龙葵碱对人肝癌HepG2细胞N-乙酰基转移酶活性的影响

目的探讨龙葵碱对HepG2细胞N-乙酰基转移酶(NAT)活性的影响。方法采用HPLC方法,以2-氨基芴(2-AF)为底物,以2-AF被NAT乙酰化为2-乙酰氨基芴(2-AAF)的量来反应NAT的活性。结果龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT的活性,作用具有剂量依赖性。结论龙葵碱通过抑制HepG2细胞NAT的活性发挥细胞毒作用。     

桑叶有效部位对高胰岛素诱导人肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的:观察桑叶有效部位(总多糖、总黄酮、总生物碱)影响核因子-κB(NF-κB)通路对高胰岛素诱导人肝癌Hep G2细胞胰岛素抵抗的改善作用。方法:以人肝癌Hep G2细胞为研究对象,在含10 mg·L-1胰岛素的培养基中培养48 h,建立IR-HepG2模型;采用桑叶有效部位观察对Hep G2细胞胰岛素抵抗的影响,从而确定最佳给药浓度。实验分为空白组,10mg·L-1胰岛素处理组(模型组),总多糖组,总黄酮组,总生物碱组,小白菊内酯组。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GODPOD)法检测培养液中残存葡萄糖含量,RT-q PCR法检测NF-κB,I-κβ激酶-β(IκKβ)及核因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA的表达,Western blot检测蛋白NF-κB,IκKβ及IκBα的相对表达量。结果:经桑叶有效部位改善Hep G2细胞胰岛素抵抗的筛选得出各给药组最佳给药剂量分别为总多糖组、总黄酮组、总生物碱组、小白菊内酯组最佳给药质量浓度分别为200,100,10mg·L-1,20μmol·L-1。与空白组比较,高胰岛素刺激后,NF-κB,IκKβ含量明显升高(P0.01),NF-κB结合蛋白IκBα明显降低(P0.01),表明高胰岛素刺激后NF-κB通路已被部分激活;而桑叶有效部位干预后,与模型组相比,只有黄酮组NF-κB,IκKβ的含量明显降低(P0.05),抑制IκBα的降解(P0.05);多糖组和生物碱组影响作用不明显。结论:高胰岛素诱导人肝癌Hep G2细胞发生胰岛素抵抗后,NF-κB通路在一定程度上被激活,推测胰岛素抵抗与NF-κB炎症通路间存在一定的关系;而桑叶黄酮可影响NF-κB通路从而改善Hep G2细胞胰岛素抵抗状态。     

松针提取物α-蒎烯对肝癌HepG2细胞miR-221及其下游靶基因表达的影响

为探讨松针提取物α-蒎烯的抗肝癌作用及机制,该实验首先使用流式细胞技术检测α-蒎烯对HepG2细胞周期的影响,然后选取与G2/M期调控相关的miR-221,采用荧光定量PCR技术检测α-蒎烯干预对其表达的影响,同时通过Target Scan等在线生物信息学软件分析miR-221的靶基因,最后对相关靶基因的表达用定量PCR进行检测。结果显示,α-蒎烯呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,可阻滞细胞于G2/M期(P0.05),显著下调HepG2细胞内miR-221的表达(P0.05),生物信息学分析显示CDKN1B/P27和CDKN1C/P57可能是miR-221的下游靶基因,荧光定量PCR显示α-蒎烯处理后二者的表达显著上调(P0.001,P0.05)。上述结果表明,α-蒎烯可能通过阻滞细胞周期于G2/M期从而发挥抗肝癌作用,其对G2/M期的调控可能与下调miR-221表达和上调其靶基因CDKN1B/P27和CDKN1C/P57的表达有关。     

