苦参碱对人HepG2细胞与人ECV304细胞的增殖抑制活性比较研究

目的:研究苦参碱对人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)活性的影响.方法:购买纯度高达99％的苦参碱纯品,通过MTT法、生长曲线法、HE染色等实验初步观察苦参碱时人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖抑制作用和形态影响.结果:MTT实验和生长曲线实验显示在不同浓度苦参碱作用不同时间后,人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞ECV304半数抑制率IC50分别为487.86μg/ml和1815.34μg/ml,且呈剂量、时间依赖性.HE染色后人肝癌HepG2细胞实验组与对照组相比形态学发生了明显的变化,而人脐静脉内皮细胞ECV304变化不明显.结论:苦参碱可抑制人肝癌HepG2细胞生长,促进其凋亡,而对内皮细胞的作用较弱.     

重组人可溶性血管内皮细胞

血管内皮细胞生长抑制因子（Vascular Endothelial GrowthInhibitor,VEGI）是从人脐静脉内皮细胞（HUVEC）cDNA文库筛选到的一个TNF超家族新成员。为研究重组可溶性人VEGI对新生血管形成抑制活性,检测了重组可溶性人VEGI对建株人脐静脉内皮细胞（ECV304）增殖抑制活性以及对兔角膜诱生血管、鸡胚尿囊膜（CAM）血管的抑制活性。表明可溶性人VEGI可以直接抑制ECV304内皮细胞的增殖,抑制兔角膜诱生血管、CAM血管形成。VEGI是一种新的血管内皮细胞生长抑制因子,强烈抑制新生血管形成,有望应用于肿瘤的治疗。     

广西尖吻蝮蛇毒K组分抗血管生成活性研究

目的探讨广西尖吻蝮蛇毒小分子多肽组分（K组分）对血管生成的抑制作用。方法采用噻唑蓝法检测K组分对培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304的生长抑制情况,结晶紫法测定K组分对ECV304细胞的黏附抑制作用,鸡胚尿囊实验观察K组分对血管生成的影响。结果K组分对人脐静脉内皮细胞株ECV304的增殖有抑制作用并呈明显的时 效及量 效关系,能够抑制ECV304细胞与纤维连接蛋白的黏附和鸡胚尿囊血管生成。结论广西尖吻蝮蛇毒K组分对血管生成有抑制作用。     

人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型的建立

目的:利用小干扰RNA(siRNA)技术建立人脐静脉内皮细胞(ECV304)小凹蛋白(Caveolin-1)基因沉默模型,为研究Caveolin-1基因在人脐静脉内皮细胞中的作用.方法:通过Ambion专用软件对Caveolin-1基因编码区分析,设计合成短发夹RNA(shRNA)单链.通过T4连接酶将退火反应合成的shRNA双链克隆入含RNA PollII聚合酶表达元件的pENTRTM/U6入门载体,并利用Gateway技术构建相应的慢病毒RNA干扰(RNAi)表达载体.用REAL-TIME RT-PCR、蛋白印迹法分析沉默效率.结果:测序结果显示pENTRTM/U6载体插入的Cavelin-1基因shRNA序列大小及阅读框架正确.LR重组反应后成功构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统.转染ECV-304细胞获得对Caveolin-1的沉默效率大于85%.结论:成功地构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统,获得了长期稳定的基因剔除效应.人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型能长期保种及传代,为进一步研究Cav-eolin-1基因的功能奠定了基础.     

芦荟多糖影响肿瘤血管生成作用的初步研究

目的研究芦荟多糖（AP）抑制肿瘤新生血管生成的作用。方法以细胞生长抑制率和IC50为考察指标,通过MTT法,测定AP对人脐静脉内皮细胞（ECV304）生长的抑制作用,并观察量效和时效之间的作用关系。结果各实验组表现肿瘤生长明显受到抑制,AP对ECV304细胞生长的抑制作用呈浓度和时间的依赖性。在24、48、72 h时间段测得的IC50分别为1.1120、0.3260、0.0795μg/mL。结论 AP具有明显的抗肿瘤新生血管生成作用,并呈浓度和时间上的依赖性。     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞作用的研究

