"冬病夏治"方药穴位贴敷治疗哮喘豚鼠的尿液代谢组学研究

目的: 采用代谢组学方法,研究"冬病夏治"方药穴位贴敷法治疗哮喘豚鼠的机制。 方法: 通过超高效液相色谱结合高分辨率质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)技术分析空白组、卵蛋白致敏的豚鼠哮喘模型组及中药穴位贴敷组豚鼠尿液代谢物图谱.使用SIMCA-P+软件正交偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)对采集的数据进行处理。 结果: 哮喘模型组和空白组、穴位给药组与哮喘模型组分别呈现聚类分布,2组之间未见任何交叉与重叠,得到了明显区分。初步确认氮4-乙酰基胞苷(N4-acetylcytidine,ac4c)、6-甲基腺苷(6-methyladinosinek,m6a)以及未确定化合物(荷质比为365.14)为哮喘发作潜在的生物标志物。甲基戊二酸、1-甲基次黄苷为冬病夏治方治疗哮喘潜在的生物标志物。 结论: 本研究建立了基于豚鼠尿液的UPLC-Q-TOF-MS代谢组学研究方法,初步阐释了"冬病夏治"方药治疗哮喘的代谢组学机制。研究结果对用现代生物科学技术解释传统中药制剂理论有一定的启发作用。     

咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠嗜酸细胞趋化因子和组胺的影响

目的观察咳喘膏对哮喘豚鼠嗜酸细胞趋化因子、组胺的影响,探讨其作用机制。方法将豚鼠随机分为对照组,模型组,地塞米松组,咳喘膏穴位贴药1、3、6h组,每组各10例。卵蛋白致敏并诱发哮喘,行穴位贴敷。检测各组嗜酸性粒细胞趋化因子、血组胺水平。结果咳喘膏穴位贴敷各组嗜酸性粒细胞趋化因子、组胺较模型明显减低。结论咳喘膏穴位贴敷可改善豚鼠哮喘气道炎性反应。     

冬病夏治方穴位贴敷对哮喘豚鼠气道炎症及肠道菌群的影响

目的:探究冬病夏治方穴位贴敷给药对哮喘豚鼠的治疗作用及其对肠道菌群的影响。方法:将75只豚鼠随机分成空白组、哮喘模型组、阳性(地塞米松磷酸钠)组、穴位给药组、非穴位给药组(n=15),采用卵蛋白注射及雾化吸入的方法建立豚鼠哮喘模型,通过肺组织病理苏木素-伊红(HE),马松(Masson)染色观察冬病夏治方对豚鼠哮喘的治疗效果。提取豚鼠粪便总基因组DNA,对16 S rRNA V4可变区基因进行PCR扩增及Illumina Hi Seq测序,将基因序列相似度高于97%的序列进行聚类归并,并进行生物信息学分析。结果:与哮喘模型组比较,各给药组豚鼠肺组织炎症细胞减少,支气管收缩、气道上皮增生症状改善明显,恢复良好,胶原纤维沉积均有不同程度减少,且地塞米松磷酸钠组与穴位给药组的减少程度明显,穴位给药组的治疗效果优于非穴位给药组。通过操作分类单元(OTU)及其丰度分析发现,冬病夏治方穴位贴敷给药后豚鼠的肠道菌群多样性升高,普氏菌属显著增多,拟杆菌门减少,变形菌增多;哮喘模型组厚壁菌数目较空白组及各给药组减少。结论:冬病夏治方穴位贴敷能有效治疗哮喘,改善哮喘症状,调控哮喘豚鼠肠道菌群的构成。提示该方可能通过调控肠道菌群从而影响机体免疫,达到治疗哮喘的效果,为研究哮喘的治疗机制提供一定的理论基础。     

穴位贴敷经皮给药药贴对哮喘豚鼠支气管肺组织中基质金属蛋白酶-9的影响

目的观察穴位经皮给药药贴对实验性哮喘豚鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响。方法将48只豚鼠随机分为正常对照组、模型组、地塞米松组和经皮给药药贴组各12只,用卵蛋白致敏法制作实验性过敏性哮喘模型。经皮给药药贴组予穴位贴敷经皮给药药贴,地塞米松组予腹腔注射地塞米松。结果模型组豚鼠肺组织中MMP-9水平明显高于正常对照组(P0.05),经皮给药药贴组、地塞米松组MMP-9水平均明显低于模型组(P均0.05),均高于正常对照组(P均0.05)。经皮给药药贴组、地塞米松组MMP-9水平无显著性差异(P0.05)。结论穴位贴敷经皮给药药贴可通过降低MMP-9水平,对支气管哮喘产生治疗作用。     