青葙苷A诱导肝癌HepG2细胞凋亡及相关机制研究

目的: 研究中药青葙子中的齐墩果烷型三萜青葙苷A（celosin A,CA）对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其相关机制。 方法: 采用E-MEM培养基建立人肝癌HepG2细胞体外培养体系,采用细胞计数试剂盒（,CCK-8）检测细胞活力,噻唑蓝（MTT）法测定乳酸脱氢酶（LDH）,免疫比色法检测细胞增殖情况,用4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4,6-2 amidine base-2-phenyl indole,DAPI）荧光染色观察细胞凋亡形态学变化,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3/7和核转录因子kappa B（NF-κB）蛋白表达水平。 结果: 用0.22-3.5 μmol·L^-1 CA处理过的HepG2细胞,LDH释放增加,呈剂量和时间依赖性。在CCK-8和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）测定过程中,CA比标准药物抗HepG2活性更强,随浓度和作用时间的增加,细胞的活性不断下降,对HepG2增殖的抑制作用明显。DAPI染色观察用CA处理过的HepG2细胞浓缩明显,细胞核分散,染色质凝聚。Western blot结果显示用CA处理过的HepG2细胞Caspase-3/7的活性显著增加,NF-κB蛋白表达水平下降。 结论: Celosin A具有诱导HepG2细胞凋亡的作用,其机制可能与激活Caspase-3/7和抑制NF-κB蛋白表达有关。     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的线粒体通路研究

 目的观察龙葵碱诱导HepG₂细胞凋亡与线粒体通路的关系。方法MTT法测定龙葵碱对HepG₂细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG₂细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca²⁺]_i的变化。结果龙葵碱对HepG₂细胞有细胞毒作用;龙葵碱诱导HepG₂细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca²⁺]_i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca²⁺顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca²⁺浓度启动细胞凋亡机制。     

N-乙酰半胱氨酸对乙醇代谢的影响及机制研究

 目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)是否能通过加速乙醇代谢而解酒以及是否能对抗乙醇对肝脏的损害及其作用机制。方法小鼠随机分组,分别灌胃给予蒸馏水和不同剂量的NAC,20 min后灌胃给予白酒,观察小鼠的翻正反射,攀网能力,用生化比色法测定肝脏中的乙醇脱氢酶(ADH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)的活性及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量。用气相色谱法测定血中乙醇的浓度。结果NAC可以减少小鼠灌胃给酒后的醉酒率,延长醉酒的潜伏时间,对抗乙醇引起的攀网能力下降,增加肝脏ADH的活性,从而增加乙醇代谢速度,降低血中乙醇的浓度;增加肝脏SOD,GSH-Px,GST的活性,提高肝脏GSH的含量,有利于清除自由基;减少肝脏中MDA的含量。而且均存在剂量依赖关系。结论NAC能加速乙醇代谢及对抗乙醇的肝脏损害,其作用机制可能与其提高ADH及抗氧化酶活性、加速清除乙醇代谢过程中产生的自由基、减少过氧化脂质的生成有关。     

龙葵碱调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的 探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的作用机制.方法 透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端榆测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspase-3活性的变化.结果 在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态.TUNEL法发现龙葵碱高、中、低剂量组HepG2细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光.流式细胞术分析表明0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24 h凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%.同时,龙葵碱升高caspase-3活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达.结论 龙葵碱通过降低Bcl-2/Bax的值,激活caspase-3酶活性诱导HepG2细胞凋亡.     

龙葵碱对雄性小鼠睾丸支持细胞毒性的初步研究

目的 初步探讨龙葵碱对睾丸支持细胞的毒性。方法 原代培养睾丸支持细胞,MTT 法检测不同浓度龙葵碱对于支持细胞的毒性作用;激光共聚焦显微镜观察细胞内线粒体膜电位的变化以及［Ca²⁺］_i 的改变。结果 龙葵碱作用于睾丸支持细胞 72 h 的 IC₅₀ 为 22.29 μmol/L。随着剂量的增大,细胞内线粒体膜电位降低,［Ca²⁺］_i 升高。结论 龙葵碱通过损伤小鼠睾丸支持细胞线粒体,升高细胞 ［Ca²⁺］_i,从而对睾丸支持细胞产生毒性作用。     

