发育期大鼠反复惊厥后海马caspase-1、IL-18、IL-β的表达及其意义

近年来，炎症和免疫反应在惊厥后继发性脑损伤中的作用日益受到重视。easpase-1是easpase超家族的重要成员，被认为与炎症和凋亡有关。白细胞介素（IL）18和IL-β是caspsse-1的两种作用底物，也是具有多向性生物功能的炎症介质。研究证实，easpase-1、IL-18、IL-β与缺氧缺血性脑损伤密切相关，但它们与发育期惊厥性脑损伤的关系尚未见文献报道。2004年4-9月我们通过发育期大鼠惊厥模型的建立，观察反复惊厥后海马easpase-1、IL-18、IL-β的表达变化及海马组织脑含水量和病理改变，从分子水平进一步阐明炎症过程在发育期惊厥性脑损伤的发病机制中的作用。     

反复热性惊厥大鼠海马IL-1β和IL-1ra表达的变化

目的 探讨大鼠反复热性惊厥(FS)后海马白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-1受体拈抗剂(IL-1ra)表达的变化.方法 清洁级21日龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、高热对照组(HC组)和热性惊厥组(FS组).末次热水浴后12 h处死动物,用ELISA法检测海马IL-1β和IL-1ra的含量;RT-PCR法测海马IL-1β和IL-1ra mRNA的表达水平.结果 Fs组大鼠海马IL-1β蛋白和IL-1β mRNA水平均明显高于NC组和HC组,差异均具有显著性(P＜0.01和P＜0.05);FS组大鼠海马IL-1ra蛋白及IL-1ra mRNA水平亦明显高于HC组和NC组,差异均具有显著性(P＜0.01和P＜0.05).各组大鼠海马IL-1ra/IL-1β蛋白比值差异无显著性(P＞0.05).结论 短期内反复FS可导致海马IL-1β和IL-1ra表达增加,提示IL-1β和IL-1ra可能参与FS脑损伤发病的病理过程.     

发育期大鼠反复热性惊厥激活内质网应激

目的 研究反复热性惊厥(FS)对发育期大鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)及脑组织葡萄糖调节蛋白78(Grp78)水平的影响,探讨FS与内质网应激的关系.方法 21日龄无特定病原体(SPF)的sD大鼠40只.采用热水浴诱导其惊厥,隔日1次,共10次.大鼠随机分为正常对照组(n=12,37.0℃水浴)和高热组(n=28,44.8℃热水浴),根据惊厥与否进一步将高热组分为高热对照组(n=12)和反复FS组(n=16).在10次处理后12 h,应用放射免疫分析法测定各组大鼠血浆ACTH水平,用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹检测各组大鼠大脑皮层和海马神经元Grp78蛋白表达水平.应用SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果 与对照和高热组比较,反复FS组大鼠血浆ACTH水平明显升高(P.<0.01).免疫组织化学结果 显示,海马和皮层的Grp78蛋白水平在对照组表达较弱,呈浅棕黄色,FS组海马和皮层Grp78蛋白表达显著高于对照及高热组,胞质可见大量深棕褐色颗粒.Westem blot结果 表明,3组大鼠海马及皮层均有Grp78蛋白表达,与对照组比较,FS组海马及皮层的Grp78蛋白水平增高明显,差异均有统计学意义(Pa<0.01).高热对照组Grp78蛋白水平与对照组比较增高,有显著性差异(P<0.01).结论 反复Fs可引起下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(HPA)激活,诱导脑内Grp78蛋白表达增加,导致内质网应激.     

发育期大鼠反复惊厥持续状态后分子伴侣介导的自噬表达的变化

目的:观察反复惊厥持续状态后海马神经元中分子伴侣介导的自噬分子的表达及其与惊厥后脑损伤的关系。方法:取日龄7 d的SD大鼠,采用简单随机分组方法分为对照组(6只)及惊厥组(39只),惊厥组反复吸入三氟乙醚诱导大鼠的惊厥持续状态,1次/d,30 min/次,连续诱导7 d。成功建立惊厥模型共30只(弃去建模失败9只),采...     

