五味子根、茎、叶、果多糖对D-半乳糖致衰老小鼠运动耐力的影响

目的 观察五味子根、茎、叶、果多糖对D-半乳糖所致衰老小鼠运动耐力的影响。方法 将雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、五味子根多糖组、茎多糖组、叶多糖组及果多糖组，分别给予蒸馏水及总糖含量为35 mg·kg^-1的根、茎、叶及果粗多糖灌胃，30 min后，除空白组皮下注射生理盐水外，其他组均皮下注射300 mg·kg^-1D-半乳糖，每日1次，持续6周。通过转棒实验、前肢握力实验和负重游泳实验评价抗疲劳能力；通过化学比色法检测小鼠血清中尿素氮（BUN）、乳酸（LD）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和活性氧（ROS）等疲劳和氧化相关指标；用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠骨骼肌细胞中促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、抗凋亡蛋白Bcl-2及活化型胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）的表达情况。结果 在疲劳转棒实验中，与空白组比较，模型组小鼠转棒停留时间显著缩短（P<0.01）；与模型组比较，五味子根、茎及果多糖组小鼠转棒时间均显著增加（P<0.01）；前肢握力实验，与空白组比较，模型组小鼠前肢握力显著缩短（P<0.01），与模型组比较，五味子根、茎、叶及果多糖组小鼠前肢握力显著增加（P<0.01）；负重游泳实验，与空白组比较，模型组小鼠负重游泳时间显著缩短（P<0.01），与模型组比较，五味子根、茎、叶及果多糖组小鼠负重游泳时间显著延长（P<0.01）；生化试剂盒检测显示，与空白组比较，模型组小鼠BUN、LD含量及LDH、CK活性显著升高（P<0.01）；与模型组比较，五味子根、茎及果多糖组小鼠BUN含量及LDH活性明显下降（P<0.05，P<0.01），五味子根、茎、叶及果多糖组小鼠LD含量及CK活性明显下降（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，模型组小鼠SOD、GSH-Px活性显著下降（P<0.01），MDA、ROS含量显著升高（P<0.01）；与模型组比较，根、茎及果多糖组小鼠SOD活性明显升高（P<0.05，P<0.01），ROS含量显著下降（P<0.01）；根、茎多糖组小鼠MDA含量显著降低（P<0.01），GSH-Px活性明显升高（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，模型组小鼠骨骼肌细胞中Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平均增加（P<0.01），Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）；与模型组比较，五味子根、茎多糖组小鼠骨骼肌细胞中cleaved Caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05），Bcl-2蛋白表达水平增加（P<0.01）。结论 五味子根、茎、叶及果多糖对D-半乳糖所致衰老小鼠具有抗疲劳作用。上述作用可能与其提高机体抗氧化能力，抑制骨骼肌细胞凋亡有关。     

五味子酸性组分的主要物质基础与生物活性研究

目的：揭示五味子酸性组分的组成及其生物活性。方法：采用有机溶剂提取、大孔树脂分离和溶剂处理的方法制备五味子酸性组分,以HPLC对其进行定性定量分析,并根据五味子的功能主治观察酸味物质对小鼠负重游泳时间、耐常压缺氧、免疫器官质量及免疫吞噬等作用的影响。结果：本文所制备的五味子酸性组分主要由柠檬酸、奎尼酸等有机酸类成分组成,2个酸性成分总量达55.08%;低剂量（5 g·kg^-1）能显著延长小鼠负重游泳时间（P<0.001）;酸味物质低剂量组小鼠胸腺指数、脾脏指数与正常对照组比较增加明显（P<0.05,P<0.01）;高、低剂量酸味物质均可显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能提高吞噬指数K值和吞噬系数a值,特别是低剂量组与正常对照组比较有显著性差异（P<0.001,P<0.01）。结论：五味子酸性组分具有较好的抗疲劳和免疫增强作用,是五味子药效物质基础的重要组成。     

