细胞自噬调控上皮间质转化在肺纤维化中的作用机制

目的 探讨细胞自噬在特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)中的作用机制及其变化对调控肺泡上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,为进一步阐明IPF的发病机制提供实验依据.方法 采用倒置显微镜观察不同浓度转化生长因子(...     

基质金属蛋白酶-11对骨肉瘤细胞上皮-间质转化的调控作用

目的 观察基质金属蛋白酶-11(matrix metalloproteinase-11, MMP-11)对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、转移的影响,探讨其对骨肉瘤细胞上皮-间质转化的调控作用。方法 对数生长期Saos-2细胞随机分为空白对照组(正常培养)、siRNA-MMP-11组(转染siRNA-MMP-11)、ovRNA-MMP-11组(转染ovRNA-MMP-11)。转染48 h采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞MMP-11 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞E-cadherin、N-cadherin、MMP-11蛋白相对表达量,采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数,采用划痕实验检测迁移细胞数;采用MTT法检测转染后培养72 h时3组细胞增殖率。结果 转染48 h, ovRNA-MMP-11组MMP-11 mRNA和蛋白相对表达量(1.511±0.082、1.688±0.115)均高于空白对照组(1.339±0.211、1.024±0.066)、siRNA-MMP-11组(1.147±0.382、0.382±0.068)(P<0.05),空白对照组...     

线粒体质量控制调控上皮-间质转化在肾间质纤维化中作用机制的研究进展

肾间质纤维化是各种慢性肾脏病进展至终末期肾病的共同病理过程,上皮-间质转化是肾间质纤维化的关键环节。线粒体是调控机体内环境稳态平衡的重要细胞器,其可通过细胞呼吸产生三磷酸腺苷,在肾间质纤维化过程中发挥重要作用。线粒体质量控制通过线粒体自噬、线粒体动力学及线粒体生物合成调控肾间质纤维化。本文就线粒体质量控制调控上皮-间质转化在肾间质纤维化中作用机制的研究进展作一综述。     

活性氧对卵巢癌上皮-间质转化作用研究进展

上皮-间质转化与上皮性卵巢肿瘤的侵袭和转移密切相关,氧化应激对疾病的发生、发展有重要影响。活性氧作为氧化应激过程中的重要产物,在卵巢癌细胞上皮-间质转化中通过对多种因子的调节参与卵巢癌细胞增殖分化、黏附和迁移等,在卵巢癌的诊断、治疗及预后中有重要作用。本文就活性氧对卵巢癌上皮-间质转化作用的研究进展作一综述。     

头颈部鳞状细胞癌细胞中的上皮间质转化机制

上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)对肿瘤转移过程至关重要。在EMT形成中,两个EMT标志性蛋白E-钙粘蛋白和波形蛋白是通过多个信号转导通路被严格控制的。表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和转换生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)通过调节一组独特的转录因子促进EMT的形成,这些独特的转录因子包括Snail和Twist。Snail、Twist和Slug通过直接调控参与细胞黏附、迁移和侵袭的基因诱导EMT的发生。本文将重点阐述头颈部鳞状细胞癌细胞中EMT发生过程中的分子机制,为进一步研究头颈部鳞状细胞癌的转移机制提供理论基础。     

幽门螺杆菌诱导上皮-间质转化在胃癌中的作用机制

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)是一种单极、微需氧、多鞭毛、螺旋形的革兰氏阴性菌,可在人胃黏膜上存活并定植。Hp作为与胃癌相关的Ⅰ类致癌物,其对胃黏膜的长期刺激可导致萎缩性胃炎、消化性溃疡、胃癌和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等多种疾病。研究表明,Hp感染可诱导胃上皮细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT),而EMT的异常调控则会导致胃癌发生。本文就Hp诱导胃上皮细胞发生EMT致胃癌的相关机制研究展开综述,为胃癌的早期诊断和靶向治疗提供新思路。     

