线粒体融合素基因-2对肝癌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨外源性线粒体融合素基因-2(mfn2)对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响及其机制。 方法:利用脂质体2000将质粒mfn2转染HepG2细胞。RT-PCR检测转染后细胞mfn2 mRNA的表达水平;Weastern Blot法检测mfn2蛋白的表达;MTT检测mfn2对HepG2细胞增殖的影响;Annnexin-V/PI双标记法检测转染前后细胞凋亡的变化;RT-PCR检测凋亡相关基因的表达;电镜观察超微结构的变化。 结果: 转染mfn2基因的HepG2细胞可以稳定表达Mfn2蛋白;MTT实验提示转染mfn2基因后，HepG2细胞增殖受到抑制;转染组与转染空质粒组和空白对照组相比前者可促进细胞凋亡(P<0.05);电镜示mfn2转染后HepG2细胞线粒体嵴断裂、消失、基质疏松;RT-PCR结果示Bcl-2和survivin基因表达下调。结论:外源性mfn2基因可抑制HepG2细胞的增殖，诱导其凋亡。凋亡相关基因的表达下调可能是其诱导凋亡的机制。     

下调PAR基因表达对前列腺癌PC3细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的:本研究以RNA干扰技术下调PAR(prostate androgen regulated)基因表达,探讨其对前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及其相关蛋白Bcl-2/Bax表达水平的影响。方法:PC3细胞转染靶向PAR基因的siRNA,MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:PC3细胞PAR基因表达水平下调,此时处于G2-M期的细胞增加,为(29.95±3.25)%;细胞凋亡率亦明显增加,为(20.61±2.73)%,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),同时Bcl-2蛋白表达下降,Bax表达水平升高,Bax/Bcl-2比值升高。结论:PAR基因表达下调可诱导细胞G2-M期阻滞和凋亡,其机制为抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达,同时促进Bax表达。     

Bcl-2与胆管细胞癌

Bcl-2原癌基因是细胞凋亡的重要抑制基因，其编码蛋白质能抑制细胞凋亡和延长细胞寿命，它的过度表达是肿瘤发生和发展的重要原因。胆管细胞癌是起源于胆道上皮细胞的恶性肿瘤，Bcl-2癌基因在该肿瘤细胞中高表达。本文综述Bcl-2及其在胆管癌细胞凋亡中的调节作用。     

西罗莫司诱导人肝癌细胞株BEL-7402凋亡及其机制

目的探讨西罗莫司（SRL）在体外诱导人肝癌细胞株BEL-7402的凋亡作用及其机制。方法以不同浓度的SRL（5、10、20、30、40和50nmol／L）作用于体外培养的人肝癌细胞株BEL-7402，应用流式细胞仪检测培养24、48和72h时的细胞凋亡情况；Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化；Western Blot法观察BEL-7402细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bcl-xl和Bax基因的表达变化；采用Caspase-3试剂盒检测Caspase-3酶的活性；JCl染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψbm）。结果SRL可诱导BEL-7402细胞凋亡，并与药物浓度和作用时间呈正相关。SRL作用BEL-7402细胞后48h，在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征，凋亡过程中线粒体膜电位下降及Caspase-3酶原蛋白激活，伴有Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论SRL能使抗凋亡蛋白Bcl-2、gcl-xl表达降低，促凋亡蛋白Bax表达上调，线粒体膜电位下降，激活Caspase-3酶原蛋白，从而诱导细胞凋亡。     

细胞凋亡

对细胞凋亡的认识已百余年，Ｖｏｇｔ１８４２年即曾观察到两栖动物发育过程中的形态改变［１］。１９７２年Ｋｅｒ，Ｗｙｌｉｅ及Ｃｕｒｉｅ以细胞凋亡是一种基本生物现象为题介绍了细胞凋亡在生物学中的广泛意义，并对凋亡细胞的形态改变及与细胞坏死进行了区别、分析，...     

丝裂霉素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

本研究旨在观察在体外丝裂霉素(ＭＭＣ)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用 ,从凋亡的角度探讨其抗癌机理 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.细胞培养及实验分组 :人肝癌ＢＥＬ 740 2细胞株来自中国科学院上海细胞所 ,用含高糖的ＤＭＥＭ培养液 ,补充体积分数为 12 %的胎牛血清、青霉素 (10 4 Ｕ/Ｌ)、键霉素 (10 0 μｇ/Ｌ) ,于37℃ ,体积分数为 5 %的ＣＯ2 孵箱中培养。实验分药物处理组与对照组 ,处理组又分 2× 10 -2 、2× 10 -3 、2× 10 -4 ｇ/ＬＭＭＣ 3种浓度 ,作用时间为 2 4ｈ。2 .透射电镜 :将浓度为 2× 10 -2ｇ/Ｌ的ＭＭＣ处理Ｂ…     