咖啡因代谢物AFMU,1X的测定及其在N-乙酰化分型中的应用

 目的：建立一套测定咖啡因的2种主要代谢物AFMU和1X的高效液相色谱（HPLC）方法。方法：选用岛津Shim-Pack CLC-ODS柱，流动相为甲醇-乙腈-水-醋酸（12∶1．5∶86．45∶0．05）。对120名健康志愿者服用咖啡5g后4h～5h尿样进行测定，以AFMU与1X摩尔比作为代谢指标，并作频谱显示。结果：受试者可明显划分为快乙酰化者和慢乙酰化者，快、慢乙酰化表型之比101∶19。结论：咖啡因HPLC方法的建立及在N-乙酰化分型中的成功应用，为国内进行N-乙酰化分型提供了一种值得推广的新方法。     

龙葵碱对HepG2细胞内caspase-3及Bcl-2蛋白含量的影响

目的：观察龙葵碱对HepG2细胞内caspase-3及Bcl-2蛋白含量的影响，阐明龙葵碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制、方法：采用激光共聚焦扫描显微术和Western blot法检测caspase-3和Bcl-蛋白含量，并对二者在细胞内的位置进行定位．结果：龙葵碱能够显著升高HepG2细胞内caspase-3蛋白含量，降低Bcl-2的含量，并且均具有剂量依赖性，Bcl-2蛋白和caspase-3蛋白均在细胞浆内呈不均匀分布，在细胞核中无分布，龙葵碱对二者的分布没有影响.结论：龙葵碱通过抑制Bcl-2的活性，激活easpase-3蛋白，诱导细胞凋亡的发生.     

紫杉醇联合三尖杉宁碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的:以HepG2细胞作为体外模型,研究紫杉醇与三尖杉宁碱联合作用抑制肿瘤细胞增殖及凋亡双重作用。方法:MTT法检测不同浓度紫杉醇、三尖杉宁碱单药及不同联合给药方案对HepG2细胞的生长抑制作用;以PI染色法流式细胞仪分析不同给药方案对HepG2细胞周期分布的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法分析不同联合给药方案对HepG2细胞凋亡的影响。结果:MTT法证实不同给药方案对HepG2细胞抑制强度不同,紫杉醇和三尖杉宁碱同时给药无明显协同作用;先给予三尖杉宁碱24 h再给予紫杉醇和先给予紫杉醇24 h再给予三尖杉宁碱可见明显协同作用,先给予紫杉醇24 h再给予三尖杉宁碱协同作用更加明显,流式细胞仪检测结果显示,紫杉醇与三尖杉宁碱联合用药较二者单独用药可诱导更多HepG2细胞凋亡。结论:紫杉醇与三尖杉宁碱联合应用可协同抑制HepG2细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。     

姜黄素对人肝细胞HepG2中低密度脂蛋白受体基因表达影响的研究

 目的研究不同浓度姜黄素对人肝细胞HepG2中内源低密度脂蛋白受体(LDLR)表达的影响,在受体水平上探讨姜黄素的调脂作用机制。方法以荧光试剂标记配体法,利用流式细胞仪技术和荧光显微镜技术研究姜黄素对HepG2细胞LDLR表达活性的影响。利用细胞免疫技术、结合荧光显微镜技术流式细胞术研究姜黄素对HepG2细胞LDLR表达数量的影响。结果姜黄素可显著增加人肝细胞HepG2内源LDLR的表达(P<0.05)。结论姜黄素能够通过增加人肝细胞HepG2 LDLR的表达起到调节血脂和抗动脉粥样硬化的作用。     

番荔枝内酯化合物对人肝癌细胞株HepG2的作用

目的研究番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用。方法设AS-4不同浓度组(6.25、12.5、25、50μg/mL)、顺铂阳性对照组(25μg/mL)和空白对照组,常规培养24、48h,进行MTT比色试验和倒置相差显微镜观察。结果AS-4可明显抑制HepG2细胞的生长,最高抑制效应达到91.68%,且有细胞毒性的时间和剂量依赖关系,48hIC50为6.67μg/mL。结论番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2有杀伤作用,显示出较强的细胞毒活性。     

