm23-H1^P96S-S120G，构建了突变型nm23-H1-EGFP融合基因。结果成功构建了nm23-H1^S44A-EGFP、nm23-H1^P96S-EGFP、nm23-H1^H118F-EGFP、rim23-H1^S120G-EGFP、nm23-H1^P96S-S120G-EGFP五个突变型nm23-H1-EGFP融合基因，经DNA序列分析突变的碱基序列与实验设计完全一致。结论成功构建了五个具有不同突变位点的突变型nm23-H1-EGFP融合基因。QuikChange^TM定点突变技术是一种简单、快速、高效的基因定点突变方法。     

p53基因缺失和248位密码子点突变与肺癌发生和预后间关系的研究

以野生型p53cDNA片段作探针，采用DNA分子印迹杂交（Southernblot）技术检测20例原发性肺癌和10例肺良性病变p53基因缺失与重排。肺癌组阳性率为30％；肺良性病变组均为阴性。同时采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）检测20例原发性肺癌，2例肺转移癌以及它们相应的非癌肺组织p53基因248位密码子点突变。结果发现，4例原发性肺癌和2例肺转移癌有p53基因248位密码子点突变，非癌肺组织均为阴性。P53基因缺失和突变与肿瘤大小、分期、非小细胞肺癌病理分型无关（P＞0．05），与肿瘤转移有关（P＜0．05）。提示：p53基因缺失和突变与肺癌的发生和预后密切相关。     

Fez1基因和肿瘤

Fez1基因是由Ishii H发现的一个新的候选抑癌基因。 它定位于染色体8p22,编码67kDa的亮氨酸拉链蛋白,有与依赖cAMP激活蛋白相似区域。它在人类的许多肿瘤包括膀胱移行细胞癌，前列腺癌，食管癌，乳腺癌，胃癌等都存在异常表达。但原因尚不清楚，可能包括有：①基因缺失；②无义突变或点突变；③反常甲基化；④等位基因丢失所致的反常转录。这些改变可能在肿瘤的发生发展中起重要作用。近年来通过对其功能的研究，认为Fez1基因的功能有：抑制肿瘤增殖，调节细胞周期，与微管调节相关。虽然对Fez1基因的研究取得一些成绩，但仍需研究其功能，失活的原因，以及在肿瘤中发生发展的作用和机制。     

乳腺癌中P16基因缺失与突变的研究

背景与目的:了解乳腺癌与p16基因的关系.材料与方法:采用PCR和DNA测序方法,对33例乳腺癌患者肿瘤组织标本的p16基因进行检测,研究p16基因的缺失和突变情况.结果:所有标本均未检出纯合缺失,10例标本进行了外显子2的序列测定,也未发现点突变.结论:p166基因的纯合缺失和点突变可能与乳腺癌的发生无关.     

肾癌组织中ras基因产物p21表达和K－ras基因点突变分析

目的研究ｒａｓ基因激活在肾癌发生中的意义。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和免疫组织化学检测肾癌组织Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子突变及其基因产物ｐ２１蛋白的表达水平。结果４２例肾癌中６例Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变，１９例ｐ２１蛋白阳性表达，正常肾组织和癌旁组织均阴性。ｐ２１表达与肿瘤分期和分级有关。ｐ２１阳性患者的手术后生存率明显低于ｐ２１阴性患者。结论肾癌Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变并不常见，ｐ２１表达可能成为肾癌恶性程度和预后评价的指标。     

胰腺癌、结肠癌患者对突变ras癌基因蛋白特异的T细胞及抗体反应

ras癌基因往往因发生特异性点突变而激活。ras癌基因突变最常是在其编码的p21蛋白第12或61位发生单个氨基酸置换，从而增强p21蛋白的GTP酶活性并激活其转化活性。在人类的多种肿瘤中均可发现突变ras基因的存在。目前已报道大约90％胰腺癌，60％甲状腺癌,50％结肠癌和40％髓样白血病患者中可检出突变ras癌基因存在,     