线粒体介导细胞凋亡和心肌保护新途径

在细胞凋亡过程中，线粒体起着主开关作用，线粒体通透性转换孔开放，线粒体跨膜电位耗损，细胞色素C和凋亡诱导因子释放到胞质中，通过两条途径分别导致细胞凋亡，Bcl-2家族蛋白以线粒体为靶位调控凋亡。线粒体KATP通道开放可以预防线粒体跨膜电位耗损而减少细胞凋亡，从而揭示了线粒体KATP通道开放产生心肌保护的新途径。     

Bcl-2基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的作用

目的:探讨Bcl-2基因对阻塞性黄疸大鼠肝细胞损害中细胞凋亡的调控作用。方法:采用胶原酶原位肝灌注法获取对照组大鼠肝细胞及阻塞性黄疸实验组术后3、7、14、21d大鼠的肝细胞,分别用RT-PCR检测Bcl-2mRNA的表达。分离对照组及实验组14d组大鼠的肝细胞行原代培养后,使用100μmol/L甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用于两组肝细胞24h后,用FCM法测定肝细胞的凋亡比率,用TUNEL技术进行肝细胞凋亡的原位检测。结果:(1)对照组大鼠肝细胞无Bcl-2mRNA表达,实验组术后7、14、21d组大鼠肝细胞均有Bcl-2mRNA表达;(2)GCDC作用两组大鼠肝细胞后,实验组比对照组肝细胞凋亡明显减少(P<0.001)。结论:在阻塞性黄疸过程中,大鼠肝细胞通过表达Bcl-2基因是抑制胆盐致肝细胞的凋亡作用的途径之一。     

康莱特诱导人肝癌细胞HepG2 凋亡的实验研究

目的 探讨康莱特注射液(KLT)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制.方法 用不同浓度的KLT培养肝癌细胞HepG2,应用流式细胞仪检测HepG2凋亡细胞的发生,应用ELISA法检测相关凋亡蛋白Bcl-2的变化.结果 流式细胞术证实KLT可诱导肝癌细胞HepG2凋亡(P＜0.01), 且具有时间、剂量依赖关系.KLT处理组HepG2细胞中Bcl-2蛋白的表达分别为(16.91±0.20)units/ml、(10.78±1.41)units/ml和(7.66±0.64)units/ml,对照组为(22.65±2.83)units/ml.结论 KLT可诱导肝癌细胞HepG2凋亡;且KLT诱导HepG2细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达的下调对调控细胞凋亡有重要作用.     

维生素K3促肝癌细胞凋亡的实验研究

目的观察维生素K3(VitK3)对肝癌细胞系HEPG2、Caspase3、BCL2基因的凋亡诱导作用。方法将不同浓度的VitK3作用于HEPG2细胞观察其作用的时间效应及剂量效应,应用细胞形态学,流式细胞术,DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测凋亡相关基因Caspase3,Bcl2mRNA表达的变化。结果VitK3对HEPG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡;细胞体积缩小,核固缩,折光性加强;DNA凝胶电泳显示DNALadder在G1期之前出现SubG1峰。凋亡相关基因Caspase3转录水平比用药前增强。结论VitK促HEPG2细胞凋亡,且与Caspase3基因表达有关。     

2-丁胺-2-去甲氧基竹红菌乙素光动力作用诱导Capan-1细胞凋亡与线粒体损伤的关系

目的 研究新型光敏剂2-丁胺-2-去甲氧基竹红菌乙素（BAHB）的光动力作用诱导人胰腺癌细胞系（Capan-1）凋亡的机制。方法 利用荧光显微镜、细胞凋亡DNA梯带、激光共聚焦扫描显微镜、Westernblot分析等技术研究BAHB诱导Capan-1凋亡与线粒体损伤的关系。结果低浓度BAHB主要定位于线粒体,高浓度时定位于溶酶体。DNA琼脂糖电泳分析显示出特征性细胞凋亡的DNA梯带。激光共聚焦扫描显微镜观察到线粒体跨膜电位（△ψm）降低,定量分析结果表明,随着光照时间的缩短,细胞的相对荧光强度增强。用Westernblot法可以检测到线粒体中细胞色素C的释放。结论 低浓度BAHB的光动力作用诱导人胰腺癌细胞凋亡的机制与线粒体损伤有关。     