复方阿胶浆对小鼠抗疲劳能力的影响

目的: 探讨复方阿胶浆对运动小鼠抗疲劳能力的影响。方法: BALB/C 纯系雄性小鼠 60只随机分对照组、人参水提液组(10 g·kg^-1)、复方阿胶浆低、中、高剂量组(7.5,15,30 g·kg^-1)5组,灌胃30 d后,通过负重游泳实验,测定血乳酸(LA)、肝糖元、血红蛋白(Hb)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清肌酸激酶(CK)、血清尿素氮(BUN)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果: 与对照组比,复方阿胶浆低、中、高剂量组血LA、MDA的含量明显降低,血红蛋白的含量显著增加(P<0.05);中、高剂量组肝糖元、BUN的含量显著增加,CK的含量显著降低,GSH-Px的活性明显增强(P<0.05);中剂量组LDH的含量显著性降低(P<0.01),SOD的活性明显增强(P<0.05)。结论: 复方阿胶浆可以有效延缓疲劳的产生、提高机体组织对疲劳的耐受力。     

体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型的效用特点

目的 研究药物—体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证动物模型的药理作用特点。方法 按体质量等级将48只Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白组,人冠状病毒229E感染组,寒湿组,人冠状病毒肺炎疫毒袭肺复合模型组,体外培育牛黄高、低剂量组,每组8只。采用寒湿环境诱导+人冠状病毒229E感染形成复合动物病证结合模型,在感染当天给予体外培育牛黄（0.128,0.064 g?kg^-1）,灌胃给药,连续3 d,观察小鼠一般状态,小鼠肺指数和肺指数抑制率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠肺组织病毒载量;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测小鼠血清胃动素（MTL）,胃泌素（GAS）含量,以及小鼠肺组织细胞因子白细胞介素（IL）-10,IL-6,肿瘤坏死因子（TNF）-α及γ-干扰素（IFN-γ）含量;采用流式细胞术检测小鼠血中CD4⁺ T淋巴细胞,CD8⁺ T淋巴细胞及B淋巴细胞。结果 体外培育牛黄高、低剂量组可明显改善模型小鼠的一般状态,与空白组比较,模型组小鼠肺指数显著升高（P<0.01）,小鼠肺组织核酸表达显著升高（P<0.01）,小鼠血清中MTL含量显著增高,GAS含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,肺部组织细胞免疫因子TNF-α,IL-10和IL-6均显著增高（P<0.01）,小鼠外周血淋巴细胞CD4⁺ T细胞,CD8⁺ T细胞及B细胞均显著降低（P<0.01）;与模型组比较,体外培育牛黄高、低剂量组小鼠肺指数均显著降低（P<0.01）,小鼠肺组织核酸表达显著降低（P<0.01）,MTL含量显著降低（P<0.01）,小鼠肺组织中IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ含量均显著降低（P<0.01）,体外培育牛黄高剂量组可显著升高CD4⁺ T细胞（P<0.05）,体外培育牛黄可一定程度减轻模型小鼠肺组织炎性渗出,肺间质水肿及瘀血等病理表现。结论 体外培育牛黄对人冠状病毒感染致疫毒袭肺证小鼠复合模型的药理作用有明显的改善效用,可显著改善小鼠行为及排泄物状态、降低模型小鼠肺指数、提高肺指数抑制率、降低小鼠肺组织核酸表达、减轻肺组织病理损伤、调节免疫机能和抑制炎性因子释放等作用环节发挥作用,为临床用药提供依据。     