ERK1/2在黄芪多糖促进HepG2细胞凋亡中的作用

目的:阐明黄芪多糖与ERK1/2通路在HepG2细胞凋亡中的作用.方法:实验分为4组:空白对照组(control);B组,20 mg?L-1黄芪多糖3个剂量处理组(AP,20,40,80 mg?L-1黄芪多糖处理组( AP,40,80 mg?L-1),药物处理24 h后检测各指标.应用Western blot,MTT,TUNEL,线粒体膜电势检测等方法检测黄芪多糖对HepG2细胞生存凋亡及细胞中ERK1/2表达量的影响.结果:MTT与TUNEL表明黄芪多糖对HepG2细胞的凋亡具有促进作用,增加HepG2细胞的caspase-3的活性,降低(HepG2)细胞线粒体的膜电位,降低Bcl-2表达;黄芪多糖可以降低ERK1/2的表达,表明黄芪多糖的凋亡促进作用可能通过ERK1/2途径.结论:黄芪多糖可以通过抑制ERK1/2信号通路促进HepG2细胞的凋亡.     

半枝莲对人肝癌细胞株HepG2细胞黏附的影响

目的观察半枝莲对人肝癌细胞株HepG2细胞黏附的影响,探讨其抑瘤机制。方法 40只Wistar大鼠随机分为空白组及半枝莲小、中、大剂量组,分别早晚灌胃给药,半枝莲小、中、大剂量组给药量分别为0.75、1.50、3.00 g/mL,空白组给予等量生理盐水,连续4 d,第5日取血,分离血清,分别作用于等量HepG2细胞,MTT法检测各组细胞黏附情况。结果半枝莲组与空白组相比,能明显抑制HepG2细胞的黏附（P〈0.05）,呈明显的量效关系。结论半枝莲可能通过抑制肿瘤细胞的黏附来发挥抗肿瘤的作用。     

小柴胡汤对体外培养人肝癌细胞株HepG2增殖的影响

目的探讨小柴胡汤45%乙醇提取物对体外培养人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其可能的机理。方法采用ATP-Lite法测定不同浓度小柴胡汤对体外培养的HepG2增殖的作用,同时利用氧自由基清除能(ORAC)法测定样品的抗氧化活性;以LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO),Griess法测定NO的终产物亚硝酸盐的含量,观察样品对NO生成的影响。结果小柴胡汤在62.5～500mg/L浓度范围内可以显著抑制HepG2增殖,抑制作用呈剂量相关性,计算半数抑制浓度(IC50)为(90.7±23.7)mg/L。小柴胡汤提取物具有一定的抗氧化活性,其抗氧化能力为阳性对照维生素C的1.3倍。小柴胡汤在3.125～50mg/L浓度范围内均可以显著抑制NO的生成(P0.05,P0.01)。结论小柴胡汤具有体外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,其抑制作用可能与其抗氧化活性及抑制NO生成有关。     

姜黄素对HepG2细胞蛋白质组的影响

目的:应用双向电泳和质谱技术研究姜黄素对HepG2细胞蛋白质组的影响。方法:双向电泳分离HepG2细胞和经过30μmol/L姜黄素处理的HepG2细胞蛋白质,经银染后扫描得到蛋白质组图谱,用Image Master2D 6.0软件进行差异蛋白质组分析,筛选差异在2倍以上的蛋白质作为差异蛋白,进行质谱鉴定,并用RT-PCR方法进行初步验证。结果:经姜黄素处理后,HepG2细胞中蛋白质二硫键异构酶、复制蛋白A2、肉碱缺乏症相关蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子表达量增加,而增殖细胞核抗原、内质网60蛋白酶、Ran结合蛋白1、Stathmin 1/oncoprotein 18、Nm23蛋白表达量降低。结论:姜黄素可以通过干扰细胞周期变化、抑制肿瘤细胞的生长、促进细胞凋亡、抑制肿瘤浸润与转移及促进细胞损伤修复而起到抗肿瘤作用,此外,姜黄素降血脂和抗动脉粥样硬化作用可能与促进脂肪酸跨膜转运、维护细胞膜稳定性相关。