目的以人脐静脉内皮细胞作为血管新生内皮细胞的模拟物,通过研究As2O3对人脐静脉内皮细胞的影响,探讨As2O3的抗血管新生作用机制。方法分离和培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度和时间的As2O3和VEGF作用于脐静脉内皮细胞,应用流式细胞技术测定As2O3和VEGF对脐静脉内皮细胞增殖、细胞凋亡和癌基因bcl-2表达的影响。结果As2O3以时间和剂量依赖的方式抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制癌基因bcl-2表达,而VEGF可拮抗As2O3的部分作用。结论As2O3可以通过直接作用于内皮细胞而抑制血管新生。     

3,4,5,6-四羟基(口山)酮对高糖所致内皮细胞损伤的保护作用

目的研究3,4,5,6-四羟基(口山)酮对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用.方法在培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)高浓度葡萄糖(30 mmol·L-1)处理48 h引起细胞损伤.荧光分光光度法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、一氧化氮(NO)生成量与细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量;MTT比色法检测细胞存活数量;流式细胞仪检测细胞周期.结果①3,4,5,6-四羟基(口山)酮能显著抑制高糖所致内皮细胞LDH释放、NO和MDA生成增加;②3,4,5,6-四羟基山酮能显著抑制高糖所致的活细胞数减少;③3,4,5,6-四羟基(口山)酮能显著减轻高糖所致内皮细胞增殖的抑制.结论3,4,5,6-四羟基山酮减轻高糖所致的人脐静脉内皮细胞损伤,其保护作用与抗氧化减少氧自由基生成有关.     

人脐静脉血管内皮细胞的高效分离与培养

目的:建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、鉴定的高效方法.方法:胰酶消化法从脐静脉获得HUVEC,观察其形态并传代培养,检测其摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AcLDL)的情况,传3代流式榆测内皮细胞特异性表达.结果:消化分离的细胞呈小圆形且聚集成团;2h细胞开始贴壁,呈条索状;7d细胞增多呈漩涡样生长;此后细胞继续增多接近融合,呈铺路石样改变.流式检测细胞高表达血管内皮细胞特异性标志CD144、vWF、CD31,部分表达CD34,而白细胞共同抗原CD45为阴性表达.镜下发现贴壁细胞原代、第5代摄取Dil-AcLDL,胞浆呈现红色荧光,提示为有活性的内皮细胞.结论:利用胰酶消化法能从人脐静脉获得大量内皮细胞,体外培养后能成功增殖传代.     

HPV阳性宫颈癌细胞特异性穿膜肽PTP的穿膜特性研究

目的：证实宫颈癌细胞特异性细胞膜穿透肽特异性穿膜并优化穿膜条件。方法：将编码人乳头瘤病毒（HPV）阳性宫颈癌细胞特异性穿膜肽（PTP）的cDNA片断与编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因片断融合,克隆至原核表达质粒pET15b克隆位点,构建pET15b-GFP-PTP重组原核表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3)并表达GFP-PTP融合蛋白,纯化后的GFP-PTP融合蛋白作用于体外培养的HPV阳性宫颈癌细胞株HeLa,Siha,肺癌细胞株A549及正常脐静脉内皮细胞ECV304。利用合成的标记短肽探讨优化穿膜条件。结果：荧光显微镜观察发现,与融合蛋白GFP-PTP共孵育后的Hela和Siha细胞胞浆及胞核内有绿色荧光均匀分布,而A549及ECV304胞内无绿色荧光。与GFP共孵育的任何细胞内均无绿色荧光。流式细胞术分析结果显示PTP对HeLa,Siha细胞的穿膜效率分别为33.2％和28.9％。10% DMSO处理细胞后可增强PTP特异性穿透HPV阳性宫颈癌细胞株的胞膜并改善胞浆内分布。结论：本研究结果为进一步探讨PTP作为宫颈癌防治的靶向导入载体奠定了基础。     

板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用

目的 研究板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用机制.方法 用不同浓度的板蓝根注射液与人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)共同培养后,采用MTY法及形态学方法观察板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用.结果 不同浓度的板蓝根注射液对细胞生长具有抑制作用.结论 板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的增殖不但具有抑制作用,且与浓度呈正相关.     