疏肝健脾养心方对失眠模型小鼠食欲素A及其受体的干预作用

目的 探讨疏肝健脾养心方下调食欲素A（OXA）及食欲素受体1（OX1R）、食欲素受体2（OX2R）的表达对失眠模型小鼠的干预作用。方法 利用腹腔注射对氯苯丙氨酸（PCPA）建立失眠小鼠模型,50只BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、右佐匹克隆组（0.13 mg·kg^-1）、疏肝健脾养心方低、高剂量组（8.4、33.6 g·kg^-1）,并给予相应药物治疗14 d。监测小鼠体质量变化,分别进行Morris水迷宫、戊巴比妥钠协同睡眠实验;免疫组化（IHC）检测下丘脑OXA的表达;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测下丘脑、血清、脾脏组织中OXA、5-羟色胺（5-HT）含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测下丘脑OXA及其受体OX1R、OX2R mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量显著降低（P<0.01）,逃避潜伏期时间显著增加（P<0.01）,睡眠潜伏期显著增加（P<0.01）,睡眠持续时间显著减少（P<0.01）,下丘脑、血清、脾脏组织中OXA含量升高、5-HT含量明显降低（P<0.05）,下丘脑中OXA及其受体的mRNA含量显著升高（P<0.01）。与模型组比较,疏肝健脾养心方低、高剂量组小鼠体质量明显升高（P<0.05,P<0.01）,逃避潜伏期时间明显减少（P<0.05）,睡眠潜伏期减少,睡眠持续时间显著增加（P<0.01）,下丘脑、血清、脾脏组织中OXA含量降低、5-HT含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,下丘脑中OXA及其受体的mRNA含量显著降低（P<0.01）。结论 疏肝健脾养心方具有镇静、催眠作用,对失眠症有一定的治疗作用,其机制与增加脑中5-HT的含量,抑制下丘脑中OXA及其受体的表达有关。     

基于靶器官铁死亡探讨绿豆汁炙黄药子的炮制减毒机制

目的 探究绿豆汁炙黄药子的炮制减毒作用,并基于其主要毒性靶器官肝铁死亡探究其减毒机制。方法 60只雄性ICR小鼠随机分为空白组、生黄药子组、水炙黄药子组,绿豆汁炙黄药子1组（黄药子-绿豆10∶1,闷润40 min,130 ℃炒18 min）、绿豆汁炙黄药子2组（黄药子-绿豆10∶1,闷润80 min,100 ℃炒14 min）、绿豆汁炙黄药子3组（黄药子-绿豆20∶3,闷润40 min,160 ℃炒14 min）。生黄药子及各炮制品组均以3 g·kg^-1·d^-1的剂量分别灌胃对应的95%乙醇提取物药液,空白组灌胃等体积的0.5%羧甲基纤维素钠,1次/d,连续14 d。苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝脏组织病理变化;生化检测小鼠血清谷氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平,以及肝组织丙二醛（MDA）、亚铁离子（Fe²⁺）、还原型谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）的水平;蛋白免疫印迹法检测铁关键蛋白铁蛋白重链1（FTH1）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的表达水平。结果 HE染色结果显示,空白组小鼠肝组织结构清晰,肝细胞形态正常;生黄药子组与水炙黄药子组小鼠肝细胞胞质疏松、空泡,病理性损伤明显;各绿豆汁炙黄药子组小鼠病理性损伤明显改善。与空白组比较,生黄药子组小鼠血清ALT、AST水平显著升高（P<0.01）,肝组织MDA及Fe²⁺水平显著升高（P<0.01）,GSH、SOD水平显著降低（P<0.01）,FTH1、GPX4蛋白表达显著下调（P<0.01）;与生黄药子组比较,各绿豆汁炙黄药子组小鼠血清ALT、AST水平显著降低（P<0.01）,肝组织MDA的水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,Fe²⁺水平显著降低（P<0.01）,GSH、SOD水平显著升高（P<0.01）,FTH1、GPX4蛋白表达显著上调（P<0.01）;与水炙黄药子组比较,各绿豆汁炙黄药子组小鼠血清AST水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,肝组织MDA水平显著降低（P<0.01）,SOD水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,FTH1蛋白表达显著上调（P<0.01）,绿豆汁炙黄药子2、3组小鼠血清ALT水平显著降低（P<0.01）,肝组织Fe²⁺水平显著降低（P<0.01）,GSH水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,GPX4蛋白表达明显上调（P<0.05,P<0.01）。各绿豆汁炙黄药子组中以绿豆汁炙黄药子3组的减毒效果最佳,即黄药子-绿豆=20∶3,闷润40 min,160 ℃炒14 min。结论 绿豆汁炙法能够缓解黄药子导致的肝损伤,其减毒机制可能与抑制其靶器官肝脏的铁死亡有关。     

