咖啡因可保护UVB致人皮肤成纤维细胞的损伤

目的：确定咖啡因对中波紫外线（UVB）照射致体外培养人皮肤成纤维细胞氧化损伤的防护作用.方法：分离培养人成纤维细胞,分为空白对照组、咖啡因组、UVB照射组、UVB照射＋咖啡因组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2.用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化比色法检测细胞丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性.结果：UVB照射前后用咖啡因处理能使成纤维细胞存活率提高、MDA产生减少,酶的活性增强.结论：咖啡因对UVB照射损伤成纤维细胞具有一定保护性作用,其机制可能与抑制氧化损伤和增强抗氧化能力有关.     

硒代蛋氨酸对中波紫外线致HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究硒代蛋氨酸对中波紫外线（UVB）致HaCaT细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法 培养HaCaT细胞,分为4组：①正常对照组,不做任何处理;②硒代蛋氨酸组：分别加入1、10、50、100、200 nmol/L和1 μmol/L 硒代蛋氨酸预孵育24 h;③UVB组：30、60、90 mJ/cm2 UVB照射;④硒代蛋氨酸 + UVB组：不同浓度硒代蛋氨酸预孵育24 h后进行不同剂量UVB照射。采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）水平。采用析因设计方差分析、单因素方差分析对数据进行统计学分析,多重比较采用LSD法。 结果 析因设计方差分析结果显示,UVB照射对细胞增殖活性有抑制作用（F = 128.04,P < 0.05）,且随UVB强度增加,细胞增殖活性逐渐下降,组间差异有统计学意义（P < 0.05）;硒代蛋氨酸预孵育对细胞增殖活性也有影响（F = 5.95,P < 0.05）,其中10 nmol/L ~ 1 μmol/L硒代蛋氨酸 + UVB组与UVB组比较,细胞增殖活性显著升高（P < 0.05）;UVB照射和硒代蛋氨酸对细胞增殖活性无明显交互作用（F = 1.65,P > 0.05）。30 mJ/cm2 UVB 照射后,UVB组凋亡率（31.9% ± 2.67%）较正常对照组（4.1% ± 0.67%）显著升高（P < 0.05）;而10、50、100、200 nmol/L和1 μmol/L硒代蛋氨酸 + 30 mJ/cm2 UVB组凋亡率［依次为：（21.9 ± 3.72）%、（17.2 ± 1.67）%、（4.6 ± 0.85）%、（7.5 ± 1.86）%、（13.5 ± 1.95）%］均较30 mJ/cm2 UVB组凋亡率显著下降（P < 0.05）。30 mJ/cm2 UVB组与正常对照组相比,SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高（P < 0.05）;10 nmol/L ~ 1 μmol/L硒代蛋氨酸 + 30 mJ/cm2 UVB组与30 mJ/cm2 UVB组比较,SOD和GSH-Px活性增高,MDA含量下降（P < 0.05）。 结论 硒代蛋氨酸可以减轻UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤,其机制与增强抗氧化酶活性、减少氧自由基有关。     

自噬在富氢液减轻UVB致皮肤成纤维细胞损伤中的作用

目的探讨自噬对富氢液减轻UVB照射导致的人皮肤成纤维细胞氧化损伤的调控作用。方法取健康男童包皮环切术后包皮,进行人真皮成纤维细胞的原代培养,将细胞分组:正常对照组(Con组);氢气对照组(Con+H_2);UVB照射组(UV组);UVB照射+富氢培养液组(UV+H_2组);UVB照射+富氢培养液+自噬抑制剂3-MA组(UV+H_2+3-MA组),各组培养6h、12h和24h,电镜观察自噬体和LC3的表达变化,根据上述结果,各组在UVB照射后培养6h后,进行相MTT、LDH、ROS、MDA和自噬蛋白Beclin-1、ATG5和P62的检测。结果与Con组和Con+H_2组比较,UV组MTT值和P62表达减少(P0.05),自噬体、LDH、ROS、MDA、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1和ATG5表达增加(P0.05);与UV组比较,UV+H_2组自噬体、MTT、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1和ATG5表达增加(P0.05),LDH、ROS、MDA和P62表达减少(P0.05);与UV+H_2组比较,UV+H_2+3-MA组自噬体、MTT、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1和ATG5表达减少(P0.05),LDH、ROS、MDA和P62表达增加(P0.05)。结论富氢液通过激活自噬途径减轻UVB照射导致的人皮肤成纤维细胞损伤。     