"咳喘宁"贴膏对支气管哮喘模型大鼠血清IgE影响的研究

目的:通过建立大鼠支气管哮喘模型,观察穴位贴敷"咳喘宁"贴膏对支气管哮喘模型大鼠血清IgE的影响.方法:将60只Wistar大鼠适应性喂养1周后,按数字随机表分组法随机分为空白对照组(A组)、模型对照组(B组)、内服"桂龙咳喘宁"对照组(C组)、内服"地塞米松"对照组(D组)、穴位贴敷"咳喘宁"高剂量治疗组(E组)、穴位贴敷"咳喘宁"低剂量治疗组(F组)6组,每组10只.各组大鼠用Elwood法造模.于诱喘前10h开始给药,并分别观察各组大鼠血清IgE含量的变化.结果:模型对照组大鼠血清IgE含量明显高于空白对照组(P＜0.01);各治疗组大鼠血清IgE明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01).其中穴位贴敷"咳喘宁"贴膏能明显降低IgE含量,虽不及内服"地塞米松"组,但等同内服"桂龙咳喘宁"组.结论:"咳喘宁"贴膏能降低哮喘大鼠血清IgE水平,减轻免疫炎性反应,对哮喘有较好的防治作用.     

咳喘灵贴膏贴敷穴位治疗豚鼠哮喘的实验研究

哮喘是一种以嗜酸性粒细胞(EOS)、肥大细胞反应为主,淋巴细胞和巨噬细胞浸润为辅的气道炎症性疾病.目的:探讨咳喘灵贴膏贴敷穴位对哮喘豚鼠血清总IgE、EOS、IgG及IL-4的影响,阐明其药治疗哮喘的作用机制.方法:采用腹腔注射卵蛋白致敏法,建立豚鼠哮喘模型,设空白组、模型组、内服组、穴贴组,采用放免法检测血清总IgE、IgG和IL-4的含量用常规法检测EOS计数.结果:咳喘灵贴膏贴敷穴位较空白组可明显降低EOS计数(P＜0.01),提高IgG含量(P＜0.01),对IgE和IL-4无明显影响.与内服组比较,穴贴组降低EOS计数和提高IgG含量较内服组更明显(P＜0.05),IgE,IL-4的含量无显著性差异.结论:咳喘灵贴膏贴敷穴位可降低血中EOS计数(P＜0.01),提高IgG含量(P＜0.01),减轻哮喘气道高反应性,并能提高机体的免疫力,具有良好的平喘、化痰、固本作用.     

白芥子涂法穴位贴敷调控TGFβ/MAPK/MMPs通路保护过敏性哮喘豚鼠气道上皮屏障作用的研究

目的:研究白芥子涂法穴位贴敷对哮喘豚鼠的保护作用机制。方法:将豚鼠分为正常组、模型组、贴敷治疗组,OVA致敏,首次激发后,行每周一次的贴敷治疗,共3次。HE染色检测炎症水平、明胶酶谱法检测肺组织金属蛋白酶活性,Western Blot法检测TGFβ、MMP9及Pan-cadherin及磷酸化和非磷酸化Erk1/2、p38的含量。结果:白芥子涂法穴位贴敷能明显减轻哮喘豚鼠的炎症,降低肺组织TGFβ水平并通过抑制Erk1/2及p38MAPK磷酸化,降低肺组织中金属蛋白酶活性、MMP9含量,减少气道上皮屏障关键蛋白Pan-Cadherin破坏。结论:白芥子涂法穴位贴敷可能是通过降低TGFβ-Erk1/2、p38途径抑制金属蛋白酶表达和活性,保护胞外基质细胞连接蛋白,起到防治过敏性支气管哮喘的作用。     