RNAi技术沉默Bcl-2基因对人膀胱癌细胞株T24增殖影响的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bcl-2基因表达对人膀胱癌细胞株T24增殖的影响。方法针对Bcl-2 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,转染T24细胞。采用Western blot检测重组质粒对Bcl-2蛋白表达的影响,MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用,Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)检测转染重组质粒后细胞的凋亡状况。结果成功构建了pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,并成功转染T24细胞。重组质粒抑制Bcl-2基因的表达接近70%;转染重组质粒后,T24细胞的活力降低为(66.9±5.6)%;重组质粒组的T24细胞凋亡率为34.55%～45.39%。结论pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒明显下调Bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡。     

大鼠肝脏缺血不同时间再灌注时肝细胞凋亡的动态变化及凋亡相关基因Bcl-2的表达

目的:探讨大鼠肝脏经历不同缺血时间后再灌注时肝细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达的变化及二者的相关性.方法:参照Nauta的方法制作大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,用流式细胞仪检测肝细胞凋亡百分率及Bcl-2蛋白的表达.结果:随着肝脏热缺血时间的延长,肝细胞凋亡百分率明显增加,而Bcl-2蛋白表达量逐渐下降.结论:肝细胞凋亡在肝脏缺血再灌注损伤过程中发挥着重要作用,Bcl-2蛋白对肝细胞凋亡具有抑制作用.     

化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤效应及其与Bcl－2表达的关系

目的观察化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤作用，探讨其与胃癌组织中Bcl-2蛋白表达的关系。方法新鲜胃癌组织制备单细胞悬液，分别加入紫杉醇（Tax）、顺铂（DDP）、阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5-Fu）和丝裂霉素（MMC）培养48h。四氮唑盐还原法（MTr）观察药物作用后癌细胞活力及代谢活性变化。免疫组织化学技术检测Bcl-2的表达。结果5种化疗药物平均抑制率依次为Tax（40．6±6．9）％、5．FU（38．9±9．2）％、CDDP（38．4±7．8）％、ADM（31．6±8．5）％、MMC（28．9±9．8）％。不同类型胃癌对5种化疗药物的敏感性由强到弱依次为印戒细胞癌、管状腺癌、黏液腺癌和乳头状腺癌。全组Bcl-2阳性率为80％，阳性者对5-FU、MMC和ADM有较强的耐药性。结论MTr比色法体外药敏试验。有助于筛选个体化有效治疗药物。Bcl-2的高表达可能是胃癌多药耐药的原因之一。     

bcl-2过表达对阿霉素诱导的膀胱癌细胞凋亡和活性氧产生的影响

目的探讨凋亡相关基因bcl-2过表达对阿霉素(ADR)诱导的膀胱癌细胞凋亡的影响。方法采用脂质体转染法将bcl-2基因转入膀胱癌BIU87细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)法检测bcl-2基因的表达。比较BIU87、BIU87/neo和BIU87/bcl-2细胞对ADR的敏感性。用ADR分别作用于上述细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)产生情况。结果建立分别稳定表达bcl-2基因、新霉素抗性基因(neo)的膀胱癌亚克隆细胞株BIU87/bcl-2、BIU87/neo。RT-PCR BIU87/bcl-2细胞的bcl-2 mRNA水平显著高于BIU87、BIU87/neo(P＜0．01)。噻唑蓝(MTT)检测显示BIU87/bcl-2细胞对ADR的化疗敏感性明显降低(P＜0．01)。ADR作用24 h后,BIU87、BIU87/neo细胞凋亡率分别为(23．75±3．72)%、(21．94±1．27)%,而BIU87/bcl-2细胞为(3．38±0．95)%(P＜0．01)；ROS分别为(90．45±1．96)%、(88．41±3．88)%和(77．00±3．86)%,BIU87/bcl-2细胞较前两者明显降低(P＜0．01)。结论bcl-2基因能够抑制ADR诱导的膀胱癌BIU87细胞凋亡,降低细胞内ROS水平是其发挥抗凋亡作用的重要机制。     

Bcl-2基因蛋白在肝脏恶性肿瘤中的表达

目的:了解Bcl-2基因蛋白在肝脏恶性肿瘤中的表达情况.方法:对56例不同类型的肝脏恶性肿瘤进行了Bcl-2单克隆抗体的免疫组化染色.结果:肝细胞癌阳性表达率为22.7%(5/22),胆管细胞癌为75%(12/16),肝转移性癌为22.2%(4/18),其中胆管细胞癌的阳性表达率和染色强度均高于肝细胞癌,22例肝细胞癌的癌旁组织中检出肝细胞异型增生6例,其中仅1例Bcl-2呈阳性表达.结论:Bcl-2基因蛋白可能在胆管细胞癌的发生中起重要作用,而对肝细胞的分裂、增殖无明显影响.     