维生素B_2修饰的纳米酶对紫外线诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的作用及机制

目的探讨维生素B_2修饰的纳米酶(VB_2-IONzymes)对中波紫外线(UVB)照射后HaCaT细胞氧化应激损伤的作用及可能的机制。方法 UVB照射诱导HaCaT细胞光损伤模型,将培养的HaCaT细胞分为空白组、UVB照射组、VB_2-IONzymes组、UVB+VB_2-IONzymes组。CCK-8检测HaCaT细胞增殖活性,酶生化法检测细胞醛缩酶(MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,ELISA法检测细胞中Nrf2及HO-1蛋白水平。结果 UVB照射组HaCaT细胞增殖活性显著降低,细胞MDA水平升高,SOD水平降低,Nrf2及HO-1蛋白表达下降,与空白组相比,差异均有统计学意义(P0.01);加入VB_2-IONzymes后,与UVB照射组相比,细胞活力明显提高(P0.05),细胞MDA水平显著降低,细胞内SOD水平、Nrf2及HO-1蛋白表达均显著上升(P均0.01)。结论 VB_2-IONzymes有抗氧化应激作用,其机制可能与促进Nrf2和HO-1表达相关。     

紫檀芪对中波紫外线照射的HaCaT细胞抗氧化物酶表达及活性的影响

目的 探讨紫檀芪对HaCaT细胞急性中波紫外线（UVB）损伤的防御作用及相关机制。方法 MTS法和流式细胞仪检测不同浓度紫檀芪作用后HaCaT细胞增殖活性及凋亡与坏死率,筛选无毒性紫檀芪浓度。HaCaT细胞随机分为对照组（不做任何处理）、UVB组和2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪组及2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪 + UVB组。Western印迹法检测紫檀芪和UVB处理前后HaCaT细胞内Nrf2核转位情况,定量PCR检测过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）的表达,ELISA检测CAT和SOD活性。结果 MTS法和流式细胞仪检测结果显示,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪对HaCaT细胞无毒性作用。对照组Nrf2胞质蛋白1.03 ± 0.08、胞核蛋白1.04 ± 0.11;与对照组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组Nrf2胞质蛋白和胞核蛋白均无明显变化,UVB组Nrf2胞质蛋白无明显变化,但Nrf2胞核蛋白显著增加（1.77 ± 0.08,q = 17.24,P < 0.01）。与对照组及UVB组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪 + UVB组Nrf2胞质蛋白浓度均显著下降（0.86 ± 0.10、0.87 ± 0.11、0.46 ± 0.11,均P < 0.05）,胞核蛋白浓度则显著升高（2.38 ± 0.11、2.57 ± 0.11、2.07 ± 0.13,均P < 0.01）。qPCR显示,与对照组相比,UVB照射对CAT mRNA表达有明显的抑制作用（P < 0.05）,对SOD mRNA表达则无明显影响（P > 0.05）,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组CAT和SOD的表达亦均无明显变化（P > 0.05）。然而,2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT表达的抑制（P < 0.05）,并上调SOD的表达（P < 0.05）。ELISA显示,UVB照射可显著降低HaCaT细胞内CAT和SOD活性（均P < 0.001）,2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT和SOD活性的抑制作用（P < 0.05）,但其活性仍明显低于对照组（P < 0.05）。结论 紫檀芪可通过激活Nrf2通路,上调其下游抗氧化物酶CAT、SOD表达,防御HaCaT细胞急性UVB损伤。     