基于血清代谢组学与网络药理学研究咳喘停穴位贴敷治疗哮喘的效应物质与作用机制

基于血清代谢组学和网络药理学研究咳喘停穴位贴敷治疗哮喘的效应物质及作用机制。将60例长期使用低剂量吸入性糖皮质激素-福莫特罗(ICS-formoterol)的哮喘患者随机分为西药组(30例)和西药+咳喘停组(30例),另纳入30名健康人为健康对照组。其中西药组予以低剂量ICS-formoterol治疗,西药+咳喘停组在西药基础上进行咳喘停穴位贴敷,健康对照组不进行任何干预。哮喘患者在治疗前、后进行哮喘控制测试(ACT)评分、肺功能指标第1秒用力呼气容积(FEV1)、呼气流量峰值(PEF)等疗效评价。采用气相色谱-质谱联用的代谢组学技术,结合多元数据统计筛选咳喘停穴位贴敷治疗哮喘的潜在生物标志物,进一步分析相关代谢通路。采用UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技术结合网络药理学,构建咳喘停穴位贴敷治疗哮喘的“成分-靶点-通路”网络,探讨咳喘停穴位贴敷治疗哮喘的效应物质及作用机制。ACT评分、FEV1、PEF结果表明咳喘停穴位贴敷治疗哮喘具有较好的疗效。血清代谢组学共筛选出10个咳喘停穴位贴敷治疗哮喘的内源性生物标志物,获取了甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,乙醛酸和二羧酸代谢等代谢通路。U...     

白芥子涂法穴位贴敷对豚鼠支气管哮喘气道高反应性和肺组织TRPV1表达影响的研究

目的:研究白芥子涂法穴位贴敷对哮喘豚鼠的抗气道高反应性作用,并初步探讨其机制。方法:将豚鼠分为正常组、哮喘组、贴敷治疗组。模型采用OVA致敏法,首次激发后,行每周一次的白芥子涂法贴敷,共3次。末次激发后24 h,小动物呼吸功能测试仪检测呼气阻力、吸气阻力、肺顺应性,HE染色检测肺组织炎症,免疫组化法检测肺组织TRPV1的定位与表达,免疫印迹法检测肺组织TRPV1蛋白的表达水平。结果:与正常组相比,哮喘组豚鼠呼气阻力、吸气阻力明显上升,肺顺应性明显下降,TRPV1表达略有上升(P0.05);与哮喘组相比,贴敷治疗组豚鼠哮喘组豚鼠呼气阻力、吸气阻力显著下降,肺顺应性上升,TRPV1表达显著下调(P0.05)。结论:白芥子涂法穴位贴敷可能通过调节肺组织TRPV1,降低哮喘中的气道高反应性感性。     

咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠氨茶碱药代动力学影响的研究

[目的]研究中药咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠氨茶碱药代动力学的影响,探讨其可能机制。[方法]将30只豚鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、咳喘膏高、中、低剂量组,每组6只。采用卵蛋白致敏-雾化激发方法复制豚鼠支气管哮喘模型。豚鼠均予氨茶碱灌胃,咳喘膏高、中、低剂量组予咳喘膏穴位贴敷,按设定时点经豚鼠内眦取血,高效液相色谱法检测氨茶碱血药浓度,DAS2.0药代动力学软件计算氨茶碱药代动力学参数。[结果]咳喘膏高剂量组与正常组、模型组及低剂量组比较,氨茶碱半衰期(T1/2)延长(P=0.007,P=0.022,P=0.028)、消除速率常数(Ke)减低(P=0.005,P=0.012,P=0.015),差异有统计学意义;咳喘膏中剂量组与正常组比较,氨茶碱T1/2延长(P=0.029)、Ke减低(P=0.047),差异有统计学意义。[结论]咳喘膏穴位贴敷可影响氨茶碱药代动力学,使氨茶碱T1/2延长,Ke减低。可以通过调控咳喘膏药物颗粒直径的方法,减小咳喘膏穴位贴敷对氨茶碱药代动力学影响。     

喘敷灵敷贴对哮喘豚鼠肺组织一氧化氮和一氧化氮合酶浓度的影响

目的观察喘敷灵敷贴对哮喘豚鼠肺组织中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)浓度的影响,探讨喘敷灵敷贴防治哮喘的机制。方法将40只健康豚鼠随机分为正常组、造模组、中药组、西药组,以卵蛋白致敏豚鼠并诱喘成功后,分别予喘敷灵穴位敷贴、西药酮替芬等不同治疗后,测定各组豚鼠肺组织中NO、NOS水平。结果造模组豚鼠肺组织中NO、NOS水平较正常组明显升高(P<0.01),中药组豚鼠肺组织NO、NOS水平较造模组明显降低。结论中药喘敷灵穴位敷贴可降低哮喘豚鼠肺组织NO、NOS水平,对哮喘有一定的防治作用。     