白细胞介素-22对转化生长因子β1诱导的大鼠肝细胞上皮-间质转化的调控作用

目的研究白细胞介素-22(IL-22)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肝细胞上皮-间质转化(EMT)的调控作用。方法将大鼠正常肝细胞BRL-3A细胞分为空白对照组、模型对照组和梯度浓度的重组IL-22(1、10、50 ng/ml)干预组,除空白对照组外,各组均给予2 ng/ml的TGF-β1进行刺激,培养48 h,实时荧光定量PCR检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)m RNA的表达量;Western blot检测E-cadherin、vimentin蛋白的表达量。结果空白对照组vimentin m RNA和蛋白的相对表达量分别为0.99±0.11、0.67±0.08,E-cadherin m RNA和蛋白的相对表达量分别为0.98±0.08、0.77±0.06;与空白对照组相比,模型对照组vimentin m RNA(1.24±0.02)和蛋白(0.96±0.06)的表达均增强(t值为-3.805和-4.946,均P<0.05),E-cadherin m RNA(0.81±0.06)和蛋白(0.58±0.03)的表达均减弱(t值为2.868和4.890,均P<0.05)。与模型对照组相比,梯度浓度重组IL-22干预组vimentin m RNA(0.97±0.10、0.57±0.03、0.30±0.77)和蛋白(0.86±0.03、0.74±0.02、0.61±0.04)的表达均减弱(F值为115.068和45.057,均P<0.05),E-cadherin m RNA(1.03±0.07、1.31±0.02、1.61±0.09)和蛋白(0.70±0.02、0.80±0.03、0.88±0.03)的表达均增强(F值为81.163和59.197,均P<0.05);梯度浓度的重组IL-22(1、10、50 ng/ml)干预组之间比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 TGF-β1能诱导大鼠肝细胞发生EMT,IL-22能够逆转TGF-β1介导的EMT,且呈剂量依赖性。     

LGR5对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制研究

目的探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制。方法采用前瞻性研究,以宫颈癌细胞Hela为研究对象,构建过表达和敲低LGR5的细胞株,RT-PCR和Western blot检测LGR5表达。将转染pc DNA3.1-LGR5的Hela细胞作为LGR5组,以转染pc DNA3.1空载体的细胞记为pc DNA3.1组;将转染LGR5 siRNA细胞作为si LGR5组,以转染阴性对照siRNA细胞记为NC组。Western blot分别检测各组细胞中上皮间质标记物钙黏附蛋白E(E-cadherin)、钙黏附蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及Wnt/β-cadherin通路蛋白β链蛋白(β-catenin)和下游蛋白c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin D1)表达变化。Transwell实验检测各组细胞迁移侵袭能力变化。结果 Hela细胞中成功过表达和敲低了LGR5;与pc DNA3.1组相比,Hela细胞转染pc DNA3.1-LGR5后细胞中上皮标志物E-cadherin表达显著降低(P0.05),间质标记物vimentin、N-cadherin表达显著增加(P0.05)。与NC组相比,Hela细胞转染si LGR5后细胞中E-cadherin表达明显增加(P0.05),vimentin、Ncadherin表达明显下降(P0.05)。与pc DNA3.1组相比,Hela细胞过表达LGR5后细胞迁移侵袭能力、Wnt/β-catenin通路蛋白β-catenin及其下游基因c-Myc、Cyclin D1表达均显著增加(P0.05);而Hela细胞沉默LGR5后较NC组细胞迁移侵袭能力、Hela细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达均明显降低(P0.05)。结论过表达LGR5能够促进宫颈癌细胞Hela上皮间质转化和侵袭迁移,而干扰LGR5则抑制了细胞上皮间质转化和迁移侵袭,其中机制可能与LGR5调控Wnt/β-catenin信号转导有关。     