富氢液通过自噬途径下调中波紫外线诱导的HaCaT细胞炎症因子的表达

目的 探讨氢气是否能通过自噬途径调节中波紫外线（UVB）诱导的HaCaT细胞炎症因子的表达。 方法 将培养的HaCaT细胞分为空白对照组（不做任何处理）,氢气组（仅用富氢培养液培养）,1、10、50 mJ/cm2 UVB组,1、10、50 mJ/cm2 UVB + 氢气组,50 mJ/cm2 UVB + 3甲基腺嘌呤（3MA）组,50 mJ/cm2 UVB + 雷帕霉素组,50 mJ/cm2 UVB + 3MA + 氢气组,50 mJ/cm2 UVB + 雷帕霉素 + 氢气组。细胞经过不同处理培养12 h后,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）,细胞提取蛋白检测自噬蛋白LC3和Beclin1的表达,上清液用ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）α、白细胞介素（IL）-1β、HMGB1和IL-6的水平。 结果 与空白对照组相比,UVB诱导的HaCaT细胞LDH释放增多,细胞活力下降,自噬蛋白LC3和Beclin1表达增加,炎症因子TNF-α、IL-1β、HMGB1和IL-6释放增加（均P < 0.05）。与UVB组相比,氢气可减少LDH释放,提高细胞活力,自噬蛋白LC3和Beclin1表达进一步增加,炎症因子TNF-α、IL-1β、HMGB1和IL-6表达减少（均P < 0.05）。与50 mJ/cm2 UVB组相比,50 mJ/cm2 UVB + 3MA组炎症因子TNF-α、IL-1β、HMGB1和IL-6表达进一步增加（P < 0.05）,而50 mJ/cm2 UVB + 雷帕霉素组炎症因子TNF-α、IL-1β、HMGB1和IL-6表达减少（P < 0.05）。与50 mJ/cm2 UVB + 氢气组相比,50 mJ/cm2 UVB + 氢气 + 3MA组炎症因子TNF-α、IL-1β、HMGB1和IL-6表达增加（P < 0.05）。 结论 UVB照射可以诱发自噬蛋白表达增加 ;富氢液可以下调UVB诱导的HaCaT细胞炎症因子的表达,而这一过程是通过激活自噬途径实现的。     

人参皂苷Rg1对UVB损伤PG12及成纤维细胞的保护作用

目的研究人参皂苷Rg1对中波紫外线（UVB）损伤皮肤成纤维细胞以及作为皮肤神经细胞模型的PC12细胞的保护作用。方法实验分为UVB模型组、UVB＋Rg1三个不同浓度保护组、对照组,分别以60mJ／cm^2、100mJ／cm^2强度UVB造成培养的皮肤成纤维细胞、皮肤神经细胞模型PC12（神经元化）细胞损伤,用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化法检测光损伤前后细胞培养上清SOD活性、MDA含量。结果强度为60mJ／cm^2、100mJ／cm^2的中波紫外线分别可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞、神经元化PC12细胞增殖活性降低,细胞培养上清SOD活性降低,MDA含量升高,与UVB模型组相比均P〈0．05。给定浓度范围的Rg1能增加细胞的增殖活性,增加细胞培养上清SOD活性、降低MDA含量。结论紫外线可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞及PC12细胞氧化损伤,人参皂苷Rg1对损伤的细胞具有一定保护作用,其机制可能与它的抗氧化、增强细胞活力有关     