川芎嗪注射液对大鼠惊厥性脑损伤海马白细胞介素-18、白细胞介素-1β表达的影响

目的探讨发育期大鼠反复惊厥后海马IL-18、IL-1B表达及川芎嗪对其表达的影响。方法20日龄健康SD大鼠162只随机分为正常对照组、惊厥组及川芎嗪组。通过三氟乙醚反复吸入（连续6次，1次／d；对照组除外）制作发育期大鼠惊厥动物模型。其中川芎嗪组大鼠在每次惊厥后予腹腔注射川芎嗪（50mg／kg）．每12h注射1次，连用6d；惊厥组及对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水，连用6d。RT-PCR方法检测各组反复惊厥后6h，1、3、7d海马IL-18、IL-113mRNA表达，ELISA方法检测各时间点海马IL-18和IL-113蛋白表达，观察脑含水量变化和光镜下海马区神经元病理改变。结果川芎嗪组各时间点海马IL-18、IL-1βmRNA及其蛋白表达较惊厥组显著下调（P〈0．05，0．01），脑含水量（7d除外）较惊厥组显著降低（P〈0．01），海马神经元水肿、变性坏死较惊厥组明显减轻。结论川芎嗪能有效减轻惊厥性脑水肿和海马神经元病理损伤，其机制可能与抑制海马IL-18、IL-1β异常表达有关。     

新生儿HIE血清IL-1β、IL-6、IL-10表达及其临床意义

新生儿缺氧缺血性脑病(Hypoxicischemic encephalopathy,HIE)是新生儿窒息的严重并发症,病情重、病死率高,可导致智力低下、癫痫、脑性瘫痪等神经系统后遗症,是足月儿围产期脑损伤的最常见原因。IL1β、IL6、IL10是与炎性有关的细胞因子,为探讨其与新生儿HIE的相互关系,本研究应用ELISA法动态检测新生儿HIE及正常足月新生儿血清IL1β、IL6、IL10水平,现将结果报道如下。对象与方法一、对象HIE组为我院新生儿科2002年5月至2003年10月间收治住院的32例患儿,其中男22例,女10例,胎龄为37～42周,出生体重为2500～4000g,均有窒息史。…     

新生儿HIE血清IL-1β、IL-6、IL-10表达及其临床意义

新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic ischemic encephalopathy，HIE）是新生儿窒息的严重并发症，病情重、病死率高，可导致智力低下、癫痫、脑性瘫痪等神经系统后遗症，是足月儿围产期脑损伤的最常见原因。IL-1β、IL-6、IL-10是与炎性有关的细胞因子，为探讨其与新生儿HIE的相互关系，本研究应用ELISA法动态检测新生儿HIE及正常足月新生儿血清IL—1β、IL-6、IL-10水平，现将结果报道如下。     

戊四氮反复点燃致不同发育期大鼠海马损伤的病理改变

目的探讨不同发育期大鼠癫痢发病机制。方法对P10、P20、P603组大鼠,用戊四氮反复点燃5d,设生理盐水对照组;观察各组大鼠行为学改变,海马神经元形态、神经元计数、苔藓纤维发芽、NF—κB表达。结果（1）点燃后P10、P20组惊厥潜伏期、潜伏发作期较P60短,惊厥持续时间较P60长（F=103．28,132．65,P均〈0．05）;（2）P10、P20实验组海马各区无明显神经元丢失;P10DG区颗粒细胞计数较对照组增多;P60CA1、CA3区神经元较对照组明显减少,DG区无改变;（3）各组海马CA3区均可见苔藓纤维发芽,其中P60组较P10、P20组明显;（4）各实验组NF—κB阳性表达细胞较对照组均增多,且随鼠龄增加NF—κB光密度值逐渐减弱,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论（1）不同发育期大鼠惊厥易感性存在差异;（2）发育鼠致痂后海马神经元损伤、病理性苔藓纤维发芽较轻,可能为对惊厥耐受性较好的病理学证据;（3）NF—κB在惊厥性脑损伤过程中发挥一定生物学效应。     