四君子汤调控肝癌癌旁组织NF-κB p65的O-GlcNAc糖基化修饰抑制肝细胞癌进展的机制

目的 探究四君子汤通过调控肝癌癌旁组织核因子-κB p65（NF-κB p65）的O-连接的β-N-乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）糖基化修饰,干预肝癌发展的分子机制。方法 建立原位肝癌小鼠模型,将24只C57BL/6小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组、模型组、四君子汤低剂量组（10 g·kg^-1）、四君子汤高剂量组（25 g·kg^-1）,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平和p65的磷酸化修饰水平;免疫沉淀法（IP）检测p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测癌旁组织中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA表达水平;观察各组小鼠肿瘤数量,称量肝脏质量;检测各组小鼠的旷场运动情况和抓力,分析小鼠的气盛衰度。结果 与正常组小鼠肝组织比较,模型组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平显著下降（P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平显著下降（P<0.01）;p65的磷酸化水平显著升高（P<0.01）;IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著升高（P<0.01）;肝脏质量显著升高（P<0.01）;小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数显著下降（P<0.01）,气盛衰度显著下降（P<0.01）。与模型组小鼠比较,四君子汤低剂量组和四君子汤高剂量组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平明显升高（P<0.05, P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平明显上调（P<0.05,P<0.01）;p65的磷酸化水平显著下降（P<0.01）;四君子汤低剂量组IL-6、TGF-β₁、VEGFA mRNA水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;四君子汤高剂量组中IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.01）,直径>3 mm肿瘤数量显著减少（P<0.01）,小鼠肝脏质量明显降低（P<0.05）,小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数明显升高（P<0.05,P<0.01）,气盛衰度显著升高（P<0.01）。结论 四君子汤可以抑制小鼠原位肝癌的进展,该作用可能是通过增加肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平,增加癌旁组织中p65的O-GlcNAc糖基化修饰,抑制p65的磷酸化修饰,最终抑制下游IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9的表达而实现。     

四神丸和葛根芩连片对DSS诱导的小鼠实验性结肠炎的作用比较

目的: 比较四神丸和葛根芩连片对硫酸葡聚糖钠(DSS)诱导的小鼠急性和慢性结肠炎的治疗作用。 方法: 急性或慢性结肠炎实验中C57BL/6J小鼠均随机分为4组,即正常组,DSS急性或慢性模型组,四神丸组(2.25 g ·kg^-1),葛根芩连片组(6.5 g ·kg^-1)。4%DSS连续给小鼠自由饮用5 d制备急性结肠炎模型;3%DSS给小鼠4次循环饮用(1~5 d,8~12 d,15~19 d,22~26 d)制备慢性结肠炎模型。急性模型于DSS饮水次日开始给药,连续ig给药8 d;慢性模型于DSS饮水2次循环后开始给药,连续给药16 d。分别测定小鼠疾病活动度指数(DAI)和结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)活性,HE染色观察结肠组织学变化。 结果: 与正常组比较,模型组急性结肠炎与慢性结肠炎小鼠DAI均明显升高,结肠组织炎症损伤较为明显,MPO活性明显升高(P<0.05,P<0.01);急性结肠炎中葛根芩连片从第5天开始、四神丸从第7天开始显著改善小鼠DAI(P<0.05),二者均能显著减轻小鼠结肠组织炎症损伤(P<0.01,P<0.05),并降低结肠组织中MPO活性(P<0.05,P<0.01);慢性结肠炎中四神丸从第18至22天及24天可显著改善模型小鼠的DAI(P<0.05),并能减轻结肠组织炎症损伤(P<0.05),葛根芩连片对慢性结肠炎小鼠各指标均无显著性改善。 结论: 四神丸对DSS诱导的急性及慢性结肠炎均有显著改善作用,葛根芩连片仅对急性结肠炎有显著疗效。     