京尼平苷通过P13K-Akt途径拮抗黑素细胞氧化损伤北大核心CSCD

目的 探讨京尼平苷对体外培养的人黑素细胞氧化损伤的拮抗作用,以及PI3K-Akt途径在其中的作用。方法 取健康青少年环切术后包皮,分离并培养表皮黑素细胞。取第2 ～ 3代黑素细胞,分为对照组（不做任何处理）、京尼平苷组（125 μmol/L京尼平苷处理）、LY294002组（5 μmol/L LY294002处理）、H2O2组（250 μmol/L H2O2处理）、京尼平苷 ＋ H2O2组（125 μmol/L京尼平苷处理24 h后,加入250 μmol/L H2O2作用4 h）、京尼平苷 ＋ LY294002 ＋ H2O2组（125 μmol/L京尼平苷处理24 h后,加入5 μmol/L LY294002作用1 h,然后用 250 μmol/L H2O2作用4 h）。作用完成后,用噻唑蓝（MTT）法检测黑素细胞增殖活性,Western印迹检测Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、血红素加氧酶1（HO-1）、谷胱甘肽过氧化物酶1（GPx-1）蛋白的表达,生物化学方法检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）含量。通过单因素方差分析（ANOVA）对各组间数据进行比较,采用SNK-q检验进行组间两两比较。结果 H2O2组细胞增殖率较对照组明显降低（P 〈 0.01）,p-Akt（P 〈 0.01）、HO-1（P 〈 0.01）、GPx-1（P 〈 0.05）蛋白表达水平下降,SOD活性、CAT活性降低（均P 〈 0.01）,ROS含量显著升高（P 〈 0.01）。与H2O2组相比,京尼平苷＋ H2O2组黑素细胞增殖率上升（72.98% ± 8.92%比50.53% ± 10.85%,P 〈 0.05）,p-Akt（P 〈 0.05）、HO-1（P 〈 0.01）、GPx-1（P 〈 0.01）蛋白表达上调,SOD［（6.82 ± 1.03） U/mg比（1.29 ± 0.43 ） U/mg,P 〈 0.05］和CAT［（46.08 ± 4.16） U/mg比（18.71 ± 3.09） U/mg,P 〈 0.05］酶活性增高,ROS含量（1 284.33 ± 110.64比2 158 ± 222.75,P 〈 0.01）减少;京尼平苷 ＋ LY294002 ＋ H2O2组黑素细胞增殖率（44.35% ± 14.85%）较京尼平苷 ＋ H2O2组降低（P 〈 0.05）,p-Akt（P 〈 0.01）、HO-1（P 〈 0.05）、GPx-1（P 〈 0.01）蛋白表达下调,SOD活性［（1.31 ± 0.65） U/mg,P 〈 0.05］和CAT活性［（23.25 ± 5.56） U/mg,P 〈 0.05］减弱,ROS含量增加（1 668 ± 62.03,P 〈 0.05）。结论 京尼平苷可通过PI3K-Akt途径促进黑素细胞HO-1和GPx-1表达,增强SOD和CAT活性,拮抗黑素细胞氧化应激损伤。     

外源性胆绿素对中波紫外线诱导的角质形成细胞光损伤的保护作用和机制

【摘要】 目的 探讨外源性胆绿素对中波紫外线（UVB）照射的HaCaT细胞光损伤的保护作用。方法 将HaCaT细胞分为加入0、0.1、1、10 μmol/L胆绿素并照射UVB的UVB组、0.1 μmol/L UVB组、1 μmol/L UVB组、10 μmol/L UVB组及不做处理的对照组。UVB照射剂量为30 mJ/cm2,照射后继续培养24 h,分别检测细胞活性氧（ROS）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量,ELISA法检测各组细胞的炎症因子白细胞介素6（IL-6）、IL-8水平。多组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 UVB组、0.1 μmol/L UVB 组、1 μmol/L UVB组、10 μmol/L UVB组、对照组细胞ROS水平（3 613.33 ± 206.61、2 958.67 ± 193.87、2 678.33 ± 178.24、2 274.67 ± 118.81、1 905.67 ± 250.25）、SOD活力（24.41 ± 1.78、28.96 ± 2.21、29.75 ± 1.75、30.19 ± 2.29、37.52 ± 2.31）、MDA含量（5.61 ± 0.32、5.46 ± 0.55、4.65 ± 0.22、2.55 ± 0.93、1.31 ± 0.05）、IL-6水平、IL-8水平差异均有统计学意义（F值分别为 34.02、57.36、214.09、29.73、11.40,均P < 0.05）,UVB组ROS水平、MDA含量及IL-6、IL-8水平均高于另4组（均P < 0.05）,SOD活力均低于另4组（均P < 0.05）。结论 外源性胆绿素减轻UVB引起的HaCaT细胞的氧化损伤、减轻炎症反应和抑制脂质过氧化作用,对细胞光损伤有一定的保护作用。     