咳喘宁治疗支气管哮喘的药效学研究

目的：探讨咳喘宁治疗支气管哮喘的药效学机理。方法：采用磷酸组胺致喘法观察咳喘宁对哮喘豚鼠模型的影响;采用浓氨水致咳法观察咳喘宁对致咳小鼠模型的影响;采用酚红排泌试验观察咳喘宁的祛痰作用。结果：与模型组比较,各治疗组引喘潜伏期和致咳潜伏期明显延长,咳嗽次数明显减少,酚红排泌量明显增加（P〈0．05或P〈0．01）;高剂量组引喘潜伏期和致咳潜伏期长于桂龙咳喘宁组,酚红排泌量多于桂龙咳喘宁组（P〉0．05）。结论：咳喘宁具有显著的平喘、止咳、祛痰的作用。     

洋金花治疗银屑病有效部位的药理作用研究(Ⅰ)——抗炎、抗瘙痒及抗过敏作用

目的:阐明洋金花治疗银屑病有效部位的抗炎、抗瘙痒及抗过敏作用。方法:以二甲苯致小鼠耳肿胀法和10%蛋清致大鼠足肿胀法进行抗炎作用研究;用0.35%磷酸组织胺刺激豚鼠皮肤考察抗搔痒作用;以氯化乙酰胆碱和组织胺混合液引起的豚鼠喘息性抽搐为指标考察抗过敏作用。结果:洋金花治疗银屑病有效部位可明显抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀和蛋清引起的大鼠足肿胀;可使组织胺所致豚鼠皮肤搔痒的组织胺用量明显增加;对乙酰胆碱和组织胺混合液所引起的豚鼠变态反应性哮喘的发作潜伏期明显延长。结论:洋金花治疗银屑病有效部位具有较强的抗炎、抗皮肤瘙痒及抗过敏等药理作用。     

龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的比较研究

目的：通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的影响,比较在生理及病理状况下龟鹿二仙胶汤及拆方各药物的作用。方法：取1月龄SD大鼠和4月龄豚鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,运用MTT法比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对不同软骨细胞增殖的影响。结果：中药血清各组对SD大鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用,西药组明显高于中药各组;龟板与全方效果相当。中药血清各组对豚鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用。龟鹿二仙胶、龟板促增殖效果与西药相比差异无统计学意义。人参的促增殖作用也比作用于正常软骨细胞时有所增强。结论：在病理状态下,龟鹿二仙胶、龟板的促增殖作用明显增强,人参在细胞机能状况下降时才明显发挥补虚作用。     

桑通颗粒的主要药效学研究

目的:观察桑通颗粒的止咳、祛痰、平喘作用。方法:将实验动物随机分为5组,即空白对照组,桑通颗粒高、中、低剂量组和阳性对照组;采用氨水引咳法观察桑通颗粒对致咳小鼠模型的影响;采用酚红排泌试验观察桑通颗粒的祛痰作用;采用磷酸组胺-乙酰胆碱引喘法观察桑通颗粒对致喘豚鼠模型的影响。结果:与空白对照组比较,桑通颗粒各治疗组致咳潜伏期和引喘潜伏期明显延长,咳嗽次数明显减少,酚红排泌量明显增加(P<0.05或P<0.01);桑通颗粒各组与阳性对照组比较,差别无统计学意义(P>0.05)。结论:桑通颗粒具有较好的止咳、祛痰、平喘的作用。     

西洋参抗疲劳作用及对迟发型超敏反应单核吞噬细胞功能影响的实验研究

目的:观察西洋参抗疲劳作用,对迟发型超敏反应强度、单核吞噬细胞功能的影响。方法:通过游泳法,观察西洋参对氢化可的松所致阴虚小鼠的游泳生存时间的影响;采用溶血空斑法,观察西洋参对豚鼠迟发型超敏反应强度的影响;采用小鼠碳粒廓清法,观察西洋参对小鼠单核细胞吞噬指数的影响。结果:西洋参能显著延长阴虚小鼠的游泳时间,与模型对照组比较,高、低剂量组均有显著性差异(P<0.01,P<0.05);可显著提高豚鼠迟发型超敏反应的强度,空斑实验比色OD值与模型对照组比较,高、低剂量组均有显著性差异(P<0.01);可提高小鼠单核细胞的吞噬指数,高、低剂量组与模型对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:西洋参可显著提高氢化可的松所致阴虚小鼠免疫能力;提高迟发型超敏反应的强度和小鼠单核吞噬细胞的能力。说明该药具有提高机体免疫力,扶正固本的作用。     