GVAX (Cell Genesys)

Cell Genesys (formerly Somatix Therapy Corp) is developing GVAX as a potential cancer vaccine for various tumor types. Clinical trials have commenced for melanoma, renal tumor, lung tumor, pancreatic tumor, prostate tumor and multiple myeloma [191143], [287470], [298308], [367408], [401114]; trials are planned for 2001 in leukemia (phase I) and pancreatic cancer (phase II) [366918], [388814]. A worldwide collaboration was signed with Japan Tobacco in December 1998, covering the application of GVAX in prostate cancer trials [312213]. This collaboration may be extended to lung cancer and melanoma, depending on the clinical trial results for prostate cancer [309873], [311835]. The Japanese clinical trials were put on hold on 21 September 2000 due to problems with the mass production of cells by Cell Genesys [384885]. Somatix was developing GVAX until its merger with Cell Genesys in June 1997 [248422]. In April 2001, Cell Genesys initiated the first in a series of trials of a high-potency version of GVAX prostate cancer vaccine following encouraging phase II data reported for its first-generation product. The high-potency form of GVAX is similar to the first-generation product except that it releases an increased quantity of immune system stimulant [405932].     

大鼠神经干细胞和雪旺细胞体外共培养生长特性

目的：探讨雪旺细胞（SC）对神经干细胞（NSC）的生物作用，为临床移植神经细胞提供依据和方法。方法：将神经干细胞分别在有雪旺细胞骨架、分泌物及活雪旺细胞饲养层的不同环境中培养，同时设立各自对照组，观察神经干细胞迁徙、贴壁能力、分化、细胞代谢、轴突生长、免疫组化神经丝染色情况。结果：与雪旺细胞有关的实验组神经干细胞大量分化为具有细长突起的细胞，神经丝（NF）标记阳性细胞多，突起长（特别是经胎牛血清培养过的雪旺细胞实验组），细胞贴壁力强，细胞生长代谢旺盛，突起粗壮并且生长速度快。结论：雪旺细胞能促进神经干细胞分化，并促进其生长。     

CT-2584 (Cell Therapeutics)

CT-2584, an anticancer agent that inhibits phospholipid signaling, is under development by Cell Therapeutics Inc (CTI) as a potential treatment for various types of cancer. Phase II trials are underway for the treatment of prostate cancer and soft-tissue sarcoma [306617], [324290]. According to CIBC World Markets, completion of enrolment for these trials was expected in the fourth quarter of 2000. Furthermore, the initiation of phase II/III trials in combination with taxotere for the treatment of prostate cancer was anticipated in the second half of 2000, as were phase I/II trials in combination with cisplatin for the treatment of other cancers, including lung cancer [396582]. Results of a phase II study in patients with soft-tissue sarcomas evaluating pharmacokinetics, tolerance and therapeutic activity were presented at the 2000 American Society of Clinical Oncology (ASCO) meeting [367283]. Further data are expected to be presented at the ASCO meeting in May 2001 [396582]. Cell Therapeutics is seeking development and commercialization partners for CT-2584 [386398].     

A Novel Shell-Structure Cell Microcarrier (SSCM) for Cell Transplantation and Bone Regeneration Medicine

Purpose  

The present study aims to develop a novel open and hollow shell-structure cell microcarrier (SSCM) to improve the anchorage-dependent cell (ADC) loading efficiency, increase the space for cell proliferation and tissue regeneration, and better propel its therapeutic effects.     

睾丸支持细胞与生精功能障碍的关系

支持细胞(Sertoli cell)位于睾丸生精小管内皮,每个生精小管横断面有8-10个支持细胞.支持细胞和精子发生关系密切,是性成熟前精子发生和维持成年后精子生成的基础,支持细胞在生精功能调节方面的作用主要是通过其分泌的各种细胞因子来完成,这些因子相互作用,与睾丸中其他细胞分泌的因子一起构成了一个非常复杂的调控网络.本文就支持细胞所分泌的抑制素B(Inhibin B,INHB)、抗苗氏管激素(Anti-mullerian hormone,AMH)、激活素(Activin,ACT)等因子与生精功能障碍的关系作一简要综述.     

睾丸支持细胞与生精功能障碍的关系

支持细胞（Sertoli cell）位于睾丸生精小管内皮,每个生精小管横断面有8-10个支持细胞.支持细胞和精子发生关系密切,是性成熟前精子发生和维持成年后精子生成的基础,支持细胞在生精功能调节方面的作用主要是通过其分泌的各种细胞因子来完成,这些因子相互作用,与睾丸中其他细胞分泌的因子一起构成了一个非常复杂的调控网络.本就支持细胞所分泌的抑制素B（Inhibin B,INHB）、抗苗氏管激素（Anti-mullerian hormone,AMH）、激活素（Activin,ACT）等因子与生精功能障碍的关系作一简要综述.     