柴达木枸杞多糖对UVB诱导人HaCaT细胞氧化损伤及凋亡相关蛋白的影响

目的观察枸杞多糖对中波紫外线(UVB)辐射后人角质形成(HaCaT)细胞的氧化损伤及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)表达的影响。方法超声辅助水提法制备枸杞多糖(LBP)粉末,体外培养HaCaT细胞,随机分为空白对照组、UVB照射组(UVB 30m J/cm~2辐射40min)、UVB+LBP组(UVB 30m J/cm~2辐射40min+LBP 1mg/m L),照射前12h加入LBP,照射结束后继续培养20h,倒置显微镜观察细胞形态;MTS法检测各组细胞吸光度值(A值);酶生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶(CAT)活力和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量和丙二醛(MDA)含量;Western blot法测定各组细胞p38MAPK,caspase-8,caspase-3和Bcl-2的表达水平。结果与对照组相比,UVB照射组细胞形态明显异常,漂浮的死细胞明显增多;与UVB照射组相比,UVB+LBP组细胞的形态趋于正常,漂浮的死细胞明显减少。UVB照射组较对照组细胞吸光度(A值)明显降低(P0.05);UVB+LBP组细胞吸光度较UVB照射组明显升高(P0.05)。UVB照射组SOD活力、CAT活力、GSH-Px含量较对照组降低,MDA含量较对照组升高(P0.05);UVB+LBP组细胞SOD活力、CAT活力、GSH-Px含量较UVB照射组升高,MDA含量较UVB照射组降低(P0.05)。UVB照射组p38MAPK,caspase-8,caspase-3蛋白表达量明显高于对照组,Bcl-2表达量明显低于对照组(P0.05);与UVB照射组相比,UVB+LBP组HaCaT细胞p38MAPK,caspase-8,caspase-3表达水平降低,Bcl-2表达水平升高(P0.05)。结论枸杞多糖可抑制UVB辐射后HaCaT细胞的氧化损伤,并下调p38MAPK,caspase-8,caspase-3及上调Bcl-2的表达水平。     

饱和氢氯化钠溶液对小鼠变应性接触性皮炎的影响

目的 探讨饱和氢氯化钠溶液对变应性接触性皮炎（ACD）的治疗作用及相关机制。方法 将40只小鼠随机分为四组：对照组、对照 + 饱和氢氯化钠溶液组、ACD组和ACD + 饱和氢氯化钠溶液组。将二硝基氟苯搽在小鼠外耳建立二硝基氟苯致小鼠变应性接触性皮炎模型,腹腔注射饱和氢氯化钠溶液5 ml/kg进行治疗。评估皮损,计算耳厚度差、耳肿胀度,酶联免疫吸附试验检测皮损组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素（IL）-6、IL-17和干扰素γ（IFN-γ）水平,并计数皮损中炎性细胞数量。采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析,各组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD分析法。 结果 与对照组比较,ACD组皮损评分（7.33 ± 1.53）、耳厚度差［（0.73 ± 0.15） mm］和耳肿胀度［（18.67 ± 3.05） mg］增加,左耳皮损组织TNF-α［（1475.52 ± 233.81） ng/g］、IL-6［（184.65 ± 78.39） ng/g］、IL-17［（628.56 ± 201.44） ng/g］和IFN-γ［（197.72 ± 37.81） ng/g］水平和炎性细胞数量［（752.00 ± 166.06）个/mm2］亦增加（均P < 0.05）;与ACD组比较,ACD + 饱和氢氯化钠溶液组皮损评分（3.33 ± 0.58）、耳厚度差［（0.46 ± 0.11） mm］、耳肿胀度［（11.00 ± 2.64） mg］、左耳皮损组织TNF-α［（817.72 ± 101.13） ng/g］、IL-6［（95.86 ± 36.65） ng/g］、IL-17［（373.38 ± 126.74） ng/g］和IFN-γ［（63.31 ± 17.38） ng/g］水平和炎性细胞数量［（384.00 ± 97.35）个/mm2］均降低（均P < 0.05）。结论 饱和氢氯化钠可以减轻ACD中炎症因子的释放。     