补肾化痰益智法对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及抗氧化能力的影响

目的: 观察补肾化痰益智法对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及抗氧化能力的影响并探讨其可能机制。方法: 随机将APP/PS1双转基因小鼠分为模型组、西药多奈哌齐组(6.5×10^-4g·kg^-1·d^-1)、补肾化痰益智方高、低剂量组(15.6,7.8 g·kg^-1·d^-1), 每组10只。空白组为10只同月龄相同遗传背景C57BL/6J小鼠。从3月龄开始对小鼠分别实施灌胃治疗, 每日1次。空白组、模型组均给予等容积的生理盐水灌胃。连续灌胃3个月后,进行跳台实验及穿梭箱实验评定各组小鼠的学习记忆能力;采用比色法检测小鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量。结果: 跳台实验结果显示,与模型组比较, 各组小鼠的潜伏期明显延长和出错次数明显减少(P < 0.01);穿梭箱实验结果显示,与模型组比较,各组小鼠的主动回避次数明显增加(P < 0.01,P < 0.05),主动回避潜伏期、被动回避潜伏期明显缩短(P < 0.01);西药组和补肾化痰益智方高、低剂量组小鼠脑组织中SOD活性较模型组显著升高(P<0.01),MDA含量明显降低(P<0.01)。结论: 补肾化痰益智方对APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆具有一定的改善作用,且可能与其抗氧化作用有关。     

黄芪建中汤抗疲劳机制研究＊

目的 探究黄芪建中汤抗疲劳的作用机制。方法 采用随机数字表法，将60只km小鼠分为空白组、模型组、黄芪建中汤高、中、低剂量组，每组10只。空白组、模型组予0.5 mL/d蒸馏水灌胃，黄芪建中汤高、中、低剂量组分别给予生药量为0.154 g/mL、0.308 g/mL、0.616 g/mL的水煎剂0.5 mL/d灌胃，给药30 d，除空白组外，对各组小鼠干预1 h之后测试运动能力（疲劳转棒仪观察运动时间和掉落次数）；给药30 d后测量肝脏以及肌肉的ATP和糖原含量，测量血浆中的尿素氮、乳酸脱氢酶、乳酸和SOD含量。结果 与模型组相比，黄芪建中汤各剂量组治疗后，小鼠运动时间显著延长（P < 0.01），掉落次数也明显减少（P < 0.01），其耐力运动时间与剂量成正比，掉落次数与剂量呈反比。其中，模型组小鼠肝脏和肌肉的ATP、糖原，血清SOD、乳酸脱氢酶含量明显低于空白组（P < 0.01），血清乳酸和尿素氮的含量明显高于空白组（P < 0.01）。黄芪建中汤各剂量组小鼠肝脏和肌肉ATP、糖原，血清SOD、乳酸脱氢酶含量明显升高（P < 0.01），血清乳酸和尿素氮含量明显下降（P < 0.01）。结论 黄芪建中汤具有一定的抗疲劳作用，促进机体能量代谢可能是其抗疲劳的作用机制之一。     