食管鳞癌P_(53)蛋白及PCNA的表达意义

目的 :观察癌细胞增殖活性与癌分化及分级的关系 ,探讨 P5 3及 PCNA在食管鳞癌诊断中的意义。方法 :用免疫组化 L SAB法检测 10 0例食管鳞癌标本中 P5 3蛋白及 PCNA的表达。同时用 10例正常皮肤作对照。结果 :P5 3蛋白阳性表达细胞数与癌分级呈正相关。 PCNA的表达强度与食管鳞癌的分化程度成反比。 P5 3表达与 PCNA表达呈平行关系。结论 :P5 3蛋白及 PCNA的表达强度可反映食管鳞癌的增殖活力和转移能力。可作为判断肿瘤发生可能性的标志物 ,在食管鳞癌的早期诊断中具有重要意义。     

奥沙利铂保留灌肠对直肠癌细胞增殖的影响

目的 比较奥沙利铂(L-OHP)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)手术前保留灌肠对直肠癌增殖细胞抗原(17CNA)表达的影响,为直肠癌的灌肠化疗提供理论依据。方法选择2000年10月～2003年8月我院收治的直肠癌患者70例,随机分成奥沙利铂组(30例)、5-FU组(30例)、对照组(10例),术前每晚分别灌入奥沙利铂(50mg)、5-Fu(500mg)、生理盐水各20ml,行保留灌肠,连续7天。分别于治疗前1天、第8天钳取癌灶粘膜送检,行PCNA免疫组化染色。结果奥沙利铂组与5-Fu组治疗后其PCNA阳性细胞数均明显减少(P＜0．01),且奥沙利铂组治疗后其PCNA阳性细胞数减少较5-Fu组更为明显(P＜0．05)。结论奥沙利铂及5-Fu保留灌肠均可抑制直肠癌细胞增殖,且奥沙利铂作用较5-Fu更显著,奥沙利铂手术前保留灌肠可作为直肠癌术前辅助治疗方案。     

全反式维甲酸对骨髓纤维细胞的影响

通过纤维细胞集落(CFU-F)的培养,观察了急性早幼粒细胞性白血病(APL)的CFU-F,结果APL 患者较正常骨髓明显低下(4.3±1.63/2×10~5细胞)(n=9);完全缓解后则上升达正常水平(12.4±2.55/2×10~5)。体外试验,维甲酸(RA)加入CFU-F 培养系后,CFU-F 下降为3.11±1.24/2×10~5细胞,明显低于对照组8.5±1.57/2×10~5(P<0.05)。提示RA 对骨髓纤维细胞有抑制作用,此结果可能为RA 治疗骨髓纤维化提供初步依据。     

Gemcitabine in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC)

The role of chemotherapy in the treatment of non-smallcell lung cancer (NSCLC) has increased greatly in the past fewyears. While cytotoxic drugs are currently used both as singleagents and in combination for palliation in locally advanced andmetastatic disease, they have also been incorporated intomulti-modality treatment strategies of Stage I to Stage IIINSCLC. One of the main reasons for the increased acceptance ofchemotherapy is the development of new substances.Among the most promising of these new drugs is theantimetabolite gemcitabine. Several single-arm gemcitabine PhaseII studies involving more than 400 patients show validatedresponse rates in more than 20% of the patients. Thesepositive results have also been confirmed in randomized Phase IIstudies. Gemcitabine's unique mechanism of action, its lack ofoverlapping toxicity with other agents, and its favorabletoxicity profile also define it as an ideal candidate forcombination therapy.The activity seen with single-agent gemcitabine therapy canbe compared with that of cisplatin-etoposide combination therapy.Gemcitabine-cisplatin combination response rates range from31% to 54%, with a median survival time between 8.4and 15.4 months and a 1-year survival rate between 30% and59%. In addition to the clinical research ofgemcitabine-cisplatin combinations, gemcitabine has also beentested in various double and triple combinations withcarboplatin, paclitaxel, docetaxel, vinorelbine, and ifosfamide.Investigations combining gemcitabine with radiation therapy areon-going. The following review will summarize results fromrepresentative Phase I/II and III studies using gemcitabine forNSCLC patients.