免疫球蛋白对戊四氮致惊大鼠海马神经元死亡及IL-1β和IL-1ra表达的影响

目的探讨免疫球蛋白对戊四氮致惊大鼠海马神经元死亡及IL-1β和IL-1 ra表达的影响。方法在W istar大鼠腹腔内注射戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)诱发大鼠惊厥发作,制作癫模型。将45只大鼠随机分为3组,正常对照组,PTZ静脉注射免疫球蛋白组(PTZ-IVIG),PTZ-生理盐水组(PTZ-NS)。经HE和TUNEL染色,在光镜下,观察神经细胞死亡,采用免疫组织化学方法检测神经细胞内IL-1β和IL-1 ra表达。结果海马CA1区IL-1β/IL-1 ra比值PTZ-IVIG组(0.5±0.1)较PTZ-NS组(1.9±0.5)低,两者比较差异有统计学意义(t=12.9,P<0.05)。PTZ-IVIG组海马CA1区凋亡细胞数较PTZ-NS组少,阳性细胞数前者为(16.4±3.3)个/1000μm2,后者为(41.7±3.5)个/1000μm2,两者差异有统计学意义(t=27.1,P<0.05)。PTZ-IVIG组海马CA1区坏死细胞数少,为(19.0±2.6)个/1000μm2,PTZ-NS组为(42.3±4.9)个/1000μm2,两者差异有统计学意义(t=20.9,P<0.05)。结论免疫球蛋白具有抑制惊厥所致的神经元死亡的作用,其作用可能机制为调节神经细胞内白介素1网络系统。     

内质网应激反应介导反复高热惊厥大鼠海马神经元的凋亡

目的 观察反复高热惊厥(FS)大鼠海马神经元凋亡,及内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78和内质网促凋亡因子半胱氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)表达的改变,探讨内质网应激反应在热性惊厥后脑损伤中的作用.方法 SD大鼠80只,雌雄各半,随机分为对照组和反复FS组,每组40只.采用反复热水浴诱导大鼠FS,隔日诱导1次,共10次.应用原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测凋亡细胞,免疫组织化学、免疫蛋白印记(Western blot)和荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测反复FS后3、6、12、24,48 h和对照组大鼠海马内GRP78及Caspase-12 mRNA和蛋白的表达.结果 反复FS后随着时间的延长,反复FS组大鼠TUNEL阳性神经元数目明显增加,于惊厥后24 h达高峰.Hoechst染色可见其凋亡细胞的核浓缩和核碎裂.Western blot显示反复FS组大鼠3、6、12 h海马内GRP78蛋白的表达较对照组明显增高,表达高峰在FS后6 h.GRP78 mRNA的表达时相改变和高峰出现时间与蛋白表达类似.免疫组织化学显示其GRF78蛋白广泛分布于海马内各个区,与对照组分布相同.FS后12、24和48 hCaspase-12活性片段的表达较对照组明显增多,24 h达峰值.12,24、48 h Caspase-12 mRNA的表达与对照组的比较有显著性差异,24 h达高峰.免疫荧光双标记显示Caspase-12活性片段阳性细胞大多为神经元,并与TUNEL染色共定位,表现为核浓缩和核碎裂.结论 Caspase-12介导的内质网应激凋亡途径参与了反复FS导致的神经元凋亡过程.     

Cathepsin B抑制剂对反复惊厥新生大鼠海马组织Clusterin表达的干预作用

目的探讨新生期大鼠反复惊厥后海马丛生蛋白(Clusterin)的表达及溶酶体蛋白酶抑制剂Cathepsin B(CBI)对其表达的干预作用。方法 6日龄SD大鼠随机分为3组:对照组、惊厥组(RS组)、CBI组,每组6只。RS组新生大鼠每日吸入0.04～0.05 mL三氟乙醚诱导其惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;CBI组惊厥前腹腔注射CBI(2μL,0.5 g.L-1),采用同样方法吸入三氟乙醚诱导其惊厥发作。于出生35 d(P35)处死3组大鼠,并取其海马组织。采用免疫印迹技术检测其Clusterin的表达。3组蛋白水平比较采用SPSS 17.0软件进行方差分析。结果 RS组海马中Clusterin表达(1.19±0.10)明显高于对照组(0.64±0.24),两两比较差异有统计学意义(P<0.01)。CBI组海马Clusterin表达(0.80±0.16)明显低于RS组,差异有统计学意义(P<0.01),CBI组海马Clusterin表达与对照组比较差异无统计学意义。结论惊厥后Clusterin蛋白表达水平明显上调,表明Clusterin参与了新生大鼠反复惊厥后所致脑损伤的分子机制,CBI对其表达有明显干预作用。     