miR-338-3p对甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化的调控作用

目的 探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)过表达靶向沉默信息调节因子（SIRT）6对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化（EMT）的影响。方法 采用荧光素酶报告实验分析miR-338-3p与SIRT6的靶向关系。构建SIRT6 pcDNA载体过表达SIRT6,将miR-338-3p mimic与pcDNA-SIRT6单独或联合转染至TPC-1细胞,根据转染质粒的不同分为6组：对照组（不作处理）、mimic-NC组（转染mimicNC）、miR-338-3pmimic组（转染miR-338-3pmimic）、pcDNA-SIRT6组（转染pcDNA-SIRT6）、mimicNC+pcDNA-SIRT6组（共转染mimic-NC和pcDNA-SIRT6）和miR-338-3p mimic+pcDNA-SIRT6组（共转染miR-338-3p mimic和pcDNA-SIRT6）。分别检测各组TPC-1细胞的克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率及上皮型钙黏蛋白（E-cad）、神经型钙黏蛋白（N-cad）和波形蛋白的表达量。结果 miR-338-3p的...     

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA X失活特异转录物（lncRNA XIST）通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系;划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA和蛋白表达。结果 在卵巢癌组织和细胞系中,lncRNA XIST高表达,miR-340-5p低表达（P <0.05）。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达（P ...     

沉默Tiam1基因对大肠癌LoVo细胞上皮-间质转化的影响

目的:探讨RNAi技术沉默Tiam1对大肠癌LoVo细胞上皮-间质转化(EMT)的影响.方法:应用RNAi技术将Tiam1的特异性干扰片段转染处理LoVo细胞,采用Real time-RT PCR方法检测Tiam1表达水平和沉默前后LoVo细胞E-cadherin、Vimentin、RhoA、RhoC、Rac1的表达水平;扫描电镜、透射电镜,HE染色观察细胞结构及形态变化;考马斯亮蓝染色观察细胞骨架变化.结果:与对照组比较,RNAi组的Tiam1 mRNA表达水平明显降低;RNAi组的E-cadherin mRNA表达水平比对照组上调,差异具有统计学意义(P ＜ 0.05),RNAi组Vimentin、RhoA、RhoC、Rac1的mRNA表达水平与对照组比较差异均无显著性(全部P ＞ 0.05);扫描电镜显示RNAi组细胞胞体比对照组变圆、细胞突起明显变短或消失,丝状微绒毛减少,变为扁平盘状突起;透射电镜显示RNAi组细胞表面丝状微绒毛比对照组有较明显减少;HE染色显示对照组细胞散在生长,呈细长梭形,RNAi组细胞生长较集中,呈圆形或类圆形;RNAi组细胞质中丝网状的骨架蛋白结构及点状肌动蛋白小体比对照组减少.结论:沉默Tiam1能在一定程度上使已发生EMT的大肠癌细胞出现上皮表型及降低其迁移运动能力,对EMT有一定程度的逆转作用,推测Tiam1通过诱导EMT来促进大肠癌侵袭、转移,至于其确切机制尚待进一步研究.     

启膈散对食管鳞状细胞癌上皮-间质转化的影响

目的探究中药方剂启膈散对食管癌细胞系上皮-间质转化的影响。方法启膈散经过煎煮、浓缩制备成为冻干粉。Eca109细胞分别与浓度为50、100、200μg/ml的启膈散共培养,用CCK-8法检测细胞增殖活性;用Transwell实验检测细胞迁移能力;用荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比,200μg/ml启膈散可以显著抑制细胞增殖;100μg/ml和200μg/ml启膈散可以显著抑制细胞迁移;随着启膈散浓度的升高,E-钙粘蛋白mRNA和蛋白水平表达量均上升,N-钙粘蛋白和波形蛋白mRNA及蛋白水平表达量均下降。结论启膈散抑制食管癌细胞上皮-间质转化并影响细胞迁移。     