CDKN2/p16甲基化的研究与结直肠癌

抑癌基因CDKN2／p16在结直肠癌等多种肿瘤中缺失、点突变及甲基化，导致肿瘤的发生发展。甲基化是其失活的主要机制。应用甲基化特异PCR。检测恶性肿瘤患者外周血中的甲基化改变，在早期诊断、监测术后复发和判定预后方面，具有重要的临床意义。     

胰液K-ras12密码子点突变及血清CA19-9水平与胰腺癌复发关系

背景与目的：K-ras基因是与胰腺癌相关的基因，血清CA19-9对诊断胰腺癌有价值：本工作研究目的在于探讨胰液中K-ras12密码子点突变联合血清CA19-9检测与胰腺癌病程的关系。方法：测定32例临床及手术证实的胰腺癌患者血清CA19-9水平，并采用内镜ERCP从胰管收集的胰液标本，聚合酶链反应一限制性片断长度多态性分析（PCR-PFLP）检测胰液K-ras基因12密码子点突变，分析K-ras12密吗子点突变及血清CA19-9水平联合检测与胰腺癌术后复发的关系。结果：①胰液中K-ras12密码子点突变率为56．3％，与肿瘤大小密切相关（P〈0．05）。K-ras12密码子点突变阳性、阴性表达病例3年复发率分别为66．7%和33．3％：②高血清CA19-9水平且K-ras12密码子点突变阳性组3年复发率为69．2％，而低血清CA19-9水平且K-ras12密码子点突变阳性组3年复发率为20．0％，差异具有显著性（P〈0．05）。结论：联合胰液中K-ras12密码子点突变和血清CA19-9检测可作为判断胰腺痛术后复发的有效指标，多因素分析对胰腺癌术后复发的判断更有价值。     

肿瘤基因治疗新策略

本文综述了有关肿瘤基因治疗的新策略，主要有突变补偿，分子化疗及遗传性免疫增强等方法。突变补偿是指去除激活的癌基因或增强抑癌基因的表达；分子化疗是将毒素基因释放到肿瘤细胞中而达到化疗“辐射”作用，遗传性免疫增强法是通过导入免疫刺激分子或肿瘤相关抗原基因而增强宿主对肿瘤的免疫反应，这些方法发展迅速，日趋成熟，为恶性肿瘤的基因治疗带来新的曙光。     

一种快速、灵敏测定人体HPRT基因位点的改进方法

人体外周血淋巴细胞中抗6-硫代鸟嘌呤(6-TG~r)突变体是在HPRT基因位点上的突变细胞,具有稳定的6-TG~r表型。当胞体中HPRT基因改变时,通过检测人体外周血中6-TG~r出现的频度,就可确定体细胞的突变频度。该位点的控制基因定位于X染色体长臂末端。目前研究已表明某些肿瘤患者、接触过环境中各种诱变剂的人群(肿瘤病人化疗后)和电离辐射者等,其突变频度都可增高,且与剂量之间有一定的依赖关系。     

应用p53基因型探索肝细胞肝癌起源的研究

应用多聚酶链反应扩增肝癌组织中ｐ５３基因第７外显子，结合ＨａｅⅢ酶切研究１１例肝癌病人２９个初发灶和再发灶石蜡标本中ｐ５３基因２４９编码子点突变初发灶和再发灶的基因型，以及ｐ５３基因点突变和肝癌再发之间的关系。我们以基因型分析为基础，结合二次手术前血清甲胎蛋白水平以及再发时间对１１例病人的２９个初发灶及再发灶肝癌的起源进行了分析。１４个初发灶中，有１０个ｐ５３基因点突变（７１．４％）。１５个再发灶中，有１０个ｐ５３基因点突变（６６．７％）。１２个多结节肝癌标本中，有１０个ｐ５３基因点突变（８３．３％）。６对标本具有不同的基因型，５对标本具有相同的基因型，５个多结节标本均为相同的基因型。７个再发灶肝癌为多中心起源，４个再发灶肝癌为单中心起源。研究结果表明，肝癌具有两种起源，ｐ５３基因２４９编码子点突变易导致肝癌的转移性复发