瘦素对三苯氧胺诱导的乳腺癌MCF-7细胞的凋亡抑制作用及相关机制

目的 探讨瘦素在体外对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡抑制作用及其抑制MCF-7细胞凋亡的相关机制.方法 将MCF-7细胞接种于48孔板中.分组处理48 h后,ELISA测定不同浓度瘦素对不同浓度三苯氧胺引起的MCF-7细胞凋亡.实时荧光定量PCR方法检测各组细胞中Survivin、BCL-2、BAX的mRNA的相对表达水平改变.结果 103 ng/mL和104 ng/mL瘦素可以有效抑制TAM诱导的MCF-7细胞凋亡.104 ng/mL明显上调了乳腺癌MCF-7内Survivin mRNA的表达,而BCL-2、BAX mRNA改变无统计学意义.结论 瘦素可以有效抑制TAM诱导的MCF-7细胞凋亡,其机制可能与瘦素上调Survivin mRNA的表达有关.     

塞来昔布联合顺铂对SGC-7901人胃癌细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的:探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合顺铂对SGC-7901人胃癌细胞生长、凋亡及Bcl-2表达的影响.方法:终浓度为100、200及300 μmol/L的塞来昔布作用于SGC-7901入胃癌细胞24 h后加入顺铂(2.0 μg/mL),采用M开比色法测定细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及Bcl-2表达水平.结果:不同浓度的塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞均有抑制作用,抑制率与对照组相比.差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞学检测到凋亡峰,细胞阻滞于G0/G1期.同时伴随Bcl-2表达水平下降,其抑制作用呈时间-剂量依赖性,且以上抑制作用与顺铂具有协同作用.结论:塞来昔布能促进顺铂诱导胃癌细胞凋亡,进而抑制胃癌细胞的增殖,这可能是COX-2抑制剂抗肿瘤的机制之一.     

Bcl-2 gene therapy for apoptosis following traumatic brain injury

Objective: Toinvestigatethetherapeuticeffect of Bcl-2 fusion protein on apoptosis in brain following traumatic brain injury. Methods: Bcl-2 gene was cloned by RT-PCR. Bcl-2 and EGFP genes were linked together and inserted into pAdeno-X vector. This recombinant vector was packaged into infectious adenovirus in HEK293 cells. Ninety Wistar rats were assigned randomly into experimental group (n=45) and control group (n=45). All rats were subjected to traumatic brain injury. Then recombinant adenovirus (for experimental group) or saline (for control group) was injected into the traumatic brain. The expression of Bcl-2 fusion protein was investigated by Western blotting, immunohistochemistry and fluorescence microscopy. Apoptosis in the injured brain was studied by TUNEL. Animals' behavior capacity was evaluated by tiltboard test. Results: In the experimental group, many fluorescent cells were found around the traumatic locus, which were also proven to be Bcl-2-positive by immunohistochemistry. On the contrary, few Bcl-2-positive cells and no fluorescent cell were detected in the control group. Bcl-2 expression of experimental group was much higher than that of control group, which was illustrated by Western blotting. The apoptosis index of experimental group was 0. 027±0. 005, and that of control group was 0.141±0.025 (P <0.01). Two weeks after injury, animals of the experimental group behaved better than those of the control group. Conclusions: A recombinant adenovirus vector expressing Bcl-2 fusion protein has been constructed. Bcl-2 fusion protein can suppress apoptosis and promote cell survival. Moreover, the behavior recovery of the injured animal is promoted. Bcl-2 fusion protein provides a way to track the target cells in vivo.     

StealthTM RNAi沉默人肝癌细胞Bcl-2表达抑制体外移植瘤生长的研究

目的探讨StealthTMRNAi抑制Bcl-2基因表达对体内移植瘤生长的影响。方法通过合成的人肝癌Bcl-2基因干扰序列转染入肝癌细胞内并从皮下移植到裸鼠,免疫组化检测瘤组织中Bcl-2蛋白的表达。结果荧光显微镜下显清晰的绿色荧光为转染成功细胞;RT．PCR检测转染组Bcl-2基因mRNA的表达水平下调（P〈0．01）。转染StealthTMRNA裸鼠皮下移植肿瘤生长缓慢,与对照组瘤体积比较差异有显著性（P〈0．01）;采用免疫组化法检测注射StealthTMRNA组,Bcl-2蛋白的表达下调（P〈0．01）。结论StealthTMRNAi可抑制Bcl-2基因表达,对移植瘤的生长有抑制作用。