穴位贴敷联合益气固本膏方治疗对支气管哮喘儿童吸入激素的疗效影响

目的:观察穴位贴敷联合益气固本膏方治疗对儿童哮喘吸入型激素的疗效影响。方法:把124例符合断标准的支气管哮喘患儿分为4组:A组为单纯使用吸入型激素;B组为加用夏季穴位贴敷;C组为加用冬季益气固本膏方;D组为加用夏季穴位贴敷联合冬季益气固本膏方。观察哮喘急性发作次数、感冒次数、急性发作时需要雾化吸入的疗程及一年后吸入激素停药比例,并检测治疗前后IgE、IgA、IgG、CD4、CD8浓度。结果:治疗一年后,加用中医治疗三组临床疗效、血IgE及CD8下降、IgG及CD4升高均优于A组,尤以D组为显著(P0.05),其中D组总有效率为94.29%、吸入激素停药比例为34.29%而A组总有效率为76.67%、吸入激素停药比例为16.67%。结论在吸入型激素治疗基础上,加用中医穴位贴敷及益气固本膏方治疗能提高哮喘患儿免疫功能,改善过敏状态,从而减少吸入激素使用疗程,尤以两者合用疗效更佳。     

中医药治疗支气管哮喘临床观察

目的 :通过临床实验 ,观察珠贝定喘丸和金喉健气雾剂对支气管哮喘急性发作期患者的临床疗效。方法 :将具有支气管哮喘典型临床表现并为急性发作期的患者 4 2例随机分为两组 ,治疗组服用珠贝定喘丸并金喉健气雾剂雾化吸入 ,同时寒哮方选射干麻黄汤合小青龙汤加减 ,热哮方选清肺定喘汤 ;对照组予以西医常规治疗。结果 :两组疾病疗效、证候疗效比较 ,差异无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ;两组患者治疗前证候积分无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,治疗后证候积分较治疗前显著降低 (P <0 .0 5 ) ,治疗后组间比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;患者血清EOS变化两组患者治疗前无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,治疗后均有显著性降低 (P <0 .0 5 ) ,且对照组更为显著。结论 :中医药对支气管哮喘患者症状改善有较明显的作用 ,能有效降低患者血清EOS水平 ,从而抑制炎性介质的释放 ,减轻气道高反应状态。     

基于代谢组学的苍耳子配伍黄芪后减毒作用研究

目的:利用代谢组学技术,研究苍耳子及其配伍黄芪后,大鼠肝脏组织病理、血浆生化指标、尿液代谢图谱的变化,探讨黄芪配伍苍耳子对肝脏的减毒作用。方法:大鼠30只随机分为正常对照组、苍耳子组(21.0g/kg)、黄芪配伍组(31.5g/kg),灌胃给药,连续给药28d,收集大鼠24h尿液,测定尿液UPLC-TOF-MS图谱;肝门取血做生化检测;取肝脏做组织病理学检查。结果:给药28d,苍耳子组及黄芪配伍组较对照组ALT、AST均升高,肝组织出现病理改变;黄芪配伍组较苍耳子组ALT、AST降低,肝组织病变明显减轻。苍耳子组、黄芪配伍组尿液代谢物表型的聚类分布均偏离对照组,但黄芪配伍组尿液代谢物表型的聚类分布位于对照组与苍耳子组之间。结论:苍耳子(21.0g/kg)长期给药可造成肝功能的明显损害,配伍黄芪后(31.5g/kg)具有一定的减毒作用。     

理肺化瘀方治疗支气管哮喘疗效及对患者血清内IgG、IgA、IgM的变化研究

目的:分析理肺化瘀方对支气管哮喘患者的疗效及患者血清内免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M的变化。方法:选取支气管哮喘患者302例,根据治疗方法不同分为两组,每组151例。对照组给予常规治疗,观察组在对照组基础上给予自拟理肺化瘀方剂治疗,分析两组患者治疗后的临床疗效。结果:治疗后,观察组喘息、哮鸣音积分及嗜酸性粒细胞(EOS)、白三烯D4(LTD4)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、二氧化碳分压(PaCO₂)、免疫球蛋白E(lgE)水平低于对照组,环磷酸腺苷(cAMP)、酸碱度(pH)、氧分压(PaO₂)、IgG、IgA、IgM水平高于对照组(P<0.05)。结论:自拟理肺化瘀方剂治疗支气管哮喘,可改善患者临床症状、血气指标及免疫功能。