不同剂量中波紫外线照射对角质形成细胞增殖活力和自噬体表达影响的研究

【摘要】 目的 观察HaCaT细胞和原代角质形成细胞接受不同剂量中波紫外线（UVB）照射后细胞增殖活力和自噬体表达水平的变化,并初步评估增殖活力损伤程度和自噬体表达水平之间的相关性。 方法 两种细胞各分为5组,对照组、5、10、20、40 mJ/cm2 UVB照射组,照射结束后12 h进行MTT实验或单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色,全波长酶标仪下读取各孔A值,倒置荧光显微镜下随机选取视野,计数每视野下自噬体表达阴性细胞和阳性细胞数目。 结果 经不同剂量UVB照射后,HaCaT细胞的增殖活力（A值）较原代角质形成细胞下降更明显,其中HaCaT细胞10、20、40 mJ/cm2照射组（A值分别为1.367 ± 0.035、1.173 ± 0.034、0.873 ± 0.025）两两之间以及与对照组（1.519 ± 0.022）之间差异均有统计学意义（P < 0.01）;原代角质形成细胞仅10、20、40 mJ/cm2 UVB照射组（A值分别为0.782 ± 0.012、0.773 ± 0.021、0.725 ± 0.031）与对照组（0.887 ± 0.035）之间差异有统计学意义（P < 0.05）。5、10、20 mJ/cm2 UVB照射后两种细胞MDC染色,自噬体表达阳性的细胞比率均出现增加,但照射量至40 mJ/cm2时则出现下降,以原代角质形成细胞下降更明显,其中HaCaT细胞10 mJ/cm2和20 mJ/cm2 UVB照射组自噬体表达阳性率（分别为22.69% ± 2.15%、28.10% ± 2.92%）较对照组（10.18% ± 1.50%）有显著上升,而40 mJ/cm2组自噬体表达上升幅度出现下降（趋势卡方检验χ2 = 27.48,P < 0.01）;原代角质形成细胞对照组、5、10、20 mJ/cm2组间自噬体阳性率变化不大,但40 mJ/cm2组表达出现明显抑制（趋势卡方检验χ2 = 6.86,P < 0.01）。 结论 UVB对HaCaT细胞和原代角质形成细胞增殖活力的损伤均有剂量依赖性,原代角质形成细胞更耐受UVB损伤;5、10、20 mJ/cm2 UVB照射能促进HaCaT细胞自噬体表达增加,且有剂量依赖性,而对原代角质形成细胞自噬体表达水平未产生显著影响;40 mJ/cm2 UVB照射后HaCaT细胞自噬体表达有下降趋势,而显著抑制原代角质形成细胞自噬体水平的表达。 【关键词】 角质形成细胞; 自噬体; 紫外线     