反复高热惊厥大鼠脑源性神经营养因子表达的意义

目的 探讨大鼠反复高热惊厥(FS)后脑源性神经营养因子(BDNF)的变化.方法 雄性SD大鼠51只随机分为健康对照组(NC组,n=14),高热对照组(HC组,n=19)和FS组(n=18),热水浴法建立FS模型.酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组海马匀浆BDNF水平,免疫组织化学法检测BDNF在大鼠脑组织各区的表达,原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡,采用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 ELISA法测得的FS组海马BDNF水平(89.90±12.51)ng/g明显高于NC组(54.43±18.92)ng/g和HC组(64.09±15.03)ng/g(Pa<0.01),FS组大鼠各脑区BDNF阳性神经元A值亦明显高于NC和HC组(Pa<0.01);FS组分析各Ⅸ凋亡指数(AI)均明显高于NC与HC组(Pa<0.01),各区AI从高到低依次为海马齿状回(DG)区(32.65±2.14)%、CA3区(28.99±1.16)%、CAI区(24.28±0.92)%、颞叶皮层(CTL)(22.19±1.06)%,且原位末端标记法染色观察脑组织各区细胞凋亡程度与BDNF在脑组织各区的表达特点呈正相关(r=0.332 P<0.05).结论 反复FS后大鼠脑内BDNF表达明显增加,并且与神经细胞的凋亡程度相关.     

发育鼠反复惊厥脑损伤后海马神经元可塑性研究

目的观察幼鼠反复惊厥后海马组织病理学改变,探讨幼鼠急性损伤后神经元的可塑性。方法用戊四氮（pentylenetetrazol,PTZ）对生后10d（P10）Wistar鼠反复腹腔注射5d,制成反复惊厥模型,设生理盐水对照组;采用硫堇染色对CA1、CA3、DG及门区神经元进行细胞计数;免疫组化技术检测惊厥发作24h后NF—κB的表达;Timm组织化学染色观察苔藓纤维发芽并评分。结果①海马CA1、CA3区神经元计数实验组与对照比较差异无统计学意义（P〉0．05）,齿状回DG区颗粒细胞数实验组（23．25±3．05）较对照组（16．25±1.58）增多（P〈0．05）。②海马CA1、CA3及DG区NF-κB光密度值较对照组高（P〈0．05）。③实验组CA3区苔藓纤维发芽评分（1．50±0．92）明显高于对照组（0．25±0．46,P〈0．01）。结论幼鼠急性惊厥性脑损伤后海马齿状回颗粒细胞增生、苔藓纤维发芽是发育脑急性损伤神经可塑性的有力佐证,其中NF—κB表达增加起一定作用。     

硫化氢对反复热性惊厥幼鼠白细胞介素-1β、白细胞介素-18的影响

目的 探讨反复热性惊厥(FS)幼鼠在硫化氢(H2S)干预后其海马组织中IL-1β、IL-18水平的变化.方法 SD大鼠192只随机分为对照组、FS组、FS+硫氢化钠(NaHS)组、FS+羟胺(HA)组,每组各48只.采用热水浴诱导大鼠反复FS,每次诱导3～5 min,隔日诱导1次,共诱导10次.采用甲苯胺蓝染色了解各组幼鼠海马的病理变化;通过免疫组织化学法观察各组幼鼠IL-1β、IL-18 蛋白表达变化;采用反转录聚合酶链反应方法检测各组幼鼠海马组织中IL-1β、IL-18 mRNA的表达情况.结果 反复FS幼鼠海马组织中IL-1β和IL-18蛋白、IL-1β mRNA、IL-18 mRNA表达水平均增高,甲苯胺蓝染色显示其海马神经元排列紊乱,细胞核大小不一,部分细胞呈现空泡变性,部分浓缩凝固;NaSH干预后IL-1β蛋白、mRNA表达明显降低,FS+NaHS组IL-18蛋白、mRNA表达在1 d、3 d、7 d与FS组相比显著降低;HA干预6 h、3 d、7 d时 IL-1β 蛋白及mRNA表达均较FS组明显增高,6 h时IL-18的表达与FS组相比显著增高.结论 H2S对反复FS造成的脑损伤具有保护作用,其抑制IL-1β和IL-18的表达可能是其机制之一.     