乌头类双酯型生物碱水解转化规律及含量计算方法研究

 目的 研究乌头类双酯型生物碱水解转化规律,建立LC-MS定性分析及HPLC定量分析乌头类双酯型生物碱及其水解产物方法。方法 通过控制乌头碱、新乌头碱、次乌头碱3种双酯型生物碱的水解条件,分别获得不同阶段的水解产物,从而推导各水解产物的精确质量浓度。结果 根据LC-MS定性分析结果,乌头类生物碱水解规律为乌头类双酯型生物碱先水解生成焦乌头碱类生物碱,再继续水解生成苯甲酰乌头原碱类生物碱;并根据水解规律分别计算出焦乌头碱类生物碱、苯甲酰乌头原碱类等乌头类生物碱水解产物的精确质量浓度。HPLC 方法学表明,焦乌头碱、焦新乌头碱、焦次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱分别在0.70～44.64 μg·mL-1 (r=0.999 7;0.34～21.77 μg·mL-1 (r=0.999 9;0.38～24.37 μg·mL-1 (r=0.999 9;0.48～30.74 μg·mL-1 (r=0.999 9;0.41～26.38 μg·mL-1 (r=0.999 9;0.42～27.08 μg·mL-1 (r=0.999 7内线性关系良好。结论 本实验得出了乌头类双酯型生物碱水解转化规律,并建立了计算不同水解阶段水解产物的方法,其专属性高、定量简便,为乌头类生物碱及其水解产物的定量分析和乌头类中药材炮制、质量控制等提供了简便可行的方法。     

哈蟆油非水溶性成分酶解物的抗疲劳作用

目的:研究哈蟆油非水溶性成分酶解物抗疲劳生物活性。方法:采用碱性蛋白酶酶解法制备哈蟆油非水溶性成分酶解物。以哈蟆油非水溶性成分酶解物高、中、低(0.6g/kg,0.3g/kg,0.15g/kg)3个剂量组对小鼠进行连续灌胃给药30天,空白对照组给予等体积蒸馏水,分别观察小鼠负重游泳时间、血清尿素氮含量、肝糖原含量、血乳酸含量等指标的变化。结果:中剂量组小鼠负重游泳时间与对照组比较时间显著延长(P<0.05),低剂量组肝糖原与对照组比较含量显著增加(P<0.05),各剂量组血乳酸曲线下面积与对照组比较显著减小(P<0.01),各剂量组血清尿素氮与对照组比较含量均无显著下降(P>0.05)。结论:哈蟆油非水溶性成分酶解物具有明显抗疲劳作用。     

薏苡仁醇溶蛋白水解工艺优化及其ACE 抑制活性的研究

目的：对薏苡仁中含量最丰富的醇溶蛋白水解条件进行优化,并对其水解产物进行血管紧张素转化酶（ACE）体外活性评价。方法：利用胃蛋白酶水解薏苡仁醇溶蛋白,邻苯二甲醛法测定水解度,通过正交实验优化醇溶蛋白酶解条件。酶解液超滤（截留分子量3 kD）冻干得到小分子量多肽,采用高效液相色谱法对其ACE 抑制活性进行测定。结果：薏苡仁醇溶蛋白酶解的最佳条件为：底物浓度1%,酶与底物浓度比1颐5,水解时间48 h;酶解物在0.1 mg·mL-1 浓度下体外ACE 抑制率为83.40%依0.93%。结论：醇溶蛋白水解产物表现出较强的体外ACE 抑制作用,为薏苡仁降压作用的进一步研究及功能食品的开发提供了理论支持。     

人工养殖暹罗鳄鱼肉酶解物提高缺氧耐受力的药效学验证

目的:验证鳄鱼肉酶解物具耐缺氧作用。方法:以茚三酮-紫外分光光度法测定不同酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜酶、中性蛋白酶和木瓜酶+中性蛋白酶)的鳄鱼肉酶解产物的蛋白含量,并观察其酶解物提高小鼠的耐缺氧能力。结果:鳄鱼肉胃蛋白酶酶解产物的蛋白含量最高,鳄鱼肉胃蛋白酶酶解产物0.55,1.10 g.kg-1连续ig 20 d,可明显延长小鼠常压耐缺氧时间(与对照组比较P<0.05)。结论:鳄鱼肉胃蛋白酶酶解物具有提高缺氧耐受力的作用。     