自噬促进剂西罗莫司对中波紫外线诱导成纤维细胞提早衰老的影响

【摘要】 目的 研究自噬促进剂西罗莫司对反复亚毒性中波紫外线诱导提早衰老（UVB-SIPS）的影响。方法 人皮肤成纤维细胞分为6组,对照组、10 mg/L西罗莫司组、UVB组、UVB + 0.1 mg/L西罗莫司组、UVB + 1.0 mg/L西罗莫司组、UVB + 10.0 mg/L西罗莫司组。UVB照射剂量10 mJ/cm2每日1次共5次,对照组用含1%小牛血清的DMEM培养基培养5 d;西罗莫司组在每次换液后加入西罗莫司;西罗莫司 + UVB组在每次照射UVB后加入西罗莫司过夜。CCK-8检测细胞活性,β半乳糖苷酶化学染色法检测衰老细胞,吖啶橙染色检测细胞自噬,Western印迹检测衰老相关分子信号p53及自噬相关蛋白LC3-B及beclin 1的表达水平。数据用SPSS 16.0软件分析,多组间均数行单因素方差分析,结合t检验和LSD法。 结果 UVB + 0.1、1.0、10 mg/L西罗莫司组的细胞活性（A450值）分别为0.27 ± 0.02、0.36 ± 0.04、0.39 ± 0.04,呈浓度依赖性升高,与UVB组（0.26 ± 0.01）比较,差异均有统计学意义（均P ＜ 0．05）;3个组β半乳糖苷酶染色阳性细胞分别为92.50% ± 0.34%、42.40% ± 0.53%、6.20% ± 0.39%,与UVB组（95.10% ± 0.32%）比较,差异均有统计学意义（P ＜ 0．05）;3组吖啶橙染色荧光定量分别为36.43 ± 0.24、45.25 ± 0.33、48.69 ± 0.37,与UVB组（33.99 ± 0.32）比较,差异均有统计学意义（P ＜ 0．05 ）;3组p53、LC3-B及 beclin 1的表达与UVB组比较,差异均有统计学意义（P ＜ 0．05）。 结论 自噬促进剂西罗莫司在提高细胞自噬率的同时,可抑制UVB诱导的成纤维细胞提早衰老。 【关键词】 成纤维细胞; 细胞衰老; 紫外线; 西罗莫司; 自噬     

热处理对UVB辐射后体外培养人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理与窄谱中波紫外线（NB-UVB）联合作用对正常人黑素细胞活性的影响。 方法 分别以20、30、50、70、90、120、180 mJ/cm2 NB-UVB辐射体外培养的正常人黑素细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖活性并选择最佳照射剂量;以42 ℃,1 h为热处理干预剂量,将黑素细胞分为4组：正常对照组、UVB组、加热组、UVB + 加热组,连续干预3 d,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素含量,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 NB-UVB照射呈剂量依赖性减少黑素细胞存活率,选择50 mJ/cm2作为最佳照射剂量;黑素细胞经不同干预后,UVB组、UVB+加热组的酪氨酸酶活性分别为0.244 ± 0.018、0.310 ± 0.015,较对照组（0.235 ± 0.018）分别增长3.8%和31.9%（P < 0.05）,两组黑素含量分别为0.201 ± 0.016、0.286 ± 0.019,较对照组（0.171 ± 0.016）分别增长17.5%和67.3%（P < 0.05）;UVB组和UVB+加热组处于G1期的黑素细胞较对照组分别减少23.94%和33.51%（P < 0.05）,S期细胞分别增加15.35%（P < 0.05）和17.76%（P > 0.05）,G2期分别增加11.93%（P < 0.05）和16.08%（P > 0.05）。 结论 热处理与NB-UVB可以协同增加黑素细胞的酪氨酸酶活性,促进黑素合成及细胞的增殖分化。     