中医药调控子宫内膜异位症上皮间质转化的研究进展

<正>子宫内膜异位症(简称内异症)是指在子宫腔以外的部位出现了具有生长功能的子宫内膜组织(腺体和间质),其主要症状为痛经、腹部包块和不孕。内异症是常见的妇科疑难病之一^[1],其形态学表现多为良性,但也有与恶性肿瘤相似的性质,如细胞种植、侵袭和远处转移^[2]。近年来相关研究发现,     

口腔鳞状细胞癌瘤芽与上皮-间质转化相关性分析及临床意义

目的:观察口腔鳞状细胞癌瘤芽(tumorbudding)与上皮–间质转化(EMT)相关性,进一步探讨其与临床病理特征及预后的关系。方法:收集我院2007年至2013年收治的30例口腔鳞状细胞癌患者手术切除的标本,根据HE染色瘤芽数量将其分为2组,低瘤芽组(≤5),高瘤芽组(5)。免疫组织化学观察切片组织波形蛋白(Vimentin)表达情况,分析瘤芽数量与上皮间质转化的相关性以及与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier法进行生存分析,组间差异采用Log-rank检验。结果:低瘤芽组共22例,高瘤芽组共18例,病理学检查发现瘤芽内肿瘤细胞形态与肿瘤主体细胞无差异,瘤芽数量与患者年龄、性别、无相关性,瘤芽与肿瘤大小、临床分期以及淋巴结转移呈正相关(P0.05),高瘤芽组其Vimentin的表达率明显高于低瘤芽组,提示瘤芽与口腔癌EMT过程相关,是EMT的形态学表现。两组患者的中位生存期(overallsurvival,OS)分别为40.4,26.5个月(χ2=5.265,P=0.012),两组中位无进展生存期(progression-freesurvival,PFS)分别为35.8,22.1个月(χ2=6.744,P=0.009)。结论:口腔鳞状细胞癌组织瘤芽数量与EMT密切相关,代表恶性和侵袭能力更高的癌细胞亚群,可作为口腔鳞状细胞癌患者的预后判断指标。     

同期放化疗诱导人结直肠癌细胞发生上皮-间质转化

目的:探讨放化疗抵抗的结直肠癌细胞发生上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的意义。方法:采用5-FU化疗同期进行放疗对人结直肠癌野生型细胞(HCT116)进行干预,诱导放化疗共同抵抗的细胞株(HCT116CRR)并采用克隆形成实验进行放化疗抵抗性的鉴定。高倍显微镜下观察细胞形态学变化。采用Real-time PCR和Western印迹,检测上皮表型标志物E-cadherin,间质表型标志物N-cadherin、波形蛋白(v imentin)、核转录因子(Snail)m RNA及其蛋白的表达。结果:放化疗抵抗的结直肠癌细胞发生与EMT相符的形态学改变,细胞呈纺锤体状,极性消失,并出现伪足;Real-time PCR和Western印迹结果显示E-cadherin m RNA及蛋白表达下调;N-cadherin,v imentin,Snail m RNA及蛋白表达上调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:放化疗抵抗后的人结直肠癌细胞发生EMT,其与结直肠癌的治疗抵抗相关。     

P120ctn基因沉默促进舌癌细胞上皮-间质转化

目的探索P120-连环蛋白(P120ctn)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)上皮-间质转化(EMT)中的作用。方法采用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染人舌鳞癌细胞(TSCCA),采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blot检测细胞中P120ctn、E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vim)的mRNA和蛋白表达的变化,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验检测转染前、后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染TSCCA后发现,随着P120ctn表达的明显降低,E-cad的mRNA和蛋白表达水平明显降低,N-cad和Vim的mRNA和蛋白表达水平明显升高,细胞迁移和侵袭能力明显提高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论在OSCC中P120ctn可能通过调控EMT标记物E-cad的表达参与EMT的发生,调节肿瘤的侵袭和转移。     