丹参干燥前后游离型和结合型酚酸的比较研究

丹参干燥前后,新鲜和干燥丹参中酚酸成分含量有显著性差异,即在干燥过程中随脱水增加,丹参酚酸含量显著增加。为探究丹参干燥前后游离型和结合型酚酸含量的差异及转化,该实验对丹参酚酸水解方法、水解产物、水解规律等进行研究,采用UPLC测定丹参结合型酚酸4种主要水解产物丹参素、咖啡酸二聚体(SMND-309)、咖啡酸、甘西鼠尾草酸甲(原紫草酸)以及丹参中3种主要游离酚酸成分(迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B)的含量。结果显示,丹参酚酸的碱水解效果显著优于酸水解,优选的碱水解条件为用含有1%抗坏血酸的2 mol·L-1氢氧化钠溶液于70℃水解4 h;游离酚酸和结合酚酸的水解产物相同;新鲜丹参中游离酚酸含量较低,结合酚酸含量较高,而干燥丹参却相反。提示丹参生长过程中已积累储存了大量的结合型酚酸,主要以酯键与细胞壁多糖结合形成了不溶性酚酸,常规方法不易检出,在干燥脱水过程中,结合型酚酸或在相关酶的作用下转化生成大量的游离酚酸。     

奥沙利铂水解动力学初步研究

 目的 研究奥沙利铂溶液在不同温度、pH条件下水解动力学,以及缓冲盐对药物水解的影响。方法 采用高效液相色谱法测定奥沙利铂的水解产物草酸和杂质B含量,进一步推导出奥沙利铂水解过程,并运用经典恒温法探讨其稳定性。结果 奥沙利铂水溶液在不同温度、pH条件下的水解反应均符合一级动力学,水解活化能为60.9 kJ·mol-1,且在pH 4.2时最稳定。此外缓冲盐会加速药物的水解作用,缓冲盐浓度与药物水解程度呈正相关。结论 奥沙利铂在水溶液中易水解,故在药物的溶解和新制剂研究的过程中都应当严格控制工艺条件。     

黑玛咖不同提取物的抗疲劳作用与谱效关系研究

目的研究黑玛咖不同提取物的抗疲劳作用及其超高效液相色谱(UPLC)图谱与抗疲劳作用的谱效关系,为明确黑玛咖的抗疲劳作用的物质基础提供依据。方法通过小鼠力竭游泳实验、检测肝糖原和血清乳酸水平,比较黑玛咖8种提取物的抗疲劳作用;采用UPLC-Q-TOF/MS法建立黑玛咖8种提取物的指纹图谱;以小鼠力竭游泳实验为抗疲劳作用的药效学指标,采用偏最小二乘法回归(PLSR)分析建立其谱效关系。结果黑玛咖60%、80%、95%乙醇提取物(醇提物)均明显增加小鼠力竭游泳时间,且以95%醇提物增加作用更为显著;黑玛咖80%醇提物能显著增加因过度运动所致的降低的肝糖原水平;黑玛咖95%醇提物能明显减少小鼠负重游泳后产生的血清乳酸堆积。从黑玛咖不同提取物UPLC指纹图谱中提取出23个能够表征含量差异的特征峰。采用PLSR分析,以力竭游泳时间为药效指标时,发现黑玛咖提取物中N-苄基十六酰胺、N-苄基-5-氧代-6E,8E-十八碳二烯酰胺、1,3-二苄基-2-苯基-4,5-二甲基咪唑和N-十八烷酰胺与抗疲劳作用呈正相关,且VIP值大于1。结论黑玛咖95%及80%醇提物具有显著的抗疲劳作用;明确N-苄基十六酰胺、N-苄基-5-氧代-6E,8E-十八碳二烯酰胺、1,3-二苄基-2-苯基-4,5-二甲基咪唑和N-十八烷酰胺是黑玛咖抗疲劳作用的主要有效成分。为深入研究黑玛咖抗疲劳药效物质基础及建立全面可靠的质量控制方法提供思路。     