黄芪甲苷对HaCaT细胞的光保护效能及其机制

目的 观察黄芪甲苷对于中波紫外线（UVB）损伤的人表皮细胞的保护作用,探讨其相关机制。方法 将培养的永生化人皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）分为对照组、UVB组、黄芪甲苷组和UVB + 黄芪甲苷组,其中UVB组和UVB + 黄芪甲苷组细胞接受50 mJ/cm2 UVB照射,加药组加入不同浓度的黄芪甲苷（10、20、50、100、200 mg/L）进行干预,24 h后CCK8法检测细胞活性。根据CCK8法检测结果选择最佳药物浓度（20 mg/L）进行后继实验。照光后继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平,Western印迹法检测HaCaT细胞中p53、p38、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和高迁移率族蛋白A1（HMGA-1）的表达。 结果 与对照组相比,10 mg/L和20 mg/L黄芪甲苷组对HaCaT细胞的增殖活性无明显影响（F = 1.32,P > 0.05）,50、100和200 mg/L黄芪甲苷对细胞增殖活性有一定抑制作用（F = 20.20,P < 0.05）;UVB组与对照组比较,HaCaT细胞增殖活性显著下降（F = 99.00,P < 0.01）。与UVB组相比,UVB + 黄芪甲苷（10 ~ 200 mg/L）组HaCaT细胞增殖活性不同程度升高（F = 19.08,P < 0.01）,其中UVB + 20 mg/L黄芪甲苷组升高程度最高。进一步实验表明,与UVB组相比,UVB + 20 mg/L黄芪甲苷组ROS产生受到明显抑制（t = 21.12,P < 0.01）。Western印迹结果表明,与对照组比较,UVB组p53、p38、MMP-9和HMGA-1蛋白的表达升高（均P < 0.01）,而UVB + 20 mg/L黄芪甲苷组细胞内p53、p38、MMP-9和HMGA-1蛋白的表达水平较UVB组显著降低（P < 0.01）。 结论 黄芪甲苷可有效抑制UVB引起的表皮细胞光损伤。     

茶多酚EGCG及UVB对角质形成细胞水通道蛋白3表达及EGFR/ERK信号传导途径的影响

目的 探讨茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）及中波紫外线（UVB）对角质形成细胞水通道蛋白3（AQP3）的表达及信号传导途径的影响。 方法 20例健康人每日外涂不同浓度EGCG乳膏,2周后测定皮肤含水量及经皮水分丢失（TEWL）变化。对培养的人角质形成细胞分别予以10-7,10-6,10-5 mol/L的EGCG处理后予以UVB照射,或者用EGFR/ERK的磷酸化抑制剂处理后予以UVB照射,Western印迹检测AQP3蛋白表达变化以及EGFR/ERK信号传导途径变化。 结果 健康人皮肤予以不同浓度EGCG乳膏处理后,皮肤含水量显著增加,经皮水分丢失明显减少。UVB照射前予以10-7,10-6,10-5 mol/L EGCG处理,AQP3表达明显升高,分别为172.36 ± 12.42,320.66 ± 15.51,368.10 ± 11.39,与单纯UVB照射组（灰度值设为100.00）比较差异具有统计学意义（t值分别为12.16,26.75,38.62,P值均 < 0.05）。UVB照射前予以EGFR磷酸化抑制剂PD153035（1.0 μmol/L）和ERK磷酸化抑制剂U0126（10 μmol/L）处理后,AQP3表达也明显升高,分别为413.85 ± 25.27,268.85 ± 16.33,与单纯UVB照射组比较,差异具有统计学意义（t值分别为35.16,19.25,P值均 < 0.05）。UVB照射可以激活角质形成细胞EGFR/ERK信号传导途径,预先予以EGCG处理可以显著抑制EGFR/ERK的磷酸化。结论 EGCG可以增强皮肤屏障功能。UVB照射可以下调角质形成细胞AQP3表达,而EGCG处理可以上调AQP3表达,其机制可能与抑制UVB照射诱导的EGFR/ERK活化有关。     

沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞慢性光损伤的影响

【摘要】 目的 探讨沉默miRNA-23a对UVB照射所致成纤维细胞慢性光损伤的影响。 方法 将成纤维细胞分为空白对照组、UVB光损伤组、miRNA-23a 沉默组、UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组。SA-β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）化学染色测定老化程度,流式细胞仪检测细胞周期,实时PCR法检测p53、p16、p21 mRNA的表达,免疫印迹法检测p53、p16、p21的蛋白表达量。 结果 UVB光损伤组与UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的SA-β-Gal细胞蓝染阳性率分别为（94.60 ± 2.58）%、（48.18 ± 3.70）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。G1期阻滞率分别为（85.06 ± 1.52）%、（57.48 ± 2.01）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的p53、p16、p21 mRNA及蛋白表达量与UVB光损伤组相比,差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞衰老有抑制作用,而miRNA-23a对下游衰老相关信号分子的抑制可能是其机制之一。