缺氧缺血新生大鼠脑组织caspase-1和白细胞介素18 mRNA表达及其关系探讨

目的研究caspase-1及其底物之一白细胞介素(IL)-18 mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用及其意义.方法 112只7日龄新生Wistar大鼠按照完全随机化方法分为对照组、HIBD 3、8、24 h、3、6和14 d组,每组16只.其中8只采用RT-PCR 方法检测caspase-1和IL-18 mRNA在HIBD后脑皮层中的表达及其相关性,另外8只光镜下观察脑组织病理学改变.结果对照组有caspase-1 mRNA少量表达(0.2918 ± 0.0809),HIBD 24 h组其水平开始增加(0.5222 ± 0.0941,与对照组比较P<0.01),6 d达高峰(0.7886 ± 0.0480,与其余各组相比P<0.01), 此后下降,但HIBD 14 d (0.5314 ± 0.1272)仍可检测出.对照组IL-18 mRNA水平为0.3218 ± 0.0466,HIBD 24 h至6 d其表达逐渐增加(24 h 0.5823 ± 0.0740; 3 d0.6976 ± 0.1073; 6 d 0.9110±0.0647,与对照组比较均为P<0.01),并达高峰(HIBD 6 d组与其余各组相比P<0.01).HIBD后IL-18 mRNA的表达在时间上与caspase-1具有紧密相关性(r=0.871,P<0.01).组织学检查发现神经元变性、坏死在HIBD 1～6天逐渐加重.结论 HIBD后caspase-1和IL-18 mRNA的表达逐渐增加,其变化规律与光镜观察到的脑损伤进展的时间框架吻合,提示它们均参与了新生鼠HIBD的病理形成过程.     

新生期大鼠反复惊厥后皮层微管相关蛋白1轻链3的表达及干预

目的 研究新生期大鼠反复惊厥后皮层中微管相关蛋白1轻链3(LC-3)的表达及3甲基腺嘌呤(3-MA)对表达的调控作用.方法 生后6 d的SD大鼠随机分成3组,每组24只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30min,连续9d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;3-MA组惊厥前腹腔注射3-MA(总量2μl),同样方法 吸入三氟乙醚诱导惊厥,方法 同惊厥组.3组大鼠于最后一次惊厥后分别按1.5、3、6、24 h后断头取脑,采用蛋白质免疫印迹技术(Western blot)分别检测3组大鼠大脑皮层中LC-3的表达.结果 惊厥组(1.5、3、6 h)LC-3的表达明显高于对照组(t=2.483,2.599,6.937,1.280均P＜0.05),3-MA组LC-3的表达明显低于惊厥组(t=2.243,7.775,5.887,4.245均P＜0.05).而24h惊厥组LC-3的表达并不明显高于对照组(t=1.280,P＞0.05).结论 惊厥后自噬途径被激活;3-MA参与了自噬途径的调控.     

幼年大鼠热性惊厥后海马区Nogo-A mRNA及Nogo-R mRNA的表达

目的探讨热性惊厥（FS）幼年大鼠海马区Nogo-A及Nogo受体（Ng-R）mRNA表达变化及其意义。方法15日龄健康雄性SD大鼠127只随机分为正常对照组（n=40，37℃水浴）与高热组（n=87，44，5℃热水浴）；高热组根据是否发生惊厥再分为高热对照组（n=42）和FS组（n=45）；各组再分为5个处理组（1、3、5、7、10次水浴）。各处理组随机选取5只大鼠，断头处死，取海马组织，冷冻切片，采用反转录聚合酶链反应法检测其海马组织Nogo-A mRNA、Ng-R mRNA的相对表达量；另3只大鼠采用同样方法制备海马组织冷冻切片，分别采用Nissl染色及Timm染色观察其海马组织神经元变化及海马齿状回苔藓纤维发芽（MFS）现象。应用SPSS 13．0软件进行统计学分析。结果1．正常对照组无惊厥发作。高热对照组中2只大鼠出现惊厥后弃用。FS组大鼠有多种形式惊厥发作：点头、强直、阵挛或强直阵挛发作，2只淹死，3只死于惊厥持续状态。2．与正常对照组和高热对照组比较，第7次及第10次黔后大鼠海马区Nogo-A mRNA和Ng-R mRNA的表达均升高，均有显著性差异（Pa〈0．01）。3．Nissl染色显示第5次FS后大鼠海马CA1、CA3、Hile区神经元排列松散，第7、10次FS后改变更甚；2个对照组大鼠海马神经元排列紧密，各组均未见神经元丢失。4．Timm染色显示，第5、7、10次FS后大鼠海马齿状回出现MFS现象，正常对照组和高热对照组海马齿状回未见明显MFS现象。结论FS后大鼠海马区Nogo-A mRNA、Ng-R mRNA的表达上调可影响海马损伤修复。