鹿茸冻干粉的酶解及其酶解产物性质的研究

目的:通过研究鹿茸冻干粉酶解产物的促成骨细胞增殖活性,抗氧化性以及血管紧张素转化酶Ⅰ(angiotensin Ⅰ-converting enzyme,ACE,EC3.4.15.1)抑制活性,为阐明鹿茸强筋健骨的机制以及揭示鹿茸体内生理功能发挥的机制提供研究线索.方法:采用体内常见的消化酶胃蛋白酶和胰蛋白酶分别和同时对鹿茸冻干粉进行酶解,确定酶解完全的条件,收集相对分子质量小于1万的多肽混合物,对其抗氧化性,ACE抑制活性以及促成骨细胞增殖活性进行研究.结果:鹿茸冻干粉的不同酶解产物对羟自由基的清除效果非常明显,其IC50均低1 g·L-1,远低于维生素C的5.5 g·L-1,同时胃蛋白酶和双酶酶解产物对ACE抑制效果极佳,胰蛋白酶酶解产物对大鼠成骨细胞(UMR-106细胞)的促增殖作用达73.43%.结论:本实验进一步验证了鹿茸强筋健骨以及强身抗老等传统功效,对于ACE抑制活性的试探性研究也表明鹿茸酶解产物具有潜在的高血压防治功能;本实验结果也为进一步分离提取鹿茸酶解产物中的抗氧化性多肽,ACE抑制活性肽以及促成骨细胞活性肽提供强有力的依据.     

土鳖虫胰酶酶解物抗凝活性部位分离纯化及组成分析

目的:采用溶剂萃取和凝胶柱色谱法对土鳖虫胰酶酶解物进行分离纯化,初步确定其抗凝活性部位及化学成分组成。方法:应用胰酶酶解法制备土鳖虫胰酶酶解物,以APTT(活化部分凝血酶时间)为指标,采用溶剂萃取法,获得抗凝活性部位IV,经凝胶柱色谱法对其进行分离纯化获得胰酶酶解纯化物;采用考马斯亮蓝法对纯化物进行定量分析,通过MALDI-TOF-MS检测分离部分的分子量分布范围。结果:土鳖虫胰酶酶解物部位IV有较强的抗凝活性,其抗凝活性强度与酶解物质量浓度相关;部位IV经Sephadex G-25纯化后,通过考马斯亮蓝法测得其蛋白质量分数5.5%;进一步经Sephadex G-10脱盐的纯化物,采用MALDI-TOF-MS检测,确定为相对分子质量在850～910 Da的3组多肽混合物。结论:采用凝胶柱色谱法分离纯化土鳖虫胰酶酶解物是可行的,抗凝活性组分是<1 000 Da的小分子肽类。     

基于苯甲酸HPLC定量分析的制草乌氨基醇型乌头原碱类水解产物的含量测定

目的建立推算乌头碱氨基醇型水解产物含量的方法。方法通过控制苯甲酰乌头原碱水解条件,分别获得不同阶段的水解产物,确定苯甲酰乌头原碱降解率与苯甲酸转化率之间的关系,建立通过苯甲酸HPLC定量分析推导氨基醇型乌头原碱类水解产物含量的方法,并利用该方法对药典法制草乌生物碱含量进行测定。结果苯甲酰乌头原碱降解率与苯甲酸转化率约为1∶1,通过测定苯甲酸含量计算氨基醇型乌头原碱类含量的公式为：氨基醇型乌头原碱类含量≈（苯甲酸的含量×529）/122。药典法制草乌的双酯型生物碱、单酯型生物碱和氨基醇型乌头原碱类含量分别为0.0025%、0.16%和0.005%。结论通过定量分析苯甲酸含量推导乌头碱氨基醇型水解产物含量的方法可行,操作简单。