miR-124 靶向调控CMTM6 增强CIK 对胶质瘤细胞杀伤效应机制研究

目的 研究细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer ,CIK）细胞对胶质瘤细胞杀伤效应的影响以及微小核糖核酸（miRNA,miR）-124 在此过程中的调节作用及可能机制。方法 收集2017 年3 月～ 2019 年10 月鄂州市中心医院神经外科收治的30 例脑胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR 法检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-124,含MARVEL 跨膜结构域的趋化素样因子家族基因6 (chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domaincontainingfamily member 6,CMTM6) mRNA 表达量及相关性。诱导培养CIK 细胞后,分别与胶质瘤细胞C6 和U87共培养,另转染miR-124 mimic,inhibitor 及阴性对照序列,通过CCK-8 实验检测CIK 细胞及转染对胶质瘤细胞的杀伤效应;双荧光素酶报告实验分析miR-124 与CMTM6 基因的靶向关系,qRT-PCR 和Western blot 检测胶质瘤细胞中miR-124,CMTM6 mRNA 及蛋白表达。结果 与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-124 表达(0.325±0.031 vs1.004±0.086) 显著降低,CMTM6 mRNA 表达(3.167±0.324 vs 0.981±0.089) 显著升高,差异有统计学意义（t=39.051,26.337,均P ＜ 0.001）,二者呈负相关（r2=0.262）。与转染阴性对照比较,miR-124 mimic 转染及其与CIK 细胞共培养对C6(72.84%±3.81% vs 99.67%±3.45%,51.46%±3.18% vs 74.59%±3.47%),U87 细胞(71.93%±3.94% vs98.26%±3.59%,52.67%±3.24% vs 76.28%±3.64%) 增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义（q=16.340,15.486,14.087, 13.886,均P ＜ 0.001）。双荧光素酶报告实验显示,miR-124 和CMTM6 具有明显的靶向关系。Western blot 结果显示,与转染阴性对照+CIK 组比较miR-124 mimic 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6蛋白表达(0.435±0.042vs 0.897±0.061,0.354±0.029 vs 0.725±0.068) 显著降低,转染miR-124 inhibitor 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6 蛋白表达(1.142±0.121 vs 0.897±0.061,1.326±0.125 vs 0.725±0.068) 显著增加,差异均有统计学意义（q=13.817,10.839, 7.327,17.558,均P ＜ 0.001）。结论 CIK 细胞可有效杀伤胶质瘤细胞,miR-124 可通过靶向抑制CMTM6 增强CIK 细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应。     

Twist1通过NF-κB信号通路对人乳头状甲状腺癌上皮-间质转化的调控机制研究

目的探究Twist1对人乳头状甲状腺癌的侵袭转移的影响及相关蛋白表达的影响。方法利用MTT检测Twist1对人乳头状甲状腺癌乳头状癌细胞(IHH-4)细胞增殖能力的影响;利用转孔小室(Transwell小室)实验检测Twist1对人乳头状甲状腺癌IHH-4细胞侵袭能力的影响;采用免疫印迹试验(Western Blot)检测上皮-间质转化(EMT)相关标志蛋白和核因子(NF-κB)信号通路的分子蛋白的改变情况。结果在人乳头状甲状腺癌IHH-4细胞中沉默Twist1后,细胞的增殖能力没有发生显著变化;通过沉默Twist1可以降低人乳头状甲状腺癌IHH-4细胞侵袭和迁移能力,降低了EMT的恶性程度;Western Blot检测沉默Twist1后EMT相关蛋白上皮钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和NF-κB信号通路的p-NF-κB P65均发生明显改变。结论在人乳头状甲状腺癌中Twist1起到癌基因的作用,并且通过NF-κB信号通路对人乳头状甲状腺癌上皮-间质转化起到促进作用,为临床治疗人乳头状甲状腺癌提供科学依据及新的治疗靶点和思路。